藻胆蛋白与血卟啉衍生物光敏剂的光毒性比较

目的：比较藻胆蛋白和血卟啉衍生物光敏剂的光动力杀伤和光毒性作用，并从理论上分析吸收光谱特性和光敏作用之间的关系。方法：采用吸收光谱面积的计算方法和MTT法检测光照后培养细胞存活率。结果：3种藻胆蛋白的光敏毒性从大到小依次为藻红蛋白、藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，均较血卟啉光敏剂有较弱的日光光敏毒性，光谱分析的理论计算数值和实验结果基本相符。结论：藻胆蛋白，尤其是别藻蓝蛋白和血卟啉光敏剂相比，有较弱的光敏毒性，适合开发成新型的光敏药物．     

光动力治疗恶性肿瘤26例临床观察

光动力疗法(PDT)是近年来新兴的恶性肿瘤治疗技术,随着国产光敏药物血卟啉衍生物(HpD)产业化和激光技术的发展,它在我国得到了迅速的发展.我院自2004年2月引进该项技术以来,采用国产血卟啉注射液(HpD)介导的光动力疗法(HpD-PDT)治疗多种恶性肿瘤26例,18例随访6个月,取得良好的疗效,现报道如下.     

光动力疗法对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外杀伤作用的实验观察

目的:探讨光动力疗法(PDT)对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的杀伤效应.方法:以人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,以血卟啉衍生物(HpD)为光敏剂,以630 nm波长激光为光源,采用连续照射的方式,将不同浓度HpD处理的MDA-MB-231细胞,照射不同剂量的激光后,用MTT法测定其OD492值,并绘制MDA-MB-231 PDT后的生长曲线,用光镜、电镜观察PDT后不同时间细胞的形态变化.结果:HpD浓度为0.5 mg/L时基本无杀伤作用;在相同的激光照射剂量下,2 mg/L HpD即有较好的杀伤作用,再增大HpD浓度对细胞的杀伤效应增加不明显;在相同的HpD浓度下,激光剂量为5 J/cm2时OD492值降低达平台.光镜、电镜下细胞形态也发生了明显的变化.结论:PDT对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231有明确的杀伤效应,HpD浓度2 mg/L、激光剂量5 J/cm2是本实验PDT的最佳作用参数.     

光动力联合紫杉醇对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的 探讨血卟啉衍生物联合紫杉醇注射液对人食管癌细胞Eca-109体外光动力疗法效应的影响.方法 将食管癌细胞株Eca-109分为8组:对照组、化疗组、化疗+高剂量光敏剂治疗组、化疗+中剂量光敏剂治疗组、化疗+低剂量光敏剂治疗组、高剂量光敏剂治疗组、中剂量光敏剂治疗组和低剂量光敏剂治疗组.种板孵育24 h,检测肿瘤细胞的存活率:于化疗方案组加入紫杉醇作用12 h,再往含光敏剂实验组分别加入血卟啉衍生物高、中、低剂量,4h后行光动力照射,照光前后荧光显微镜下观察细胞凋亡形态,照光后继续培育24 h,开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率:流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 血卟啉衍生物浓度越高食管癌细胞显示的荧光强度越强,荧光强弱与细胞的活性成正比,与紫杉醇联合组则可见到更多凋亡细胞.在肿瘤细胞的生长抑制率、细胞凋亡率方面.化疗+高剂量光敏剂光动力治疗组与空白对照组、单纯化疗组及低剂量光敏剂光动力治疗组相比,差异均有显著意义(P<0.01);含光敏剂大剂量组与小剂量组相比,差异有显著意义(P<0.05);化疗组及光动力组与空白对照组相比.差异有显著意义(,P<0.05).结论 光动力联合紫杉醇化疗对人食管癌细胞细胞株Eca-109增殖有协同抑制作用,二者可协同诱导人食管癌细胞株发生凋亡.     

高温对血卟啉光动力效应的影响及其机理

本实验观察高温对血卟啉光动力效应的影响。结果表明,高温和光动力效应有协同作用。加热温度不同对血卟啉光动力效应的影响不同,不同类型的肿瘤细胞对高温—光动力效应的敏感性也不同。在动物肿瘤细胞和人癌组织中发现,光动力效应可产生一种新荧光物质,其荧光发射峰为460nm。高温—光动力效应可能与高温增加细胞摄取血卟啉衍生物和产生新荧光物质有关。     

血卟啉衍生物光动力学疗法体外杀伤人喉癌细胞株Hep-2的实验研究

目的 探讨使用血卟啉衍生物对喉癌细胞进行光动力学治疗的有效照光时间和有效药物使用量.方法 使用波长630 nm的激光照射同血卟啉衍生物共同培养的喉癌Hep-2细胞株,使用MTT法评价不同的用药浓度(0、5、10、50、100和200μg/mL)和不同的光照能量密度(10、20、30、40和50J/cm2)细胞毒的作用.结果 随着药物浓度的增加细胞的死亡率增加,但是在100μg/mL以上增加不明显.随着光密度的增加细胞的死亡率增加,在40 J/cm2以后死亡率没有明显的增加.结论 血卟啉衍生物在630 nm的激光照射下能够有效地在体外杀伤肿瘤细胞,其杀伤的最佳效果与用药浓度和照射能量有关.     

Photofrin光动力治疗食管癌近期疗效观察

目的观察photofrin光动力治疗食管癌的近期疗效及其并发症。方法食管癌32例,以加拿大产光敏制Photorfin 2mg/kg静脉滴注,48h及72h后采用英国产DIOMED630型半导体激光治疗仪,通过内镜活检孔导入光导纤维,在内镜直视下对准病灶,以300J/cm的光剂量进行照射。结果无完全效应病例,明显效应26例(81.2%)、有效应4例(1 2.5%)、无效应2例(6.3%), 总有效率为81.2%。无严重并发症发生。结论光动力治疗食管癌近期疗效确切,尤其能有效解除食管梗阻,改善患者生活质量,手术安全、痛苦小,不失为一种较好的姑息治疗手段。     

人食管癌细胞体外光动力效应主要影响因素的实验研究

目的探讨光动力作用（PDT）对体外培养的人食管癌细胞Eca-109的杀伤效应．初步揭示影响Eca-109细胞光动力疗法杀伤效应的主要影响因素。方法以两种光敏剂血卟啉衍生物（HpD）和光敏素（Photofrin）不同浓度于特定光照剂量（15J／cm^2）下和不同浓度的HpD在三种不同光照能量密度（10J／cm2,30J／cm^2,50J／cm^2）下作用于食管癌Eca-109细胞,光源采用DIOMED630PDT系统,24h后通过MTT法检测细胞生存率,并应用荧光分光光度计RT-5000检测不同浓度HpD作用于Eca．109细胞4h后胞内光敏剂荧光值。结果两种光敏剂不同浓度间细胞生存率均有明显差异,三种不同光照能量密度下不同HpD浓度细胞生存率间亦存在明显差异（P〈0．05）。同一浓度不同光照能量密度的细胞生存率间,前4个低浓度生存率间未见明显差异（P〉0．05）,后4个高浓度生存率间则差异有统计学意义（P〈0．05）。根据荧光分光光度计RT-5000测得的胞内荧光值及标准曲线取得胞内光敏剂浓度,并与孵育浓度进行回归分析,得相关系数r=0．997,即胞内光敏剂浓度与孵育浓度呈正相关。结论特定光源下,光照能量密度、光敏剂的种类及其光敏剂的孵育浓度是影响Eca-109 PDT效应的主要因素。     

Photofrin光动力联合化疗对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的研究Photofrin光动力联合氟尿嘧啶和顺铂化疗药物对食管癌细胞株Eca-109增殖的抑制作用。方法将食管癌细胞株Eca-109分为6组，A：对照组，B：化疗组，C：化疗＋高剂量光敏剂治疗组，D：化疗＋低剂量光敏剂治疗组，E：高剂量光敏剂治疗组，F：低剂量光敏剂治疗组。种板孵育24h后，采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的存活率；于化疗组加入化疗药（5-Fu＋DDP）作用12h，再按实验分组加入光敏剂血卟啉衍生物（HPD）低剂量或高剂量，4h后行630nm激光照射，光能量密度30J／cm^2，照光后继续培育24h，开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率。结果除了低剂量光敏剂＋化疗组同高剂量光敏剂组差异不显著外．其余相互间差异均有统计学意义，高剂量光敏剂＋化疗组细胞抑制率较高，低剂量光敏剂组抑制率较低。结论在特定光源状态下,一定的光敏剂、光照能量密度、孵育时间，光敏剂孵育浓度是人食管癌细胞Eca-109体外光动力效应的主要影响因素。两种不同的HPD孵育浓度下细胞抑制率有显著性差异。相同光照能量密度及孵育时间下，孵育浓度越高，其杀伤效应越强。光动力与化疗联合对食管癌细胞的杀伤力提高，光动力与化疗有协同作用。     

血卟啉衍生物光动力学疗法体外杀伤人喉癌细胞株Hep-2的实验研究

目的 :探讨使用血卟啉衍生物对喉癌细胞进行光动力学治疗的有效照光时间和有效药物使用量。方法 :使用波长 6 30nm的激光照射同血卟啉衍生物共同培养的喉癌Hep - 2细胞株 ,用MTT法评价不同的用药浓度(0 μg、5 μg、10 μg、5 0 μg、10 0 μg、2 0 0 μg ml)和不同的光照能量密度 (10J cm2 、2 0J cm2 、30J cm2 、4 0J cm2 、5 0J cm2 )细胞毒的作用。结果 :随着药物浓度的增加细胞的死亡率增加 ,但是在 5 0 μg ml以上增加不明显。随着光密度的增加细胞的死亡率增加 ,在 4 0J cm2 以后死亡率没有明显的增加。结论 :血卟啉衍生物在 6 30nm的激光照射下能够有效的在体外杀伤肿瘤细胞 ,其杀伤的最佳效果与用药浓度和照射能量有关     

人食管癌荷瘤裸鼠光动力效应机制的初步研究

目的 探讨光动力治疗(photodynamictherapy,PDT)对人食管癌细胞Eca-109荷瘤裸鼠的作用机制.方法 通过皮下接种Eca-109细胞建立人食管鳞癌荷瘤裸鼠模型,并将其随机分为血卟啉衍生物(Hematoporphyrin derivative,HpD)光动力治疗组(给予HpD及光照),单纯照光组(仅给予光照),单纯光敏剂组(仅给予HpD)及空白对照组.腹腔注射HpD24h后前两组行光照(光能量密度为120J/cm~2),3d后处死所有裸鼠并检测瘤组织丙二醛(MDA)含量,免疫组化检测caspase-3并HE染色观察.结果 HpD-PDT组与空白对照组.单纯照光组,单纯光敏剂组的MDA含量相比均显著增高(P<0.01),而后3组之问MDA含量均无明显差异(P>0.05).HpD-PDT组与空白对照组闻caspase-3蛋白阳性率无明显差异(P>0.05).光镜下,HE染色仅HpD-PDT组可见大片均质红染的坏死物.结论 HpD-PDT对人食管癌荷瘤裸鼠的作用机制主要是通过光照产生单态氧直接损伤肿瘤细胞并在过氧化反应中产生MDA.其凋亡途径中caspase-3可能未激活,即其凋亡途径可能是不依赖caspase-3通路的.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of photodynamic therapy (PDT) in nude mice bearing human esophageal cancer cell line Eca-109 xenografts. Methods A nude mouse model bearing human esophageal carcinoma was established by subcutaneous transplantation of Eca-109 cells. The mice were then randomized into 4 groups, namely hematoporphyrin derivative (HpD)-PDT group (given HpD and laser irradiation), exclusive laser irradiation group, exclusive HpD group and blank control group. In HpD-PDT group, the mice were exposed to irradiation at the light energy density of 120 J/cm~2 delivered via a DIOMED 630 PDT system 24 h after intraperitoneal HpD injection, and the mice in exclusive laser irradiation group received only laser irradiation. Three days later, all the nude mice were sacrificed for determination of malondialdehyde (MDA) production, immunohistochemistry for caspase-3 protein and HE staining of the tumor tissue. Results The MDA level was significantly higher in HpD-PDT group than in the other 3 groups (P<0.01), and comparable between the latter 3 groups. Expression of caspase-3 protein was similar between HpD-PDT group and the blank control group (P>0.05). Under light microscope, HE staining visualized massive tissue necrosis in HpD-PDT group with homogeneous red staining. Conclusion In human esophageal carcinoma xenografts in nude mice, HpD-PDT generates singlet oxygen to result in direct tumor cell damage and cause MDA production. Caspase-3 may not be activated in the apoptotic pathway, suggesting that this pathway may not be caspase-3-dependent.     

血卟啉衍生物光动力对两株人结肠癌细胞杀伤实验的对比研究

目的 探讨血卟啉衍生物(HpD)光动力学效应(PDT)对体外培养人结肠癌细胞株LoVo和CoLo205的生物作用.方法 在体外培养的LoVo和CoLo205细胞中分别加入不同浓度的HpD(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 μg/ml)孵育6 h,予波长为630 nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20J/cm2,继续孵育24 h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率.荧光分光光度计检测LoVo与CoLo205细胞内HpD荧光强度.结果 HpD-PDT对体外培养的人结肠癌LoVo和CoLo205细胞均有杀伤作用,两者无显著性差异(P＞0.05).其杀伤作用大小与HpD的浓度和激光剂量成正相关(P＜0.01).激光能量为20 J/cm2,HpD的浓度为2.5μg/ml时,其杀伤LoVo、CoLo205细胞的作用最明显;HpD-PDT对LoVo和CoLo205的半数杀伤度(IC50)分别为0.4 μg/ml、0.6 μg/ml,两者无显著性差异(P＞0.05).检测LoVo与CoLo205细胞内HpD荧光强度无显著性差异(P＞0.05).结论 HpD-PDT可有效杀伤体外培养的人结肠癌LoVo和CoLo205细胞,且对两种细胞的杀伤作用无明显差异.     

ALA-PDT对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖抑制作用的研究

目的 探讨5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)在体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,并确定合适的光敏剂浓度和激光能量密度密度.方法 体外培养人体瘢痕疙瘩成纤维细胞.实验分为空白对照组、激光组(仅予不同能量密度He-Ne激光照射)、光敏剂组(仅予不同浓度光敏剂ALA同时培养)和ALA-PDT组(先后予ALA培养和He-Ne激光照射).采用MTT法计算各组细胞增殖抑制率.结果 激光组和光敏剂组对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖无明显抑制作用.ALA-PDT组中,当He-Ne激光剂量(>10 J/cm~2)与ALA浓度(>0.125 mmol/L)达到一定程度时,抑制作用明显,随激光能量密度和药物浓度的同时增大,抑制作用逐渐增大.结论 ALA-PDT对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖有明显抑制作用,其抑制作用随药物浓度和激光能量密度增加而增加,最佳的参数:ALA浓度为0.25 mmol/L,He-Ne激光能量密度为40 J/cm~2.     

漏芦对抗血卟啉衍生物光氧化作用的研究

光卟啉(YHpD)合并照光使红细胞溶血度和红细胞膜脂质过氧化产物丙二醛含量大大增加,红细胞膜乙酰胆碱酯酶活力显著减低。体内给药,YHpD对小鼠皮肤产生明显光敏反应。漏芦水提取物在体外和体内试验中都明显对抗YHpD的光氧化作用,这种对抗作用与其对YHpD产生的单线态氧的清除有关。     

血卟啉衍生物光动力对两株人鼻咽癌细胞杀伤实验的对比研究

目的 探讨血卟啉衍生物(HpD)光动力学效应(PDT)对体外培养人鼻咽癌细胞株CNE2和C666-1的生物作用.方法 向体外培养的CNE2和C666-1分别加入不同浓度的HpD(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0μg/m)孵育4 h,予波长为630nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20 J/cm2,继续孵育24h,用四唑盐比色法测定细胞存活率.结果 HpD-PDT能有效地杀伤体外培养的人鼻咽癌CNE2和C666-1细胞,其杀伤作用大小与HpD的浓度和激光剂量成正相关(P＜0.01).激光能量为20 J/cm2,HpD的浓度为2.5μg/ml或2.0μg/ml时,其杀伤CNE2、C666-1细胞的作用最明显;HpD-PDT对CNE2和C666-1的半数杀伤度分别为0.7μg/ml、1.2μg/ml,两者存在显著性差异(P＜0.05).相同HpD浓度、激光剂量条件下,C666-1细胞存活率显著高于CNE2(P＜0.05).结论 HpD-PDT对CNE2和C666-1细胞均有杀伤作用,但C666-1细胞对HpD-PDT的敏感性低于CNE2.     

叶绿素光敏剂光动力治疗鲜红斑痣

目的：观察叶绿素光敏剂光动力治疗鸡冠动物模型后的形态学变化。方法：５４只动物随机分成３组：单纯照光组，单组光敏剂组，光动力治疗组。治疗光源为主发射峰位于６５０ｎｍ的红光。治疗参数：给药至照光间隔时间５ｍｉｎ，给药浓度１０ｍｇ／ｋｇ体重，功率密度１５０ｍＷ／ｃｍ＾２，能量密度９０Ｊ／ｃｍ＾２，肉眼观察鸡冠外形及颜色变化，光镜观察组织学改变。结果：对照组无变化，光动力治疗组形态学改变包括：红细胞、内皮     

血啉甲醚和血卟啉衍生物在类风湿关节炎滑膜细胞中吸收特性的对比研究

目的：探讨体外培养的类风湿性关节炎（RA）患者的滑膜细胞对光敏剂血淋甲醚（HMME）的吸收特点,并与目前常用的光敏剂血卟啉衍生物（HpD)进行对比。方法：用荧光分光光度计法检测RA滑膜细胞对HMME、HpD的吸收量与孵育时间和孵育浓度的关系。结果：①RA滑膜细胞对HMME、HpD的吸收量随着孵育浓度的增加而增加。当培养液中光敏剂浓度达80μg/ml时,孵育1h细胞内HMME含量达到饱和状态;而HpD的浓度要到140μg/ml时细胞内的吸收量才达到高峰,当两种光敏剂细胞内浓度均达高峰时,HMME的含量为HpD含量的2倍。②细胞对两种光敏剂的吸收量亦随着孵育时间的增加而增加,HMME吸收得更快,第15分钟时吸收量为最大吸收量的52．9％,第60分钟为84．4％,细胞对HpD的吸收第15分钟为49．1％,第60分钟为69．2％。结论：与光敏剂HpD相比,RA滑膜细胞能更多更快地吸收HMME。推测HMME较HpD更适合用于光动力疗法滑膜切除术。     

HpD-激光对小鼠肝脏影响的实验研究

正常小鼠肝脏能贮溜大量HpD,当用320～350J/cm~2剂量的激光照射时即发生光敏效应。肝细胞最早发生改变的是线粒体和糖原,继而内质网、溶酶体、细胞核及血窦面的细胞膜等也发生明显的变性坏死变化。血窦内的枯否细胞变化也很明显,内皮细胞也相继发生改变。从实验结果表明,光敏效应在细胞的膜结构、核染色质等都起反应,支持单态氧学说,并为临床应用提出了应注意的问题。     

CLINICAL USE OF HEMATOPORPHYRIN DERIVATIVE IN MALIGNANT TUMORS

It has been shown by many investigators that hematoporphyrin derivative (HpD) when infused intravenously is perferentially retained by malignant cells. Clinical trials both for the detection and treatment of malignant tumo;rs have been carried out. If localized HpD is acti- vated by visible light, particularly 625-630 nm in the wave length of the spectrum red region cytotoxic singlet oxygen is elicited.. Since 1981 a. study gro.up on HpD-photora- 41iation therapy (HpD_PR'D has been set up in the Cancer Institutei, Chinese Academy of Me- dical Sciences (CAMS), Beijing. PRT technic and procedure used in this group are essentially the same as first described by Dougherty and his associates, exceipt that all the medical facilities including the HpD and laser system used are China made. 47 patients with cancers treated by PRT are presented with promising short-term results.