茵陈五苓散对动脉粥样硬化大鼠细胞凋亡的影响

目的探讨茵陈五苓散对动脉粥样硬化（AS）大鼠细胞凋亡的影响。方法采用高脂饲料喂饲法复制大鼠动脉粥样硬化模型，70只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、茵陈五苓散组、胶股蓝组，造模1个月后抽样检测大鼠主动脉，以发现动脉粥样硬化斑块为造模成功指标，经治疗1个月后分别检测血脂、血液流变学，用HE染色观察主动脉组织学变化，用透射电镜观察大鼠主动脉组织超微结构变化，用免疫组化法观察大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）细胞凋亡。结果茵陈五苓散与胶股蓝组比较，能降低TC、TG、LDL，升高HDL，均有非常显著性意义（P〈0.01），降低血浆黏度、全血中切、红细胞压积、血小板黏附率具有显著性意义（P〈0．05），消退斑块具有显著性意义（P〈0.05），维持主动脉组织结构，抑制细胞凋亡具有显著性意义（P〈0．01）。结论茵陈五苓散具有良好的抗动脉粥样硬化作用，它可能是通过抑制细胞凋亡来实现的。     

茵陈五苓散对动脉粥样硬化大鼠蛋白质组学的影响

目的:探讨茵陈五苓散对动脉粥样硬化(AS)大鼠作用的分子机制,方法:20只雄性Wistar大鼠采用高脂饲料喂饲法复制大鼠AS模型,造模1月后抽样检测大鼠主动脉,以发现动脉粥样硬化斑块为造模成功指标.茵陈五苓散治疗1个月后分别用固相pH梯度双向凝胶电泳分离茵陈五苓散组和模型组的AS大鼠主动脉组织总蛋白质,银染显色,PDQuest 2-de软件分析差异蛋白质点.结果: 双向电泳图象分析茵陈五苓散组图象的平均蛋白质数为1077±68,模型组的平均蛋白质数为1106±84;差异蛋白质有556个,其中有196个表达增强,有360蛋白质表达下降.结论: 茵陈五苓散的抗AS作用与这些差异表达蛋白质有关,这些差异蛋白质有待质谱分析鉴定,为茵陈五苓散作用的分子机理研究提供了新的思路.     

兔主动脉粥样硬化斑块组织中ApoE的表达

目的:复制实验性动脉粥样硬化(AS)模型,观察主动脉粥样硬化斑块组织中ApoE的表达.方法:30只家兔随机等分为对照组和AS模型组2组,以高胆固醇饲养家兔合并免疫损伤复制实验性AS模型,肉眼观察主动脉病变并行苏丹Ⅳ染色,然后将正常组和实验性AS模型组的主动脉组织固定,石蜡包埋切片后,进行HE染色、主动脉平滑肌细胞(SMC)-α-actin免疫组织化学染色及ApoE探针原位杂交.结果:高胆固醇喂饲家兔合并免疫损伤复制出明显的AS病变,模型组主动脉粥样硬化斑块面积明显高于正常组.HE染色可见内皮多处破损,内膜明显增厚,有数层泡沫细胞.SMC-α-actin免疫组织化学染色可见AS斑块中部分泡沫细胞呈SMC-α-actin阳性.原位杂交结果显示AS斑块的所有泡沫细胞中均可检测到ApoE mRNA表达,而正常组未见阳性颗粒.结论:ApoE可在兔主动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞源性和平滑肌细胞源性的泡沫细胞中表达,与动脉粥样硬化的发生、发展过程密切相关.     

辛伐他汀对大鼠动脉粥样硬化模型主动脉IL-18，IL-10 mRNA 表达的影响

目的：研究辛伐他汀对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）模型大鼠主动脉粥样硬化段IL-18, IL-10 mRNA表达的影响。方法雄性SD大鼠高脂饲料喂养,复制食饵性AS早期模型,用药组灌胃辛伐他汀。造模给药4周后,用RT-PCR方法观察对照组、模型组和用药组主动脉壁粥样硬化段病理变化及IL-18,IL-10 mRNA的表达。结果辛伐他汀组AS主动脉硬化段IL-18 mRNA的表达降低,IL-10 mR-NA的表达增加,动脉硬化的进程被阻止。结论辛伐他汀对大鼠动脉粥样硬化具有保护作用,并能提高AS斑块稳定性。     

木贼提取物对早期AS大鼠血管平滑肌凋亡及Fas、FasL表达的干预

目的研究木贼正丁醇提取物对大鼠动脉粥样硬化早期主动脉平滑肌细胞凋亡及Fas、FasL表达的影响。方法选用雄性SD大鼠,随机分为正常对照、病理模型、阳性药及木贼提取物治疗组。复制食饵性AS早期模型,用木贼提取物预防性给药,以吉非罗齐为阳性药对照。实验9周,流式细胞术定量检测主动脉平滑肌细胞凋亡率及Fas、FasL的表达,光镜下观察主动脉形态学变化。结果木贼正丁醇提取物治疗组平滑肌细胞的凋亡率明显高于模型组(P<0.01),Fas、FasL表达均高于模型组(P<0.01及P<0.05),主动脉损伤程度减轻。结论木贼正丁醇提取物可通过调控AS早期主动脉平滑肌细胞Fas、FasL基因表达,促进平滑肌细胞凋亡,阻断AS进展。     

血府逐瘀汤对动脉粥样硬化大鼠MMP-9及TIMP-1的影响

目的研究血府逐瘀汤对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）大鼠动脉斑块基质金属蛋白酶9（MMP-9）及组织抑制物1（TIMP-1）的影响。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、血府逐瘀汤组,对照组给予正常饲料,模型组给予高脂饲料,血府逐瘀汤组给予高脂饮食同时给予该药干预。12周后,处死大鼠,取主动脉免疫组化法观察主动脉斑块内MMP-9和TIMP-1的表达水平。结果血府逐瘀汤组MMP-9的表达较模型组明显减少（P〈0.05）,TIMP-1表达明显升高（P〈0.05）。结论血府逐瘀汤可以通过下调动脉粥样硬化大鼠动脉斑块内MMP-9的表达,升高TIMP-1表达,起到防治动脉粥样硬化和稳定斑块的作用。     

妊娠相关血浆蛋白-A在血管平滑肌细胞中表达及其细胞学功能

目的:研究兔动脉粥样硬化(AS)模型中AS易损斑块培养出的血管平滑肌细胞(VSMCs)妊娠相关血浆蛋白-A (PAPP-A)的表达及其细胞学功能.方法:建立新西兰兔AS易损斑块模型,体外培养来源于主动脉正常组织、易损斑块组织的VSMCs.RT-PCR检测这两个不同来源VSMCs中PAPP-A的mRNA表达水平;细胞免疫组化方法检测PAPP-A的蛋白表达,并确定表达部位.利用MTT法测定细胞生长曲线,采用划痕法检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:易损斑块组织的细胞PAPP-A的mRNA水平高;正常组织的VSMCs无PAPP-A的mRNA表达.免疫组织化学结果显示PAPP-A在易损斑块平滑肌细胞为强阳性表达,主要分布于细胞的胞质,正常主动脉的VSMCs中未见PAPP-A表达.来自易损斑块的血管平滑肌细胞生长能力强,较易迁移但易调亡.结论:易损斑块的血管平滑肌细胞强烈表达PAPP-A,并表现出相应的细胞学功能改变.     

大鼠动脉粥样硬化痰瘀互结病证结合模型的建立及方药干预研究(中医药实验与动物模型专栏)

目的 建立大鼠动脉粥样硬化痰瘀互结病证结合模型,并观察模型大鼠炎症因子的变化以及方药（丹蒌片）的干预作用。方法 32只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阿托伐他汀钙组(ATV组)、丹蒌组（DLP组）,每组8只。正常组大鼠喂食基础饲料,余3组均采用高脂饮食 维生素D3腹腔注射联合颈动脉球囊损伤的方法复制痰瘀互结型AS模型。模型组、ATV组、DLP组分别给予生理盐水、阿托伐他汀钙混悬液、丹蒌片混悬液灌胃干预4周。干预结束后,HE染色观察大鼠胸主动脉病理学改变,检测大鼠血清中血脂、hs-CRP、IL-6、TNF-α和LP-PLA2水平,RT-PCR法检测大鼠胸主动脉组织内IL-6、TNF-α和LP-PLA2 mRNA表达。结果 ①与正常组比较,模型组大鼠血清中TC、LDL-C、hs-CRP、IL-6、TNF-α和LP-PLA2水平升高（P<0.05）,HDL-C下降（P<0.05）,血管组织中IL-6、TNF-α和LP-PLA2表达升高（P<0.05）,HE染色光镜下观察,模型组大鼠胸主动脉内皮细胞排列不完整,内膜明显不规则增厚,内皮下间隙增宽,泡沫细胞聚集,脂质沉着,形成了典型的AS斑块。②与模型组比较,ATV组与DLP组大鼠血清TC、LDL-C和hs-CRP、IL-6、TNF-α和LP-PLA2水平降低（P<0.05）,胸主动脉组织内IL-6、TNF-α和LP-PLA2的表达下降（P<0.05）,ATV组与DLP组两组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。HE染色光镜下观察,ATV组与DLP组大鼠胸主动脉内膜增生明显减轻,斑块面积减小,动脉粥样硬化的程度减轻。结论 采用高脂饮食 维生素D3腹腔注射联合颈动脉球囊损伤的方法可以建立AS痰瘀互结证的大鼠模型,并且痰瘀同治方药（丹蒌片）可以改善该模型大鼠的AS和炎症反应。     

茵陈五苓散对梗阻性黄疸大鼠肝组织中钙蛋白酶的干预作用

目的：探索梗阻性黄疸时钙蛋白酶在大鼠肝组织中的表达变化及其意义;探讨梗阻性黄疸术后中药茵陈 五苓散对肝脏的保护作用及与钙蛋白酶表达的关系。方法：建立梗阻性黄疸SD大鼠肝损害模型,并将成年SD大鼠分 为假手术对照组(S组),梗阻性黄疸组(O组),梗阻性黄疸+中药茵陈五苓散组(OC组),梗阻性黄疸+生理盐水组(OW 组)。检测血清中TBIL,ALT,AST等生化指标含量;肝组织切片行HE染色观察肝组织的病理改变;免疫组织化学 和Western印迹测肝组织中钙蛋白酶表达变化;Real-time PCR检测大鼠肝组织钙蛋白酶基因表达量,观察梗阻性黄疸 时钙蛋白酶在大鼠肝组织中的表达变化。结果：随着造模时间的延长,钙蛋白酶蛋白及基因表达水平呈逐渐增加趋 势。梗阻性黄疸大鼠给予中药茵陈五苓散可以抑制钙蛋白酶的表达,减少因钙蛋白酶高表达引起的肝细胞损伤,改 善肝脏因梗阻引起的肝功能异常。钙蛋白酶基因表达水平与梗阻性黄疸肝损伤程度变化一致。结论：梗阻性黄疸患 者辩证使用茵陈五苓散可促进术后肝脏功能恢复,降低并发症发生率,从而为临床围手术期合理应用中药提供理论 依据。     

多肽化合物urantide对动脉粥样硬化大鼠胸主动脉和VSMC中Ⅳ型胶原表达的影响

目的：探讨多肽化合物urantide对动脉粥样硬化（AS）大鼠胸主动脉和血管平滑肌细胞（VSMC）中Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）表达的影响,阐明其防治AS的作用机制。方法：180只Wistar大鼠随机分为正常对照组（n=30）和AS模型组（n=150）,采用高脂饲料喂养和腹腔注射维生素D₃（VD₃）的方法建立大鼠AS模型。150只AS模型鼠随机分为AS组、氟伐他汀（Flu）组和urantide组（3、7和14 d组）（n=30）。免疫组织化学法检测大鼠胸主动脉壁内Col Ⅳ的表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠血清和尿液中羟脯胺酸（HYP）水平。体外培养的VSMC随机分为正常对照组、尾加压素（UⅡ）（10^-8 mol·L^-1）组、Flu组和urantide （10^-10~10^-6 mol·L^-1）组,ELISA法检测各组大鼠VSMC培养上清中Col Ⅳ水平。结果：各组大鼠胸主动脉内膜下不规则斑块内Col Ⅳ表达水平比较差异有统计学意义（F=35.09,P<0.01）。与正常对照组比较,AS组大鼠主动脉中Col Ⅳ表达水平明显升高（P<0.01）;urantide组Col Ⅳ阳性染色强度和范围较AS组均减少（P<0.01）。各组大鼠血清和尿液中HYP水平比较差异有统计学意义（F=24.38,P<0.01;F=26.72,P<0.01）。与正常对照组比较,AS组大鼠血清中HYP水平明显升高（P<0.01）,尿液中HYP水平明显降低（P<0.01）;与AS组比较,urantide组大鼠血清中HYP水平均明显降低（P<0.01）,尿液中HYP水平明显升高（P<0.01）,接近或优于Flu组水平。各组大鼠VSMC培养上清中Col Ⅳ水平比较差异有统计学意义（F=31.04,P<0.01）。与正常对照组比较,UⅡ组大鼠VSMC培养上清中Col Ⅳ水平明显升高（P<0.01）;与UⅡ组比较,urantide组大鼠VSMC培养上清中Col Ⅳ水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：urantide可抑制AS大鼠胸主动脉和VSMC中Col Ⅳ的表达,缓解AS病变程度,为临床应用urantide治疗AS提供了实验依据。     

Urantide对动脉粥样硬化大鼠胸主动脉组织中c-Jun氨基末端激酶表达的影响及其意义

目的：探讨Urantide对动脉粥样硬化（AS）大鼠胸主动脉组织中c-Jun氨基末端激酶（JNK）mRNA和蛋白表达的影响,阐明其防治AS的分子机制。方法：采用腹腔注射维生素D₃（VitD₃）联合高脂特制饲料饲养方法建立大鼠AS模型,同时设对照组。建模成功的150只AS模型大鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、Urantide 3 d组、Urantide 7 d组和Urantide 14 d组,每组30只。辛伐他汀组大鼠灌胃给予辛伐他汀,连续14 d;Urantide 3、7和14 d组大鼠经尾静脉注射Urantide,分别连续3、7和14 d。采用全自动生化分析仪检测大鼠血清学指标,HE染色观察大鼠胸主动脉组织病理形态表现,免疫组织化学染色、qRT-PCR和Western blotting法检测大鼠胸主动脉组织中JNK mRNA和蛋白表达水平。结果：与对照组比较,AS模型组大鼠血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白（LDL）水平均升高（P<0.05）,高密度脂蛋白（HDL）水平降低（P<0.05）。HE染色,模型组大鼠胸主动脉组织中泡沫细胞形成,中膜弹性纤维断裂以及钙化形成;与模型组比较,辛伐他汀组和Urantide组大鼠胸主动脉病理改变明显改善。免疫组织化学染色,对照组大鼠胸主动脉组织中JNK阳性颗粒微量表达;与对照组比较,模型组大鼠胸主动脉组织中JNK阳性表达强度明显增加（P<0.05）;与模型组比较,辛伐他汀组和不同时间Urantide组大鼠胸主动脉组织中JNK阳性表达强度明显降低（P<0.05）。qRT-PCR和Western blotting法检测,与对照组比较,模型组大鼠胸主动脉组织中JNK mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,辛伐他汀组和不同时间Urantide组大鼠胸主动脉组织中JNK mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与辛伐他汀组比较,不同时间Urantide组大鼠胸主动脉组织中JNK mRNA和蛋白表达水平进一步降低（P<0.05）。结论：Urantide可改善AS大鼠胸主动脉的病理损伤,其机制可能与抑制JNK信号通路的表达有关。     

辛伐他汀通过上调动脉粥样硬化大鼠血管壁Bcl-2蛋白的表达而抑制细胞凋亡

目的 探讨辛伐他汀对动脉粥样硬化(AS)大鼠模型血管壁细胞凋亡、Bcl-2蛋白的表达干预作用.方法 高脂饲料及腹腔注射维生素D3复制大鼠AS模型,随机分为对照组(n=10)给予普通饲料喂养,实验组(n=13)给予高脂饲料喂养,干预组(n=13)给予高脂饲料喂养基础上加用辛伐他汀干预,11周后取胸主动脉,观察其斑块变化.采用免疫组化Elivision法测定AS血管壁中Bcl-2蛋白表达.通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI),分析各组中Bcl-2表达及AI变化.结果 与对照组比较,Bcl-2蛋白的表达在实验组明显降低(P<0.05);而与实验组比较,干预组Bcl-2蛋白的表达明显升高(P<0.05),且与对照组比较无差异.同时,AI在各组中的变化比较则相反,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 辛伐他汀抗大鼠AS的作用可能与上调Bcl-2蛋白表达,进而抑制细胞凋亡相关.     

内毒素对大鼠动脉粥样硬化病灶的影响及TLR4的作用

目的探讨慢性炎症过程对大鼠动脉粥样硬化形成的影响。方法本实验通过定期腹腔注射小剂量细菌内毒素的方法在高脂饲养的大鼠体内引起一个持续性的低水平的全身炎症反应,以促进了大鼠冠状动脉及主动脉的血管病变,根据处理因素的不同把动物分为正常组(A组)、单独内毒素注射组(B组)、单独高脂饲养组(C组)和内毒素注射 高脂饲养组(D组),分别在2、4、8、12周时杀死动物采血并留取组标本。HE染色观察主动脉内膜变化情况,免疫组织化学检测观察主动脉内皮TLR4的表达情况。结果①D组大鼠主动脉动脉内皮下泡沫细胞的出现较其他组提前,主动脉及冠状动脉的变化以平滑肌细胞增生、动脉管腔狭窄为主,部分符合动脉粥样硬化的病理变化,且动脉形态学变化较其他组更显著。②A组大鼠主动脉内皮细胞无TLR4表达,B组、C组和D组大鼠主动脉内皮细胞有TLR4表达,且D组升高的程度明显高于内毒素组和高脂饲养组。结论慢性炎症过程对大鼠动脉粥样硬化的形成具有显著促进作用,此过程可能是由TLR4受体介导的。     

urantide对实验性动脉粥样硬化大鼠胸主动脉损伤的影响

目的：观察urantide对动脉粥样硬化（AS）大鼠胸主动脉损伤的影响,探讨其防治AS的作用机制。方法：采用高脂饲料喂养及腹腔注射维生素D3损伤动脉内膜的方法建立大鼠AS模型,随机分为正常组、AS模型组、阳性药组及urantide组。全自动生化分析仪检测大鼠血清中的甘油三酯(TG) 、总胆固醇(TC) 、高密度脂蛋白(HDL) 、低密度脂蛋白(LDL) 和Ca²⁺的水平;胸主动脉HE染色观察各组大鼠胸主动脉形态学变化。RT-PCR方法检测大鼠胸主动脉中尾加压素Ⅱ（UⅡ）及其受体G蛋白偶联受体14（GPR14 ）mRNA的表达。结果：与正常组比较,AS模型组大鼠血清中Ca²⁺、TG、TC、HDL及LDL水平明显升高（P<0.01）;urantide组大鼠在给药后,血清中上述各项指标均随给药时间的延长呈现逐渐降低的趋势,达到或接近阳性药组大鼠的水平,与AS模型组比较差异有统计学意义（P<0.01）。与正常组比较,AS模型组大鼠胸主动脉出现典型AS病变;与AS模型组比较,urantide组大鼠AS病理改变逐渐减轻。与正常组比较,AS模型组大鼠UⅡ及GPR14 mRNA的表达水平增高（P<0.01）;与AS模型组比较,urantide组大鼠随给药时间的增加,UⅡ及GPR14 mRNA表达水平降低（P<0.01）。结论: urantide对AS大鼠胸主动脉损伤有一定的保护作用。     

多廿烷醇抗动脉粥样硬化的分子机制研究

目的:探讨多廿烷醇抗动脉粥样硬化的分子机制?方法:采用腹腔注射维生素D3+高脂饮食喂养12周,建立大鼠动脉粥样硬化模型,同时使用多廿烷醇对其进行预干预?将40只SD 大鼠随机平分成4组,为正常组?动脉粥样硬化组?阿托伐他汀组及多廿烷醇组?酶法(终点法/CHO-PAP Method)检测血清血脂水平,ELISA法检测血清炎症因子超敏C反应蛋白(hs-CRP),取大鼠腹主动脉行电镜检查,采用Western blot法检测动脉粥样硬化斑块p38MAPK磷酸化的表达水平?结果:正常组可见完整内皮,动脉粥样硬化组大鼠腹主动脉有明显动脉粥样硬化形成,多廿烷醇组动脉粥样硬化程度较轻,大鼠血脂?血清hs-CRP炎症因子及大鼠腹主动脉p38MAPK磷酸化表达量均在正常组最低,动脉粥样硬化组最高,多廿烷醇组居中(P < 0.05)?结论:多廿烷醇除了具有调脂作用外,可对动脉粥样硬化大鼠血清炎症因子hs-CRP和 p38MAPK磷酸化有一定抑制作用,p38MAPK磷酸化通路可能参与多廿烷醇抗动脉粥样硬化机制?     

αSMA、MMP-13及VEGF在应用口服枸杞多糖预防动脉粥样硬化家兔动脉中的表达及临床意义

目的探讨αSMA、MMP-13及VEGF在应用枸杞多糖治疗动脉粥样硬化家兔动脉中的表达及临床意义。方法将24只雄性新西兰白兔随机分成3组:空白对照组、模型组、预防组,每组8只。空白对照组喂饲普通饲料,模型组喂饲含2%胆固醇的饲料,预防组喂饲含2%胆固醇的饲料,并在每天早晨饲料中按体重加入枸杞多糖(LBP)20mg/kg。第16周末空气栓塞处死所有动物并观察主动脉形态学变化及应用免疫组织化学染色进行指标的检测及分析。结果与空白对照组相比,模型组全部形成动脉粥样硬化模型,预防组也形成了动脉粥样硬化,但是斑块厚度明显低于模型组。通过免疫组织化学染色发现:预防组与模型组比较,主动脉斑块厚度和斑块内平滑肌细胞明显减少;血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达降低,预防组与模型组相比,VEGF的阳性表达率显著减小(P<0.05);MMP-13(Matrix metalloproteinase 13)的表达降低,预防组与模型组相比,MMP-13的阳性表达率显著减小(P<0.05)。结论 1.口服枸杞多糖能明显抑制高脂血症所诱发的VSMC增殖,促进已经增殖的VSMC凋亡;2.枸杞多糖能够降低动脉斑块内MMP-13和VEGF的表达,从而抑制动脉粥样硬化的发生与发展;3.口服枸杞多糖能有效预防高脂饲料诱发的家兔主动脉AS斑块的形成。