PDTC对膀胱癌EJ细胞Livin、Survivin mRNA表达影响

目的:探讨体外细胞培养,观察核转录因子κB通路特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对膀胱癌EJ细胞凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平的影响。方法:采用Real-time PCR法检测以不同浓度不同时间的PDTC处理的膀胱癌EJ细胞的凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平情况。结果:PDTC可降低膀胱癌EJ细胞凋亡抑制因子Livin、Survivin mRNA表达水平,呈剂量-时间依赖性,且呈负相关(P<0.05)。结论:PDTC可使膀胱癌EJ细胞凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平减少,其机制可能与NF-κB通路被抑制相关。     

腺病毒介导的HSV-TK基因系统联合羟基喜树碱对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的HSV-TK系统联合羟基喜树碱(HCPT)对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用.方法 使用含有HSV-TK基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷腺病毒转染人膀胱癌细胞T-24细胞,表达GFP为转染成功标志,同时观察转染率,PCR检测TK表达.以正常T-24细胞为空白对照,转染成功后分别加入GCV、GCV HCPT,采用MTT法测定单纯HCPT作用于人膀胱癌细胞72 h细胞增殖抑制率、各组治疗转染后人膀胱细胞24、48、72 h细胞存活率;流式细胞仪检测GCV(0.5 mg/ml) HCPT(10 mg/L)作用T-24细胞4h后的凋亡情况.结果 随着浓度的增高,HCPT对T-24细胞的生长抑制率逐渐增高,HCPT浓度为0.01 mg/L时T-24生长抑制率为14%,50 mg/L时T-24生长抑制率为63%,当HCPT浓度大于100 mg/L时,抑制作用无明显增加(P=0.216).GCV组、GCV HCPT各组对转染后细胞有明显杀伤作用(P=0.00),GCV HCPT组随HCPT浓度增高和作用时间的延长,杀伤效率明显增高.0.5 mg/ml GCV单独作用于转染后的膀胱癌细胞72 h后,细胞存活率为34.6%,GCV(0.5 mg/m1) HCPT(10 mg/L)组的细胞存活率仅为8.07%(P=0.00).GCV 10 mg/mlHCPT作用后4h,T-24细胞出现M1期前典型的细胞凋亡峰,凋亡率达52.93%.结论 HSV-TK/GCV系统联合HCPT治疗能增强自杀基因系统对人膀胱癌的杀伤作用,能够良好地诱导人膀胱癌细胞的凋亡.     

新城疫病毒D90杀伤口腔鳞癌细胞系CAL-27机制的研究

目的探讨新城疫病毒(NDV)D90杀伤口腔鳞癌细胞系CAL-27的机制。方法 CAL-27细胞用稀释10倍的D90病毒作用0、12、24、36 h后用以Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术检测NDV D90对口腔鳞癌细胞系CAL-27细胞凋亡情况的影响,接种于24孔板中的CAL-27细胞用稀释10倍的D90病毒作用12 h,4',6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色检测NDV D90对CAL-27细胞作用前后细胞形态学的变化;用稀释10倍的病毒与细胞分别共同孵育12、24、36 h,同时设置对照组。使用BCA蛋白测定试剂盒的裂解物中的蛋白质含量进行测定。免疫蛋白印迹法检测NDV D90作用CAL-27细胞后对凋亡相关蛋白表达量的影响。结果 NDV D90能引起细胞CAL-27的凋亡,并且凋亡率随着病毒作用的时间增加而升高[0 h,12 h,24 h,36 h的凋亡率分别为(3.68±1.50)%、(19.22±0.99)%、(82.80±0.74)%、(99.69±0.13)%];D90作用于CAL-27后细胞核出现凋亡的相关形态改变,如核固缩以及核碎裂;随着病毒作用时间的增加,细胞色素C蛋白表达水平升高,胱天蛋白酶3前体蛋白(procaspase-3)以及procaspase-9蛋白表达水平降低,procaspase-8蛋白表达水平没有明显变化,同时未检测到肿瘤坏死因子α蛋白的表达。结论 NDV D90毒株能引起人口腔鳞癌细胞系CAL-27的凋亡,且凋亡率呈时间依赖性;NDV D90引起CAL-27细胞凋亡主要是通过线粒体途径,死亡受体途径没有被激活或者作用非常小。     

MALAT-1沉默对膀胱癌细胞增殖. 凋亡及caspase-3表达的影响

目的 检测MALAT-1在正常膀胱组织和膀胱癌组织间的表达差异,探讨MALAT-1沉默对膀胱癌细胞增殖.凋亡及caspase-3表达的影响。方法 RT-PCR检测膀胱癌组织及正常膀胱组织中MALAT-1基因的表达;CCK-8比色实验检测MALAT-1沉默和MALAT-1正常表达的膀胱癌EJ细胞的增殖;TUNEL免疫荧光法检测MALAT-1沉默和MALAT-1正常表达膀胱癌EJ细胞的凋亡;Western blot法检测MALAT-1沉默和MALAT-1正常表达的膀胱癌EJ细胞中caspase-3蛋白的表达。结果 膀胱癌组织中MALAT-1的表达显著高于正常膀胱上皮组织;MALAT-1沉默细胞的增殖能力显著弱于MALAT-1正常表达的细胞;MALAT-1沉默细胞的凋亡显著高于MALAT-1正常表达的细胞;MALAT-1沉默细胞caspase-3蛋白的表达显著高于MALAT-1正常表达的细胞。结论 MALAT-1在膀胱癌组织中的表达被激活,MALAT-1能促进膀胱癌细胞的增殖,抑制膀胱癌细胞的凋亡,这种抑制作用可能是通过直接调控caspase-3的表达而实现的。     

Caspase-3在膀胱癌组织中的表达及意义

目的探讨caspase-3在膀胱癌发病过程中的作用及与细胞凋亡之间关系.方法应用免疫组织化学方法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法,检测55例膀胱癌和12例正常膀胱组织中caspase-3和细胞凋亡的表达水平.结果膀胱癌中caspase-3阳性表达率为41.8%,显著低于正常膀胱组织的75.0%(P＜0.05).caspase-3表达与膀胱癌病理分级、临床分期和肿瘤复发之间无关(P＞0.05).膀胱癌中caspase-3阳性表达者的细胞凋亡指数为9.3±3.1显著高于阴性表达者的6.8±2.4(P＜0.001).结论 caspase-3表达下调导致细胞凋亡减少,可能在膀胱癌的发生发展过程中起重要作用.     

AS2O3诱导人膀胱癌EJ细胞株凋亡作用的体外研究

目的观察三氧化二砷（Arsenic trioxide,AS2O3）对人膀胱癌EJ细胞生长抑制作用,并探讨其作用机理。方法四甲基偶氮唑蓝（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromid,MTT）法检测EJ细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡,并对半胱天冬酶（Caspase）—3活性进行检测。结果AS2O3可有效地抑制EJ细胞生长,且呈时间、浓度依赖性特点;经药物作用后,膀胱癌细胞凋亡明显增加,凋亡率随作用时间的延长而增多。结论ASO可显著抑制膀胱癌细胞生长,诱导细胞凋亡是其作用机制之一。     

膀胱癌中ICE表达及其与细胞凋亡的关系

探讨白细胞介素 - 1β转化酶 (ICE)在膀胱癌发病中的作用。方法 :应用免疫组化方法检测ICE在2 1例正常膀胱组织 ,6例膀胱乳头状瘤和 72例膀胱移行细胞癌组织中表达 ;应用原位凋亡检测TUNEL法测定膀胱癌中细胞凋亡指数。结果 :膀胱癌ICE表达显著减少 ,但与肿瘤病理分期、分级、复发之间均无相关性。膀胱癌中ICE强阳性表达者 ,凋亡指数增高。结论 :ICE异常表达参与膀胱癌发生过程 ,但其不是膀胱癌有价值的独立预后指标。     

hTERT启动子调控的野生型p53基因对膀胱癌细胞的靶向性抑制作用

目的:探讨人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)启动子调控的野生型p53基因的靶向性表达,观察对人膀胱癌细胞株T24的选择性杀伤效应及细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法,将构建的含hTERT启动子调控表达人野生型p53基因和报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,分别转染膀胱癌细胞株T24和正常人胎肺成纤维细胞,应用荧光显微镜、电镜、台盼蓝拒染法及流式细胞仪等方法,观察基因的靶向性表达及对膀胱癌细胞株T24细胞形态学、生长抑制曲线及细胞周期变化的影响。结果:转染hTERT启动子调控的目的基因可在端粒酶阳性的膀胱肿瘤细胞中靶向性表达发出绿色荧光。靶向转染野生型p53基因能抑制膀胱癌细胞生长,72h后细胞生长抑制率分别为48.5%、高于常规培养组3.6%和阴性对照组2.5%,差异有显著性意义(P<0.05)。电镜可见典型的凋亡细胞。细胞周期分析G0和G1期细胞比例明显增高,并出现凋亡峰。结论:构建的hTERT启动子调控表达的野生型p53基因能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥靶向性抑制膀胱癌细胞生长作用。     

高侵袭力及稳定高表达增强型绿色荧光蛋白的膀胱癌细胞株的建立

目的:建立具有高侵袭力及稳定高表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的膀胱癌细胞株. 方法:通过构建侵袭小室,以穿透人工基底膜、聚碳酸脂膜能力为依据,筛选从人膀胱癌细胞系EJ中筛选具有体外高侵袭能力的膀胱癌细胞亚系(EJ-m3).用pEGFP-C1转染人膀胱癌细胞系EJ及其高侵袭力亚系,经G418抗性筛选和96孔板有限稀释获得稳定高表达EGFP的单克降细胞株.并用流式细胞术检测EGFP表达率,通过细胞周期、生长曲线和体外侵袭实验,对转染和未转染EGFP的细胞生物学行为进行综合分析. 结果:筛选出了具有高侵袭力的膀胱癌细胞EJ-m3,并获得了稳定高表达EGFP的细胞株EJ- GFP和EJ-m3-GFP.该两株细胞EGFP的表达率均为99.9%,增殖指数、生长曲线和体外侵袭力与未转染前相似(P>0.05). 结论:用改良侵袭实验筛选膀胱癌细胞系的高侵袭力亚系的方法是可靠的.转染EGFP的细胞其生物学行为并未发生改变.所获得的具有高侵袭力和稳定高表达EGFP的膀胱癌细胞为膀胱癌侵袭及转移的研究提供了良好的实验平台.     

转FAS基因治疗膀胱癌的实验研究

目的探讨Fas基因转染对膀胱癌细胞的作用。方法应用脂质体介导的方法,将人Fas cDNA导入膀胱癌细胞EJ中,并利用Northem bolt、原位杂交、流式细胞术检测细胞的Fas mRNA和分子表达。以顺铂作用转染前后的EJ细胞,用流式细胞仪、DNA梯形带和NTT法分析顺铂对转染前后的EJ细胞抑制增殖和诱导凋亡的能力。结果脂质体介导的Fas基因转染可明显增强膀胱癌细胞EJ的Fas表达,顺铂对转染后的EJ细胞抑制细胞增殖和诱导凋亡的能力明显增强。结论 Fas系统参与泌尿生殖系肿瘤的发生发展过程,Fas基因转染可显著上调膀胱癌细胞EJ的Fas表达。联合应用Fas基因转染和顺铂可获得协同的细胞毒作用,为进一步将Fas基因用于临床治疗膀胱癌提供了理论与实验基础。     

外源性P16基因导入对人膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：将外源性P16基因导入该基因纯合性缺失的人膀胱癌细胞系，观察对肿瘤细胞增殖活性及凋亡的影响。方法：构建P16逆转录病毒表达载体，转染膀胱癌细胞系，应用Northern杂交及免疫细胞化学检测外源性P16基因的表达；流式细胞仪检测细胞周期，原位细胞凋亡检测及透射电镜观察细胞凋亡。结果：转染外源P16基因的肿瘤生长速率明显降低，Ki67标记指数下降，大多数细胞被抑制在G0和G1期，同时发现凋亡细胞的存在。结论：外源性P16基因导入不仅抑制膀胱癌细胞的增殖，且可诱导其凋亡。     

Anti-tumor effect and mechanism of Paeonol on the hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404]

OBJECTIVE: To investigate the anti-tumor effect of Paeonol (Pae) on the hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404 and its molecular mechanisms. METHODS: Hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404 was treated by Pae in various concentrations and different time points respectively; and then the cell proliferation was assayed by light microscope, MTT method. DNA agarose gel electrophoresis and TUNEL were used to detect the apoptosis. The expression of PTEN and Akt were examined by RT-PCR and immunocytochemical ABC method. RESULTS: Compared with the control groups Pae obviously increased the inhibitory and apoptosis rate of hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404. It also showed a typical apoptotic morphology and DNA depicted a ladder pattern characteristic of the apoptosis, indicating the presence of DNA fragmentation. RT-PCR and immunocytochemical ABC assay showed that Pae could increase the expression of PTEN and decrease the expression of Akt. CONCLUSION: Pae can increase the anti-hepatocellular carcinoma effect, and its mechanism may be the increase of apoptosis-inducing effect which is regulated by phosphatidylinositol-3-kinase.     

维生素D衍生物EB1089对人喉癌细胞Hep-2细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨EB1089对人喉癌细胞Hep-2凋亡的作用及可能的机制．方法：MTT法检测不同浓度（0,1,10,100nmol／L）EB1089处理24,48,96h对Hep-2细胞的抑制率;TUNEL检测细胞凋亡;分光光度法检测Caspase-3活性．结果：EB1089在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制Hep-2细胞的生长（P〈0．05）,对Hep-2细胞的抑制率为2．6％-70．0％;10,100nmol／LEB1089处理细胞48h,可诱导Hep-2细胞发生凋亡,其凋亡指数分别为22．8±1．6和53．8±3．6,与对照组相比有统计学差异（P〈0．05）;EB1089处理细胞12,24,48,96h后Caspase-3的活性增加,与对照组相比分别增加了2．09,2．72,4．91,5．23倍（P〈0．05）;用Caspase-3活性抑制剂可部分缓解EB1089诱导的Hep-2细胞凋亡．结论：EB1089可能通过诱导Caspase-3活性增加的方式抑制Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡．     

新城疫病毒对TSCCa细胞survivin表达及细胞周期的影响

目的 研究新城疫病毒(NDV)对人舌鳞癌TSCCa细胞survivin表达及细胞周期的影响.方法 通过NDV体外感染人舌鳞癌TSCCa细胞,MTT方法 检测TSCCa细胞的生长情况;采用RT-PCR和Western bloting检测survivin表达变化;流式细胞术分析检测NDV感染后TSCCa细胞分裂周期各时相的变化及细胞凋亡情况.结果 NDV感染后TSCCa细胞降低survivin表达,细胞凋亡率增加,S和G2/M期细胞减少,增殖指数(PI)降低,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01).结论 NDV感染可抑制TSCCa细胞survivin的表达,影响细胞周期,诱导细胞凋亡.     

三氧化二砷体外诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人胃癌SGC 790 1细胞抑制生长、诱导凋亡的生物学效应。方法 :光学显微镜观察细胞形态 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)还原法检测As2 O3 对该细胞株生长的影响 ,流式细胞仪 (FCM )及 3′ OH末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果 :SGC 790 1细胞经As2 O3 作用后 ,细胞增殖受到明显抑制 ,且呈剂量和作用时间依赖关系 ,细胞周期分析显示G2 M期阻滞 ;FCM检测在细胞周期G1期前出现低于 2倍体的凋亡峰 ;TUNEL标记发现DNA链的断裂。结论 :As2 O3 能抑制人胃癌SGC 790 1细胞增殖 ,并诱导该细胞系凋亡 ,其发生机制可能与细胞周期阻滞有关。     

尼美舒利对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的干预作用

目的 :研究尼美舒利对肝癌SMMC 772 1细胞增殖、凋亡的干预作用。方法 :研究对象为SMMC 772 1肝癌细胞系 ,细胞增殖采用MTT比色法检测 ,细胞凋亡采用电镜观察、流式细胞仪和TUNEL法检测。结果 :尼美舒利显著抑制体外培养的SMMC 772 1细胞增殖 ,随着药物剂量的增加和时间的延长 ,SMMC 772 1的生长、增殖明显抑制 ,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术、TUNEL法检测示 ,使用不同浓度尼美舒利作用于SMMC 772 1细胞 72h后 ,可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,随着药物浓度增加 ,凋亡率和凋亡指数均显著增加 ,差异有显著性。结论 :选择性COX 2抑制剂尼美舒利可以显著抑制SMMC 772 1细胞增殖 ,且呈明显的时间、剂量依赖关系 ,同时诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,且具有剂量依赖性     

丝裂霉素诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡的研究

目的:研究丝裂霉素对胆囊癌细胞凋亡的影响。方法:在体外培养的胆囊癌细胞中加入不同浓度的丝裂霉素,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测胆囊癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征、细胞凋亡百分率及细胞周期的变化。结果:在丝裂霉素作用下,凋亡的胆囊癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带;流式细胞仪测定,出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高,分别与对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05);同时,S期细胞含量下降,而G_2/M期细胞含量上升。结论:丝裂霉素可诱导胆囊癌细胞发生凋亡,并可使胆囊癌细胞生长受阻于G_2/M期,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制。     

雷公藤内酯醇对人绒毛膜癌细胞株JAR增殖凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人绒癌细胞株JAR增殖、凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响。方法:以体外培养的人绒癌细胞株JAR为研究对象,MTT法检测TP对细胞增殖的抑制情况;TUNEL法观察TP作用于细胞后引起细胞凋亡情况,PCR和Western blot检测TP对凋亡调控蛋白BCL-2/BAX mRNA和蛋白表达的影响。结果:随着作用浓度的增加及时间延长,TP能明显抑制JAR细胞增殖并诱导其凋亡(P<0.05);并能下调凋亡抑制蛋白BCL-2的mRNA和蛋白的表达,上调凋亡促进蛋白BAX的mRNA和蛋白表达(P均<0.05)。结论:雷公藤内酯醇在体外能抑制人绒癌细胞株JAR增殖,诱导其凋亡;凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达水平的变化可能是TP诱导JAR细胞凋亡的重要机制。     

丹皮酚对人肝癌Bel-7404的抑瘤效应及其机制

目的：探讨丹皮酚（Paeonol，Pae）抑制人肝癌细胞株Bel-7404增殖作用及其分子机制。方法：应用光学显微镜、MTT法检测经不同浓度、不同时间Poe处理Bel-7404细胞后的增殖抑制作用；DNA凝胶电泳法、TUNEL法检测细胞凋亡；用RT—PCR法、免疫细胞化学ABC法检测抑癌基因PTEN和致癌基因Akt表达水平。结果：与空白对照组比，Pae能抑制人肝癌细胞Bel-7404的增殖，诱导其凋亡，光镜下可见明显的凋亡细胞；DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征；RT—PCR和免疫细胞化学检测显示，Poe处理Bel-7404后可使PTEN表达升高，Akt表达下降。结论：Pae具有抗Bel-7404细胞增殖的作用，其机制可能是通过抑制P13K通路，增强诱导其凋亡有关。     

姜黄素对人胃癌BGC-823细胞体外生长的影响

目的:观察姜黄素(CCM)对人胃癌BGC-823细胞体外生长的影响。方法:将0、30、60、90、120μmol/L CCM分别与人胃癌BGC-823细胞共培养24、48 h。采用显微镜直接观察BGC-823细胞的形态变化,采用MTT比色法检测BGC-823细胞抑制率,流式细胞术(FCM)检测胃癌细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果:CCM作用后的BGC-823细胞伪足回缩,细胞变小、变圆,瘤巨细胞减少或不见瘤巨细胞。MTT检测显示CCM显著抑制BGC-823细胞的生长,FCM检测提示CCM影响胃癌细胞周期,使其阻滞于G2/M期。TUNEL法表明CCM可以诱导胃癌细胞出现凋亡(P0.05～P0.01)。结论:姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖,改变其细胞周期分布,诱导胃癌细胞凋亡。