胰岛素样生长因子-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响,探讨IGF-1对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.30只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组及IGF-1治疗组.于缺血10min后经尾静脉给予IGF-1 10μg,应用TTC染色观察梗死灶体积,应用免疫组化染色和TUNEL法检测Bcl-2,Bax蛋白表达及神经凋亡细胞.结果与缺血组比较,IGF-1治疗组梗死体积明显减少(P＜0.01),凋亡细胞数明显减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.01),Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01).结论IGF-1通过增加Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,对脑缺血再灌注损伤起保护作用.     

参附注射液对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达及参附注射液对其的影响。方法成年雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、参附注射液治疗组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞((middle cerebral artery oc-clusion,MCAO)再灌注模型,应用TTC染色检测脑梗死体积,免疫组织化学法检测海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果缺血组大鼠海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达较假手术组明显增加(P<0.01),给予参附注射液处理后,Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.01),Bax蛋白表达减少(P<0.05),差异均有统计学意义。结论参附注射液可以通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达来抑制细胞凋亡,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

替勃龙对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡的影响

目的:研究雌激素对缺血性脑损害的神经保护作用是否与抗神经元凋亡有关。方法:30只雌性成年SD大鼠,随机分为假手术组(sham),手术对照组(OVX),替勃龙组\[0.25 mg/(kg·d)\];采用大鼠大脑中动脉闭塞制成局灶性脑缺血模型。在缺血2 h、再灌注24 h后立即断头取脑,应用2,3,5-三苯基氯化四唑(TTC)染色观察脑梗死体积,TUNEL法检测凋亡细胞,链酶菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)法检测抗凋亡基因Bcl-2、细胞凋亡诱导因子Bax和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶caspase-3的表达。结果:替勃龙用药组较手术对照组脑梗死体积显著缩小(P<0.05),TUNEL阳性细胞数减少(P<0.01),Bcl-2阳性细胞增多(P<0.01),Bax及caspase-3阳性细胞减少(P<0.01)。结论:替勃龙可抑制去卵巢大鼠局灶性脑缺血再灌注时神经细胞凋亡,具有神经保护作用。     

亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的干预研究

目的探讨亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的影响。方法选取成年雄性健康清洁级Wistar大鼠42只,随机分为假手术组、对照组及亚低温组。亚低温组和对照组采用大鼠4条血管阻断全脑缺血模型(Pulsinelli-4VO法)制备大鼠全脑缺血再灌注模型,假手术组仅切开颈部皮肤和肌层暴露双侧椎动脉和颈动脉,不行椎动脉凝闭和颈总动脉夹闭。假手术组和对照组置于室温下,亚低温组给予亚低温处理。采用流式细胞仪对海马神经元Bcl-2、Bax表达进行测定。结果假手术组、对照组及亚低温组神经元凋亡百分率及增殖指数比较,差异均有统计学意义(F=142.869,P<0.01;F=153.993,P<0.01)。假手术组Bcl-2、Bax表达(均道值)微弱,在此忽略;对照组Bcl-2、Bax表达(均道值)与亚低温组比较,差异均有统计学意义(t值分别为63.747、28.803,P<0.01);两组Bcl/Bax比值比较,差异亦有统计学意义(t=9.601,P<0.01)。结论全身亚低温可有效干预大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡,其机制与Bcl-2、Bax的表达有关,受到二者比值的调控。     

吡那地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注后caspase-3及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨吡那地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-3及Bcl-2蛋白表达的影响。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂治疗组(开放剂组)及KATP开放剂 阻断剂治疗组(阻断剂组)。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),应用TTC染色检测脑梗死体积,应用TUNEL法检测神经元凋亡,应用免疫组化方法检测caspase-3及Bcl-2蛋白表达。结果开放剂组脑梗死体积显著小于对照组和阻断剂组(P<0.01),对照组与阻断剂组之间差异无显著性(P>0.05);开放剂组神经元凋亡数较对照组和阻断剂组显著减少(P<0.01)。对照组与阻断剂组之间差异无显著性(P>0.05);开放剂组caspase-3蛋白表达显著少于对照组和阻断剂组(P<0.01),对照组与阻断剂组之间差异无显著性(P>0.05);开放剂组Bcl-2蛋白表达显著多于对照组和阻断剂组(P<0.01),对照组与阻断剂组之间差异无显著性(P>0.05)。结论KATP通道开放剂能显著减轻脑缺血再灌注后脑梗死体积、减少Caspase-3蛋白表达、增加Bcl-2蛋白表达、抑制神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

针刺预处理对大鼠局灶性脑缺血的抗细胞凋亡作用

目的:探讨针刺预处理对大鼠局灶性脑缺血的抗细胞凋亡作用. 方法: 利用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血模型,实验动物随机分为假手术组(Sham),单纯缺血再灌注组(I/R),针刺预处理后缺血再灌注组(EA I/R),其中EA I/R组缺血前行百会穴重复电针刺激(30 min/d×5 d). 行TTC染色观察脑梗死体积,利用免疫组化及TUNEL法观察缺血周边区域Bcl-2蛋白表达及神经细胞凋亡的情况. 结果:与I/R 组相比,EA I/R组脑梗死体积明显缩小(P<0.01),Bcl-2蛋白的表达显著增加(P<0.01),神经元的凋亡数目明显减少(P<0.01). 结论:针刺预处理可以减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,可能是通过促进Bcl-2蛋白的表达,减少神经元的凋亡来实现的.     

颈内动脉注射pLXSN-Bcl-2cDNA对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积、神经细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的研究经颈内动脉注射质粒PLXSN介导人Bcl-2基因对大鼠局灶性脑缺血后脑梗死体积,神经细胞凋亡及Bcl-2、Bcl-xl和Bax表达的影响。方法健康Wistar雄性大鼠72只,采用线栓法制备大鼠MCAO模型,随机分为空质粒PLXSN对照组和PLXSN-Bcl-2治疗组。再灌注3h后分别经颈内动脉注射质粒PLXSN、PLXSN-Bcl-2。采用TTC染色法检测脑梗死体积,TUNEL法标记凋亡细胞,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax蛋白表达。结果MCAO后24、48和72h,脑梗死体积和凋亡神经细胞率治疗组显著小于对照组(P<0.05和P<0.01),治疗组Bcl-2和Bcl-xl蛋白的表达较对照组显著增加(P<0.01和P<0.05),而Bax蛋白表达治疗组较对照组显著减少(P<0.05)。结论颈内动脉注射质粒PLXSN介导Bcl-2基因对脑缺血有脑保护作用。促进bcl-2、bcl-xl表达升高,下调bax蛋白表达,从而抑制神经细胞凋亡,可能为其治疗脑梗死的机制之一。     

不同剂量促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响

目的:探讨促红细胞生成素(Epo)对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的影响.方法:32只雄性SD大鼠随机分成Epo低、中、高剂量组和缺血再灌注组,4组大鼠均采用线栓法阻断一侧大脑中动脉血流2 h再灌注24 h制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型.缺血开始时Epo低、中、高剂量组分别腹腔注射Epo 1000 U/kg、3000U/kg、5000U/kg,缺血再灌注组注射等量生理盐水.再灌注24 h后断头取脑,制作石蜡切片,免疫组化染色检测Bcl-2和Bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果:与缺血再灌注组比较,Epo各剂量组凋亡细胞均少,Bcl-2表达较高,Bax表达较少,Bcl-2/Bax比值变大.Epo各剂量组间Bax的表达差异无统计学意义;高剂量Epo组对Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值影响最大;中剂量Epo对细胞凋亡的影响最为显著;低剂量Epo对Bcl-2表达和细胞凋亡的影响最小,对Bcl-2/Bax比值的影响与中剂量相同.结论:不同剂量的Epo对大鼠脑缺血再灌注损伤后皮层神经细胞凋亡的影响不完全相同,3000 U/kg可能最接近最佳应用剂量.     

金纳多注射液对局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及相关蛋白的动态影响

目的:研究金纳多注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.60只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组和金纳多治疗组.缺血组和金纳多治疗组分别在脑缺血再灌注后6,12,24,48 h处死,应用免疫组化染色及原位细胞凋亡检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白表达及凋亡细胞数.结果:缺血组和金纳多治疗组凋亡细胞数于脑缺血再灌注后24h达高峰,金纳多治疗组各时点凋亡细胞数均明显少于缺血组(P＜0.01).缺血组和金纳多治疗组Bcl-2表达于脑缺血再灌注后12 h达高峰,金纳多治疗组各时点Bcl-2蛋白表达均明显高于缺血组(P＜0.01).缺血组和金纳多治疗组Bax蛋白表达于脑缺血再灌注后24h达高峰,金纳多治疗组各时点Bax蛋白表达均明显低于缺血组(P＜0.01).结论:金纳多注射液可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对脑缺血再灌注损伤起保护作用.     

青蒿素对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡相关因子及炎症介质表达的影响

目的 探讨青蒿素对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡因子及炎症介质表达的影响.方法 采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、青蒿素预处理组.缺血2 h,再灌注24 h后,处死大鼠,脑组织取材.采用实时荧光定量PCR检测Fas、FasL、Bcl-2、Bax mRNA水平.采用ELISA法检测TNF-α和IL-1β蛋白水平.结果 与假手术比较,模型组Fas、FasL、Bcl-2和Bax mRNA表达水平上调(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下调(P<0.05),TNF-α和IL-1β蛋白水平升高(P<0.05),青蒿素预处理可明显下调Fas、FasL、Bcl-2和Bax mRNA水平及TNF-α和IL-1β蛋白水平(P<0.05),上调Bcl-2/Bax比值(P<0.05).结论 青蒿素对脑缺血再灌注损伤后的脑组织具有保护作用.     

银杏叶提取物对肾缺血再灌注损伤肾小管细胞凋亡调控基因表达的影响

目的 观察银杏提取物（Egb）对大鼠肾缺血再灌注后肾小管细胞凋亡调控基因bcl-2和bax表达的影响,探讨Egb肾保护作用的分子生物学机制.方法 用动脉夹夹闭大鼠双侧肾蒂45 min再灌注24 h方法制成急性肾缺血再灌注损伤模型.采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的DNA原位末端标记技术检测细胞凋亡的情况.免疫组化检测Bcl-2、Bax表达.结果 缺血再灌注组较假手术组肾小管凋亡细胞数明显增多,Bcl-2、Bax表达均增强,Bax/Bcl-2比值增高;银杏叶提取物处理组较缺血再灌注组凋亡细胞数明显减少,Bcl-2表达进一步增强,而Bax表达减弱,Bax/Bcl-2降低.结论 银杏叶提取物可能通过影响Bcl-2、Bax表达,抑制细胞凋亡,从而发挥对缺血再灌注损伤肾脏的保护作用.     

大鼠全脑缺血再灌后海马CA1区Bax蛋白和bcl-2表达及EGb761的保护作用

目的观察EGb761对大鼠全脑缺血再灌注后bcl-2和Bax表达的影响,以初步探讨EGb761对脑缺血损伤保护的分子机制。方法采用Pulsinelli四血管闭塞法略作改动制备大鼠弥漫性全脑缺血模型。将健康SD大鼠72只随机分为缺血再灌注组（IR组）、假手术组（SAM组）和EGb761预处理组（EGb组）,采用免疫组化SABC法和原位杂交方法对海马CA1区各再灌注时间点的Bax蛋白和bcl-2 mRNA进行检测。结果 Bax蛋白免疫组化和bcl-2 mRNA原位杂交检测可见阳性信号以再灌注24h最强,之后下降,以72h下降最明显（P〈0.05）。IR组Bax表达较SAM组明显增强（P〈0.05）,而EGb组Bax阳性信号较对应时间点的IR组明显减弱（P〈0.05）,EGb组bcl-2 mRNA阳性信号较对应时间点的IR组明显增强（P〈0.05）。结论 bcl-2和Bax是参与神经细胞调亡的重要调控基因,EGb761对脑缺血再灌注后的神经细胞具有显著的保护作用,其机制可能与上调bcl-2基因和下调Bax蛋白表达,从而抑制神经细胞凋亡有关。     

奥拉西坦对大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2及 Bax表达的影响

目的：探讨奥拉西坦对大鼠脑缺血再灌注损伤后 Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。方法利用大脑中动脉线栓法建立大鼠缺血再灌注模型,随机分为假手术组、生理盐水组、奥拉西坦小剂量组、奥拉西坦大剂量组。应用免疫组织化学法检测再灌注24 h后大鼠脑组织Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与假手术组比较,生理盐水组大鼠的Bcl-2和Bax蛋白表达明显增加（P＜0.01）,与生理盐水组比较,药物组Bcl-2表达显著增多（P＜0.01）, Bax表达显著减少（P＜0.01）,奥拉西坦大剂量组较奥拉西坦小剂量组的Bcl-2表达增多（ P＜0.05）、 Bax表达减少（ P＜0.05）。结论局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、 Bax表达增强,奥拉西坦能通过上调Bcl -2蛋白和下调Bax蛋白起到脑保护的作用。     

高浓度氢气吸入对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑皮质神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的：探讨吸入高浓度氢气对局灶性脑缺血再灌注（ I／R）损伤大鼠脑皮质神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl－2和Bax表达的影响。方法48只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组（ Sham 组）、脑I／R损伤组（I／R组：再灌注同时吸入67％N2＋33％O2）、氢气（H2）治疗组（H2组：再灌注同时吸入67％H2＋33％O22 h）,每组16只。使用线栓法建立大鼠局灶性脑I／R损伤模型。再灌注24 h后行神经功能缺损评分,采用TTC染色法观察大鼠脑梗死严重程度并计算其梗死面积,尼氏染色和TUNEL技术检测大鼠脑皮质神经细胞凋亡情况并计算凋亡指数（AI）,蛋白质印迹法检测脑皮质区Bcl－2及Bax蛋白表达。结果与Sham组比较,I／R组、H2组神经功能缺损评分、脑梗死面积、AI、Bax蛋白表达明显增加（P＜0．05）;与I／R组比较,H2组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、AI、Bax蛋白表达明显降低,神经元尼氏体增加,Bcl－2表达量明显增多（P＜0．05）。结论再灌注同时吸入高浓度H2可通过上调抑凋亡蛋白Bcl－2及下调促凋亡蛋白Bax的表达抑制神经细胞凋亡,明显减少大鼠脑梗死面积,改善大鼠脑I／R后的神经功能评分,对大鼠脑I／R损伤起到一定的保护作用。     

Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑缺血预处理脑组织中的表达及意义

目的:探讨Bcl-2和Bax蛋白在大鼠局灶性脑缺血预处理脑组织中的表达及意义.方法:线栓法阻断SD大鼠大脑中动脉建立脑缺血预处理及脑缺血模型.TTC染色法测量脑梗死体积,免疫组织化学检测前脑皮质、基底核Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:与缺血组相比,预处理缺血组脑梗死体积明显减小(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达细胞数明显增加(P＜0.01),Bax蛋白表达减少(P＜0.05).结论:缺血预处理诱导Bcl-2蛋白表达增加和Bax蛋白表达下降可能是缺血预处理诱导抗凋亡、产生脑保护机制的原因之一.     

rhG-CSF联合胞磷胆碱处理对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2,Bax的影响

目的观察rhG-CSF、胞磷胆碱处理分别对大鼠大脑局灶性脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和Bax表达规律的影响,明确rhG-CSF、胞磷胆碱对大鼠大脑局灶性脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用,并探讨其脑保护作用的机制。方法 72只成年雄性wistar大鼠(230±10g),随机分为4组,模型组(n=18)、rhG-CSF给药组(n=18)、胞磷胆碱给药组(n=18)、rhG-CSF联合胞磷胆碱给药组(n=18)。每组又分为6h、24h、72h三个亚组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注模型,采用DNA原位末端缺口标记法(TUNEL)检测神经元凋亡;HE染色观察脑组织形态病理学变化;免疫组化法测定大鼠脑缺血再灌注不同时间Bax和Bcl-2的平均光密度值。结果与手术组相比,给药组均能改善脑缺血大鼠神经损伤症状,减轻脑缺血再灌注的病理损伤,减少凋亡表达,增加Bcl-2,减少Bax的表达。且联合用药组与rhG-CSF组、胞磷胆碱组比较,各时间点Bcl-2的增加与Bax的减少,差异有统计学意义。结论 rhG-CSF、胞磷胆碱能减轻脑梗死后细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2,降低Bax表达有关,联合用药治疗效果优于单独用药。     

miRNA-29c在大鼠脑缺血再灌注神经损伤中的保护作用与机制

目的探讨miRNA-29c在大鼠脑缺血再灌注神经损伤中的保护作用与机制研究。方法 48只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,miR-29c NC组,miR-29c inhibitor组,除假手术组外,其余三组均采用拴线法建立大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注损伤模型,并于术后24 h评价大鼠神经行为变化,检测大鼠脑梗死体积,缺血侧脑组织细胞凋亡情况,脑组织中miR-29c表达量,超氧化物岐化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3),Caspase 8及Caspase 9活性,及Bcl-2,Bax,Bak1,cleaved caspase 3,cleaved caspase 8与cleaved caspase 9蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组,miR-29c NC组中miR-29c表达量显著提高,大鼠神经行为评分提高,脑梗死体积增加,细胞凋亡率提高,SOD活性降低,MDA含量,Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9活性上升,Bcl-2表达量下调,Bax,Bak1,cleaved caspase 3,cleaved caspase 8及cleaved caspase 9表达量上调,差异均具有统计学意义(P0.01)。与模型组及miR-29c NC组比较,miR-29c inhibitor组miR-29c表达量显著降低,大鼠神经行为评分降低,脑梗死体积百分比减少,细胞凋亡率降低,SOD活性上升,MDA含量,Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9活性降低,Bcl-2表达量上调,Bax,Bak1,cleaved caspase 3,cleaved caspase 8及cleaved caspase9表达量下调,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论 miR-29c对大鼠脑缺血再灌注神经损伤具有保护作用,与提高抗氧化能力及调控细胞凋亡相关蛋白表达有关。     

Effects of NGF pretreatment on cerebral injury in gerbils

Objective: To investigate the effects and underlying mechanisms of different doses of nerve growth factor(NGF) pretreatment on neuron apoptosis and the expressions of the apoptosis-related protein, Bcl-2 and Bax, in the gerbil cerebral prefrontal cortex following global cerebral ischemia-reperfusion(FR) injury. Methods: Fifty-four gerbils were randomly divided into five groups, group C: sham operation(n = 6); group I/R(n = 12), group L(n = 12): low-dose NGF+I/R, group M(n = 12): medium-dose NGF+I/R and group H (n = 12): high-dose NGF+I/R. Groups I/R, L, M and H were further divided into 2 subgroups according to the durationof reperfusion(24 h and 72 h). The global cerebral I/R injury model was induced by bilateral carotid artery occlusion for 20 min,followed by removal of the clamps to permit reperfusion. In groups L, M and H, NGF was injected into the lateral ventricle 24 h prior to ischemia. Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick end iabeling(TUNEL) and immunohis-tochemical staining were performed to detect neuron apoptosis and the expressions of Bcl-2 and Bax protein in the cerebral cortex,respectively. Results: In the I/R group and NGF pretreatment groups(L, M and H groups), reperfusion for 72 h caused higher percentages of both neurons exhibiting apoptosis and Bax positive cells(P < 0.01), but lower percentages of Bcl-2 positive cells compared with the corresponding 24 h reperfusion groups(P < 0.05). All NGF pretreatment groups exhibited lower percentages of neurons exhibiting apoptosis and Bax positive cells but a higher percentage of Bcl-2 positive-cells relative to the I/R group(P < 0.01).Moreover, the high-dose NGF pretreatment group had a greater decreased neuronal apoptosis and Bax protein expression and increased Bcl-2 protein expression than either the low-or medium-dose groups. Conclusion: Neuron apoptosis participates in the progression of cerebral ischemia-reperfusion injury. The protective effect of NGF pretreatment against ischemia-reperfusion-induced neuron apoptosis seems to be both time-and dose-dependent. This anti-apoptosis mechanism may be associated with upregulation of Bcl-2 protein expression and downregulation of Bax protein expression.