急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响

为探讨急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响，选择对于心肌有特异性损害作用的异丙基肾上腺素（ＩＳＰ），造成大鼠实验生心肌损害的动物模型，动态观察心肌损害时肌球蛋白磷酸化系统的变化规律。研究结果表明，低剂量ＩＳＰ导致心肌匀浆中肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和肌动球蛋白ＡＴＰ酶的活性下降，但心肌组织病理切片基本正常；高剂量注射ＩＳＰ，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性显著下降，与正常对照组和低剂量组相比，差异十     

急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响

为探讨急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响，选择对于心肌有特异性损害作用的异丙基肾上腺素（ＩＳＰ），造成大鼠实验性心肌损害的动物模型，动态观察心肌损害时肌球蛋白磷酸化系统的变化规律。研究结果表明，低剂量ＩＳＰ导致心肌匀浆中肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和肌动球蛋白ＡＴＰ酶的活性下降，但心肌组织病理切片基本正常；高剂量注射ＩＳＰ，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性显著下降，与正常对照组和低剂量组相比，差异十分显著（Ｐ＜０．０１）。在病理形态学上大鼠心肌组织有多处较大的坏死灶。提示，在未发生明显的病理性变化前，心肌细胞内就已发生了一系列的代谢紊乱，如酶活性下降，心肌细胞的收缩功能发生改变；当心肌组织出现病理形态学改变时，细胞内酶活性显著下降，表明已由可逆性损害发展到不可逆的心肌坏死。     

心肌急性损伤肌球蛋白轻链激酶酶促反应动力学研究

以内毒素休克狗作为急性心肌损害的动物模型，从心肌中提纯肌球蛋白轻链（ＭＬＣ）和肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ），根据酶动力学分析法研究急性损害对ＭＬＣＫ活性的影响。结果发现在此种状态下狗心肌ＭＬＣＫ活性显著降低，推测ＭＬＣＫ活性降低导致可磷酸化轻链（ＰＬＣ）磷酸化的磷酸酶相对占优势，磷酸化型Ｐ－ＬＣ向去磷酸化型转变。     

兔骨骼肌肌球蛋白轻链的分离纯化

目的 从兔骨骼肌中提取肌球蛋白轻链,为下一步研究肌肉收缩原理提供可磷酸化的底物。方法 用离心、透析、柱层析、ＳＤＳ聚丙烯配角安凝胶电流（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和电泳轩移等方法纯化兔骨骼肌肌球蛋白轻链。结果 提取纯化得到较纯的肌球蛋白,进一眇是到轻 混合液和各种轻链纯品,经紫外吸收检测及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实其分子量分别为２５０００（ＭＬＣ１）、１９０００（ＭＬＣ２）和１６５００（ＭＬＣ３）,均与文献报道     

脑中风病人血小板肌球蛋白轻链激酶和Ca~(2 ),Mg~(2 )-ATP酶活性变化的研究

目的探讨急性缺血性脑血管病血小板肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的变化及钙拮抗剂对Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的影响。方法用３２Ｐ同位素掺入法和比色法分别测定５８例脑中风病人，包括２２例短暂性脑缺血发作（ＴＩＡ）患者和３６例脑梗塞患者以及３５名健康对照者血小板ＭＬＣＫ和Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性。结果ＴＩＡ组和脑梗塞组ＭＬＣＫ活性与对照组相比均有明显增加（Ｐ＜０．０１），而Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性均低于对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。在ＴＩＡ组和脑梗塞组之间，这两种酶活性无明显差异（Ｐ＞０．０５）。用钙拮抗剂ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ治疗后，ＴＩＡ组和脑梗塞组患者Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性均有部分恢复（Ｐ＜０．０５）。结论血小板ＭＬＣＫ和Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性与急性缺血性脑血管病的发生有密切关系，钙拮抗剂可部分改善血小板Ｃａ＋２，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性状态。     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞曹受过氧化损伤，同时使用硒、维生素等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B_2轻链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３－Ｂ２轻链可变区（ＶＬ）基因并测定其核苷酸序列。方法用ＰＣＲ方法体外扩增单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ＶＬ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，将其序列通过Ｉｎｔｅｒｎｅｔ与ＧｅｎｅＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪ和ＰＤＢ已发表的抗体序列进行比较分析。结果ＶＬ基因全长３３６ｂｐ，属小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类（ＳｕｂｇｒｏｕｐⅡ），由种系基因的ＶＫ及Ｊ基因的ＭＵＳＪＫ２重排而成。该ＶＬ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｅｓｉｏｎＮｏ．ｇｂＡＦ０４４０７７）。结论该ＶＬ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２功能性轻链可变区基因。     

ABNORMAL CARDIOVASCULAR REFLEXES IN PATIENTS WITH ACHALASIA

ＡＢＮＯＲＭＡＬＣＡＲＤＩＯＶＡＳＣＵＬＡＲＲＥＦＬＥＸＥＳＩＮＰＡＴＩＥＮＴＳＷＩＴＨＡＣＨＡＬＡＳＩＡＧｅＦｅｎｇ（戈烽）；ＬｉＺｅｊｉａｎ（李泽坚）ａｎｄＫｅＭｅｉｙｕｎ（柯美云）（ＰＵＭＣＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣＡＭＳ＆ＰＵＭＣ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１...     

羟自由基对心肌肌球蛋白巯基和酶活性的影响

用大鼠心肌肌球蛋白与羟自由基（ＯＨ·）发生系统Ｈ２Ｏ２／ＦｅＳＯ４孵育，测定肌球蛋白巯基含量和Ｃａ２＋－激活的肌球蛋白ＡＴＰ酶活性，并观察组氨酸对这些指标变化的影响。结果发现：（１）ＯＨ·引起心肌肌球蛋白ＡＴＰ酶活性显著下降，同时酶蛋白巯基含量也相应减少，呈明显的剂量反应和时间依赖关系；酶活性与巯基含量之间呈密切正相关。（２）组氨酸能显著减轻ＯＨ·引起的肌球蛋白巯基含量减少，且对肌球蛋白ＡＴＰ酶的保护具有剂量依赖效应。研究表明：ＯＨ·可通过氧化酶蛋白巯基引起Ｃａ２＋－激活的肌球蛋白ＡＴＰ酶活性降低，这可能是缺血再灌注心肌收缩功能减弱的机理之一。组氨酸能阻断酶蛋白巯基被ＯＨ·氧化分解，有较强的抗自由基损伤作用。     

蒲败灌肠液抗慢性结肠炎自由基损伤的研究

通过对４０例慢性结肠炎患者及３０例健康人的对比观察，发现任性结肠炎患者血中丙二醛（ＭＤＡ）含量升高，谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）、红细胞过氧化氢酶（ＣＡＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、维生素Ｃ（ＶＣ）、维生素Ｅ（ＶＥ）水平降低，呈负相关性，运用中药蒲败灌肠液治疗后ＭＤＡ明显下降。而ＧＳＨＰＸ、ＣＡＴ、ＳＯＤ、ｖｃ，ＶＥ水平较治疗前升高。由此推论自由基损伤是慢性结肠炎普遍的发病机理，抗自由基损伤是清热解毒化湿法治疗慢性结肠炎的机理之一。     

硒和维生素E对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成代谢的影响

目的：研究硒（Se）及维生素E（VE）对去甲肾上腺素（NE）处理的心肌成纤维细胞（CFbs）Ⅰ型胶原合成的影响。方法：酶消化法获得Wistar大鼠乳鼠CFbs,与NE、Se和VE作用一定时间后,测定上清中羟脯氨酸（HYP）和Ⅰ型胶原含量。结果：Se、VE及Se+VE组培养液中HYP含量分别为（64.88±1.25）、（47.60±1.59）和（41.34±1.73）mg·L^-1 prot,明显低于NE组［（68.27±1.89）mg·L^-1 prot］（P<0.05）,Ⅰ型胶原含量分别为(0.67±0.05)、(0.40±0.03)和 0.39±0.04,与NE组（0.90±0.15）比较,差异有显著性（P<0.05）。结论：Se和VE单独应用可抑制CFbs Ⅰ型胶原的合成,二者联合应用具有协同作用。        

光甘草定通过p38/MAPK通路调控动脉粥样硬化模型兔动脉MLCK表达

目的 研究光甘草定能否通过p38/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路影响动脉粥样硬化(AS)兔模型主动脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达.方法 建立AS兔模型,将新西兰大耳白兔随机分为3组:正常对照组、高脂模型组、光甘草定组.正常对照组用正常饲料喂养;高脂模型组、光甘草定组用高脂饲料喂养,12周后分析血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)成分的变化,通过苏木精-伊红(HE) 染色分析兔动脉壁形态结构变化;免疫组织化学方法观察兔模型主动脉内膜MLCK的分布和表达;Western blot 分析兔动脉内膜MLCK水平及p38蛋白磷酸化变化.结果 成功建立AS兔模型,在给予高脂饮食12周以后,与正常对照组相比,血清中TC增高(P<0.05),TG有所增加,但差异无统计学意义;大体标本观察到大量兔动脉粥样斑块形成,HE染色显示高脂模型组兔主动脉血管内皮细胞间隙明显增大并伴有大量泡沫细胞,内膜增厚明显;免疫组化显示主动脉内膜MLCK表达量增多;Western blot显示动脉p38磷酸化水平增强(P<0.05).而加喂光甘草定后,血管内膜病变程度有所下降,MLCK表达有所下降,动脉p38磷酸化水平有所下降(P<0.05). 结论 光甘草定可能通过p38/MAPK通路影响AS兔模型主动脉内皮细胞MLCK的表达.     

脂质过氧化对培养心肌细胞的损伤作用

应用氢过氧化枯烯作用于培养的心肌细胞,观察到心肌细胞及培养液中脂质过氧化物含量增加,细胞膜流动性下降,细胞维生素E含量减少,~3H—TdR掺入率降低,细胞内酶类漏出增加以及细胞超微结构改变。表明氢过氧化枯烯激发和促进了培养心肌细胞的脂质过氧化过程,提示以氢过氧化枯烯作用于培养心肌细胞,可作为估价体外心肌细胞脂质过氧化损伤的模型之一。     

硒和维生素E对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成代谢的影响

目的：探讨硒(Se)和维生素E(VE)对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成代谢的影响。方法：用不同浓度的Se和(或)VE作用于体外培养的Wistar大乳鼠心肌成纤维细胞,测定培养上清液中羟脯氨酸及Ⅰ型胶原的含量。结果：①低、中和高浓度Se(0.05、0.1和0.2 mg·L^-1)均可抑制NE(0.2 mg·L^-1)的促成纤维细胞(CFbs)胶原合成的作用（P<0.05）,以高浓度Se最为明显（56.13±1.31,P<0.05）;②不同浓度VE（1、10和100 mg·L^-1）均降低NE对CFbs胶原合成的促进作用,以1和100 mg·L^-1 的VE对羟脯氨酸含量的影响最显著（P<0.05）;③Se和VE的联合应用（0.05 mg·L^-1 Se+10 mg·L^-1 VE）,对CFbs的胶原合成的抑制作用更明显（41.34±1.73,0.39±0.04,P<0.05）。结论：Se和VE对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成代谢有抑制作用。     

肌球蛋白轻链激酶与炎症性疾病关系的研究进展

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)可以调控肌球蛋白轻链的磷酸化,进而调控基于肌动蛋白与肌球蛋白之间相互作用的细胞骨架活动.近几年研究报道,长链MLCK与短链MLCK的异常表达在不同的炎症性疾病中多有发生,炎症相关因子能诱导MLCK表达升高.本文对MLCK在肺炎、血管损伤以及炎性肠病中的作用,及MLCK参与炎症性疾病的可能信号通路进行了综述.     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的：观察外源性硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)表达的影响。方法：32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DM组)、NaHS治疗组(DM+NaHS组)和NaHS对照组(NaHS组),每组8只。采用链脲佐菌素55 mg/kg腹腔注射诱导1型糖尿病大鼠模型。造模成功后,DM+NaHS组和NaHS组大鼠腹腔注射NaHS溶液28 μmol/kg干预治疗。8周后,测定大鼠左心室功能指标;计算心体比;测定血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isozyme,CK-MB)水平;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化; RT-PCR和Western印迹分别检测心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达。结果：与NC组比较,NaHS组各项指标差异无统计学意义(均P>0.05),而DM组左心室收缩和舒张功能下降,心体比明显增大(均P<0.01),血清中LDH和CK-MB水平明显增高(均P<0.01),心肌超微结构损伤明显,心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达明显降低(均P<0.01)。与DM组比较,DM+NaHS组左心室功能和心肌超微结构损伤明显改善,心体比明显降低(均P<0.05),血清中LDH和CK-MB水平明显下降(均P<0.01),MLCK mRNA和蛋白表达明显升高(均P<0.01)。结论：外源性H2S对糖尿病大鼠心肌损伤具有保护作用,机制可能与增强心肌MLCK表达有关。     

人心肌肌凝蛋白轻链的分离提纯与鉴定研究

参考采用Schoβler方法并加以改进,分别应用等电点沉淀法、快速蛋白质液相层析(FPLC)及SDS聚丙烯酰胺凝胶制备电泳三种方法分离提纯肌凝蛋白轻链(CMLC),其各具有不同的优缺点,并对CMLC做了鉴定。同时证明在-20℃条件下,冻存时间较长或蛋白浓度较低的CMLC容易降解。     

抑制肌球蛋白轻链激酶活性诱导细胞凋亡的研究

目的:探讨抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性诱导细胞凋亡。方法:应用尿素/甘油胶检测平滑肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平,流式细胞仪检测平滑肌细胞凋亡细胞比例。结果:ML-7处理后细胞具有剂量依赖的肌球蛋白轻链去磷酸化与细胞凋亡,肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。结论:抑制MLCK活性足以引起细胞凋亡,且肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。