静压力对新生SD大鼠髁状突软骨细胞增殖影响的体外实验研究

目的：探讨不同静压力对髁状突软骨细胞增殖的影响。方法：对培养到第三代的新生SD大鼠髁状突软骨细胞加载0、12、24、36kPa的静压力1h后立即收集样本，用流式细胞仪分析各样本各增殖周期DNA含量变化，计算细胞增殖活性指数。结果：12、36kPa静压力能降低髁状突软骨细胞的增殖活性，24kPa静压力能增加髁状突软骨细胞的增殖活性。结论：静压力对髁状突软骨细胞的增殖活性具有双重效应，即压力过大过小均不利于软骨细胞的增殖，适当静压力能促进软骨细胞的增殖。     

髁突软骨细胞碱性磷酸酶活性及体外矿化能力的检测

0　引言　髁突软骨细胞 (m andibular condylar chondrocyte,MCC)体外培养时存在细胞形态变化、 型和 型胶原表达的更迭等表型变化特征 [1 ] ,但还不清楚 MCC碱性磷酸酶 (al-kaline phosphatase,AL P)活性的变化特点 .本实验采用 AL P活性测定和 Von Kossa染色法对兔 MCC进行检测 ,以补充对 MCC这方面生物学特征的认识 .1　材料和方法1.1　 MCC的原代培养和鉴定　解剖显微镜下取 1～ 2 wk的收稿日期 :2 0 0 1-0 1-0 1;　修回日期 :2 0 0 1-0 2 -2 1作者简介 :毛　勇 ( 1964 -) ,男 (汉族 ) ,浙江宁波人 .主治医师 ,讲师 .Tel.( 0…     

无牙颌大白鼠髁状突碱性磷酸酶活性变化

应用组织化学手段，观察单颌无牙和全口无牙颌大白鼠髁状突软骨碱性磷酸酶活性变化。结果表明：无牙颌大白鼠髁状突软骨碱性磷酸酶活性降低，并随着实验周期的延长而加剧，全口无牙组比单颌无牙组更明显。提示无牙颌将导致髁状突软骨钙化及组织改建能力下降。本研究从动物实验模型表明无牙颌的丧失是其颞下颌关节疾患的重要病因之一。     

雌二醇对兔髁突软骨细胞增殖与分化的影响

采用机械分离及胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化的方法，获得兔髁突软骨细胞。应用MTT四唑盐比色法，同位素掺入法检测不同剂量71-β雌二醇（E2）（10^-12～10^-6mol/L）对兔髁突软骨细胞生长、DNA、胶原及蛋白多糖合成的影响，旨在观察雌二醇对外体培养的兔髁突软骨细胞增生与分化的影响。结果表明：10^-10～10^-8mol/L及10^-1～10^-8mol/L17β-E2对体外培养的兔髁突软骨细胞生长及DNA合成具有刺激作用，且呈剂量依赖性，最大效应浓度分别为10^-8mol/L及10^-9mol/L。但进一步增加E2浓度则刺激作用减弱。10^-6mol/L具有明显抑制性。E2对蛋白多糖合成具有相似的作用，最大刺激效应浓度为10^-8mol/L。而10^-6mol/L E2具有显著抑制作用。E2对胶原蛋白的合成无明显作用。结果显示：17β-E2对外培养的兔髁突软骨细胞增殖及分化具有双向性作用。随其剂量不同，既具有促进效应又具有抑制效应。表明雌激素对维持关节的正常功能具有重要意义，可能在颞下颌关节某些疾患的发生及进展中起一定作用。     

压力对体外培养下颌髁状突软骨细胞基质中蛋白多糖合成的影响

[目的]探讨机械压力对体外培养兔下颌髁状突软骨细胞基质中蛋白多糖合成的影响.[方法]利用自制压力装置对体外培养兔下颌髁状突软骨细胞施以不同压力,收集细胞基质中的蛋白多糖,以硫酸咔唑法测定蛋白多糖代谢产物葡萄糖醛酸的含量,间接反映软骨细胞基质中蛋白多糖合成变化情况.[结果]-0.05 MPa组中葡萄糖醛酸含量高于其余各组(P＜0.05),持续作用10 min后,葡萄糖醛酸含量最高;而0.1 MPa组葡萄糖醛酸含量低于其余各组(P＜0.05).[结论]-0.05 MPa 的压力持续作用10 min,能促进兔下颌髁状突软骨细胞蛋白多糖的合成代谢,可用于软骨组织工程种子细胞的培养.     

Bmp-2对牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 探讨骨形成蛋白-2（BMP-2）对人牙周膜（PDL）细胞增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法 通过体外细胞培养技术。用噻唑盐（MTT）法检测BMP-2刺激前后人PDL细胞增殖的情况，用酶动力学方法检测ALP活性。结果 BMP-2可明显促进PDL细胞增殖。在实验的5d范围内，浓度在25-400μg／ml时呈浓度-时间依赖关系，最佳效应浓度为200μg／ml（比对照组增加了193．4％），最佳效应时间均为3d。BMP-2可显著增强PDL细胞的ALP活性，25μg／L作用下ALP活性已经比对照组差异有显著性（P〈0．01）。浓度为100μg／L时效果最佳（P〈0．001），从第2d起。能增强人PDL细胞的ALP活性，第5d时作用趋于缓和。结论 BMP-2能促进人PDL细胞的分化和增殖，能促进细胞ALP的活性。     

压力环境对人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的探讨不同压力环境对人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法采用酶动力学方法,比较不同压强的压力在不同的作用时间下对人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果压力增加导致牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性降低。结论颌力过大将造成牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性降低,可能影响牙周组织健康。     

活化素Ⅰ型受体对小鼠下颌骨髁突软骨生长发育的影响及其机制

目的：观察Ⅰ型骨形态发生蛋白（BMP）受体活化素Ⅰ型受体（ACVR1）对出生后小鼠下颌骨髁突软骨（MCC）细胞形态、增殖和分化的影响,为研究MCC相关性疾病的病因及治疗提供参考。方法：采用Cre-LoxP系统构建在C57BL/6J小鼠MCC细胞中条件性敲除ACVR1基因的动物模型。将基因型为Acvr1^fx/fx;RS/RS和Acvr1^+/-;Osterix （+）/（-）的雌性和雄性小鼠配对合笼,以子代Osterix-Cre （+）;Acvr1^fx/-;RS/+基因型小鼠为实验组,Osterix-Cre （+）;Acvr1^fx/+;RS/+小鼠为对照组。分别取新出生（n=3）、出生后21天（PN21）（n=4）和出生后42天（PN42）（n=5）雄性小鼠,X-gal染色检测MCC组织中Osterix-Cre表达,micro-CT法检测2组小鼠下颌骨髁突宽度和髁头长度,HE染色和甲苯胺蓝染色分析2组小鼠MCC细胞形态及各层软骨厚度,免疫组织化学（IHC）染色检测2组小鼠MCC组织中增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞数和Ⅹ型胶原水平。结果：X-gal染色和IHC染色,ACVR1条件性基因缺失小鼠模型构建成功。在PN21时,与对照组比较,实验组小鼠下颌骨髁突宽度和髁头长度明显变短（P<0.05）;2组小鼠MCC细胞形态表现和结构无明显差异。与对照组比较,实验组小鼠肥大软骨细胞层（Hy）和成软骨细胞层（Ch）这2层及Hy单层MCC组织中PCNA阳性细胞数明显增多（P<0.05或P<0.01）。在PN42时,与对照组比较,实验组小鼠部分下颌骨髁突软骨细胞形态异常,部分髁突肥大软骨细胞的排列紊乱,实验组小鼠髁突软骨前1/3区的Hy和中1/3区除Hy以外的其他层细胞厚度明显增大（P<0.05或P<0.01）;与对照组比较,实验组小鼠MCC组织各层PCNA阳性细胞数和Ch中Ⅹ型胶原水平明显升高。结论：ACVR1通过抑制MCC细胞增殖和成软骨细胞向肥大软骨细胞的分化,从而影响MCC细胞形态及MCC组织结构。     

IGF-Ⅰ对体外培养的大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性的影响

为探讨矫形治疗中髁突软骨增殖活性变化的机理,本研究采用流式 细胞术 检测胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对体外培养的大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性的 影响。结 果显示,IGF-Ⅰ直接作用于培养的髁突软骨细胞24小时及96小时后,实验各组细胞的增殖 指 数（PI）均大于对照组（42.0±0.29及11.4±0.37）,其中以100ng/ml组增大最多（48.9± 0.29及23.6±0.29）;而作用96小时后各实验组的PI较对照组增高 幅度更大。以上提示,IGF-Ⅰ是大鼠下颌髁突软骨细胞的促有丝分裂因子,其作用存在延 迟效应。     

坚强内固定在下颌骨髁状突矢状骨折中的应用

目的:探讨下颌骨髁状突矢状骨折坚强内固定的方法。方法:对6例髁状突矢状骨折患者行坚强内固定,恢复髁状突全貌。结果:行坚强内固定的所有患者术后均保存了颞下颌关节功能和形态,恢复了髁状突原有的外形。结论:下颌骨髁状突矢状骨折坚强内固定可保持髁状突的外形和正常位置,有助于关节功能的恢复。     

富血小板纤维蛋白对人牙髓干细胞增殖、凋亡 及碱性磷酸酶活性的影响

目的 探讨富血小板纤维蛋白（PRF）对人牙髓干细胞增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性的影响及机制。 方法 从人牙髓组织中分离出人牙髓干细胞（hDPSCs）,hDPSCs 随机分为对照组及实验组,CCK8 实验检测PRF 刺激hDPSCs 第0、1、3、5 及7 天时细胞增殖情况;RT-PCR 检测PRF 刺激hDPSCs 第0、3、7 及14 天时 碱性磷酸酶（ALP）的mRNA 表达情况;流式细胞仪检测PRF 刺激hDPSCs 7 d 后细胞的凋亡情况,Western blotting 检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、p38、p-p38 蛋白表达。结果 实验组第1 天时细胞的增殖与对照组比较,差异无统计学意义（P >0.05）,第3、5、7 天时细胞的增殖均高于 对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;实验组第3 天时ALP mRNA 表达与对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）,第7 和14 天时ALP mRNA 表达均高于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;细胞的凋亡率及 Cleaved Caspase-3 蛋白、p-p38 蛋白表达实验组与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,实验组细胞的 凋亡率及Cleaved Caspase-3 蛋白表达均下降,p-p38 蛋白表达上调,p38 蛋白表达两组间比较差异无统计学意 义（P >0.05）。结论 PRF 可促进hDPSCs 的增殖,上调ALP 的mRNA 表达,抑制其凋亡,其机制与激活p38 信号通路有关。     

DEX和rhBMP2对体外培养人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 探讨不同浓度地塞米松(Dexamethasone,DEX)、重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP2)及两者联合应用对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性的影响.方法 组织块法培养HDPCs并进行鉴定;采用酶动力学的方法,观察 DEX、rhBMP2及二者联合应用对HDPCs的ALP活性的影响.结果 单独应用DEX时ALP活性明显增高,且在生理浓度范围内当浓度为0.01 nmol/ml时,对HDPCs的ALP活性达到最大的刺激作用,rhBMP2对HDPCs的ALP活性呈浓度依赖性增强;当联合应用DEX和rhBMP2,ALP活性比单独应用相应浓度的rhBMP2明显增高.结论 DEX、rhBMP2对HDPCs的ALP活性均有增强作用,同时二者对HDPCs的ALP活性有显著的功能放大性协同增强作用.     

五藤二草汤对类风湿关节炎骨特异性碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶的影响

目的观察五藤二草汤对活动期类风湿关节炎（RA）骨特异性碱性磷酸酶（BAP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP5b）的影响。方法将61例RA患者随机分为对照组（30例）和治疗组（31例）。对照组给予甲氨蝶呤片10 mg,口服,每周1次;来氟米特片10 mg,口服,每日1次;醋氯芬酸片100 mg,口服,每日2次。治疗组在对照组的基础上加用五藤二草汤,口服,每日3次。连用3个月为1个疗程。观察治疗前后两组主要疗效指标及骨代谢指标（BAP、TRACP5b）。结果治疗后治疗组BAP、TRACP5b较治疗前明显下降（P〈0.05）,BAP较同期对照组显著改善（P〈0.05）,TRACP5b较同期对照组明显下降（P〈0.05）。结论五藤二草汤能降低活动期RA患者BAP、TRACP5b水平,改善骨代谢。     

碱性磷酸酶(ALP)试剂对血清镁测定的影响

目的 探讨在使用日立7060A型全自动生化分析仪时,碱性磷酸酶试剂对镁离子测定的影响情况及解决办法.方法 采用不同的测试方式、两种剂型、两种含镁离子浓度的碱磷酶试剂来研讨对两种方法检测血清镁的影响情况.结果 含镁浓度越高的ALP试剂对血清镁测定影响越大,对两种方法测定血清镁的影响程度不一样.结论 可使用不含或少含镁离子的ALP试剂、清洗试剂针、设置合理的通道和选择适当测定方法来消除或减少ALP试剂对血清镁测定的影响.     

改良耳屏前切口解剖面神经颧颞支径路行髁状突骨折复位内固定术的临床研究

目的:探讨改良耳屏前切口解剖面神经颧颞支径路进行髁状突骨折复位内固定手术的临床疗效。方法:选择髁状突骨折PDA分类Ⅰ、Ⅲ型患者8例,采用改良耳屏前切口,解剖腮腺,寻及面神经颧颞支,在两神经支之间通过破损的关节囊进行髁状突骨折复位内固定。术后1、3、6个月进行临床和影像学检查,分析疗效。结果:本组8例患者伤口全部Ⅰ期愈合,面部对称,局部瘢痕不明显。随访时间1～6个月,1例术后轻度面瘫,3个月后恢复正常。1个月内都有张口疼痛,但3个月内疼痛均逐渐缓解。咬合关系恢复良好,张口度均在2.5～3.0 cm。术后1、3、6个月复查全景片或CT见骨折生长良好。结论:改良耳屏前切口解剖面神经颧颞支径路可以良好地暴露术野,对于适合的病例进行复位内固定可以取得良好疗效。     

238例恶性淋巴瘤患者中性粒细胞碱性磷酸酶染色结果分析

目的了解中性粒细胞碱性磷酸酶(ALP) 染色在淋巴瘤方面的应用是否具有其检测意义。方法将恶性淋巴瘤骨髓未侵犯189例、骨髓侵犯23例及淋巴瘤细胞白血病26例患者的新鲜干燥血片,用偶氮偶联法做ALP染色,将其结果进行分析并与40例正常人的ALP染色结果比较。结果恶性淋巴瘤患者随着病情的进展,其ALP积分逐渐增高,积分>250分的出现率在正常对照、恶性淋巴瘤骨髓未侵犯和骨髓侵犯及淋巴瘤细胞白血病组分别为0%、4.8%、39.1%、53.9%,具有统计学差异。结论随着恶性淋巴瘤的病情进展,其ALP活性可逐渐增高,提示ALP活性的增高,可间接反映恶性淋巴瘤病情的活跃及进展程度,此项化学染色结果对恶性淋巴瘤临床分期及预后的判断具有一定的参考意义。     

三氧化二砷对体外培养大鼠软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对体外培养大鼠软骨细胞活力、增殖和凋亡的影响.方法 采用细胞培养的方法,原代培养1～3天Wistar大鼠的关节软骨细胞,取第3代细胞进行实验,按染砷剂量不同分为0(对照)、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L组.采用细胞增殖与毒性检测方法(CCK-8法),在染砷24、48、72 h测定细胞活力变化;流式细胞仪检测砷对软骨细胞周期及凋亡的影响.结果 与对照组相比,各浓度染砷大鼠软骨细胞(除0.5 μmol/L 24 h无统计学意义)活力均被抑制(P＜0.01);流式细胞仪分析结果显示,As2O3将大鼠软骨细胞周期阻滞于G2期(P＜0.05),使细胞凋亡率明显增加(P＜0.05).结论 As2O3可以抑制体外培养大鼠软骨细胞的增殖,促进细胞凋亡.