重组人内皮抑素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响

目的 初步研究Wnt通路在重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,ES)诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡过程中的作用及可能机制.方法 分别以50、100、200、400 μg/ml ES体外处理人肝癌细胞株SMMC-7721,利用MTT比色法检测不同浓度、时间ES作用下的细胞增殖状态;利用流式细胞仪检...     

重组人血管内皮抑素介入栓塞治疗肝癌16例的疗效观察

目的探讨重组人血管内皮抑素介入栓塞(TACE)肝癌的疗效.方法将32例患者采用信封法随机分为药物组和对照组各16例,均行TACE治疗1~2次.对照组先行化疗药物肝动脉灌注,然后用丝裂霉素同碘化油混合物动脉栓塞;药物组在常规介入灌注化疗基础上,用重组人血管内皮抑素15~30 mg同碘化油10~20 ml混合后行肝动脉栓塞.结果两组患者均有不同程度的发热及右上腹疼痛,治疗后两组患者肿瘤体积、AFP水平均明显小于或低于治疗前(P<0.05),药物组治疗后AFP水平明显低于对照组(P<0.05).结论重组人血管内皮抑素介入栓塞治疗肝癌未见明显副反应,肿瘤缩小、AFP降低明显.     

重组人血管内皮抑素注射液恩度抑制裸鼠非小细胞肺癌淋巴转移

目的 探讨重组人血管内皮抑素注射液恩度（endostar）对非小细胞肺癌淋巴转移的抑制作用。 方法 于裸鼠右侧腋窝经皮下注射A549肺癌细胞（1×10⁷/mL,0.2 mL）建立裸鼠荷瘤模型,选择建模成功的56只裸鼠随机分为8组（n=7）：对照组（生理盐水0.2 mL,1次/d）,顺铂组（顺铂20 μg,隔日1次）,3种浓度恩度组（恩度2、4、6 mg/kg,1次/d）,3种浓度恩度+顺铂（恩度2、4、6 mg/kg,1次/d;顺铂20 μg,隔日1次）。所有实验用药均经尾静脉注射,连续给药14 d。给药结束后观察7 d,测量并记录肿瘤直径,统计各组肿瘤大小的变化。处死裸鼠,对肿瘤组织及可疑转移淋巴结采用H-E染色和免疫组织化学染色,并计算各组淋巴转移阳性率、转移淋巴结数目及微淋巴管密度。 结果 各用药组给药后与给药前肿瘤直径差值均小于对照组（P<0.05）,且3种浓度恩度+顺铂组的肿瘤直径差值均小于3种浓度恩度组和顺铂组（P<0.05）。3种浓度恩度组和3种浓度恩度+顺铂组的淋巴转移阳性率、转移淋巴结数目及微淋巴管密度均低于对照组和顺铂组（P<0.05）;6 mg/kg恩度组和6 mg/kg恩度+顺铂组淋巴转移阳性率、转移淋巴结数目及微淋巴管密度均低于2、4 mg/kg 恩度组和2、4 mg/kg恩度+顺铂组（P<0.05）。 结论 恩度和顺铂均能抑制非小细胞肺癌肿瘤生长,恩度与顺铂联合使用对肿瘤生长的抑制作用强于两者单独使用;恩度能够抑制肿瘤微淋巴管生成及肿瘤淋巴转移,且作用强度与浓度有关,顺铂未发现类似作用。     

重组人血管内皮抑素对多发性骨髓瘤血管新生的影响

目的观察重组人血管内皮抑素注射液对人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）和多发性骨髓瘤细胞株KM3增殖、凋亡及共培养体系中血管生成的影响。方法观察不同浓度的内皮抑素对HUVEC和KM3细胞株的增殖抑制作用;检测有效浓度的内皮抑素对HUVEC和KM3细胞株的凋亡作用;建立HUVEC和KM3的隔离共培养和混合共培养体系,检测共培养体系中不同浓度的内皮抑素作用后对于HUVEC血管生成的影响;检测经内皮抑素作用后对混合共培养、隔离共培养上清中VEGF浓度的影响。结果不同浓度的内皮抑素持续作用72 h,对HUVEC具有抑制增殖作用,且在50-200 ng/ml的剂量范围内呈现浓度依赖关系,而对KM3细胞未见明显作用;有效浓度的内皮抑素（100、200 ng/ml）可诱导HUVEC凋亡,而对KM3未见明显作用;共培养体系中,内皮抑素可抑制HUVEC的管状结构形成;经不同浓度内皮抑素作用后,细胞培养上清中VEGF的分泌量减少。结论内皮抑素能抑制HU-VEC的增殖;诱导HUVEC的凋亡;通过血管内皮抑制骨髓瘤细胞的促血管新生作用;抑制VEGF的分泌可能是其作用机制之一。     

重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌肿瘤血管生成及肺转移的抑制作用

目的：观察酵母表达重组人内皮抑素（recombinant human endostatin,rhES)对小鼠肺腺癌LA795原位肿瘤微血管生成及肺转移的抑制作用。方法：对含有人内皮抑素基因的重组酵母菌株进行诱导表达及纯化rhES;将接种LA795小鼠肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组，每组各10只，于接种后第6日起始予rhES和磷酸缓冲盐液（PBS）皮下注射，每日1次，连续14d；观察两组小鼠原位肿瘤微血管生成情况及肺部肿瘤转移情况。结果：经甲醇诱导酵母转化子表达rhES，并用肝素亲和层析的方法获得纯化的rhES；治疗结束后用免疫组化方法观察两组小鼠原位肿瘤微血管密度发现rhES治疗组肿瘤微血管密度明显小于PBS对照组（P＜0．01）；观察两组小鼠肺部发现rhES治疗组小鼠肺部未见有明显肿瘤转移病灶，而PBS对照组小鼠肺部可见大量散在肿瘤转移病灶；两组小鼠肺湿重比较具有显著性差异（P＜0．01）。结论：rhES具有良好的生物学活性，显著抑制了小鼠肺腺癌LA795肿瘤血管生成，并能有效抑制肿瘤的肺部转移。     

重组人血管内皮抑素在原发性肝癌化疗栓塞术中的应用

目的探讨重组人血管内皮抑素注射液（恩度）经导管动脉内化疗栓塞（TACE）治疗原发性肝癌的不良反应和近期疗效。方法将临床确诊的66例原发性肝癌患者根据条件相仿原则两两配对分为试验组和对照组。试验组先行常规肝动脉灌注化疗,然后将导管插至肝肿瘤供血动脉,将化疗药、恩度与超液态碘油充分乳化后注入动脉内行栓塞化疗,对照组行常规TACE治疗。两次治疗（间隔1个月）随访观察6个月后评价介入治疗后不良反应和临床近期疗效。结果介入治疗后1周内两组实验室指标的差异无统计学意义（均P〉0.05）;3个月及6个月后两组全身体力状况（KPS）评分、肝功能Child—pugh评分的差异亦无统计学意义（均P〉0．05）,肿瘤均明显缩小,差异无统计学意义（P〉0．05）;6个月后试验组肿瘤复发和转移率低于对照组（均P〈0.05）。结论恩度经肝动脉治疗原发性肝癌能降低肿瘤复发和转移率,并且不显著增加不良反应,有临床应用价值。     

重组人血管内皮抑制素联合TACE治疗对肝癌血管的影响

目的 探讨重组人血管内皮抑制联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)对原发性肝癌内皮生长因子(VEGF)表达和肿瘤微血管密度(MVD)的影响. 方法 46例中晚期原发性肝癌患者随机分为对照组(20例)和治疗组(26例),对照组单纯给予TACE治疗,治疗组给予重组人血管内皮抑制素联合TACE治疗.利用免疫组化法检测治疗前、后VEGF的表达变化和MVD.ELISA法检测治疗前后血清VEGF的表达水平,并进行比较. 结果 治疗组术后7d、30d血浆VEGF水平(292.34±70.74)pg/ml、(189.49±72.66)pg/ml与对照组(371.36±81.20)pg/ml、(319.24±70.54)pg/ml比较呈明显降低,差异有显著性(t=2.149,P＜0.05).术后30d治疗组和对照组的VEGF表达强度分别为(158.4±38.9)和(60.75±14.0),和MVD分别为(56.6±15.1)和(21.7±6.1),两组比较差异有显著性(t1=2.576、t2=2.328、P均＜ 0.05).结论 TACE联合重组人血管内皮抑制素治疗明显降低肝癌VEGF表达和MVD,对肿瘤再生血管有一定抑制的作用,巩固和加强了TACE的治疗.     

重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌抑制作用的实验研究

[目的]研究重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用。[方法]采用MTT法检测不同剂量不同时间重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的影响;建立Lewis肺癌自发转移模型,将40只荷瘤小鼠随机分为重组人血管内皮抑素小、中、大剂量组(5、15、30 mg.kg-1.d-1)及对照组各10只,连续给药14 d,停药1周后处死小鼠,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤抑瘤率;利用光镜和透射电镜技术,观察重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞以及对荷瘤小鼠血管内皮细胞和肿瘤细胞的形态学改变。[结果]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,400 ng处理72 h后的抑制率为(68.4±1.5)%,与处理24 h后的抑制率(21.9±2.1)%比较,差异有显著性意义(P<0.05)。各给药组肿瘤生长均较对照组缓慢,小、中、大剂量组的抑瘤率分别为28.2%、49.7%、52.8%。各给药组小鼠瘤组织内均有大面积坏死,血管内皮细胞和肿瘤细胞均发生早期凋亡的改变,且具有剂量依赖性。[结论]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用可能表现为对肿瘤细胞和毛细血管内皮细胞的双重抑制作用。     

重组人血管内皮抑素介入栓塞治疗对肝癌恶性生物学行为的影响

目的:研究重组人血管内皮抑素介入栓塞治疗对肝癌恶性生物学行为的影响.方法:选取本院收治的80例原发性肝癌患者纳入研究,随机分为两组,观察组接受重组人血管内皮抑素+吉西他滨+奥沙利铂介入栓塞化疗,对照组接受吉西他滨+奥沙利铂介入栓塞化疗,比较两组血清肿瘤标志物含量、增殖和黏附分子含量以及外周血中免疫分子含量.结果:(1)肿瘤标志物:观察组血清高尔基体蛋白73(GP73)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、DDK1含量低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)增殖和黏附分子:观察组血清Polo样激酶1(Plk1)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、CD44v含量低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)免疫分子:观察组外周血中Th1/Th2比例高于对照组、Treg/Th17比例低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:重组人血管内皮抑素介入栓塞治疗有助于杀灭肝癌细胞、抑制细胞增殖和黏附、增强细胞免疫功能,是治疗原发性肝癌的理想方法.     

重组人血管内皮抑素时间窗研究进展

【摘要】抗血管生成治疗是目前肿瘤治疗领域的研究热点, 通过抑制肿瘤内部新生血管形成达到“饿死肿瘤”的目的。随着对肿瘤抗血管生成研究的深入, 有学者指出在抗血管生成药物作用下, 肿瘤内部微血管的结构和功能可能有一段趋于正常化的时间, 即正常化时间窗。研究表明在该时间窗内联合化、放疗将提高抗瘤疗效。重组人血管内皮抑素恩度是我国具有完全自主知识产权的新型抗血管生成药物, 确定恩度的时间窗对指导恩度的抗肿瘤治疗具有重要意义。本文就恩度时间窗的研究进展作一综述。     

重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的探讨重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法体外培养人脑胶质瘤细胞,设立对照组与重组人血管内皮抑制素实验组（终浓度分别为50、100、150 ng/ml）,采用MTT法来判定该抑制因子对人脑胶质瘤细胞有无抑制作用。结果对照组OD值为0.302±0.012,实验组的OD值分别为0.284±0.006,0.218±0.014,0.175±0.012,P值均〈0.05。结论重组人血管内皮抑制素能够抑制人脑胶质瘤细胞的增殖且呈剂量依赖性。     

Effect of recombinant human endostatin on endometriosis in mice

Background Direct and indirect evidences have suggested that angiogenesis is a prerequisite for the development of endometriosis. Aiming at offering experimental evidences for anti-angiogenesis therapy, we transplanted the eutopic endometrium from patient with endometriosis into the severe combined immunodeficiency disease (SCID) mice, to evaluate the effect of the endostatin on the growth and angiogenesis of the established endometriosis lesions in SCID mice model.Methods Eutopic endometrium of women with endometriosis was transplanted into the SCID mice. The mice were randomized into treatment (n=10) and control groups (n=10). Two weeks after the implantation of endometrium fragment, the treatment group was injected with recombinant human endostatin YH-16 into the peritoneal cavity (2 mg·kg(-1)·d(-1)), whereas the control group received equivalent volume of PBS (200 &micro;l/d). The volume of endometriotic lesions in SCID mice was measured every three days, and all the treatment lasted for 14 days. Immunohistochemistry was used to determine microvessel density (MVD) and the expression of VEGF. The results were analyzed by t test and χ(2) test to value the treating effect. Results Compared with the control group, growth of endometriosis lesion was reduced in the mice treated with YH-16. Statistically significant differences in the volume and weight of the ectopic lesions were observed between the treatment and the control groups (P&lt;0.05). Microscopical examination showed that after being treated with YH-16, the volume of the endometrial tissues decreased, the glands depauperated, and the glandular epithelium partially degenerated. Necrotic debris was observed in the endometrial stroma. MVD and expression of VEGF in the treatment group were significantly lower than those in the control group (P&lt;0.05). Conclusions Recombinant human endostatin affects the maintenance and growth of endometriotic tissues by inhibiting angiogenesis and reducing the expression of VEGF in ectopic lesion. The angiostatic agent may be promising as a therapy for endometriosis.     

腹腔内应用重组人血管内皮抑制素治疗艾氏腹水瘤的实验研究

目的观察重组人血管内皮抑制素对艾氏腹水瘤( EAC)小鼠的治疗作用,并初步探讨其相关作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝( MTT)法检测不同终浓度的重组人血管内皮抑制素(0、5、10、20、40μg /ml )对体外培养的EAC细胞的抑制率;利用EAC细胞建立腹水瘤小鼠模型,将54只腹水瘤小鼠随机分为3组：A组(重组人血管内皮抑制素8 mg/kg,每12 h腹腔注射1次)、B组(重组人血管内皮抑制素8 mg/kg,每24 h腹腔注射1次)、C组即对照组(生理盐水0.2 ml/只,每12 h腹腔注射1次)。详细记录小鼠腹水量、体重及生存期;酶联免疫吸附法( ELISA)检测小鼠腹水血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2);并通过尾静脉注射伊文思蓝染液间接反映微血管通透性。结果体外实验显示,不同浓度的重组人血管内皮抑制素对EAC未见抑制作用;体内试验显示,重组人血管内皮抑制素组( A组和B组)小鼠的体重、腹水量及腹水中VEGF和MMP-2浓度均低于对照组,生存时间较对照组延长( P <0.05);3组小鼠血管通透性、A组与B组之间的各项指标差异无统计学意义( P>0.05)。结论腹腔内给药治疗小鼠EAC疗效较好,其作用机制可能与抑制VEGF及MMP-2的生成有关,提示重组人血管内皮抑制素在临床上治疗恶性腹水有较好的应用前景。     

重组人内皮抑素腺病毒对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑制作用

目的 探讨重组人内皮抑素腺病毒(Ad-endo)对人胰腺癌移植瘤生长的影响.方法 人胰腺癌Capan-2细胞经Ad-endo感染后,PT-PCR方法检测人内皮抑索基因的表达.收集Ad-endo感染Capan-2细胞的条件培养液,观察其对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)体外增殖的影响.建立人胰腺癌Capan-2细胞移植瘤模型,观察Ad-endo对胰腺癌移植瘤生长的抑制作用,分析肿瘤内微血管密度的变化情况.结果 RT-PCR方法检测到人内皮抑素基因在Capan-2细胞的表达,Ad-endo感染Capan-2细胞的条件培养液能明显抑制HUVEC的增殖.Ad-endo显著减缓了人胰腺癌Capan-2细胞移植瘤生长(P<0.05),同时也明显减少了肿瘤组织微血管密度(P<0,05).结论 腺病毒介导的人内皮抑素基因能明显抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长与血管生成.     

重组人血管内皮抑制素联合同步放化疗治疗鼻咽癌的疗效观察

摘要：目的  分析重组人血管内皮抑制素联合同步放化疗对鼻咽癌患者预后和肿瘤恶性程度的影响。方法  选取2012年11月-2015年1月在该院接受治疗的78例鼻咽癌患者作为研究对象,根据治疗方式分为接受重组人血管内皮抑制素联合同步放化疗的观察组36例,接受单纯同步放化疗的对照组42例。对比两组患者治疗后鼻咽癌预后相关因子蛋白表达量、血清生长因子水平、血清病情相关因子水平差异。结果  观察组患者治疗后鼻咽癌标本中乙酰肝素酶、蛋白激酶CK2β、缺氧诱导因子-1α、潜伏膜蛋白蛋白表达量均低于对照组（P <0.05）;观察组患者治疗后血清转化生长因子β1、血小板源性生长因子-β、表皮生长因子、表皮生长因子受体、血管内皮生长因子值均低于对照组（P <0.05）;观察组患者治疗后血清巨噬细胞炎性蛋白-3α、α-羟基丁酸脱氢酶、细胞角蛋白19片段、胸苷激酶-1、Ⅲ型前胶原、层粘连蛋白值均低于对照组（P <0.05）。结论  鼻咽癌患者接受重组人血管内皮抑制素联合同步放化疗,可以降低肿瘤恶性程度并优化治疗预后,具有积极的临床意义。

     

腺病毒介导血管内皮抑素基因转染肺癌细胞后的表达

目的:观察重组腺病毒介导的血管内皮抑素基因在体外转染A549细胞后的表达。方法:以复制缺陷型重组腺病毒为载体,将血管内皮抑素基因导入肺癌A549细胞,以免疫组织化学法、Western印迹法和ELISA法检测内皮抑素在A549细胞中的表达。结果:免疫组化染色、ELISA法和Western印迹法检测:A549细胞中内皮抑素蛋白表达阳性,Ad.Null组及PBS组内皮抑素蛋白未见有表达。结论:Ad.Endostatin转染A549细胞可表达具有生物学活性的内皮抑素。     

重组人内皮抑素的大鼠药代动力学研究

目的研究大鼠静脉注射重组人内皮抑素(recombinant human endostatin,rhEndostatin)药代动力学、组织分布及排泄。方法采用125I标记rhEndostatin示踪法,测定生物样品总放射性(radioactivity,RA法)和三氯醋酸沉淀蛋白后的放射性(trichloroacetic acid-radioactivity,TCA-RA法)以研究药物代谢过程。结果大鼠静脉注射rhEndostatin 5、10和20 mg/kg后,血药浓度和药物时间曲线下面积(area under the serum concentration-time curve,AUC)均随剂量增加而增大;TCA-RA法测定3个剂量的平均消除半衰期(elimination half-life,t1/2β)和平均清除率(systemic clearance,CL)变化不大,t1/2β为(243～265 min)、CL为(2.4～2.6 mL.kg-1.min-1)。大鼠静脉注射rhEndostatin 10 mg/kg后,以肾脏含药量最高,脑、肌肉和脂肪的含药量最低。96 h内由尿累积排泄量占给药总量的86.9%,粪中可回收到给药量的5.8%,尿和粪的总回收率达到92.7%;24 h内由胆汁排出的药量占给药量的1.3%。结论大鼠静脉注射rhEndostatin不同剂量后,药物消除基本符合线性动力学特征;组织分布呈特异性靶向分布(以肾脏含药量最高),也基本反映了rhEndostatin主要经肾由尿排泄的途径消除。     

内皮抑素抑制人脐静脉内皮细胞分泌IL-6和IL-8的实验研究

目的研究内皮抑素对体外培养的人脐静脉内皮细胞分泌IL-6和IL-8的抑制作用。方法将人脐静脉内皮细胞分为自然分泌组和实验组进行体外培养,收集第1~9天的培养上清液,采用双抗夹心ELISA法对上清液中IL-6和IL-进行定量测定。结果在自然分泌组人脐静脉内皮细胞培养上清液中检测出IL-6和IL-8,证实了在自然状态下内皮细胞能产生一定量的IL-6和IL-8,且随着内皮细胞培养天数的增加,IL-6和IL-8的分泌量也随之增加,当细胞进入对数增长期后,IL-6和IL-8接近分泌峰值,分别为(2979.32±19.65)pg/ml和(6018.87±56.74)pg/ml。加入内皮抑素的实验组培养上清液中的IL-6和IL-8水平较自然分泌组差异显著(P<0.01)。结论内皮抑素能够很好地抑制内皮细胞的生长和增殖并降低内皮细胞生物活性。