青藤碱对淋巴瘤Daudi细胞增殖及α7nAChR表达的影响

【目的】探讨青藤碱(SIN)对Burkkit淋巴瘤Daudi细胞增殖及α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)表达的影响。【方法】采用CCK-8法观察Daudi细胞的生长特点。分别以青藤碱及对照药物烟碱(Nic)、甲氨喋呤(MTX)干预48 h后,采用CCK-8法检测各组Daudi细胞增殖情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Daudi细胞α7nAChR蛋白表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测α7nAChR mRNA表达。【结果】与空白对照组比较,青藤碱抑制Daudi细胞增殖,增加细胞早期凋亡率;Nic促进Daudi细胞增殖,降低凋亡率;MTX抑制Daudi细胞增殖,增加凋亡率。Western blot和RT-PCR检测发现青藤碱降低Daudi细胞α7nAChR蛋白和mRNA表达,Nic增加Daudi细胞α7nAChR蛋白和mRNA表达,MTX对Daudi细胞中α7nAChR蛋白和mRNA表达没有明显影响。【结论】青藤碱对Burkkit淋巴瘤Daudi细胞增殖具有抑制作用并抑制α7nAChR表达,与MTX抗淋巴瘤细胞增殖的机制不同。     

青藤碱对肺癌细胞A549中COX2、α7nAChR和A2A表达的影响

【目的】观察青藤碱(sinomenine,SIN)对环氧化酶2(COX2)、α7烟碱型乙酰胆能受体(α7nAChR)和腺苷受体(A2A)表达变化的影响,探讨青藤碱对A549细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测青藤碱和4-甲基亚硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)对A549细胞增殖的影响;细胞划痕实验观察青藤碱和NNK对A549细胞迁移的影响;Western blot法观察青藤碱和NNK对A549细胞COX2蛋白表达的影响;RT-PCR和Western blot法观察青藤碱和NNK对A549细胞α7n ACh R、A2A表达的影响。【结果】NNK能促进增殖和迁移,青藤碱能抑制A549细胞增殖和迁移;NNK组COX2蛋白质水平增加,青藤碱组COX2蛋白质水平下降;NNK组α7n ACh R、A2A的表达增加,青藤碱组α7n ACh R、A2A表达下降。【结论】青藤碱能通过抑制COX2蛋白表达发挥抗A549细胞增殖和迁移作用;青藤碱对α7n ACh R和A2A受体的表达均有抑制作用。     

青藤碱对细菌内毒素刺激的小鼠及巨噬细胞嘌呤受体A2A、P2X_7表达的影响

【目的】探讨青藤碱(sinomenine,SIN)对细菌内毒素(LPS)刺激的小鼠内毒素血症模型及巨噬细胞RAW264.7细胞炎症模型嘌呤受体A2A、P2X7表达的影响。【方法】选用BALB/c小鼠设空白对照组,模型组,青藤碱组(剂量分别为40、80、160 mg/kg),青藤碱组给予腹腔注射青藤碱30 min后,模型组和青藤碱组给予腹腔注射LPS(剂量为15 mg/kg)建立内毒素血症小鼠模型,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏、脾脏嘌呤受体A2A、P2X7的表达。RAW264.7细胞设空白组、LPS组、青藤碱组,青藤碱组给予青藤碱(300μmol/L)干预2 h后,LPS组和青藤碱组均给予LPS(剂量为100 ng/m L),继续培养8 h后,采用ELISA法检测上清TNF-α分泌量,RT-PCR法检测细胞P2X7、A2A m RNA表达。【结果】在LPS刺激下,小鼠血清TNF-α和IL-6水平显著上升,肝脏、脾脏组织中嘌呤受体A2A、P2X7的表达显著升高,青藤碱能下调TNF-α和IL-6水平,并抑制A2A、P2X7的表达(均P0.05);体外LPS刺激下,RAW264.7细胞分泌TNF-α增加,A2A、P2X7的表达增加,青藤碱可抑制TNF-α的分泌,并下调P2X7的表达(均P0.05),但对A2A的表达有促进作用。【结论】青藤碱对LPS刺激的小鼠肝脏、脾脏及体外巨噬细胞中嘌呤受体P2X7的表达增加均表现抑制作用,而对不同组织细胞中A2A表达的影响不同,相关机制有待深入。     

四氢黄连碱体外抗炎作用及机理研究

【目的】观察四氢黄连碱(THC)的体外抗炎作用及其相关机理。【方法】将体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞分为空白对照组,模型对照组,四氢黄连碱低、中、高剂量组。以脂多糖(LPS)刺激小鼠原代腹腔巨噬细胞建立体外细胞炎症模型,作为模型对照组。四氢黄连碱低、中、高剂量组分别以不同浓度(终浓度为1、2、3μmol/L)的四氢黄连碱预培养小鼠巨噬细胞24 h后,加入LPS(终浓度为10μg/mL)。空白对照组加入相同体积的细胞培养液。继续培养12 h后,采用硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;实时定量PCR(q PCR)法检测细胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)mRNA的表达;酶联免疫吸附分析(ELISA)检测细胞上清液中TNF-α、IL-6含量;ELISA检测细胞内核因子kappa B(NF-κB)与DNA的结合活性。【结果】与空白对照组比较,模型对照组小鼠巨噬细胞上清液中NO、TNF-α、IL-6含量,巨噬细胞TNF-α、IL-6 mRNA表达及NF-κBp65与DNA的结合活性均显著升高(P 0.001);经四氢黄连碱预处理小鼠巨噬细胞24 h后,上述指标均显著降低,且呈剂量依赖性(P 0.05或P 0.01或P 0.001)。【结论】四氢黄连碱具有显著的体外抗炎作用,其机理可能与阻断细胞内NF-κB信号通路的激活,从而下调促炎因子NO、TNF-α及IL-6的表达和分泌有关。     

青藤碱抗炎作用机理研究

【目的】通过观察青藤碱对人环氧化酶(COX)、白介素-1β(IL-1β)基因表达的影响,探讨青藤碱的抗炎作用机理。【方法】分离正常人外周血单核细胞(PBMC),体外加药培养,提取细胞总核糖核酸(RNA),采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察青藤碱对脂多糖(LPS)刺激和非LPS刺激状态下环氧化酶及IL-1β基因表达的影响。【结果】青藤碱对COX-1基因表达无明显影响,对COX-2基因表达仅有轻微的抑制作用,而对IL-1β基因表达的抑制作用较强。【结论】青藤碱可能是通过抑制炎症性细胞因子的产生而发挥其抗炎作用。     

青藤碱对佐剂性关节炎大鼠TLR4/MyD88信号通路的影响

目的：：探讨青藤碱对佐剂性关节炎大鼠TLR4/MyD88信号通路诱导炎症的影响。方法：选择清洁级SD大鼠40只,随机分为模型组、青藤碱组、甲氨蝶呤组及正常对照组。前3组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠佐剂性关节炎模型,正常对照组大鼠右后足跖皮内注射等量0.9%氯化钠注射液。4组分别干预4周后,取膝关节滑膜,采用Real-time PCR法检测TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达,ELISA法检测炎性因子TNF-α。结果：模型组大鼠膝关节滑膜组织TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及炎性因子TNF-α表达均较正常对照组明显升高(P<0.01)。经青藤碱治疗后,TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及炎性因子TNF-α表达均较模型组明显下降(P <0.01)。结论：青藤碱可改善佐剂性关节炎大鼠的关节炎症,该作用可能与抑制TLR4/MyD88信号通路有关。     

槐定碱对小鼠巨噬细胞TLR4及JNK/c-jun mRNA表达的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞表达TLR4、JNK和c-jun mRNA及分泌TNF-α的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW 264.7巨噬细胞,实验分为4组:空白对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱预处理组,用RT-PCR技术检测RAW 264.7细胞TLR4、JNK和c-jun的mR-NA表达量,放免法检测细胞培养液TNF-α分泌量。结果槐定碱对RAW 264.7巨噬细胞TLR4、JNK、c-jun的mRNA及细胞培养液中TNF-α基础表达无影响,但对经LPS激活的巨噬细胞的TLR4、JNK mRNA表达有显著抑制作用(均P<0.01),c-jun mRNA表达亦降低,但与LPS模型组比较差异尚无统计学意义。槐定碱预处理组细胞液中TNF-α含量显著低于LPS模型组(P<0.01)。结论槐定碱抗内毒素机制与其抑制LPS引起的TLR4、JNK的mRNA高表达,并减少TNF-α分泌有关。     

肾小管上皮细胞fractalkine的表达介导对巨噬细胞的趋化作用

【目的】探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E上调表达趋化因子fractalkine的时间和剂量效应，并观察肾小管上皮细胞fractalkine表达是否介导了对巨噬细胞的趋化作用。【方法】应用免疫荧光细胞化学技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹法检测TNF-α诱导的NRK-52E fractalkine表达，应用Transwell装置观察NRK-52E对大鼠巨噬细胞株RAW 264．7的趋化效应．以及fractalkine中和抗体对趋化效应的影响。【结果】正常培养的NRK-52E可表达少量的fractalkine，TNF-α(40ng／mL)mL]激后1h，fractalkine的mRNA和蛋白表达增加尚不明显，在刺激后6h表达即明显增加，持续至24-48h。10ng／mLTNF-α即可诱导fractalkine mRNA和蛋白表达增加，20ng／mL及40ng／mLTNF-α诱导fractalkine表达增加的效应更加明显。NRK-52E fractalkine表达上调可明显增强其趋化巨噬细胞的效应．而fractalkine中和抗体可明显抑制此种趋化效应。【结论】TNF-α能够以时间和剂量依赖方式上调肾小管上皮细胞fmctalkine的mRNA和蛋白表达，且fractalkine在介导肾小管上皮细胞对巨噬细胞的趋化作用中起重要作用。     

血管内皮细胞生长因子在抗结核免疫中的作用及机制

【目的】探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)对巨噬细胞抗结核免疫作用的影响。【方法】为了研究VEGF与结核病(TB)之间的相关性,分离健康人和肺结核病人的外周血单核细胞(PBMC),Real-time PCR检测VEGF的表达水平;体外实验中,用卡介苗(BCG)感染佛波酯(PMA)诱导分化的THP-1细胞,PCR检测VEGF的表达水平。进一步探讨VEGF在抗结核免疫中的作用,分别用BCG单独处理或BCG与VEGF共同处理THP-1诱导分化的细胞,Real-time PCR检测促炎因子TNF-α,IL-6,IFN-γ,MIP-2的表达水平;Griess法检测培养上清中一氧化氮(NO)的产生。【结果】肺结核病人的PBMC中VEGF表达水平相对于健康人明显升高。BCG感染THP-1诱导分化的巨噬细胞后,VEGF表达水平上调;VEGF显著增强BCG感染的巨噬细胞中TNF-α,IL-6,IFN-γ,MIP-2的表达和NO的产生。【结论】肺结核病人的PBMC和BCG感染的巨噬细胞中VEGF表达均显著上调,并可能通过影响促炎因子和NO的产生调节巨噬细胞的抗菌活性,提示VEGF可能是治疗结核病的一个靶点。     

ERK1／2和P38信号通路在瘦素诱导巨噬细胞TNF-α表达中的作用

【目的】研究瘦素（1epfin）诱导小鼠腹腔巨噬细胞（PM）分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响，以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在这一过程中的作用。【方法】体外培养小鼠PMs，按瘦素不同浓度和，或MAPK特异性抑制剂PD98059、U0126、SB203580、SP600125进行分组。分别收集培养细胞和上清液，用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清中TNF-α水平。用蛋白印迹（Westem blot）方法测定细胞内p-ERK1／2、p-p38，以及p-JNK的表达水平，用逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）测定TNF-α mRNA的表达。【结果】瘦素能够剂量依赖性的诱导小鼠PM产生TNF-α，在瘦素质量浓度为75ng／mL时TNF-α表达至峰值，是对照组的6．6倍。瘦素可以活化ERK1/2和p38 MAPK信号转导通路，瘦素处理组的p-ERK1、p-ERK2、p-p38表达水平分别是对照组的2．3、2．4和2．6倍。ERK1／2的特异性抑制剂PD98059、U0126和p38的特异抑制剂SB203580能够分别抑制瘦素引起的ERK1／2、p38蛋白磷酸化以及TNF-α mRNA增加，两者的联合作用可以强烈抑制TNF-α mRNA的表达，而JNK信号转导途径与瘦素诱导PM表达TNF-α无关。【结论】瘦素在小鼠PM中通过同时活化ERK1／2、p38 MAPK信号转导通路而诱导细胞产生TNF-α。     

甲型H1N1流感病毒在季流病毒、禽流感病毒共感染时变异可能性的验证

目的 甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009分别与A/Brisbane/10/07和A/ShenZhen/406H/06共感染小型香猪,预测甲流病毒在与季流H3N2病毒/甲流病毒与禽流感病毒共感染时是否会发生变异.方法 分别将A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)对5～6月龄小型猪共感染,小型猪经复方氯胺酮0.1 mL/kg麻醉后进行滴鼻感染,感染后第5天安乐死动物,取动物肺组织作病毒测序分析.结果 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2)共感染后,A/California/7/2009病毒PB1基因993位G→A突变,PA基因1659位G→A突变,没有氨基酸的变异.A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后A/California/7/2009病毒PB2基因1711位T→C突变.碱基的突变未引起氨基酸的变异.结论 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后在猪的体内没有发生病毒重组、变异.     

胰腺细胞缩胆囊素和胆碱能受体对细胞内Ca~2 的调节

本文使用Fura-2做为细胞内钙离子荧光指示剂,在大白鼠胰腺分离细胞观察缩胆囊素和乙酰胆碱对细胞内钙离子的影响及其相互作用.结果表明1nmol/L缩胆囊素和lmmol/L乙酰胆碱分别使细胞内钙离子浓度从基础水平的122±8nmol/L增高至360±32nmol/L和380±20nmol/L,半最大有效浓度分别为0.45nmol/L及54μmol/L。不同剂量的缩胆囊素和乙酰胆碱彼此不同程度抑制对方的作用,后加入的试剂提高细胞内钙离子浓度的幅度与先加入的试剂所引起的增加幅度成反比,加入各自相应的受体拮抗剂可使细胞恢复对另一激素(蛙皮素)刺激的反应。说明了缩胆囊素受体和胆碱能受体的相互调节影响细胞内钙离子的活动.加入受体拮抗剂后,细胞恢复反应过程中的时间动力学改变可能与受体阻滞后钙离子通道关闭的程度和时间有关.     

甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.     

A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒感染力比较

目的甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒序列比较同源性在99%以上,本实验旨在比较两株病毒感染BALB/c小鼠研究感染力强弱。方法分别将A/California/7/2009(CA7)与A/California/4/2009(CA4)两株病毒分别连续10倍稀释后,对4~6周龄雌性BALB/c小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,每个稀释度接种10只实验小鼠,测定CA7 MLD50为101.24/0.05 mL,检测小鼠感染、致病的多项指标,观察期为14 d。结果相同TCID50的CA7和CA4病毒感染小鼠,CA4感染小鼠后14 d内死亡率为20%,而CA7感染小鼠后8 d内死亡率为100%。CA7 106TCID50感染的小鼠病理表现为重度弥漫性间质性肺炎,CA4 106TCID50感染的小鼠病理表现为中度-重度间质性肺炎。结论在相同条件下,CA7感染力明显强于CA4。     

可手术胃癌血清HER-2/neu ECD水平与临床特征及疗效的研究

目的：探讨可手术胃癌患者血清HER-2/neu胞外域部分(ECD)水平与临床特征及疗效的关系。方法：收集江苏省连云港市第二人民医院2010年01月至2010年12月,可手术胃癌患者46例进入研究,术前、术后收集血清,同时获取15例正常人、22例胃良性病变患者血清为对照组。另外收集7例血清HER-2/neu ECD阳性患...     

赐百龄胶囊质量标准的实验研究

赐百龄胶囊系选用螺旋藻为原料直接精制而成。本研究采用吸收光谱法鉴别蓝藻蛋白，可见６２０ｎｍ的特征吸收峰。采用三氯化锑试管反应鉴别β－胡萝卜素，显蓝绿色。采用ＴＬＣ鉴别氨基酸，可显７个斑点。采用ＴＬＣ鉴别多糖水解液，可显３个斑点，其中２个斑点与葡萄糖、半乳糖对应．采用氨基酸分析仪测定游离、水解氨基酸，含丰富的人体必需的氨基酸，总量高达５５％以上。采用凯氏定氮法测定总氮量，提示蛋白质总量高达６０％以上。采用柱层析－ＵＶ法测定β－胡萝卜素，含量为４４ｍｇ％。     

服镁后血镁钙及24小时尿钙和钙/肌酐比值变化

研究服镁后，血镁钙及24h尿钙和钙／肌酐比值变化及与妊高征发生的关系。方法：采用前瞻性随机双盲的方法，对治疗组52例（治疗1组24例和治疗2组28例）孕妇自孕28周起，连续服用葡萄糖酸镁，每日3g。结果：治疗组血钙明显高于对照组；治疗2组的尿钙和钙／肌酐明显高于对照2组，且妊高征发生率3．57％，明显低于对照2组（30．77％）；治疗组和对照组尿钙与钙／肌酐比值分别呈正相关关系。结论：服镁后，调节体内钙平衡，使妊高征发生率降低。     

镉对大鼠胚胎损害作用的实验研究

目的 :探讨镉对大鼠胚胎的毒性效应及可能机制。方法 :雌雄性 SD大鼠按 2∶ 1同笼交配获取 38只孕鼠 ,随机分为 4组 (对照组 ,低镉组 ,中镉组 ,高镉组 )。分别在妊第7、1 0、1 3天经腹腔注射生理盐水和不同剂量的氯化镉 ( Cd Cl2 ) ,妊 2 1 d,剖宫取胎鼠 ,活杀取出胎鼠的肝、脑组织称重后测定 Cd、Zn、Ach、AKP、DNA含量。结果 :1高镉组未见存活胎鼠 ;2染镉组胎鼠肝中镉增加 ( P<0 .0 5 ) ,脑中锌有下降趋势 ;3染镉组胎鼠肝组织中的AKP活性 ,脑组织中的 Ach、DNA含量较对照组减低。结论 :1高剂量的镉可使孕鼠胚胎发育异常 ;2母鼠染镉可致胎鼠肝中 AKP酶活性降低及脑组织中 Ach、DNA含量减少 ,抗脂质过氧化能力减弱。     

动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素与血脂检测结果分析

目的:探讨血清胆红素浓度与四种动脉粥样硬化( AS)性疾病的关系。方法:观察组分为四组,单纯性高血压组、冠心病组、糖尿病组、脑梗死组,对照组为同年龄段健康查体者,检测空腹血清总胆红素、直接胆红素、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇,计算间接胆红素,并对检测结果进行统计学分析。结果:与对照组比较,观察组中直接胆红素均有所下降,但差异无显著统计学意义( P>0 .0 5 ) ,总胆红素与间接胆红素除脑梗死组外,其他各组均明显降低( P<0 .0 5 ) ;除脑梗死组HDL - C与对照组无显著差异外,其他观察组血脂各指标与对照组比较均有显著统计学差异( P<0 .0 5 ) ,且糖尿病组三酰甘油及冠心病组低密度脂蛋白胆固醇与对照组比较有极显著统计学差异( P<0 .0 1 )。结论:高血压、冠心病、脑梗死、糖尿病等动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素浓度有不同程度降低,其中,间接胆红素降低更明显,提示可将胆红素水平作为AS患者体内氧化活性增加的一个临床监测指标     

黄体不健的生殖内分泌变化

黄体不健是不孕症的重要原因之一。本文对52例黄体不健者采用放射免疫法测定其早卵泡期血请FSH、LH、PRL、E_2和黄体中期血清PRL、E_2,P_0水平,并与正常对照组进行比较。结果表明:黄体不健组早卵泡期FSH、LH、E_2及黄体中期P_0水平较正常对照组低,而PRL水平则高于正常对照组,其差别均有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)。由此说明,黄体不健与卵泡发育障碍有关。因而认为对黄体不健的治疗,如果采用补充黄体酮的方法仅是“治标”,而促进卵泡发育成熟才是“治本”。并认为中医药的周期疗法可能为此打开一条有效途径。