抗CD4单克隆抗体可变区基因克隆及测序

目的：获取抗ＣＤ４单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因，为构建抗ＣＤ４嵌合抗体打下基础。方法 从分泌抗人ＣＤ４ ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系中提取总ＲＮＡ，用家族特异性引物进行逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），分别扩增出重链可变区（ＶＨ）基因及轻链可变区（ＶＬ）基因。将ＰＣＲ产物克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体，然后转化ＪＭ１０９细菌。并用全自动 ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ及ＶＬ基因序列进行测定。结果：ＶＨ基因为３５１     

抗HSV—糖蛋白（gp30）单克隆抗体重键可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序分析。     

抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与？…

获得抗血管内皮生长因子１６５抗体的轻重链可变区基因。方法从分泌具有中和抗血管皮生长因子１６５活性的单抗杂交瘤细胞株Ｖｍｄ１１中提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆该单抗的轻，重链可变区基因并进行序列分析。     

抗人黑色素瘤单抗HB8759轻,重链可变区基因的克隆和序列分析

获得新的鼠抗人黑色素瘤单Ｒ抗ＨＢ８７５９轻，重链可变区基因，以便对其进行基因工程改造。方法：采用反转录－ＰＣＲ从杂交瘤细胞中扩增抗体轻，重链可变区基因，测定ＤＮＡ序列，输入计算机分析，并在大肠杆菌中表达。结论：ＶＨ，ＶＬ基因均为新发现的基因序列，符合功能重排的鼠抗体可变区基因特征。     

抗HSV－糖蛋白（gp30）单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析

目的：获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白（ｇｐ３０）单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。方法：从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序列分析．结果：基因全长３５７ｂｐ，编码１１９个氨基酸，含有维持抗体结构的半胱氨酸，序列内无终止码．结论：所克隆基因具备小鼠抗体重链可变区基因结构特征，与已确认的小鼠抗体ＶＨ基因有较高的同源性，隶属于Ｋａｂａｔ分类体系中的小鼠抗体重链（Ａ）亚组．     

人黑色素瘤单抗VH—TNF融合蛋白基因的构建和表达

在大肠杆菌中表达人黑色素瘤单抗ＶＨ－ＴＮＦ融合蛋白基因。方法；在人肿瘤坏死因子基因上游插入了抗黑色素瘤单抗Ｍｅｌ３的重链可变区基因，将此融合基因插入大肠杆菌表达系统ｐＧＥＸ－２Ｔ的ＧＳＴ基因下游，ＩＰＴＧ诱导表达，表达产物经凝血酶消化后，测定其对Ｌ９２９细胞的杀伤活性，并进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，用抗ＴＮＦ抗体进行蛋白印迹分析。     

抗HEV ORF2单链可变区抗体的筛选和鉴定

目的：筛选和鉴定抗戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）开放读码框架２（ＯＲＦ２）的人源化噬菌体单链可变区抗体。方法：以大肠杆菌表达的重组ＨＥＶ ＯＲＦ２多肽做为固相包被抗原,从半合成的人源化噬菌体抗体库中经过４轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、ＤＮＡ序列分析鉴定,获得抗原结合活性较强的抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体,并以间接酶标法用该抗体对戊型肝炎患者石蜡包埋肝组织中的ＨＥＶ ＯＲＦ２抗原进行免疫组织化学鉴定。结果：筛选到的抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２的单链可变区抗体基因。酶切和序列分析表明,该抗体基因由７９５ｂｐ组成：ＥＬＩＳＡ和免疫组织化学结果显示,抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２人源化噬菌体单链可变区抗体能与重组ＨＥＶ ＯＲＦ２抗原特异性结合,并能够特异性识别戊型肝炎患者肝组织中的ＨＥＶ抗原。结论：此法     

抗癌胚抗原单区抗体的质粒构建及表达

目的 对抗癌胚抗原单区抗体进行表达研究。方法 采用ＰＣＲ技术将已获得的抗癌胚抗原（ＣＥＡ）原单克隆抗体Ｅ７Ｂ１０重，轻链可变区基因（ＶＨ、ＶＫ）进行改造后分别克陲是大肠杆菌表达质粒ＰＥＴ－２４α（＋）中，并进行表达，结果 显示重、轻链可变区在大肠杆菌中获得高铲表达，基力体总蛋白的２０％与２５％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ图谱显示表达产物分子量为１３ＫＤ、１２ＫＤ，与其基因编旧白 理     

肝癌单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析

目的：获取抗人原发性肝癌单克隆抗体重、轻链可变区基因。方法：从分泌高亲和力的抗人原发性肝癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株ＳＭ８．１１中提取细胞的总ＲＮＡ，以随机引物反转录合成ｃＤＮＡ，以特异引物进行ＰＣＲ，扩增了单抗的重链可变区（ＶＨ）及轻链可变区（ＶＬ）基因，并进行了序列分析。结果：ＶＨ基因片段长度为３５１ｂｐ，编码１１７个氨基酸残基；ＶＬ基因片段长度为３２４ｂｐ，编码１０７个氨基酸残基。两者均有４个     

鼠抗人TNF-α单域抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

ＲＴ－ＰＣＲ法获得鼠抗人肿瘤坏死因子－α单克隆抗体Ｅ６轻,重链可变区基因序列,分别构建融合表达载体ｐＧＥ６ＶＨ和ｐＧＥ６ＶＬ,利用大肠杆框图 系统表达ＶＨ和ＶＬ单域抗体蛋白。方法：将ＲＴ－ＰＣＲ法获得的Ｅ６ＶＨ和Ｅ６ＶＬ基因分别克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中,使它们受控于Ｐｔａｃ启动子,转化大肠杆菌ＤＨ５α,经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导,１００ｇ／ＬＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达