β-谷甾醇对子宫颈癌细胞微管系统的影响

目的 探讨β-谷甾醇对子宫颈癌细胞SiHa的生长抑制作用及对细胞内微管系统的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定β-谷甾醇对SiHa细胞的增殖抑制作用,并用流式细胞技术分析β-谷甾醇作用前后细胞周期的变化,应用激光共聚焦显微技术观察β-谷甾醇处理的SiHa细胞内微管和微管相关蛋白2的表达、分布,采用蛋白免疫印迹法检测微管蛋白、微管相关蛋白2的表达,及聚合和未聚合微管蛋白含量的变化。结果 20μmol／L的β-谷甾醇能明显抑制SiHa细胞的增殖,并显著促进S期细胞的集聚。激光共聚焦分析表明,β-谷甾醇作用5d的SiHa细胞微管网络异常,微管相关蛋白2表达显著下调,蛋白免疫印迹结果进一步证实β-谷甾醇能抑制微管蛋白α和微管相关蛋白2的表达,同时β-谷甾醇能抑制SiHa细胞内微管蛋白的聚合,并随着作用时间的延长而逐渐增强。结论 β-谷甾醇能降低SiHa细胞微管蛋白α和微管相关蛋白2的表达,并抑制SiHa细胞内微管的聚合,提示β-谷甾醇具有一定的抗微管作用,这一作用可能是造成SiHa细胞生长抑制的重要原因。     

黎药海南地不容氧化克班宁对人乳腺癌MCF-7细胞微管位点和微管蛋白的调控机制研究

目的：本论文深入探究黎药海南地不容抗乳腺癌活性化合物氧化克班宁对微管网络的破坏能力，研究氧化克班宁在分子层面和细胞层面对微管网络稳态的影响。方法：首先采用EBI位点竞争法和分子对接来确定氧化克班宁对微管位点的占据力；其次，采用Western Blot法检测STAT3、PKA1、CAMK4和PKA检测氧化克班宁对微管蛋白的影响。结果：EBI位点竞争法结果显示，EBI与β-微管蛋白加合物比β-微管蛋白出现在分子量更小的区域（ctrl2）。分子对接结果显示，氧化克班宁可以占据微管蛋白的秋水仙碱位点。Western Blot结果显示，低、中、高3个浓度的氧化克班宁或阳性药Taxol作用MCF-7细胞48 h后，显著降低STAT3蛋白表达水平（P<0.01），显著降低PKA1和CAMK4蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01），并且可降低PKA蛋白表达水平，与对照组差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：氧化克班宁结合在微管蛋白秋水仙碱位点扰乱微管蛋白聚合，造成MCF-7细胞有丝分裂，从而导致MCF-7细胞死亡。氧化克班宁可通过抑制MCF-7细胞中STAT3、PKA1...     

基于免疫荧光图像的微管蛋白半定量分析

目的：建立一种基于免疫荧光图像的快速、简便、半定量分析微管蛋白的方法.方法：小鼠成骨样细胞MC3T3分别在正常及三维回转条件培养48h后,免疫荧光细胞化学技术标记对照组和回转组的成骨细胞微管骨架,激光共聚焦显微镜采集荧光图像; 采用三种不同的专业图像分析软件SimplePCI,Imagepro-Plus6.0（IPP）及ImageJ定量分析三维回转培养条件对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1微管细胞骨架的影响; 用Western Blot检测α-微管蛋白表达量; 用ImageJ软件确定MC3T3-E1细胞微管骨架的分形维数.结果：对采集到的细胞骨架荧光染色图像做定量分析发现,与对照组相比,经过48h三维回转培养,MC3T3-E1细胞图像的荧光强度明显降低（P〈0.01）; Western Blot结果表明,经过48h三维回转培养,MC3T3-E1细胞α-微管蛋白表达量表达量明显下降; Im-ageJ软件分析结果表明,经过48h三维回转培养,MC3T3-E1细胞微管的分形维数也明显低于对照组（P〈0.05）.结论：图像分析软件的结果和实验结果一致,表明基于免疫荧光图像的分析方法是可行的,为细胞形态学的定量研究提供了新思路和手段.     

宫颈永生化细胞和癌细胞的α、β、γ-微管蛋白比较分析

目的：探讨中心体α、β、γ-微管蛋白在人鳞状上皮宫颈永生化细胞（H8细胞株）和癌细胞（Caski细胞株）的表达差异及其在宫颈癌发生发展过程中的作用。方法：采用免疫细胞化学sP法检测中心体α、β-微管蛋白在人宫颈永生化细胞和癌细胞中的表达差异,提取两株细胞的骨架蛋白并用Western blotting对α、β、γ-微管蛋白的表达水平进行半定量分析。结果：Caski细胞中α、β-微管蛋白表达水平高于H8细胞,差异均有统计学意义（P〈0．05）。半定量分析α、β、γ-微管蛋白,Caski细胞中的表达量高于H8细胞。结论：中心体异常可能是宫颈癌细胞恶性表型的特征之一,以中心体微管蛋白为治疗靶点的研究有着可期待的前景。     

促微管聚合蛋白家族的研究进展

 促微管聚合蛋白(tubulin polymerization promoting proteins, TPPPs)家族是一类能与微管蛋白结合,从而促使微管聚集、维持微管系统稳定性和完整性的蛋白质,其在细胞有丝分裂纺锤体组装中发挥重要作用。目前已知该家族在人类基因组中有3个成员：TPPP/p25、TPPP2/p18和TPPP3/p20,其共同点是在C末端都包含一个保守的p25-α序列。TPPP1主要与神经系统疾病相关,如多发性硬化和多系统萎缩;TPPP3在许多肿瘤细胞中表达,与肿瘤的增殖密切相关;而TPPP2的研究相对较少。本文将主要阐述TPPP家族成员及其相关疾病的最新研究进展。     

新型微管结合蛋白在肿瘤发生与发展中的研究进展

新型微管结合蛋白(NuSAP)是一种重要的有丝分裂调节蛋白,在细胞分裂间期定位于核仁,在有丝分裂期与纺锤体的微管共同定位于胞质。NuSAP磷酸化和去磷酸化可动态调节其在细胞内功能。越来越多的研究表明,NuSAP选择性地在增殖性细胞中表达,其不仅参与纺锤体的稳定组装,而且与肿瘤组织的血管形成、增殖和侵袭有一定的相关性。随着分子生物学的发展,NuSAP有望成为新的肿瘤生物标志物和临床治疗的靶点,为肿瘤的早期诊断、临床治疗和预后提供新的方向。     

中心体α、γ-微管蛋白在乳腺癌前病变及乳腺癌中的表达及其意义初探

目的 探讨中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白在人乳腺癌前病变和乳腺癌中的表达及其在乳腺癌发生发展过程中的作用。方法 采用免疫组织化学S-P法检测乳腺导管上皮不典型增生、乳腺导管内癌和浸润性导管癌各40例中中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白表达水平，30例正常乳腺组织作为对照组，并用Western印迹进行验证。所得数据经统计学分析并结合随访情况进行评价。结果 不同样本组α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达水平不同（P=0．000），随正常上皮组织到出现不典型增生至进展为原位癌和浸润性癌的发展变化，α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达量呈增高趋势，以浸润性癌为最高（40例中分别有14例、11例表达为＋＋＋），各组问差异均有统计学意义（P=0．001）。比较同例和同组α、γ-微管蛋白的表达程度差异无统计学意义（P〉0．05）。癌前病变、导管内癌、浸润性导管癌组α、γ-微管蛋白的表达水平与预后具有相关性。结论 中心体异常为乳腺癌细胞恶性表型的明显特征之一，并可能为乳腺癌形成过程中的早期事件。α、γ-微管蛋白的表达情况可为乳腺癌发生机制探讨、高危病例筛选及估测预后提供一种新的途径。     

AC960对微管蛋白聚合—解聚活性的影响

通过动物实验，观察了ＡＣ９６０对微管蛋白聚合－解聚活性的影响，结果显示：ＡＣ９６０能明显抑制微管蛋白聚合，其作用略弱于秋水仙碱，且同时抑制微管蛋白解聚作用。说明ＡＣ９６０抗癌机理可能在于影响微管蛋白的聚合－解聚活性，破坏纺缍丝形成，从而抑制癌细胞有丝分裂，促进其凋亡。     

体外LAK细胞杀伤人直肠腺癌细胞时微管蛋白变化的免疫荧光研究

应用免疫荧光细胞化学方法观察了体外LAK细胞杀伤人直肠腺癌细胞(HR8348)时效靶细胞内微管蛋白的变化。结果表明,LAK细胞与靶细胞相互接触形成效靶复合体后,两种细胞胞浆内微管蛋白出现重排现象。LAK细胞内的微管蛋白全部集中在两类细胞质膜接触处,呈月芽状分布。靶细胞内的微管蛋白在效靶复合体质膜接触处浓集成斑块状并与LAK细胞的月芽状结构融合,靶细胞逐渐变性坏死。这提示,靶细胞的溶解可能与效靶细胞的微管重排有关。     

β3-微管蛋白及tau蛋白的表达在乳腺癌紫杉类药物化疗耐药中的预测价值

目的：探讨乳腺癌β3-微管蛋白及微管相关蛋白tau的表达与紫杉类药物化疗耐药的相关性.方法：对48例进展期乳腺癌患者采用含紫杉类药物化疗方案进行2～6个周期新辅助化疗,应用空芯针穿刺技术获取化疗前及化疗后的第2、第4、第6周期末乳腺癌组织标本.免疫组织化学法分别检测β3-微管蛋白及tau蛋白的表达水平,探讨化疗疗效与β3-微管蛋白及tau蛋白表达的相关性.结果：化疗前β3-微管蛋白的平均表达率为45.6％±33.3％,tau蛋白平均表达率为62.9％±24.3％,化疗总体有效率为60.4％.β3-微管蛋白表达与紫杉类药物化疗有效率呈负相关,在化疗的第2、第4、第6疗程末,β3-微管蛋白的平均表达率分别为51.6％±31.2％,54.6％±29.1％,57.8％士30.4％,表达呈上升趋势,并在第4疗程获得了统计学的差异.tau蛋白表达与雌激素受体表达存在正相关,与化疗有效率之间无显著相关.tau在化疗前后表达无显著改变.结论：β3-微管蛋白是良好的紫杉类化疗敏感性预测因子,并且可能是紫杉类继发耐药发生的重要原因,在化疗前及化疗过程中检测其表达情况有助于化疗方案的选择.tau蛋白可能并不是一个良好的紫杉类化疗敏感性预测因子.