肝癌单克隆抗体F(ab′)_2段与葡萄球菌肠毒素A结合物的制备及其活性

目的：制备超抗原（SAg）葡萄球菌肠毒素A（SEA）与抗人肝细胞癌单克隆抗体（McAb）HAb18F（ab′）2段的结合物，并对其活性进行鉴定．方法：提取MCAbHAb18并用木瓜蛋白酶切取其F（ab′）2段，用SPDP制备HAb18F（ab′）2－SEA结合物，凝胶色谱柱纯化后用SDS－PAGE鉴定各收集峰，免疫组化ABC法鉴定结合物中的HAb18F（ab′）2的抗体活性，MMT法鉴定结合物中的SEA活化T细胞的活性．结果：成功地制备了HAb18F（ab′）2－SEA结合物，并且制备的结合物具有肝癌抗体活性和活化外周血单个核细胞的功能．结论：SPDP是一种很好的蛋白质交联剂，本实验制备的HAb18F（ab′）2－SEA结合物可用于McAb与SAg结合物导向治疗肝癌的实验研究．     

抗人食管癌单克隆抗体和争光霉素A_6结合物的制备及其对食管癌细胞的细胞毒作用

研究目的探索食管癌导向化疗的途径研究设计用异双功能基试剂SPDP联接抗人食管癌单抗和争光霉素A_6,然后用MTT法测定该结合物对食管癌细胞的特异性细胞毒作用。研究单位新乡医学院基础医学部处理方法采用MTT法,通过测定细胞代谢活性来反映单抗—A_6结合物对食管癌细胞的特异性杀伤作用。靶细胞为食管癌细胞Eca8714,非靶细胞为宫颈癌细胞HL,设有结合物组和对照组(游离A_6)。结果结合物对食管癌细胞的杀伤率比游离争光霉素强10倍。0.1μM时即显示杀伤癌细胞活性。首次发现争光霉素A_6对宫颈癌细胞HL的杀伤率明显高于对食管癌细胞Eca8714的杀伤率。结论单抗和争光霉素A_6的结合物显示出较好的特异性细胞毒作用.为食管癌导向化疗迈出了有益的探索性的一步。     

异型双功能交联剂SPDP等试剂研制成功

N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯[N-succinimidyl 3-(2-pyridyl-dithio)propionate)简称SPDP,是迄今用于共价结合蛋白质等生物活性分子最好的异型双功能试剂(Heterobifunctional reagent)。国外自1978年合成以来,已     

抗人活化血小板单抗的Fab片段与尿激酶B链的嵌合分子制备及其体外溶栓研究

抗体介导的纤溶剂是以抗体与血栓呈高选择的结合为基础的。本研究利用自制的抗人活化血小板α-颗粒膜蛋白(GMP—140)的单抗SZ—51,经木瓜蛋白酶消化制备抗体的Fab片段,与纤溶剂尿激酶的B链经化学双功能交联剂SPDP交联后,其嵌合分子的体外溶栓率较尿激酶高3～5倍,而血浆中纤维蛋白原及纤溶酶原的消耗减少,提示溶栓率的提高与嵌合分子的选择性增高有关,这种新型的嵌合分子将为体内特异性溶栓剂的研制提供一条新的途径。     

5-氟尿嘧啶-花生凝集素结合物的反应条件优化及性质研究

目的优化5-氟尿嘧啶(5-Fu)-花生凝集素(PNA)结合物的反应条件,以期制备得到既有生物活性又有较高药物结合率的结合物。方法采用单因素法优化反应条件,考察结合物稳定性,以药物结合率和体外活性为判断指标。结果以优化条件：5-Fu;EDC;NHS-1;5：2,D-半乳糖;PNA(w／w)-2．5：1,连接反应时间12h制备得到了既有生物活性又有较高药物结合率的结合物。结论D-半乳糖能保护花生凝集素的活性中心,在D-半乳糖保护下可以制备出既有生物活性又有较高药物结合率的结合物。结合物性质比较稳定。     

免疫球蛋白G-葡萄糖脱氢酶结合物的研究

介绍一种新的酶结合物的制备方法,研究了该结合物在酶联免疫吸附测定中的初步应用。通过2-亚氨硫杂戊烷的修饰反应,在葡萄糖脱氢酶、抗体(IgG)分子上分别引入新的游离巯基。巯基化的葡萄糖脱氢酶和免疫球蛋白G之间,通过双功能试剂二马来酰亚胺甲醚(进行)偶联,偶联产物由Sephacryl S-300柱层析纯化。按非竞争性固相双抗体夹心法,将精制的IgG-葡萄糖脱氢酶(A)结合物用于人白蛋白(Ⅰ),人甲胎蛋白(Ⅱ)和牛胰岛素(Ⅲ)的定量检测。在0～10 ng/mL范围内,Ⅰ和Ⅱ与A活性均呈良好的线性相关;但Ⅲ与A活性之间没有任何相应关系。     

异型双功能交联剂SPDP及其在医学研究中的应用

用抗体、铁蛋白、酶和凝集素等通过交联技术标记生物活性分子,在医学研究中应用日广。此项技术的关键是保证交联后的结合物有满意的生物活性。传统的交联方法常用同型双功能试剂(homobifunctional reagent),所得结合物生物活性不理想。近年来多改用异型双功能试剂(heterobi-     

免疫毒素BDI—1—PEA的构建及其活性测定

目的 构建新型免疫毒素BDI-1-PEA,并进行抗入膀胱肿瘤活性的初步研究测定。方法 应用异型双功能连接剂N-琥珀酰胺酯3-（2-吡啶基二硫）丙酸（SPDP）将抗人膀胱肿瘤单克隆抗体（BDI-1）与铜绿假单胞菌外毒素（PEA）交联,制备出新型免疫毒素BDI-1-PEA。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法初步检测其对人膀胱肿瘤细胞系E-J的选择性杀伤活性。结果 BDI-1-PEA结合物具有高效靶向杀伤膀胱肿瘤细胞的能力,优于游离PEA或BDI-1的混合物。结论 新型免疫毒素BDI-1-PEA有较高的选择性抗人膀胱肿瘤细胞的活性,有较高的研究的应用价值。     

小分子物质抗体制备方法的研究

目的 :研究小分子物质 ( HCV C33核心肽、促红细胞生成素、青霉素 )抗体的制备。　方法 :用两种不同的连接剂 (戊二醛、异型双功能交联剂 SPDP与载体蛋白连接后免疫动物 ,制备多克隆及单克隆抗体。　 结果 :用 SPDP作为连接剂 ,免疫效果优于戊二醛。　 结论 :本法较易制备出青霉素抗体 (多克隆 )、HCV C33肽抗体 (单克隆 )和促红细胞生成素抗体 (单克隆     

肝癌单抗—RTA结合物的制备及其对肝癌细胞株选择性杀伤作用

本文报道采用 SPDP 法制备抗人肝癌单抗(Hepama—1)与 RTA 的结合检测体外细胞毒特性,并讨论 Hepama—1单抗用于肝癌导向治疗的可行性。     

Targeted diagnosis and treatment of superficial bladder cancer with monoclonal antibody BDI-1

OBJECTIVE: To explore the application of monoclonal antibody (McAb) to targeted treatment of bladder carcinoma through a series of in vitro and in vivo studies carried out in animal model and patients with bladder carcinoma. METHODS: Monoclonal antibody BDI-1 against bladder carcinoma was prepared by the lymphocyte hybridoma technique. McAb was conjugated with 99mTc by direct reduction method. Momodin (MD) was covalently linked to McAb by SPDP method. Radioimmunoimaging of nude mice xenografts and patients with bladder carcinoma were performed with BDI-1-99mTc conjugates. An immunotoxin (BDI-1-MD) was inducted via a catheter into the bladder. Targeted treatment with BDI-1-MD was carried out in 18 patients. RESULTS: This study showed the specificity of McAb, and clear imaging of nude mice bearing xenografts. Distribution analysis of 99mTc-BDI-1 in nude mice showed the highest value of T/NT in bladder tumor. Targeted diagnosis and treatment for patients by intravesical administration are very safe and effective. CONCLUSION: The bladder cancer seems an ideal model for diagnostic and therapeutic approaches using regional administration of McAb conjugates via a catheter direct into the bladder.     

新型抗体偶联胶原包被质粒DNA血管支架的研制

目的研制一种以支架为基础的高效、局部定位的新型基因投递体系。方法利用双官能偶联剂N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)将支架表面涂布的胶原与抗DNA抗体化学键合,该抗体再与质粒DNA(pEGFP-C1)免疫结合,并加入阳离子脂质体提高细胞转染效率。用125I标记抗DNA抗体,检测支架表面偶联的抗体量。用32P标记pEGFP-C1检测通过上述方法结合在支架上的DNA量,同时以物理吸附组作为对照,通过细胞培养和兔体内实验验证其效果。结果实验组胶原基质携带抗体量约为对照组的15倍(P<0.005)。实验组胶原基质携带质粒DNA量显著高于对照组(P<0.01),释放时间达13d以上。细胞转染实验结果表明,抗DNA抗体连结pEGFP-C1质粒组支架胶原涂层表面有较多GFP转染阳性细胞生长,而未与支架接触的周边细胞几乎无转染。动物实验结果显示约有(2.8±0.7)%血管壁细胞被转染,新生内膜转染率最高,达7%,远隔器官未见载体扩散。结论抗体偶联胶原包被质粒DNA血管支架是一种新型高效、局部定位的基因转染体系。该体系适用于多种基因转染,且基因释放在一定条件下可控,为开发心血管内靶向基因投递体系提供了新思路。     

抗人T细胞CD3,CD7—PAPs免疫毒素的研制

选用抗人T细胞CD3、CD7两株杂交瘤细胞制备合单克隆抗体（McAb）腹水，经一系列免疫化学方法纯化、鉴定后，分别以SPDP为交联剂将两种McAb与商陆毒蛋白（PAPs）偶联，构建了两种抗人T细胞免疫毒素（IT）。鉴定结果表明，IT抗体活性保持良好，并能特异而高效地杀伤T细胞及T淋巴白血病细胞CEM。本结果为探讨单抗IT联合效应及其在异体／自体骨髓净化移植治疗白血病等方面的应用研究奠定了基础。     

蓖麻毒素及其SPDP修饰物对小鼠肝脏GSH含量的影响

目的：观察麻毒素（ＲＴ）修饰前后对小鼠肝脏毒性的影响。方法：ＲＴ用３－（２－吡啶二巯基）丙酸Ｎ－羟基琥珀酰亚胺酯中（ＳＰＤＰ）－－一种异型双功能交联剂,进行化学修饰,自下而上的ＳＰＤＰ衍生物（ＰＤＰ－Ｒ）,测定两者在不同剂量和时间对小鼠肝脏还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量的影响,以比较两者的毒性差别,结果：随着中毒剂量的增加和时间的延长,两者与可使小鼠肝脏ＧＳＨ含量下降,但ＲＴ组下降程度较ＰＤＰ－Ｒ     

抗CD3、CD7单抗-PAPs免疫毒素的构建及其联合杀伤效应

[目的]应用抗人T淋巴细胞单抗(抗CD3和抗CD7),分别与商陆抗病毒蛋白(PAPs)偶联构成两种免疫毒素,并探讨这两种免疫毒素在体外联合对T淋巴细胞和T淋巴母细胞(CEM细胞)的杀伤效应。[方法]选用抗CD3和抗CD7杂交瘤细胞制备单克隆抗体腹水,经纯化后以SPDP为交联剂,将两种单抗分别与商陆抗病毒蛋白偶联构建成抗CD3和抗CD7单抗免疫毒素;分别以及联合后对T淋巴细胞和CEM细胞进行体外细胞毒试验。[结果]构建的两种单抗-PAPs免疫毒素活性良好,其特异性杀伤T淋巴细胞和T淋巴母细胞CEM细胞的效应比单一抗CD3-PAPs和抗CD7- PAPs更强,对照组仅有轻微的杀伤效应。[结论]成功地构建了抗 CD3和抗 CD7单抗-PAPs免疫毒素,及其不同抗原决定簇的单抗免疫结合物,并证明联合应用抗CD3-PAPs和抗CD7-PAPs免疫毒素有相加的杀伤效果。     

蓖麻毒素修饰物的制备和细胞毒作用

为了降低蓖麻毒素的毒性，保留其抗肿瘤活性。采用３－Ｎ－羟基丙酸琥珀酰亚胺酯修饰ＲＴ，实验观察修饰前后ＲＴ的急性及体外对三株肿瘤细胞杀伤作用的。ＲＴ－ＰＤＰ小鼠腹腔ＬＤ５０为６８．２μｇ／ｋｇ，比ＲＴ大２．４５倍，并且对人子宫颈癌细胞胃癌及小鼠乳腺癌细胞的均有较强杀伤性。     

蓖麻毒素及其修饰物在肝癌细胞膜上的分布

目的：探讨３－（α－吡啶二硫基）丙酸Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基酯（ＳＰＤＰ）修饰的蓖麻毒素毒癌活性及其机制。方法：用流式细胞仪分析蓖麻毒素及其修饰物在肝癌细胞膜上的分布变化。结果：修饰的蓖麻毒素在肝癌细胞上的分布比未修饰的蓖麻毒素明显增多,结论：ＳＰＤＰ修饰后的蓖麻毒素对肝癌细胞的亲和力增加,提示蓖麻毒素用ＳＰＤＰ修饰可能是改进其抗癌作用的一个有价值的途径。     

抗慢性B淋巴细胞白血病患者血清IgM McAb的纯化及其酶结合物的制备

应用DEAE-22纤维素离子交换柱和正辛酸法从接种杂交瘤细胞BALB/C 鼠的腹水或腹腔肿瘤浸出液中纯化抗慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)患者血清IgM 单克隆抗体(McAb),纯化物经巴比妥琼脂电泳,SDS-PAGE 鉴定为高纯度。ELISA 法证明具有高效价、高度特异性。采用过碘酸钠氧化结合法制备的辣根过氧化酶 HRPO-McAb 结合物的免疫活性、酶与蛋白质二者mol比、标记率均达到质量要求。