异鼠李素作用后HeLa细胞bcl-2基因表达的变化

目的　本研究采用人宫颈癌细胞 (He L a细胞株 ) ,观察异鼠李素诱导下 He L a细胞 bcl- 2和 bax基因表达的改变以研究其抗癌作用的机理。方法　体外培养的人宫颈癌细胞 (He L a)经 2 0μg/ml异鼠李素处理后 ,作光电镜观察 ,集落形成实验 ,3H- Td R掺入实验和流式细胞术检测。结果　异鼠李素作用后 ,He L a细胞的生长明显受到抑制 ,细胞形态出现凋亡特征 ,集落形成率和3H- Td R掺入率显著低于对照组 ,流式细胞仪检测显示异鼠李素处理组的细胞被阻止在G2 /M期 ,细胞凋亡率升高 ,bcl- 2癌基因表达降低 ,bax癌基因表达明显增加。结论　异鼠李素可能通过影响癌基因表达 ,从而抑制 He L a细胞增殖 ,达到抑制肿瘤的作用。     

异鼠李素对乳腺癌细胞的作用机制

为探讨异鼠李素对乳腺癌细胞中的作用及其机制,以两种乳腺癌细胞株MCF7和BT549作为模型细胞株,通过加入不同浓度的异鼠李素,采用MTT法检测其对细胞增殖活性的抑制作用。在确定增殖抑制作用的基础上,采用流式细胞术测定异鼠李素对细胞周期和凋亡的影响,及采用免疫印迹的方法观察异鼠李素对细胞增殖及凋亡信号通路的影响。实验结果显示,异鼠李素可显著抑制乳腺癌细胞株MCF7及BT-549的增殖,其IC₅₀分别为11.72和8.74 μmol/L;通过流式细胞术检测,发现异鼠李素可引起细胞G₁期的周期阻滞及促进细胞的凋亡,信号通路分析显示异鼠李素可减少细胞增殖通路蛋白AKT和ERK的磷酸化及增殖核抗原Ki67的表达,减少Bcl-2的表达及增加Bax的表达,促进Caspase 3的剪切,从而导致细胞的凋亡。因此,异鼠李素具有显著的抗乳腺癌作用,其作用机制与抑制细胞的增殖通路及促进细胞的凋亡有关。     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分(hTR)模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF-7细胞.发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72 h,端粒酶活性较对照组降低61.0%(P<0.05);细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0/G1期细胞数增多,S期及G2/M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化.提示端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景.     

苦参碱对视网膜母细胞瘤细胞survivin和端粒酶活性表达的影响

目的 研究苦参碱对视网膜母细胞瘤(RB)细胞凋亡抑制蛋白survivin和端粒酶活性表达的影响,探讨苦参碱对Rb的作用机制.方法 体外培养视网膜母细胞瘤患者HXO-Rb细胞经不同浓度的苦参碱作用后,采用噻唑蓝比色法测定细胞生长情况,RT-PCR检测survivin RNA水平,聚合酶链法(PCR)检测端粒酶活性.结果 苦参碱在一定范围内可抑制HXO-Rb细胞的生长,使survivin mRNA表达下调.可明显观察到细胞凋亡的形态学改变,端粒酶活性明显下降,细胞凋亡率增加.结论 苦参碱可以增加HXO-RB细胞凋亡,可以减少RB细胞mRNA表达,减弱RB细胞端粒酶活性,影响其周期变化,抑制RB细胞系增殖.其对survivin的抑制,及端粒酶活性的下降可能是诱发RB细胞凋亡的原因.     

紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究紫杉醇对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法 0．001－1μmol/L的紫杉醇处理SGC7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量TRAP－银染法测定端粒酶活性变化。结果 不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性,光镜及流式细胞术分析表明,0．01μmol/L的紫杉醇处理后24h,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰,对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且随紫杉醇浓度增大,抑制作用逐渐增强,24h酶活性即显著受抑制,72h变为阴性。结论 紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一,端粒酶可作为肿瘤化疗的敏感性指标。     

三氧化二砷诱导T淋巴细胞白血病细胞株凋亡研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对T淋巴细胞白血病细胞株的作用及其机制.方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对细胞株的生长抑作用,流式细胞仪测定细胞凋亡峰,端粒重复扩增法检测端粒酶活性,实时RT-PCR测定端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达.结果2～6μmol/L As2O3可抑制Molt-4细胞生长,且随着时间的延长和药物剂量的增大,这种抑制作用更为明显(P<0.05).药物作用72h,As2O3对Molt-4细胞生长抑制半数致死量为4.68μmol/L.2～6μmol/L浓度范围内,As2O3诱导Molt-4细胞的凋亡率随时间的延长和药物剂量的增大而升高(P<0.05).6μmol/L药物作用96h,K562细胞和Molt-4细胞的凋亡率分别为83.44%±18.04%和77.93%±6.00%.As2O3能显著抑制Molt-4细胞株端粒酶活性,下调hTERT mRNA表达.结论As2O3有明显抑制T淋巴细胞白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用.通过下调hTERT mRNA表达,从而抑制端粒酶活性可能是As2O3的主要作用机制之一.     

端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸(ASODN)下调端粒酶活性及其阻抑肝癌HepG2细胞周期的实验研究

目的探讨人类端粒酶催化亚单位(hTERT)基因关键区段的反义寡核苷酸(as-hTERT)对HepG2细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法通过PCR合成as-hTERT、正义-hTERT序列,体外作用于HepG2细胞,TRAP法检测正、反义核酸作用后的端粒酶活性变化,流式细胞术观察as-hTERT对肿瘤细胞的凋亡及细胞周期的影响。结果as-hTERT作用浓度为10μmol/L时,肝癌细胞内端粒酶活性明显减低,细胞生长受抑制,细胞凋亡率增至16.02±2.11%。结论应用针对as-hTERT的反义技术在体外可通过下调hTERT基因表达,明显降低肝癌细胞HepG2的端粒酶活性,并抑制肿瘤细胞的生长,hTERT可望成为肝癌基因治疗的新靶点。     

PKC-α反义核酸对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞周期的影响

目的 :探讨 PKC-α反义核酸对 He L a细胞增殖及细胞周期的影响。方法 :采用脂质体 (L P)介导法 ,用 0 .0 1～1.0 0μmol/L各浓度 PKC-α反义核酸 (as ODN)转染 He L a细胞 ;MTT法及软琼脂克隆形成法分别检测 He L a细胞生长指数 (growth index,GI)及其体外增殖能力 ;流式细胞术分析细胞周期。结果 :PKC- α as ODN0 .0 5～ 1.0 0 μmol/L 各浓度组 He L a细胞 GI显著降低 (P<0 .0 5 ) ,且呈量效依赖关系 ;其中 1.0 0μmol/L和 0 .5 0μm ol/L PKC-α as ODN对He L a细胞生长有非常显著抑制作用 (P<0 .0 1) ;0 .5 0 μmol/L PKC- α as ODN组 He L a细胞软琼脂克隆形成率均低于对照组 (P<0 .0 5 ) ;反义 PKC- α使细胞 G2 期百分比增高 (P<0 .0 1)。结论 :反义 PKC- α可通过阻滞细胞于 G2 期从而抑制 He L a细胞的生长。     

As2O3诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡与细胞内端粒酶活性关系的研究

目的探讨As2O3对HeLa细胞的诱导凋亡作用及对HeLa细胞端粒酶活性的影响.方法采用不同浓度的As2O3作用于人宫颈癌HeLa细胞不同生长时间段(24、48、72 h)后,显微镜下观察细胞凋亡,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定细胞生长抑制情况,TRAP-ELISA方法测定细胞内端粒酶活性变化.结果2 μmol*L-1的As2O3处理HeLa细胞48 h后可降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,细胞内端粒酶活性比对照组明显下降.随着As2O3 浓度增加、作用时间延长,作用效果越明显.结论As2O3诱导HeLa细胞凋亡可能与其抑制细胞内端粒酶活性有关.     

雄黄对K562细胞端粒酶活性和凋亡的作用

目的 :探讨雄黄对慢性粒细胞白血病细胞株K5 6 2细胞端粒酶活性及凋亡的调节作用和机制 .方法 :MTT法检测细胞增殖力 ;PCR ELISA法测定端粒酶活性 ;流式细胞仪测量细胞周期和细胞凋亡 .结果 :0 .3,0 .6 ,1.5和 3.0mg·L-1雄黄 (72h)在诱导K5 6 2细胞凋亡的同时可显著抑制细胞端粒酶活性和细胞增殖 ,并呈剂量相关 ;1.5 ,3.0mg·L-1雄黄 (72h)可诱导K5 6 2细胞G2 /M期阻滞 .结论 :雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡达到抑制细胞生长的作用 ,端粒酶活性下降是雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡的机制之一 .由大剂量雄黄诱导的K5 6 2细胞G2 /M期阻滞可能与端粒酶活性显著下降有关     

人类端粒酶逆转录酶基因的反义寡核苷酸对HeLa细胞的端粒酶活性的研究

目的：研究人类端粒酶逆转录酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法：采用PCR-ELISA法检测Hela细胞在反义寡核甘酸处理前后端粒酶活性的变化。结果：经反义寡核苷酸处理后,HeLa细胞的生长受到抑制，端粒酶活性明显降低。结论：hTR的反义寡核苷酸显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性，为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。     

青蒿琥酯对HeLa细胞生长的抑制作用

目的 研究青蒿琥酯对HeLa细胞生长抑制作用。方法 MTT法测定青蒿琥酯对HeLa细胞增殖抑制；用透射电镜观察青蒿琥酯对肿瘤细胞形态学影响；用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期变化和细胞凋亡率；用免疫组化法观察肿瘤细胞端粒酶活性。结果 MTT实验表明青蒿琥酯作用HeLa细胞72h后，细胞存活率明显下降，而且随着药物浓度的增加，抑制作用增强；流式细胞仪检测青蒿琥酯可引起HeLa细胞阻滞于G1期，细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度呈正比；透射电镜观察细胞超微结构呈现典型的凋亡特征；免疫组化检测细胞端粒酶活性降低。结论 青蒿琥酯可抑制HeLa细胞生长，诱导细胞发生凋亡，可降低细胞端粒酶活性。     

端粒酶活性对HeLa细胞生长及化疗敏感性的影响

目的研究抑制端粒酶活性对HeLa细胞在体内外生长和对顺铂敏感性的影响。方法将野生型端粒酶逆转录酶、端粒酶逆转录酶显性负突变体和对照质粒电转染于HeLa细胞中，绘制细胞生长曲线，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞对顺铂的敏感性，磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V）法检测细胞凋亡情况；接种裸鼠观察其致瘤性及对顺铂敏感性的影响。结果端粒酶逆转录酶显性负突变体转染于HeLa细胞后，端粒酶活性显著下降，细胞生长速度延缓，显著增强顺铂诱导的凋亡，端粒酶活性抑制后对裸鼠致瘤性丧失，而端粒酶活性增强后顺铂对肿瘤的抑制作用下降。结论端粒酶活性下降能抑制HeLa细胞生长，增强顺铂的杀伤作用，反之端粒酶活性升高将导致对顺铂耐药。     

丁酸钠联合阿霉素对HeLa细胞端粒酶活性的影响

目的研究阿霉素(ADR)与丁酸钠(NaBu)联用对HeLa细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法MTT法检测NaBu、ADR以及两药联用的药效动力学特征;TRAP-银染法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测hTERT mRNA表达。结果NaBu、ADR以及两药联用均可抑制HeLa细胞生长,ADR单独作用HeLa细胞48h的IC50为6000nmol/L,与1mmol/L的NaBu联用后降为320nmol/L,两组均呈剂量依赖性。ADR组和NaBu ADR组的端粒酶活性随ADR浓度增加而降低,呈剂量依赖性,在ADR浓度为100nmol/L时差异有统计学意义(P<0.05);hTERT mRNA表达与端粒酶的变化趋势一致,在ADR浓度为10nmol/L、100nmol/L浓度时差异有统计学意义(P<0.05)。结论NaBu和ADR均可抑制HeLa细胞增殖,联合应用具有协同效应,与抑制端粒酶活性、下调hTERT mRNA表达有关。     

L-精氨酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨L-精氨酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法:采用端粒酶重复序列扩增法-银染法检测端粒酶活性的变化。结果:L-精氨酸浓度低于1mmol/L组,端粒酶活性没有明显改变;5～25mmol/L组,端粒酶活性显著增强;50~100mmol/L组,端粒酶活性显著受到抑制。不同浓度L-精氨酸室温处理HeLa细胞提取液2h后,端粒酶活性与对照组无显著差异。结论:体内L-精氨酸浓度的变化引起端粒酶活性的改变,提示L-精氨酸引起的肿瘤发生发展与端粒酶活性改变有关。     

顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用

目的 观察顺铂对HeLa细胞增殖、端粒酶活性及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响，以揭示顺铂抗宫颈癌的机理。方法 运用体外细胞培养技术，以不同浓度的顺铂作用于培养的HeLa细胞72小时，采用MTT法测定细胞代谢率，用端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP—ELISA)检测细胞端粒酶活性，以流式细胞术观察PCNA的表达。结果 顺铂能以浓度依赖方式减低细胞代谢率、下调端粒酶活性并降低PCNA的表达。细胞代谢率减低分别与端粒酶活性的下调(r=0．984)和PCNA表达的降低(r=0．996)均呈正相关，端粒酶活性的下调与PCNA表达的降低也呈正相关(r=0．993)。结论 顺铂能显著抑制HeLa细胞增殖、下调端粒酶活性并使PCNA的表达降低，这可能是顺铂抗癌作用的重要机理之一。     

阿糖胞苷对子宫颈癌细胞的端粒酶活性的影响

目的 :探讨阿糖胞苷对体外培养的宫颈癌细胞 (Hela细胞 )端粒酶活性的影响。方法 :采用PCR ELISA法检测经阿糖胞苷处理前后的Hela细胞株端粒酶活性的改变。结果 :经阿糖胞苷处理后 ,Hela细胞的生长受到抑制 ,端粒酶活性明显降低。结论 :阿糖胞苷对Hela细胞具有生长抑制作用 ,其抗肿瘤作用的机理可能与抑制肿瘤细胞的端粒酶活性有关。     

反义端粒酶RNA与1,25-（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖的协同作用

【目的】观察1,25-(OH2)D3对转染反义端粒酶RNA的肝癌细胞增殖的作用。【方法】经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212-hTR导入维生素D3受体(VDR)阳性的肝癌细胞株SMMC7721细胞中培养。细胞克隆转移扩大培养,添加1,25-(OH)2D3分别作用于各实验组细胞后,采用四唑蓝比色实验(MTT)和平板克隆形成实验,检测细胞的存活和生长;TUNEL法检测细胞凋亡。【结果】转染组细胞和对照组细胞的端粒酶活性分别为0.686和1.685,说明反义端粒酶RNA可显著降低肝癌细胞端粒酶活性。10 nmol/L浓度的1,25-(OH2)D3对肝癌细胞的增殖具有明显的抑制作用;且较之于单独的1,25-(OH2)D3或转染反义端粒酶RNA对肝癌细胞增殖的抑制作用,在转染反义端粒酶RNA,降低肝癌细胞端粒酶活性后,1,25-(OH2)D3抑制肝癌细胞增殖的作用显著得到增强。各组细胞的凋亡率分别为3.4%、12.2%、8.8%、23.6%。经统计学处理,上述实验结果证实均存在显著的差异(P<0.01)。【结论】在转染反义端粒酶RNA、降低细胞端粒酶活性的基础上,1,25-(OH2)D3抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用进一步得到增强。     

端粒酶反义基因对恶性胶质瘤细胞生长的作用

目的研究端粒酶RNA的反义寡核苷酸(AODN)抗恶性胶质瘤细胞系的作用。方法采用脂质体包裹AODN转染恶性胶质瘤细胞系U251-MG细胞。用四唑盐MTT法测定细胞生长曲线,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测细胞的端粒酶活性变化;用流式细胞术检测凋亡细胞。结果2~8μmol/L AODN转染恶性胶质瘤细胞系,培养1~4 d,恶性胶质瘤细胞系端粒酶活性下降,且有剂量依赖性和时间依赖性。AODN转染的恶性胶质瘤细胞培养后细胞增生速度减慢,发生了细胞凋亡。而无义寡核苷酸则无此效应。结论AODN能特异性抑制恶性胶质瘤细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡。     

hTERT siRNA表达载体的构建及对转染的HeLa细胞生长抑制作用

目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用. 方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(small interferencing RNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT-PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况. 结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢. 结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.