小胶质细胞和脑出血

小胶质细胞作为中枢神经系统重要的固有免疫细胞,在神经变性和神经炎性反应过程中起重要作用。小胶质细胞是中枢神经系统的"警察",任何神经中枢微小变化都会引起它的变化。脑出血是人类常见的急危重症疾病,发生率高、致残程度重,给社会和家庭带来沉重负担。本文就脑出血后小胶质细胞的激活、作用、凋亡等方面进行综述。     

大黄酚对LPS诱导小胶质细胞炎性因子分泌的影响

[目的]抑制小胶质细胞的过度活化,对中风、神经退行性病变等疾病的治疗有重要意义。考察大黄酚对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞炎性因子分泌的影响。[方法]培养小胶质细胞细胞株,检测大黄酚对小胶质细胞活力及LPS诱导的小胶质细胞一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)产生的影响。[结果]与LPS相比,大黄酚可以抑制NO、TNF-α的分泌。[结论]大黄酚可以抑制LPS诱导小胶质细胞炎性因子的分泌。     

钒暴露对大鼠小胶质细胞炎症反应和迁移的影响

目的观察偏钒酸钠(Na VO3·2H2O)暴露对小胶质细胞炎症反应和迁移的影响,探讨钒神经毒性的相关机制。方法偏钒酸钠孵育原代培养的SD大鼠小胶质细胞,免疫荧光技术显示小胶质细胞形态的变化及其特异性标志物Iba1的表达,免疫印迹技术检测i NOS、COX-2、ERK和p-ERK蛋白表达,酶联免疫吸附实验检测炎症因子TNF-α,IL-1β的释放水平;构建划痕迁移模型,免疫荧光技术记录偏钒酸钠对小胶质细胞迁移的影响。结果偏钒酸钠孵育小胶质细胞后,神经小胶质细胞形态由静息态的分支状向吞噬细胞样形态转变,其特异性标志物Iba1表达显著增加;i NOS和COX-2的蛋白表达和TNF-α,IL-1β释放水平与对照组相比较均显著升高;偏钒酸钠促进小胶质细胞的迁移。结论偏钒酸钠显著促进了小胶质细胞的炎症反应和迁移。     

心脑舒通及其单体成分对内毒素激活的小胶质细胞的影响

[目的]研究心脑舒通及其单体成分对小胶质细胞(BV-2)的影响及其作用机制。[方法]实验分为对照组、脂多糖刺激组、加药组,检测心脑舒通(不同稀释倍数的心脑舒通及其单体成分)对小胶质细胞活力及脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞一氧化氮(NO)产生的影响。[结果]心脑舒通对LPS诱导的小胶质细胞NO的产生无明显抑制作用,在心脑舒通13种单体成分中,伪原薯蓣皂苷、支脱皂苷元、薯蓣皂苷元可以在不影响细胞活力的情况下抑制NO产生。[结论]心脑舒通部分单体成分抑制激活小胶质细胞NO的产生可能是心脑舒通发挥神经保护作用机制之一。     

小胶质细胞在酒精性脑损伤中的作用

饮酒对中枢神经系统有重大影响,小胶质细胞是脑内原位免疫效应细胞,它在乙醇引起的神经毒性中有重要作用,可导致神经元死亡与退行性变;小胶质细胞有利于维持稳态而不是导致神经退行性变,小胶质细胞活化是乙醇引起损害的结果而不是损害的原因。本文对乙醇引起的神经元死亡和退行性变中小胶质细胞的反应及相应机制作一综述。     

小胶质细胞在阿尔茨海默病炎性反应中的双重作用

阿尔茨海默病(AD)是一种常见的老年神经变性疾病,目前认为β-淀粉样蛋白沉积引起的炎性反应是AD的病理机制核心。小胶质细胞是AD炎性反应中最主要的炎性细胞,介导并贯穿AD病理发展全程。其可被β-淀粉样蛋白激活,产生大量致炎性细胞因子和神经元毒性介质,从而诱发脑内炎性反应,导致神经元损伤、死亡。另一方面,激活的小胶质细胞可以吞噬β-淀粉样蛋白,从而减轻了β-淀粉样蛋白对脑组织的损害。本文就激活的小胶质细胞在AD脑内炎性反应中的双重作用予以综述。     

血栓通及单体成分人参皂苷Rd对内毒素激活小胶质细胞的影响

[目的] 研究血栓通及其单体成分对小胶质细胞(BV-2)的影响及其作用机制。[方法] 实验分为对照组、脂多糖刺激组、加药组和阳性药米诺环素组,CCK-8检测血栓通(不同稀释倍数的血栓通及其单体成分)对小胶质细胞活力的影响;Greiss法检测脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞一氧化氮(NO)产生的影响,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测炎性基因的表达。[结果] 血栓通在0.5~50 mg/L范围内对LPS诱导的小胶质细胞NO的产生没有抑制作用;在血栓通5种单体成分中,人参皂苷Rg1、Rb1、Re、三七皂苷对小胶质细胞NO的产生没有抑制作用;人参皂苷Rd在不影响细胞活力的情况下能明显抑制NO产生,并且能抑制炎症基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6) mRNA 的表达。[结论] 血栓通单体成分人参皂苷Rd抑制激活的小胶质细胞产生NO和iNOS 、IL-1β、IL-6 mRNA的表达可能是血栓通发挥神经保护作用的物质基础。     

关于谷氨酸激活脊髓小胶质细胞的研究

目的通过观察谷氨酸对脊髓小胶质细胞在形态和功能方面的改变,探讨谷氨酸能否激活脊髓小胶质细胞以及激活的最佳浓度和时间点。方法原代离体培养脊髓小胶质细胞,分别用细胞培养液作为阴性对照组、50μM的ATP刺激细胞1小时作为阳性对照组以及谷氨酸通过不同浓度（500μM,1000μM和2000μM）分别作用三个不同的时间点（30min、1h和2h）作为实验组,通过免疫细胞化学方法鉴定小胶质细胞,通过酶联免疫吸附法（ELISA）测定上清液中肿瘤坏死因子（TNF-α）和一氧化氮（NO）的表达水平。结果 500μM的谷氨酸孵育1h,小胶质细胞释放TNF-α并开始被使激活,在2h TNF-α释放量大大增加（P〈0.05）。对于1000μM和2000μM组,TNF-α在三个时间点增加量都非常明显（P〈0.05）,但并不呈现时间依赖性和浓度依赖性趋势。在1000μM 2h组,TNF-α释放量最多（P〈0.001）。而与对照组相比,谷氨酸浓度达到1000μM和2000μM且孵育时间需持续2h,脊髓小胶质细胞释放的NO才会明显增加（P〈0.05）。结论谷氨酸能够激活小胶质细胞,可能1000μM是其激活小胶质细胞的最佳浓度。     

甲基苯丙胺对大鼠小胶质细胞的损伤及炎性相关基因表达的影响

目的：观察甲基苯丙胺(methamphetamine,Meth)对原代小胶质细胞的损伤及炎性相关基因表达的影响。方法：原代培养SD胎鼠小胶质细胞,利用MTT和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)分别检测Meth引起小胶质细胞活力和凋亡的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应法(real-time PCR)观察Meth对小胶质细胞炎性相关因子mRNA表达的影响。ELISA及试剂盒法检测Meth作用后小胶质细胞白介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的分泌改变。结果：MTT实验显示,Meth降低小胶质细胞活力,呈浓度依赖性,浓度为200 μmol/L时与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。TUNEL实验结果显示200 μmol/L Meth可引起细胞凋亡,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。q-PCR结果显示Meth作用于小胶质细胞24 h可降低IL-24、一氧化氮合酶3(nitric oxide synthase 3,NOS3)表达水平,上调Peli3、Sigma受体1(Sigma receptor 1,Sig1-R)、IL-1β、IL-6、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的表达水平,差异有统计学意义(P＜0.05)。此外,蛋白水平亦发现,Meth可促进IL-6和TNF-α的分泌。结论：Meth可降低小胶质细胞活力,诱导小胶质细胞凋亡,并引起IL-1β、IL-1R、IL-6、TLR4等炎性因子mRNA表达变化,促进IL-6和TNF-α的分泌,进而可能损伤中枢神经系统,产生神经毒性。     

牛磺酸对大鼠脑缺血—再灌注时缺血区脑组织小胶质细胞活性的影响

目的观察牛磺酸是否能通过抑制脑缺血—再灌注时小胶质细胞激活,抑制炎性反应,发挥保护脑组织的作用。方法 2016年3月—2017年5月在首都医科大学北京市神经外科研究所进行实验。SD大鼠54只,6只用于制备栓子,余48只大鼠随机分4组各12只,缺血2 h再灌注4 h对照Ⅰ组,缺血2 h再灌注4 h给药Ⅰ组,缺血2 h再灌注22 h对照Ⅱ组,缺血2 h再灌注22 h给药Ⅱ组。应用血栓栓塞法制作大鼠短暂性局灶性脑缺血—再灌注动物模型,应用免疫组织化学方法检测主要组织相容性复合体(MHC)抗原,观察牛磺酸对局灶性脑缺血2 h后再灌注4 h及22 h小胶质细胞活性的影响。结果与对照组Ⅰ比较,给药Ⅰ组缺血侧灰质区、胼胝体区及尾壳核区含MHCⅠ、MHCⅡ抗原阳性小胶质细胞数目明显降低(t_(MHCⅠ)=3.594、5.169、4.269,t_(MHCⅡ)=3.511、3.087、4.743,P<0.01或0.05);与对照Ⅱ组比较,给药Ⅱ组缺血侧灰质区、胼胝体区、尾状壳核区、视神经区含MHCⅠ、MHCⅡ抗原阳性小胶质细胞数亦明显降低(t_(MHCⅠ)=11.691、13.262、6.070、1.914,t_(MHCⅡ)=30.533、38.554、5.913、2.311,P<0.01或0.05);结论牛磺酸可通过抑制脑缺血—再灌注时小胶质细胞激活,发挥对脑组织的全脑保护作用。     

Caffeic acid ester fraction from Erigeron breviscapus inhibits microglial activation and provides neuroprotection

Objective:To investigate the effects of caffeic acid ester fraction(Caf)from Erigeron breviscapus, mainly composed of dicaffeoylquinic acids(diCQAs),on microglial activation in vitro and focal cerebral ischemia in vivo.Methods:The production of nitric oxide(NO),tumor necrosis factorα(TNF-α),and interleukin-1β(IL-1β)induced by lipopolysaccharide(LPS)treatment in rat primary cultured microglia were measured by Griess reaction or enzyme-linked immunosorbent assay.Cell viability of cortical neurons was measured using AlamarBlue reagent.The behavioral tests and the infarct area of brain were used to evaluate the damage to central nervous system in rat middle cerebral artery occlusion(MCAO)model of cerebral ischemia.Real time polymerase chain reaction was used to determine the expression of inducible nitric oxide synthase(iNOS), TNF-αand IL-1βmRNA in ischemic cerebral tissues.Results:Caf inhibited the production of NO,TNF-αand IL-1βinduced by LPS treatment in primary microglia in a dose-dependent manner.Exposure of cortical neurons to conditioned medium from Caf-treated microglia increased neuronal cell viability(P<0.01)compared with conditioned medium from LPS-treated alone.In MCAO rat model of cerebral ischemia,Caf could significantly improve neurobehavioural performance and reduce percentage infarct volume compared with the vehicle group (P<0.05).Caf could also significantly inhibit the up-regulation of iNOS,TNF-α,and IL-1βgene expressions in ischemic cerebral tissues.Conclusion:Caf could suppress microglial activation,which may be one mechanism of its neuroprotective effect against ischemia.     

尼古丁对脂多糖诱导的大鼠小胶质细胞激活和白细胞介素6表达的影响

目的:观察尼古丁对脂多糖(LPS)诱导的原代大鼠脑皮层小胶质细胞激活的影响及对细胞因子白细胞介素6(IL-6)表达的影响,探讨尼古丁在PD中的可能作用机制.方法:培养原代大鼠脑皮质胶质细胞,纯化小胶质细胞,用尼古丁预处理30 min,再加入LPS,采用ELISA检测小胶质细胞不同时间点分泌IL-6的水平及免疫细胞化学检...     

鞘内注射芬太尼对急性炎性内脏痛大鼠背根神经节Nav1.8表达的影响

目的 探讨鞘内注射芬太尼对急性炎性内脏痛大鼠背根神经节(DRG)电压门控Nav1.8的影响.方法 将24只SD大鼠,用随机数字表法分为3组,每组8只,腹腔注射乙酸建立急性炎性内脏痛模型,实验中经L3、L4的留置管给药.对大鼠进行行为学评分,灌注取材L5或L6DRG,用免疫荧光染色方法观察Nav1.8表达的变化.结果 单...     

二甲双胍减轻氧糖剥夺/复糖复氧所诱导的小胶质细胞炎性反应

目的:研究二甲双胍在氧糖剥夺/复糖复氧所致小胶质细胞炎性反应中的作用?方法:建立氧糖剥夺/复糖复氧模型诱导小胶质细胞(BV-2细胞株)的活化,给予不同浓度(0.02?0.20?2.00 mmol/L)的二甲双胍预处理BV-2细胞,通过MTT活性和乳酸脱氢酶活性检测确定二甲双胍的有效浓度;通过酶联免疫吸附试验测定细胞上清炎性因子白介素(IL)-1?茁的含量,免疫荧光检测细胞表面分子CD11b的表达及蛋白免疫印迹法分析胞核蛋白κB的表达?结果:二甲双胍(2.00 mmol/L)能够减少氧糖剥夺/复糖复氧模型诱导的BV-2细胞乳酸脱氢酶的释放并增加MTT的活性,降低细胞表面分子CD11b的表达,抑制胞核蛋白κB的核转位,减少IL-1?茁的生成与释放?结论:二甲双胍能够减轻氧糖剥夺/复糖复氧所致小胶质细胞的炎性反应?     

ClC-3氯通道调节氧糖剥夺所诱导的小胶质细胞的表型转化

目的:研究ClC-3氯通道在氧糖剥夺所致小胶质细胞表型转化中的作用?方法:应用小胶质细胞株(BV-2)制备氧糖剥夺模型,分别给予氯通道阻断剂DIDS和NPPB预处理BV-2细胞?通过MTT活性测定确定BV-2细胞损伤及药物的有效浓度;通过实时荧光定量PCR法测定细胞表型相关分子,如M1型相关分子[肿瘤坏死因子-?琢(tumor necrosis factor-?琢,TNF-?琢)?白介素-1β(interleukin 1?茁,IL-1?茁)?CD86]和M2型相关分子[转化生长因子?茁(transforming growth factor β,TGF-β)?CD206]mRNA水平的表达;通过RNA干扰的方法下调ClC-3的表达,再给予氯通道阻断剂DIDS和NPPB干预,进一步检测细胞的MTT活性,观察药物作用效果?结果:预先给予DIDS(1和10 μmol/L)和NPPB(1 μmol/L)能够改善氧糖剥夺所诱导的BV-2细胞MTT活性下降,抑制M1型相关分子如TNF-?琢?IL-1?茁和CD86的表达并促进M2型相关分子(TGF-?茁和CD206)的表达;通过RNA干扰下调ClC-3的表达,能够消除DIDS和NPPB的作用?结论:ClC-3氯通道参与调控氧糖剥夺所致小胶质细胞的表型转化,阻断ClC-3氯通道抑制氧糖剥夺诱导小胶质细胞向M1型转化?     

小胶质细胞组蛋白去乙酰化酶3在低压低氧诱导的氧化应激中的作用

目的 探究低压低氧对脑内氧化应激的影响及小胶质细胞HDAC3在其中的作用.方法 将野生型小鼠置于模拟海拔高度6000米的低压舱中连续饲养7 d,随后取小鼠海马组织并提取RNA,实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测氧化应激标志物诱导...     

阻断Nav1.8通道对右侧星状神经节的影响

目的 研究利用电压门控钠离子通道1.8(Nav1.8)特异性阻断剂A-803467局部阻断Nav1.8对右侧星状神经节(RSG)的影响.方法 24只成年家犬随机分为对照组(DMSO)、低浓度组、中浓度组和高浓度组,每组6只,向RSG内局部分别注射0.1 mL DMSO和低(10 mmol/L)、中(15 mmol/L)、高浓度(20 mmol/L)的A-803467,并在注射前和注射后30 min测定由高频刺激RSG引起的最大心率的变化情况和RSG的神经活性频率和振幅变化情况.以刺激电压为横坐标,心率变化的最大百分比为纵坐标绘制出的电压-心率反应曲线以反映RSG的功能情况.结果 在基础状态时,对照组和低、中、高浓度组的RSG功能和神经活性比较,差异均无统计学意义(P>0.05);在注射A-803467后30 min,可观察到电压-心率反应曲线明显钝化,RSG功能显著降低,RSG神经活性频率和振幅明显减小,差异均有统计学意义(P<0.05).且A-803467的浓度越高,电压-心率反应曲线钝化程度越大,RSG功能降低越显著,频率和振幅越小.结论 阻断Nav1.8通道可以抑制RSG功能和神经活性,且阻断剂浓度越大,抑制效应越强.     

胆碱受体激动剂对谷氨酸诱导小胶质细胞增殖的影响

目的：观察尼古丁及卡巴胆碱对谷氨酸诱导的小胶质细胞增殖的影响．方法：培养的小胶质细胞系,加入不同浓度的尼古丁、卡巴胆碱及谷氨酸,用MTT方法检测细胞活性,观察对小胶质细胞数量的变化．结果：培养的小胶质细胞提示,尼古丁及卡巴胆碱显著减少谷氨酸诱导小胶质细胞数量的增多,有剂量依赖效应,10μmol／L浓度效果最为显著．结论：尼古丁及卡巴胆碱可显著抑制谷氨酸诱导小胶质细胞活化的增殖．     

LPS激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用研究

目的 探讨脂多糖(LPS)激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用.方法 用佛波酯诱导人单核细胞(THP-1)分化为巨噬细胞.实验分为对照组、LPS组、LPS+NLRP3 siRNA组、LPS+Scrambled siRNA组.采用免疫荧光染色检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白ASC的共定位、Western blotting检测NLRP3蛋白的表达、ELISA检测细胞培养上清白介素1β(IL-1β)的浓度.结果 与对照组相比,NLRP3和ASC蛋白的共定位明显增多,LPS组NLRP3蛋白的表达增强.LPS还能使细胞培养上清IL-1β的浓度显著升高,NLRP3 siRNA干扰后细胞培养上清IL-1β的浓度显著降低.结论 LPS可以促进炎性小体成分NLRP3、ASC的表达,激活NLRP3炎性小体,刺激巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β.     

热射病小鼠脑组织小胶质细胞活化的变化

目的 研究热射病小鼠脑组织中小胶质细胞活化的变化情况,初步探讨小胶质细胞在热射病脑损伤中的作用.方法 采用小动物环境模拟舱建立温度(41.2±0.5)℃,相对湿度(60±2)％的热暴露损伤模型,将57只BALB/c雄性小鼠分为正常组和热射病1、6、24 h组.Real-time PCR检测大脑皮层M1型极化标志物TNF-α、CD45和CD11b的表达,以及M2型极化标志物Arg1、FIZZ和CD206的表达.Western blot检测各组大脑皮层CD45、CD11b、FIZZ和CD206的表达.免疫组织荧光技术检测CD45和CD206的分布和共定位表达.结果 Real-time PCR检测结果显示M1型极化标志物TNF-α、CD45和CD11b在热损伤后1h达高峰,而M2型极化标志物Arg1、FIZZ和CD206在热损伤后24 h达高峰(P＜0.01).Western blot检测M1型极化标志物CD45及CD11b的蛋白表达量,在1h后显著升高,随后逐渐下降,24 h后最低;M2型极化标志物FIZZ与CD206的表达趋势并不完全一致,但二者均在24 h后显著升高并达峰值(P＜0.01).免疫组织荧光染色结果显示CD45和CD206共定位表达于热射病小鼠大脑皮层,且分别在热损伤后1h和24 h荧光光密度增强.结论 热射病后小鼠脑组织小胶质细胞出现明显活化,其活化的规律表现为热射病后1h主要为M1型极化,而在热射病后24 h则主要表现为M2型极化,这种变化形式可能与热射病后出现的中枢神经损伤有关.