严重烫伤小鼠TNF—α表达及其在胰岛素抵抗中作用的研究

目的：阐明TNF-α超表达在烧伤胰岛素抵抗中的作用机制。方法：观察全层体表面积30%（30%TBSA）烫伤小鼠肝脏TNF-α-mRNA表达的动态变化和肝脏及肌肉部分纯化的胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶（Insulin receptor tyrosine protein kinase,InsR-TPK)活性变化和肝脏及肌肉部分纯化的胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶（Insulin receptor tyrosine protein kinase,InsR-TPK)活性变化以及注射TNF-McAb后InsR-TPK活性恢复情况。结果：（1）严重烫伤小鼠肝脏TNF-α-mRNA表达，伤后3h开始升高，24h略有下降，随后又升高，一直持续到第5天。（2）严重烫伤小鼠肝脏和肌肉InsR-TPK活性降低。注射TNF-McAb，烫伤小鼠肌肉InsR-TPK活性恢复而肝脏InsR-TPK活性变化不明显。结论：严重烫伤后TNF-αmRNA表达增强，血中TNF-α水平升高，抑制InsR-TPK活性，引起InsR信号传递障碍是烧（创）伤胰岛素抵抗主要环节和分子基础。     

缺氧习服大鼠骨骼肌葡萄糖转运体特点的研究

目的探讨缺氧习服后组织葡萄糖转运体的变化特点及葡萄糖摄取变化机制.方法将缺氧组大鼠置模拟海拔5 000 m低压舱内,30 d后取双后肢骨骼肌测定组织葡萄糖水平、葡萄糖摄取率,并分离细胞膜、细胞内质膜,用同位素标记的葡萄糖进行Scatchard分析测定葡萄糖转运体密度及其亲和力,通过免疫印迹测定葡萄糖转运体1、4的表达.对照组大鼠在平原进行,其它操作及条件与缺氧组相同.结果缺氧组大鼠骨骼肌葡萄糖含量增加、葡萄糖摄取率增强,骨骼肌细胞膜、细胞内质膜上葡萄糖转运体密度均非常显著地高于对照组.葡萄糖转运体1、4在细胞膜、细胞内质膜上的表达量较对照组显著增加.缺氧组葡萄糖转运体4 mRNA显著高于对照组,葡萄糖转运体1 mRNA水平变化不显著.结论表达增强,细胞膜与细胞内质膜上转运体密度均增加是缺氧习服后大鼠骨骼肌葡萄糖转运体的变化特点,是缺氧习服后骨骼肌葡萄糖摄取能力增强的重要原因之一.     

在严重烫伤大鼠中IL-1对葡萄糖分解代谢关键酶的调节作用

目的：探讨大鼠严重烫伤后ＩＬ－１对其骨骼肌葡萄糖分解代谢的影响。方法：利用背部３０％与一侧后肢７％ＴＢＳＡⅢ度烫伤大鼠模型,观察了伤后７ｄ内血浆与比目鱼肌中的ＩＬ－１含量及肌肉中葡萄糖分解代谢的关键酶６－磷酸果糖激酶（ＰＦＫ）和丙酮酸脱氢酶（ＰＤＨ）活性的动态变化,结果：伤后血中与比目鱼肌中ＩＬ－１水平显著升高;比目鱼肌的ＰＦＫ活性显著升高,ＰＤＨ活性显著降低。外源性ＩＬ－１静脉注射正常大鼠。注射     

西罗莫司对大鼠烧伤后IRS-1 Ser307磷酸化和胰岛素抵抗的作用

目的:探讨西罗莫司对大鼠烧伤后胰岛素受体底物1丝氨酸307(IRS-1 Ser307)磷酸化和胰岛素抵抗的作用.方法:6周龄SD大鼠(体质量160～170g)随机分为假烫伤组(n=8)、烫伤组(n=8)和烫伤 西罗莫司组(n=8).烫伤组和烫伤 西罗莫司组大鼠制成烫伤面积为30%的Ⅲ度烫伤模型,伤后第4天禁食5 h后的大鼠腹腔注射西罗莫司(0.4mg/kg)2h后,进行正常血糖高胰岛素葡萄糖钳夹技术实验,实验后颈动脉放血处死,立即采集肌肉和脂肪标本,采用免疫沉淀和免疫印迹方法分析IRS-1及其磷酸化丝氨酸307和酪氨酸活性的变化,通过免疫组化观察各组肌肉组织中磷酸化哺乳类西罗莫司靶点激酶(mTOR)表达的差异.结果:正常血糖高胰岛素葡萄糖钳夹技术实验中假烫伤组、烫伤组和烫伤 西罗莫司组10%葡萄糖输注率分别为(12.33±0.42)、(6.61±0.27)和(10.35±0.63)mg/(kg·min),烫伤组和其他2组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).烫伤大鼠肌肉和脂肪组织中IRS-1 Ser307活性较假烫伤组明显升高(P＜0.05),而IRS-1磷酸化酪氨酸活性较假烫伤组明显降低(P＜0.05).西罗莫司明显降低烫伤大鼠IRS-1 Ser307活性而明显增加IRS-1磷酸化酪氨酸活性(P＜0.05).免疫组化显示烫伤后磷酸化mTOR活性升高,西罗莫司显著抑制了mTOR活化.结论:西罗莫司通过抑制mTOR磷酸化作用从而降低了IRS-1磷酸化丝氨酸307活性,至少部分减轻烧伤后胰岛素抵抗的发生.     

葡萄糖转运体1研究进展

葡萄糖转运体（glucose transporter,GLUT）家族是葡萄糖转运的主要媒介，目前发现有13个成员。其中GLUT1以异构体的形式广泛表达于多种细胞，是介导葡萄糖经过血脑屏障的主要转运体。疾病可以改变GLUT1介导的葡萄糖转运过程，糖转运受到干扰能使脑功能受损，甚至导致脑死亡。近来研究显示，GLUT1能介导一些神经活性药物的转运，如糖基化的神经肽、低分子量肝素及D-葡萄糖衍生物等。因此，依赖于葡萄糖转运体的葡萄糖运载方法有可能是一个选择性药物运输系统，通过此高效转运系统，可调节药物进入大脑。     

严重烫伤后巨噬细胞膜蛋白GTP酶活性变化及补体对其影响

目的 观察严重烫伤后巨噬细胞膜蛋白GTP酶活性变化及补体对它的影响，探讨它在烧伤后巨噬细胞活化中的作用。方法采用小鼠18％TRSAⅢ度烫伤模型，分为正常组、去补体对照组、各时相烫伤组以及用眼镜蛇毒素因子预先体内耗竭补体再烫伤组，取腹腔巨噬细胞，分离膜蛋白，以r-32p-GTP为反应底物，通过液相闪烁计数检测其GTP酶活性。结果 腹腔巨噬细胞膜蛋白GTP酶活性在严重烫伤后6h开始升高，72h仍处于高峰；去补体后再烫伤，则GTP酶活性显著低于烫伤对照组。结论 严重烫伤后活化的补体能迅速激活巨噬细胞膜G蛋白。     

葡萄糖对35%TBSAⅢ°烫伤大鼠肠内补液时吸收率影响的研究

目的:研究葡萄糖对35%TBSAⅢ°烫伤大鼠肠内补液时小肠电解质溶液吸收率的影响.方法:雄性Wistar大鼠30只,随机分为:假烫补林格氏液组(假烫LR组,n＝10);烫伤补林格氏液组(烫伤LR组,n＝10)和烫伤补葡萄糖-林格氏液组(烫伤LR/G组,林格氏液中加入20g/L的葡萄糖粉,n＝10).烫伤组采用沸水法(100℃,15s)造成35%TBSAⅢ°烫伤.各组于烫伤后0.5h按1/2派克兰公式量和速率(2mL/kg*1%TBSA-1)进行肠内补液.测定烫伤后4h内肠道对水分和Na+的吸收率,以及伤后4h肠黏膜血流量和Na+-K+-ATP酶活性.结果:烫伤LR组小肠对水和Na+的吸收率明显下降(P＜0.05);两烫伤组之间比较,烫伤LR/G组对水和Na+的吸收优于烫伤LR组,在伤后2h有显著差别(P＜0.05);伤后4h烫伤LR/G组肠黏膜血流量和Na+-K+-ATP酶活性也显著高于烫伤LR组(P＜0.05).结论:35%TBSAⅢ°烫伤大鼠肠内补液时,小肠对葡萄糖电解质溶液的吸收率明显下降;葡萄糖可以提高烫伤休克肠内复苏时小肠的吸收率,并且与提高肠黏膜血流量和Na+-K+-ATP酶活性有关.     

严重烫伤后大鼠海马NMDA受体通道特性的变化

目的 研究严重创伤对海马NMDA受体功能的影响，为控制创伤后的过度应激反应提供实验依据。方法 以大鼠背部30％TBSAⅢ度烫伤作为严重创伤过度应激模型，利用细胞贴附式膜片钳技术，观察严重烫伤后0.1,1,2,4,8,24,48h海马NMDA受体单通道电流的变化。结果 在35pS电导水平的开放中，各烫伤组海马NMDA受体的电流幅度与对照组相比无显著差异，但开放概率增加非学显著，烫伤后0.1,1,2,4,8h组开放时间常数τ1和τ2均比对照组显著增加，各烫伤组关闭时间无明显变化。在100pS电导水平和开放中，各烫伤组电流幅度与对照组相比无显著改变，但通道开放概率增加非常显著。2h烫伤组开放时间常数τ1和τ2也比对照组显著增加，通道的关闭时间无明显差异。结论 严重烫伤主要引起海马NMDA受体通道开放概率显著增加，导致NMDA受体通道显著激活。     

严重烫伤大鼠海马NMDA受体活性变化的机制研究

目的 研究严重创伤对海马NMDA受体（NR）活性的影响及其相关机制，为设法调节NR的活性从而控制创伤后HPA轴的过度兴奋提供实验依据。方法 以大鼠背部30TBSAⅢ度烫伤作为严重创伤过度应激模型，利用放射配基结合法检测烫伤后海马NR活性（最大结合容量及亲和和）的变化，Western-blot 免疫共沉淀方法检测烫伤海马NR1，NR2A，NR2B酪氨酸磷酸化的改变，高效液相色谱方法检测烫伤海马谷氨酸含量的变化。结果 严重烫伤后0．1,1,2,4,8,24,48h海马NR的亲和力显著增加，尤以烫伤后2h最为明显，最大结合量从1h起亦显著增加；各时相点海马酪氨酸磷酸化NR1，磷酸化NR2A磷酸化NR2B蛋白水平皆显著增高；烫伤后0,5,1,2,4h，海马内谷氨酸释放量增加非常明显，伤后24h及48h无明显变化。结论 严重烫伤导致海马NR持续过度激活；NR酪氨酸磷酸化水平的增加是其过度激活的重要原因，氨酸释放量的变化可能不是持续激活的主要因素。     

大鼠严重烫伤早期应激反应中肝脏糖皮质激素受体变化的实验研究

目的 研究大鼠在严重烫伤早期应激反应中肝脏糖皮质激素受体（GR）的表达变化及意义，探讨影响GR改变的分子机制。方法 通过免疫印迹分析GR在严重烫伤后早期不同时相点肝脏中的表达变化及烫伤血清、细胞因子以及高浓度地塞米松对体外培养肝细胞GR表达的影响；应用放免和ELISA方法测定烫伤大鼠血清皮质酮和细胞因子TNF－α、IL-β的浓度变化。结果 大鼠肝脏GR的表达在严重烫伤后早期显著下调，而血清皮质酮和血清炎性细胞因子在烫伤早期均显著升高，体外实验则证实烫伤血清和TNF－α、IL－1对培养肝细胞的GR的表达有明显抑制作用，高浓度地塞米松作用则不明显。结论 严重烫伤会引起大鼠肝脏GR表达显著下调，烫伤早期分泌增多的炎性细胞因子可能是引起GR下调的主要原因之一，而烫伤早期机体内部大量生成的糖皮质激素对GR的表达并无显著影响。     

Caveolin-3在白藜芦醇改善高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中的作用

 【目的】在高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠模型上,探讨微囊蛋白3（CAV-3）在白藜芦醇改善骨骼肌胰岛素抵抗中的作用及机制。【方法】实验大鼠分三组:正常饮食组（NORM）,高脂饮食组（HFD）,高脂饮食加白藜芦醇干预组（HFD+ RSV）。通过腹腔糖耐量试验,空腹血糖和空腹血清胰岛素值以及2-脱氧-[3H] 葡萄糖的摄取,从整体上探讨白藜芦醇对胰岛素抵抗的保护作用。再通过免疫印迹检验微囊蛋白3(CAV-3)与葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）在以上过程中的表达情况。【结果】HFD能显著诱导胰岛素抵抗,补充RSV能抑制高脂的诱导作用。离体骨骼肌实验证实,RSV的保护作用与其促进胰岛素诱导的葡萄糖摄取有关。免疫印迹证实RSV能够增加骨骼肌CAV-3蛋白表达,促进GLUT4向细胞膜的转运。【结论】白藜芦醇能改善高脂诱导的胰岛素抵抗,其保护作用与其上调CAV-3蛋白表达,促进GLUT4向细胞膜转运,改善骨骼肌葡萄糖的摄取有关。     

Changes of the binding capacity of insulin receptors and activities of adenylate cyclase in hepatocytes after scalding in rat

Ｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｃａｐａｃｉｔｙｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓａｎｄａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆａｄｅｎｙｌａｔｅｃｙｃｌａｓｅｉｎ　ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓａｆｔｅｒｓｃａｌｄｉｎｇｉｎｒａｔｓＸｕＡｉｍｉｎ（徐爱民）；Ｘｕｌ...     

严重烫伤大鼠肝细胞跨膜信号传导的研究

本文研究３０％体表皮肤全层烫伤大鼠的肝细胞膜胰岛素受体结合性质变化和对肝细胞膜腺苷酸环化酶活性调节，探讨跨膜信号传导在烫伤后胰岛素抵抗中的作用。结果证明烫伤后肝细胞膜胰岛素受体结合容量降低，胰岛素对腺苷酸环化酶抑制的敏感性下降。提示烫伤后肝膜信号传递障碍可能影响糖代谢异常和引起胰岛素抵抗。     

大鼠缺氧习服后骨骼肌葡萄糖摄取的特点

目的　探讨机体习服于缺氧环境后组织葡萄糖摄取的变化特点。方法　将大鼠置模拟海拔 5 0 0 0m低压舱内 3 0d后 ,取动脉血 ,测定血气、血糖、血常规等 ,取双后肢骨骼肌测定组织葡萄糖水平、葡萄糖摄取率 ,并分离细胞内、外膜进行葡萄糖结合实验测定葡萄糖结合位点数及其亲和力 ,各指标以平原大鼠进行对照。结果　缺氧组大鼠血糖显著高于对照组 (P <0 0 5 )。骨骼肌中葡萄糖水平、葡萄糖摄取率、内外膜葡萄糖结合位点数均非常显著地高于对照组 (P <0 0 1)。结论　细胞对葡萄糖的摄取能力增强是机体习服于缺氧环境后优先利用葡萄糖的重要机制之一。     

肥胖Wistar大鼠骨骼肌细胞GLUT-4转位变化的研究

目的:探讨肥胖大鼠骨骼肌细胞的葡萄糖转运因子4(GLUT-4)转位变化.方法:10周龄雄性Wistar大鼠46只,随机平均分成对照组和肥胖组.6周肥胖模型建立后,用超速蔗糖梯度离心方法分离骨骼肌细胞内膜和外膜的匀浆,用Westem blot方法检测两组大鼠骨骼肌细胞内、外膜GLUT-4的蛋白水平.同时分别检测其空腹血糖、空腹胰岛素和血脂浓度.结果:肥胖组大鼠的胰岛素敏感指数明显下降(P＜0.01),肥胖组的内、外膜GLUT-4蛋白含量均较对照组下降,而且外膜GLUT-4下降比内膜更明显(分别为57.0%、12.2%,P＜0.01).结论:肥胖下调骨骼肌细胞GLUT-4总量,抑制细胞内膜GLUT-4向细胞外膜的转位,提示肥胖大鼠的骨骼肌存在由于GLUT-4下降调节所致的胰岛素抵抗.     

十二指肠-空肠转流手术对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的改善作用

目的 建立十二指肠-空肠转流手术(duodenal-jejunal bypass surgery, DJB)动物模型, 观察术后GK大鼠胰岛素抵抗情况的变化, 研究DJB手术治疗2型糖尿病的机理。方法 雄性Wistar大鼠为空白对照组;雄性GK大鼠分为模型对照组和DJB手术组。分别于手术后3、6和9周每组随机抽取6只动物进行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验;钳夹实验结束后1周, 检测肝脏GcK、G6P以及PEPCK mRNA表达情况以及骨骼肌细胞膜GLUT4含量变化。结果 术后3周和6周, DJB手术组动物的葡萄糖输注率(GIR)较模型对照组差异无显著性(P>0.05), 肝脏GcK、G6P以及PEPCK mRNA表达量较模型对照组差异无显著性(P>0.05);术后9周, DJB手术组动物的葡萄糖输注率(GIR)显著高于模型对照组(P<0.05), 肝脏GcK表达量DJB手术组显著高于模型对照组(P<0.05), 而G6P以及PEPCK mRNA表达量显著低于模型对照组(P<0.05);DJB手术后3、6和9周, DJB手术组骨骼肌细胞膜GLUT4的含量较模型对照组差异无显著性(P>0.05)。结论 DJB手术改善血糖的水平是通过改善体内肝脏组织的胰岛素抵抗, 通过调节糖代谢酶的表达, 进而提高肝脏葡萄糖摄取并抑制肝脏糖异生作用。在实验周期内, DJB手术对于骨骼肌组织的胰岛素抵抗未发现有明显改善, 提示DJB手术治疗2型糖尿病的效果与时间有一定关系。     

钒酸钠对STZ-糖尿病大鼠心肌细胞膜GLUT4易位的影响

目的探讨钒酸钠类胰岛素作用及对实验性糖尿病大鼠心肌组织葡萄糖转运蛋白4 (glucose transpoter type 4, GLUT4)与胰岛素刺激GLUT4易位的影响.方法 40只Wistar大鼠随机分为2组,1组应用链脲佐菌素(55 mg/kg)腹腔内注射,5 d后血糖大于13.5 mmol/L定为实验性糖尿病大鼠(STZ-D大鼠),然后将STZ-D大鼠组及正常组再分为2组,加钒组隔日管饲0.4% 钒酸钠稀释液,持续4周后在麻醉情况下每组各一半大鼠在尾静脉注射5U /kg诺和正规胰岛素治疗,5 min后心脏抽取血液标本并提取心脏,应用Western blot 技术测定GLUT4蛋白表达.结果钒酸钠治疗使STZ-D大鼠血糖、甘油三酯、胰岛素降低,STZ-D大鼠心肌细胞膜GLUT4蛋白含量与正常对照组比较明显降低(53%),而钒酸钠与胰岛素合用治疗STZ-D大鼠可使心肌细胞膜GLUT4增加2.7倍.结论钒酸钠治疗STZ-糖尿病大鼠在不增加胰岛素释放的情况下具有明显改善糖脂代谢的效果,糖尿病大鼠心肌细胞膜GLUT4含量减少可能是引起心肌葡萄糖转运障碍及心功能下降的因素,钒酸钠治疗使胰岛素调节GLUT4转运易位增加致心肌组织对葡萄糖摄取利用加强可能是某些降低血糖的机制以及改善心功能原因.     

Effect of Kaiyu Qingwei granule on insulin receptor in liver and skeletal muscular cell membrane in diabetes mellitus rats

Objective: To investigate the effect of Kaiyu Qingwei granule (KYQWG) on the insulin binding capacity of liver and skeletal muscular cell membrane and serum insulin-like growth factor-1 (IGF-1) in streptozotocin-induced diabetic rats.Methods: Rats in four experimental groups were investigated: the control group, the model group, the KYQWG group and the Metformin group. The insulin binding rate (IBR) of liver and skeletal muscular cell membrane was detected by receptor-ligand radiometric method and changes of serum levels of glucose, insulin and IGF-1 were observed before and after 4 weeks of medication.Results: The KYQWG group had a lower blood glucose level and IBR of liver and muscular cell membrane, as compared with those in the model group (P<0.01 or P<0.05), and a higher level of IGF-1 than that in the model group(P<0.01), but had no obvious changes in the serum level of insulin.Conclusion: KYQWG may increase the serum level of IGF-1 in diabetic rats, thus to decrease the insulin resistance at ante-receptor sites and improve the sugar metabolic disturbance in rats with diabetes mellitus.