白血病细胞雄激素受体基因启动子甲基化状态的研究

目的 检测白血病细胞雄激素受体基因启动子区CpG岛甲基化状态情况,初步探讨雄激素受体基因启动子区甲基化与白血病发病机制的可能联系.方法 应用甲基化特异性PCR技术(methylation specific PCR, MSP)检测3种白血病细胞株及15例患者骨髓标本雄激素受体基因甲基化状态.结果 白血病细胞株均出现甲基化和非甲基化带,呈部分甲基化状态,而作为对照的正常人白细胞均只出现非甲基化带.15例白血病患者全部检出甲基化状态. 结论 白血病细胞的雄激素受体基因启动子区存在高甲基化现象,可能为白血病的致病机制分析提供了一个新的方向,提示AR基因启动子CPG岛的甲基化有可能成为白血病的新的参考标记物.     

白血病细胞雌激素受体多个启动子甲基化的实验研究

目的检测白血病细胞雌激素受体（estrogen receptors,ER）基因启动子区CpG岛甲基化状态情况,探讨雌激素受体基因多个启动子区包括ERα（ERα-A,-B and-C）和ERβ甲基化与其表达异常的联系。方法应用RT—PCR检测6种白血病细胞株以5′-杂氮-2-脱氧胞苷（5′-Aza-Dc）去甲基化前后ER基因表达活性并应用甲基化特异性PCR技术（methylation specific PCR,MSP）检测10例正常人白细胞和6种白血病细胞株以5′-Aza-Dc去甲基化前后ER基因甲基化状态。结果ER各启动子在白血病细胞株中均出现甲基化或半甲基化带,但只有ERα-A基因表达沉默而且在正常人白细胞中呈未甲基化状态,在以5′-Aza-Dc处理细胞株后ERα-A基因表达恢复。结论白血病细胞的雌激素受体基因启动子区存在高甲基化现象并导致其基因表达沉默,可能为白血病的致病机制分析提供了一个新的方向,提示ERα-A基因启动子CPG岛的甲基化有可能成为白血病的新的参考标记物。     

乳腺癌雌激素受体α基因启动子甲基化与其蛋白表达的关系

目的：检测乳腺癌雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）基因启动子区CpG岛甲基化状态,探讨乳腺癌ERα启动子甲基化与其蛋白表达及临床病理的关系。方法：采用免疫组化EnVisionTM二步法检测20例正常乳腺组织、44例乳腺癌组织ERα基因的表达,同时运用甲基化特异性PCR（Methylation-Specific PCR,MSP）及测序法分别检测ERα基因启动子A区和B区CpG岛的甲基化状态。结果：32例ERα阳性乳腺癌组织中,ERα启动子A区、B区甲基化率分别为28.2%和18.8%。12例ERα阴性乳腺癌组织中,ERα启动子A区、B区甲基化率分别为66.7%和58.3%。ERα阳性乳腺癌组、ERα阴性乳腺癌组、乳腺癌组的ERα启动子A、B区甲基化率均较正常组显著增高（P〈0.05）;ERα阴性乳腺癌组的ERα启动子A、B区甲基化率较ERα阳性乳腺癌组均显著增高（P〈0.05）。乳腺癌组织ERα表达与启动子区甲基化之间呈显著负相关。结论：乳腺癌组织ERα基因表达沉默与其启动子A区、B区CpG岛甲基化相关,后者有可能成为乳腺癌预后不良的分子检测指标。     

葛根素影响雌激素受体α启动子甲基化调控成骨细胞增殖分化的研究

目的：探究葛根素对大鼠成骨细胞代谢调控的途径,为绝经后骨质疏松治疗提供理论依据。方法取新生 SD 大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞,分别加入不同浓度（5、10、25、50、100μmol／L）葛根素分组培养,应用巢式甲基敏感性聚合酶链反应方法观察雌激素受体α（estrogen receptorα,ERα）启动子 A 区甲基化,反转录－聚合酶链反应方法观察 ERαmRNA 表达,MTT 法和对硝基苯磷酸酯方法观察体外培养成骨细胞的增殖及碱性磷酸酶活性。结果随着葛根素浓度增加,ERα基因启动子甲基化程度逐渐减弱;同时发现细胞中 ERα mRNA 表达逐渐增强,25μmol／L葛根素浓度时表达最强（P ＜0．01）。葛根素能刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性（P ＜0．01）。结论葛根素抑制 ERα启动子甲基化及增加 ERαmRNA 表达,可能通过此途径促进成骨细胞增殖分化。     

宫颈癌细胞FHIT基因启动子CpG岛甲基化状态分析

FHIT基因是一种与凋亡有关的肿瘤抑制基因,广泛存在于各种细胞凋亡系统中,在多种肿瘤及细胞系中失活,其启动子部位CpG岛甲基化是FHIT基因失活的主要机制之一。本研究应用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)对不同宫颈鳞癌细胞系FHIT基因启动子CpG岛甲基化状态进行检测,在分子水平上了解FHIT异常甲基化与宫颈癌的相关性,为宫颈癌去甲基化治疗提供依据。     

白血病细胞多巴胺受体基因甲基化研究

目的：探讨多巴胺受体（ＤＲＤ４）基因第一外显子中ＮｏｔＩ酶切位点甲基化与急性非洒巴细胞白血病（ＡＭＬ）的关系。方法：应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印记杂交与ＤＮＡ序列分析技术对ＡＭＬ患者骨髓标本进行分析。结果：在２７例白血病患者骨髓标本中１６例ＤＲＤ４基因甲基化（５９％），其中初治化疗敏感患者ＤＲＤ４基因甲基化发生率为５０％（９／１８），复发及难治患者甲基化发生率为７８％（７／９），而９例正常人骨髓标本ＤＲ     

脑梗死患者雌激素受体基因启动子甲基化的相关分析

目的 探讨ER基因启动子甲基化与脑梗死的关系.方法 采用nMSP检测甲基化状态.结果 脑梗死组甲基化率为70.3%较对照组28.8%高,P<0.05.结论 ER基因启动子甲基化可能致脑梗死发病.     

肼苯哒嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231雌激素受体α去甲基化的影响

目的探讨肼苯哒嗪对雌激素受体（ER）α阴性人乳腺癌细胞株MDA—MB-231ERα基因启动子区CpG岛DNA甲基化的影响。方法体外细胞培养,按药物浓度分为4组：分别用0、5、10、20μmol／L的肼苯哒嗪作用ERa阴性人乳腺癌细胞株MDA—MB-231细胞96h;按药物作用时间分为4组：分别于0、72、96、120h10μmol／L肼苯哒嗪作用ERn阴性人乳腺癌细胞株MDA—MB-231细胞,倒置光学显微镜下观察肼苯哒嗪对细胞生长的影响。各组提取MDA—MB-231细胞总RNA,用RT-PCR及图像分析检测肼苯哒嗪对MDA—MB-231细胞ERamRNA表达的影响;提取MDA—MB-231细胞基因组DNA,纯化、修饰后用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测乳腺癌细胞株MDA-MB-231ERa基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态。结果与对照组比较,5、10、20μmol／L肼苯哒嗪组ER／β-actin光密度积分值比值均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）;72、96、120h10μmol／L肼苯哒嗪组ER／β-actin光密度积分值比值均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。5μmol／L肼苯哒嗪作用120h后ERa基因呈部分去甲基化状态,而经10μmol／L肼苯哒嗪作用120h后的ERα基因呈完全去甲基化状态。结论肼苯哒嗪可以逆转ERα阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231ERα基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态,使沉默基因重新表达。     

甲状腺乳头状癌组织中NIS和RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究

目的 探讨甲状腺乳头状癌及癌旁组织中,甲状腺功能基因钠碘转运体基因(NIS)和甲状腺抑癌基因RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)基因启动子甲基化改变的特点及其相关性.方法 采用甲基化特异性PCR方法分别检测NIS和RASSF1A基因启动子的甲基化状况.结果 ①甲状腺乳头状癌组织中NIS基因启动子甲基化显著高于癌旁组织(P＜0.05).②甲状腺乳头状癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化显著高于癌旁组织(P＜0.05).③功能基因NIS启动子甲基化发生显著高于抑癌基因RASSF1A基因启动子的甲基化(P＜0.05):功能基因NIS和抑癌基因RASSF1A的启动子的甲基化呈正相关(rs=0.41,P＜0.05).结论 RASSF1A基因和NIS基因启动子异常甲基化是甲状腺乳头状癌发生或发展过程中的分子事件,两者的基因甲基化提示呈一定正相关,可能相互影响共同参与了甲状腺乳头状癌发生、发展过程.     

59例急性白血病患者雌激素受体的检测

目的探讨急性白血病细胞雌激素受体(ER)表达及其对急性白血病预后的意义。方法采用免疫组化ABC法检测了59例急性白血病患者及20例对照组骨髓单个核细胞的ER表达。结果AL初诊组(13.83±9.39%)与完全缓解组(12.71±7.09%)ER+细胞率明显高于对照组(6.25±3.78%)(P<0.05),而难治复发组ER+细胞率(5.93±2.52%)明显低于完全缓解组和初诊组(P<0.05)。对照组男性与女性、AL组男性与女性、对照组≤50岁患者与>50岁患者、AL组≤50岁患者与>50岁患者、ANLL组与ALL组ER+率比较均无统计学意义(P>0.05)。结论ER表达与性别、年龄、AL类型无关。白血病细胞ER检测对疗效判断具有一定意义。