MiR-29c在大鼠肾间质成纤维细胞中的抗纤维化作用

目的:在细胞水平探索miR-29c在肾脏纤维化中的作用.方法:检测TGF-β,对大鼠肾间质成纤维细胞的促纤维化作用及该过程中miR-29c表达的变化.miRanda和高通量测序找出miR-29c的靶基因.通过转染miR-29c mimics(高表达),检测其对胶原Ⅰ(Col Ⅰ)表达的影响.结果:TGF-β1能刺激大鼠肾间质成纤维细胞转分化;大鼠肾间质成纤维细胞转分化后miR-29c表达下调;上调miR-29c能抑制TGF-β1的促转分化作用.结论:miR-29c mimics通过有效抑制TGF-β1刺激NRK-49F细胞株Col Ⅰ表达起到抗纤维化作用,人工合成的miR-29c mimics转染NRK-49F细胞株有效提高miR-29c表达量从而抑制Col Ⅰ表达,为治疗肾间质纤维化提供了一个新的靶点.     

白血病抑制因子通过乙酰化STAT3抑制肾间质纤维化的研究

目的 研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)对肾间质纤维化的作用及其机制。方法 TGF-β和(或)LIF和(或)TSA刺激肾脏成纤维细胞(NRK-49F);TGF-β和(或)LIF刺激Stat3基因敲除细胞(MEF-Stat3-KO);用KM小鼠建立单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)模型,腹腔内注射LIF后收集肾脏;用Western Blot方法检测纤维化相关性蛋白(Col3和FN1)和乙酰化Stat3的表达,用RT-PCR方法检测Col3和FN1的mRNA表达,用免疫组化方法检测肾脏组织的Col3、FN1和LIFR、Stat3的沉积。结果 在NRK-49F细胞中,LIF降低TGF-β诱导的Col3和FN1的表达;在Stat3-KO细胞中,LIF对Col3和FN1的表达无作用。UUO肾脏中,LIFR和Stat3的表达较假手术组明显减少,LIF注射后Col3和FN1的沉积减少。LIF刺激NRK-49F细胞15min后,乙酰化Stat3明显增多;TSA刺激细胞后,Col3和FN1的表达降低更加明显。结论 LIF抑制体内外肾间质纤维化,依赖于Stat3,其机制可能包括乙酰化修饰。     

阿魏酸钠对TGF—β1诱导下肾脏成纤维细胞α-SMA、CTGF表达及细胞外基质合成的影响

目的观察阿魏酸钠（SF）对转化生长因子β1（TGF-β1）作用下肾成纤维细胞（NRK-49F）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及结缔组织生长因子（CTGF）表达、细胞外基质（ECM）合成的影响,探讨其抗肾间质纤维化的效果及可能机制。方法体外培养NRK-49F细胞,利用MTT观察阿魏酸钠对TGF-β1诱导细胞活力的影响;实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应（Real TimeRT—PCR）检测细胞α-SMA及CTGF mRNA的表达;免疫细胞化学法观察细胞α-SMA、CTGF蛋白表达的情况;ELISA法测定细胞上清Ⅰ型胶原（Col I）、纤维连接蛋白（FN）的表达。结果TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏成纤维细胞活力、上调细胞α-SMA、CTGF在mRNA和蛋白水平的表达、增加ColI及FN的合成;阿魏酸钠能够减轻TGF-β1,的上述效应。结论阿魏酸钠可以在一定程度上抑制TGF-β1诱导的肾脏纤维化。     

红花黄色素对实验性肾间质纤维化大鼠TGF-β及Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察红花黄色素注射液对肾间质纤维化大鼠TGF-β及Ⅰ型胶原表达的影响,并探讨其肾脏保护机制。方法45只雄性SD大鼠,随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction;uuo）组（B组）、UUO＋红花黄色素治疗组（C组）,各15只。C组红花黄色素5mg／kg·d,造模术前1天开始腹腔注射给药,各组术后10d处死大鼠,处死后取术侧肾组织行HE、Masson染色,转化生长因子（Transforming growth factor-β;TGF-β1）,Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ,Col Ⅰ）免疫组化检测、结果应用图像分析系统进行半定量分析。结果B组、C组可见明显肾间质纤维化的病理改变。c组与B组相比,肾间质纤维化病变程度较轻。免疫组化结果提示：C组与B组相比TGF-β、ColⅠ表达减少（P〈0．01）。结论注射用红花黄色素对大鼠肾间质纤维化有保护作用,这种作用可能是通过抑制TGF-β1的表达,减少Ⅰ型胶原合成的作用实现的。     

阿魏酸哌嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用

目的观察阿魏酸哌嗪（Piperazine ferulate，PF）对单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction，UUO）模型大鼠肾小管间质的转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α—SMA）和Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ，ColⅠ）表达水平的影响，初步探讨其对小管间质纤维化的作用机制。方法将24只大鼠分为假手术（Sham—operated rats，SOR）组、UUO组、氯沙坦（Angiotensin Ⅱ receptor blocker，ARB）组和PF组。运用免疫组化技术半定量分析实验第14天各组大鼠肾组织中TGF-β1、α—SMA和ColⅠ的表达水平。结果免疫组化结果表明SOR组TGF-β1、α—SMA和ColⅠ均为少量表达，UUO组大鼠上述表达明显增加；ARB组和PF组TGF-β1、α—SMA和ColⅠ的表达均低于UUO组，但高于SOR组，两治疗组之间差异无统计学意义。结论阿魏酸哌嗪可以降低肾小管间质TGF-β1、α—SMA和ColⅠ的表达水平，延缓肾小管间质纤维化的进程。     

赖氨酰氧化酶样蛋白1在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的动态表达

目的 观察赖氨酰氧化酶(LOX)家族中的赖氨酰氧化酶样蛋白1(LOXL1)及相关胶原蛋白在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的动态表达，探讨其在日本血吸虫肝纤维化形成中的作用。方法 采用日本血吸虫感染的小鼠肝纤维化模型，于感染后第6、9、12周剖杀小鼠，收集其血清和肝脏标本；以HE和天狼星红两种染色方法分别观察并评价小鼠肝脏纤维化的进展程度；同时检测小鼠血清转氨酶水平。以免疫印迹(Western blot)和荧光定量PCR(qPCR)方法分别检测肝组织LOXL1、Ⅰ型胶原蛋白(Col1)及α-肌动蛋白(α-SMA)的表达并分析其含量的变化；并对血清中的可溶性和不可溶性胶原进行测定，以判断胶原交联情况。结果 HE和天狼星红染色结果显示，随感染时间延长，小鼠肝纤维化也随之进展，在感染第9周肝纤维化程度最为严重，随后进入慢性肝纤维化期，纤维化程度减轻。Western blot和qPCR结果显示，LOXL1和其他纤维化指标表达情况类似，均在感染第9周时表达量明显上调；可溶性胶原含量在感染第9周时达峰值后下降，而不可溶性胶原含量则持续上升。结论 LOXL1与血吸虫肝脏纤维化过程中纤维交联存在相关关系，可能...     

microRNA-132对肾间质成纤维细胞分泌细胞外基质的调控作用

目的:探讨microRNA-132(miR-132)对转化生长因子(transforming growth factor,TGF)β1刺激后大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)的细胞外基质分泌的调控作用。方法:体外培养NRK-49F细胞株,经TGF-β1(2、3、5 ng/mL)作用24 h,或细胞转染miR-132模拟物(rno-miR-132 mimics,50 ng/mL)作用24 h,或rno-miR-132 mimics与TGF-β1共同作用24 h,茎环实时荧光定量PCR(real-time quanti-tative PCR,RT-qPCR)法检测细胞miR-132表达,RT-qPCR法和Western Blot法分别检测细胞胶原蛋白I(Collagen I,Col I)mRNA和蛋白表达。结果:①不同浓度TGF-β1刺激后NRK-49F细胞miR-132和Col I的表达显著升高(P<0.01)。②rno-miR-132 mimics(50 ng/mL)作用NRK-49F细胞Col I表达显著升高(P<0.01)。③与TGF-β1(3 ng/mL)阳性对照组相比,rno-miR-132 mimics(50 ng/mL)与TGF-β1(3 ng/mL)共同作用NRK-49F细胞Col I表达显著升高(P<0.01)。结论:miR-132可以促进TGF-β1诱导的NRK-49F细胞分泌细胞外基质。     

单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质MCP-1的表达及其意义

目的：探讨肾间质纤维化中单核细胞趋化因子-1（MCP-1）的表达及其与肾间质巨噬细胞浸润的关系。方法：60只SD雌性大鼠随机分成假手术（SOR）组、单侧输尿管梗阻（UUO）组，于术后第1，4，7，10，14 d分别处死各组大鼠。用HE和MASSON染色法观察UUO大鼠术后不同时间点肾脏病理改变，用免疫组化法检测肾小管间质MCP-1表达和巨噬细胞浸润。结果：UUO组肾小管-间质MCP-1，单核巨噬细胞抗原ED-1表达较SOR组明显增多（P<0.05），MCP-1表达与巨噬细胞浸润呈正相关（r =0.865,0.928,0.858,0.893,0.873，均P<0.05）；MCP-1表达和巨噬细胞浸润分别与肾间质胶原相对面积呈正相关（分别为r =0.856,0.896,0.686,0.820,0.867和r =0.942,0.898,0.920,0.914,0.829，均P<0.05）。 结论：随UUO大鼠病程进展，肾小管间质MCP-1表达增多，可能在肾间质纤维化中起重要作用。MCP-1可能通过介导巨噬细胞浸润参与肾间质纤维化，MCP-1可成为治疗肾间质纤维化的新靶点。     

选择性环氧化酶-2抑制剂对梗阻性肾病大鼠肾组织中巨噬细胞趋化蛋白-1的调节

目的 探讨塞来昔布(celecoxib)与吲哚美辛(indomethacin)比较对单侧榆尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾脏的保护作用及可能机制.方法 大鼠随机分为4组:模型组(UUO组),塞来昔布治疗组(UUO+celecoxib组),吲哚美辛治疗组(UUO+indomethacin组)和假手术组即对照组(SOR).4周后检测各组大鼠血清肌酐及尿素氮水平,并采用放射免疫方法 测定大鼠尿液血栓烷素B2(TXB2)浓度.应用免疫组织化学方法 检测肾脏巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、转化生长因子-β,(TGF-β1)及Ⅳ型胶原(ColIV)的蛋白水平.结果 塞来昔布及吲哚美辛均可以降低尿TXB2浓度,以塞来昔布组更为显著;与对照组相比,其余3组,MCP-1、TGF-β;及ColⅣ的蛋白表达水平均显著上升,肾间质纤维化严重;塞来昔布治疗后,上述蛋白表达水平显著下调,肾间质纤维化程度明显减轻.结论 塞来昔布能减轻UUO大鼠肾间质纤维化,下调MCP-1的表达,减少肾间质单核巨噬细胞浸润可能是其机制之一.     

肾炎康复片对大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的:研究肾炎康复片对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用。方法:21只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、肾间质纤维化组(UUO组)及肾炎康复片组(SKT组),观察大鼠UUO术后14d梗阻侧肾脏的组织学变化、纤维连接蛋白(FN)及基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-l)的表达情况。结果:与Sham组相比,UUO组大鼠肾间质纤维化面积显著增加(P<0.01),FN及TIMP-1表达均有显著增高(P<0.01);与UUO组相比,SKT组大鼠肾间质纤维组织面积减少,FN及TIMP-1表达减弱(P<0.01);UUO组和SKT组大鼠FN及TIMP-1与肾间质纤维化面积成正相关(P<0.01)。结果:肾炎康复片可下调FN和TIMP-1在UUO大鼠肾间质中的表达,从而延缓肾间质纤维化的进展。