血管内皮生长因子-C在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响

目的:探讨胃癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达与肿瘤新生淋巴管形成的关系。观察以pCI-neo为载体的反义血管内皮生长因子-C(Anti-VEGF-C)转染的人胃癌细胞SGC-7901中VEGF-C蛋白的表达,及其对人胃癌细胞生长的抑制作用。方法:取72例胃癌标本的癌旁组织,通过RT-PCR检测VEGF-C的mRNA表达;免疫组化检测VEGFR-3,计算出微淋巴管的密度并行相关统计分析。以脂质体转染法转染既往试验合成的重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C到体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,用免疫组化和Western blot分析VEGF-C基因及蛋白的表达,最后用MTT法及流式细胞仪分析其对细胞生长的抑制作用。结果:淋巴结转移阳性组中VEGF-C mRNA阳性表达85.7%,高于阴性组的20.0%(P<0.05);VEGF-C mRNA表达阳性组淋巴管密度6.36±1.66,阴性组3.95±1.52(P<0.05);淋巴结转移阳性组淋巴管密度6.65±1.57,阴性组3.75±1.47(P<0.05)。重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C转染体外培养的人胃癌细胞株后,免疫组化和Western blot均显示pCI-neo-anti VEGF-C转染组无VEGF-C mRNA及其蛋白的表达,MTT检测表明pCI-neo-anti VEGF-C转染组活细胞数较其它各组均低(P<0.05)。结论:VEGF-C能促进癌旁微淋巴管增生、提高胃癌侵袭力;反义VEGF-C转染可封闭人胃癌细胞SGC-7901VEGF-C mRNA,减少其VEGF-C蛋白的表达,抑制其体外生长。     

反义促血管生成素2基因稳定转染对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的抑制作用

目的：观察以pEGFP-N1为载体的促血管生成素2（angiopoietin2,Ang2）反义基因转染的人胃癌细胞SGC-7901中Ang2蛋白的表达,研究其对人胃癌细胞体外生长的抑制作用。方法：应用重组质粒转染反义Ang2的pEGFP-N1载体（pEGFP-N1-anti Ang2）、pEGFP-N1空载体质粒以脂质体转染法转染体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,应用RT-PCR技术与免疫组化法检测Ang2基因及其蛋白的表达,MTT法分析细胞生长抑制作用,Annexin V-FITC和PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：RT-PCR与免疫组化均示pEGFP-N1-anti Ang2转染组无Ang2 mRNA及其Ang2蛋白的表达,MTT检测表明pEGFP-N1-anti Ang2转染组活细胞数较其它两组均低,差异有统计学意义（F=10.39,P=0.002 4）,流式细胞仪检测则显示其凋亡率较其它两组明显增高,差异有统计学意义（?字2=3 188.98,P＜0.000 1）。结论：pEGFP-N1-anti Ang2成功转染人胃癌细胞SGC-7901且可封闭Ang2 mRNA表达,使已转染pEGFP-N1-anti Ang2的人胃癌细胞Ang2蛋白的表达减少,并抑制人胃癌细胞的恶性表型。     

Ang-2在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响

目的：探讨促血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)在胃癌组织中的表达及其与肿瘤病理分期的联系;观察反义 Ang-2基因转染对人胃癌细胞 SGC-7901的影响。方法：用 Western Blot法检测 Ang-2蛋白在 10例胃癌组织及 10例正常胃组织中的表达,用免疫组化法检测 53例不同病理分期的胃癌组织中 Ang-2蛋白的表达;应用脂质体转染法将既往实验合成[1]的 pEGFP-N1-anti Ang-2转染体外培养的人胃癌细胞 SGC-7901,以空载体(pEGFP-N1 )转染组和未转染组作对照, RT-PCR及免疫组化检测转染后 Ang-2基因及蛋白的表达, MTT法和流氏细胞术检测反义 Ang-2基因转染对细胞生长和细胞调亡的影响;分别用上述三组细胞注射于裸鼠皮下,对比观察肿瘤生成的速度和肿瘤组织中的血管生成数量。结果：Ang-2蛋白在正常胃组织中不表达,在胃癌组织中呈阳性表达,并且随病理分期进展表达呈增强趋势;RT-PCR及免疫组化显示反义Ang-2基因转染组无 Ang-2 mRNA及 Ang-2蛋白的表达,MTT法检测显示反义 Ang-2基因转染组活细胞数较其它两组均低（P＜0.05）,流氏细胞术检测显示其调亡率较其它两组明显增高（P＜0.01）;转染了反义 Ang-2基因的胃癌细胞成瘤速度较其它两组明显减慢（P＜0.05）,肿瘤组织中血管生成的数量较其它两组明显减少（P＜0.05）。结论：胃癌组织中 Ang-2的表达与胃癌血管生成及胃癌侵袭能力密切相关;反义 Ang-2基因转染可封闭人胃癌细胞 SGC-7901中 Ang-2 mRNA及 Ang-2蛋白的表达,抑制其体外生长,促进其凋亡;并对其体外成瘤性及其新生血管的生成有明显的抑制作用。     

洛铂对胃癌细胞SGC-7901中Akt、PTEN、ERK mRNA表达的影响

目的:探讨洛泊对体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖抑制作用及Akt、PTEN、ERK mRNA的表达。方法:体外培养胃癌细胞SGC-7901,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度不同时间洛铂对胃癌细胞株的生长抑制率;RT-PCR法检测Akt、PTEN、ERK mRNA表达的变化。结果:洛铂体外能抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖,检测发现PTEN mRNA的表达增高,AKT、ERK mRNA的表达减少,且呈剂量时间依赖性(P<0.05)。结论:胃癌SGC-7901细胞对洛泊具有药物敏感性,洛铂能诱导体外培养的胃癌细胞凋亡,其作用机制可能与洛铂诱导胃癌细胞中PTEN-mRNA的表达增高AKT、ERK mRNA的表达减少有关。     

siRNA干扰survivin对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的 探讨siRNA沉默survivin基因表达对人胃癌SGC-7901细胞用期、增殖、凋亡的影响及其作用机制的初步探讨.方法 针对survivin mRNA序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞.MTT法检测SGC-7901细胞增殖;RT-PCR法检测survivin、caspase-3基因表达;Western blot检洲survivin、caspase-3表达;细胞免疫组织化学检测survivin表达;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况.结果 survivin siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中survivin的表达,与空白对照组比较.survivin siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P＜0.05);survivin在mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05),caspase-3在mRNA水平变化不明显(P＞0.05),而在蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);survivin siRNA组细胞凋亡率增高(P＜0.05).结论 survivinsiRNA可以下调胃癌SGC-7901细胞survivin基因的表达,抑制细胞的生长活性,并促进其凋亡.     

小白菊内酯对人胃癌细胞株SGC-7901增殖及Livin和Ki67蛋白表达的影响

目的观察小白菊内酯(Par)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖及Livin、Ki67蛋白表达的影响。方法将人胃癌细胞SGC-7901分为空白对照组、阳性对照组和Par作用组,分别用普通培养液、氟尿嘧啶培养液、Par培养液进行培养。采用MTT法测定Par对人胃癌细胞SGC-7901的体外生长抑制率,并用免疫组化法检测3组细胞的Livin、Ki67蛋白表达量。结果细胞培养24、48、72 h,Par作用组SGC-7901体外生长抑制率显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);而与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Par作用组Livin和Ki67蛋白表达量均较空白对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);而与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Par可抑制人胃癌细胞株SGC-7901的生长,其机制与降低Livin、Ki67蛋白表达量有关。     

生存素反义寡核苷酸在胃癌化疗中对表阿霉素的增敏性及其信号转导途径研究

目的:通过构建survivin反义寡核苷酸,研究其在胃癌化疗中对表阿霉素(Epirubicin,EPI)的增敏作用及作用机制.方法:构建survivin反义寡核苷酸链(Antiscnse RNA,ASODN)及正义寡核苷酸对照链(SODN),脂质体法转染胃癌SGC-7901细胞,MTT法检测转染组细胞抑制率并筛选出适宜浓度,不同浓度表阿霉素处理胃癌SGC-7901细胞,MTT法检查表阿霉素对其生长抑制作用并筛选出4组浓度做为待测浓度,将2种因素联合作用于SGC-7901细胞,Western-blot法检查survivin蛋白表达情况,MTT法检查表阿霉素对其抑制率,流式细胞仪检查细胞周期,Annexin V-FITC法榆查细胞凋亡情况,RT-PCR法检查bcl-2、SMac mRNA表达情况.结果:经200 nmol/L survivin反义寡核苷酸处理后的SGC-7901细胞对表阿霉素的敏感性明显增加:MTT法示转染后细胞经表阿霉素作用24 h后,抑制率较单独使用表阿霉素的未转染组明显提高(P＜0.05,q＞1.15),流式细胞仪检查示联合作用组使细胞G2/M期细胞数较单独使用表阿霉素组明显增多:Western-blot检查示转染后survivin蛋白表达水平显著降低,Annexin V-FITC检查示转染组细胞凋亡明显增加,RT-PCR检查示:SMac mRNA在联合作用组较空白对照组表达上调.结论:Survivin反义寡核苷酸能够增强SGC-7901细胞对表阿霉素的敏感性,其作用可能是通过上调SMac的表达实现的.     

siRNA干扰Msi1对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移的影响。方法针对Msi1 mRNA序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞。RT-PCR法检测Msi1基因表达;Westernblot检测survivin、caspase3及MMP-9表达;MTT法检测SGC-7901细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果Msi1 siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中Msi1的表达,与空白对照组比较,Msi1 siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P<0.05);survivin、MMP9蛋白表达水平显著下调(P<0.05),而caspase3蛋白表达水平上调(P<0.05);Msi1 siRNA组凋亡率增高。结论沉默Msi1对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移有负性调节作用。     

慢病毒介导的CD/TK基因靶向杀伤胃癌细胞的作用

目的:探讨慢病毒介导的血管内皮细胞生长因子受体(KDR)启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(FGW-KDRP-CD/TK)抑制胃癌SGC-7901细胞的体外杀伤作用.方法:用重组慢病毒FGW-KDRP-CD/TK体外感染表达KDR的SGC-7901细胞,荧光显微镜观察其感染效率;RT-PCR,WesternBlot方法检测转基因细胞CD/TK的表达;用细胞计数法绘制细胞生长曲线;用流式细胞术观察用药后细胞周期的变化.给予前药更昔洛韦(GCV)和5-氟胞嘧啶(5-FC)处理后,采用MTT法观察该体系对SGC-7901细胞杀伤效应及其旁观者效应.结果:慢病毒的感染率随病毒滴度的增高而递增.经RT-PCR,West-ernBlot检测发现转基因细胞有目的基因及蛋白产物的表达.从细胞生长曲线可以看出已转染慢病毒SGC-7901和未转染SGC-7901细胞增殖情况相似,其差异无显著性.流式细胞术检测结果与对照相比较,随着前药剂量的增大,处于S期细胞明显减少.MTT法检测结果显示前药呈剂量依赖性抑制SGC-7901细胞生长.同时该体系存在明显的旁观者效应.结论:KDR启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SGC-...     

si-RNA介导FGFR1基因沉默对胃癌细胞生长及凋亡的影响

目的探索靶向沉默成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）表达对胃癌细胞SGC-7901生长及凋亡的影响。方法通过Westernblotting法研究FGFR1蛋白在胃癌细胞SGC-7901以及人正常胃黏膜上皮细胞GES-1的表达情况;设计合成特异性针对FGFR1基因的小干扰RNA（siRNA）及阴性对照-siRNA（NC-siRNA）;采用瞬时转染法将siRNA转入胃癌细胞SGC-7901中,Westernblotting法检测转染siRNA-FGFR1后对SGC-7901细胞中FGFR1蛋白表达的影响。通过MTT法检测siRNA-FGFR1对SGC-7901细胞增殖抑制的时间-效应关系,以及克隆集落形成实验检测siRNA-FGFR1对SGC-7901细胞克隆集落形成的影响;采用Hoechst染色法和流式细胞术检测siRNA-FGFR1对胃癌细胞凋亡的影响。结果与人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901的FGFR1蛋白表达水平明显增高（P＜0.05）;siRNA-FGFR1转染SGC-7901细胞后,FGFR1蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）;胃癌细胞增殖生长曲线提示,用siRNA技术沉默胃癌细胞中FGFR1的表达后,相较于空白组和NC-siRNA组,siRNA-FGFR1组细胞增殖明显受抑制,另外胃癌细胞SGC-7901克隆集落形成明显受抑制;流式细胞术结果表明,正常组与NC-siRNA组中胃癌SGC-7901细胞早期凋亡百分比差异无统计学意义（P＞0.05）,而siRNA-FGFR1组细胞早期凋亡百分比显著升高（P＜0.01）。结论siRNA-FGFR1可抑制FGFR1蛋白在人胃癌细胞SGC-7901中的表达,并抑制胃癌细胞的生长,促进其凋亡。以FGFR1为靶点的小RNA干扰技术有望成为胃癌靶向治疗的新方法。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

十二指肠损伤的治疗体会

目的：提高十二指肠损伤的诊治水平，方法：回顾总结该院1999年－2001年间收治的十二指肠损伤7例临床经验。结果：合并其他腹部脏器损伤86％（6／7），单纯十二指肠损伤14％（1／7）。损伤部位以十二指肠降部为多占71％（5／7），水平部和球部各占14％（1／7），术后并发症发生率28％（2／7）、病死率14％（1／7）。结论：掌握十二指肠损伤的特点，早诊断、早手术、术中认真探查，掌握好检查指征，选择合理恰当术式，加强术后管理，可提高治愈率。     

断指再植的护理体会

随着医疗水平的提高,显微手外科技术在各基层医院已得到广泛开展,所收治的此类患者在逐年增加.随机统计了近两年我院20份34指的病例,通过观察认为手术的成功与否不但取决于损伤的局部条件、术中的操作和术后的治疗,同时与术前、术后的护理也密不可分.对离断指及伤口的妥善处理,积极的术前准备和术后的精心护理,特别是术后对血运的密切观察,同时通过术前术后的健康教育使患者对该疾病的知识有了一定的掌握,认识了康复训练的重要性从而使功能达到最大限度的恢复.     

法乐氏四联症的外科治疗34例分析

目的：总结法乐氏四联症外科治疗经验。方法：共34例，年龄2～16岁，32例在中低温体外循环、胸部正中切口行法乐氏四联症根治术，1例在非体外循环下行改良B-T分流术，1例行根治术同时行双向Glenn分流术。结果：术后早期死亡1例，死亡原因为低心排综合征，无远期死亡。结论：本症应争取早日行根治术，肺动脉发育差者应行改良B-T分流术，右室发育不良者在行根治术同时行双向Glenn分流术，死亡原因以低心排综合征多见，应采取合适的手术方式及围术期多种方法预防。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。