肾上腺髓质瘤无性繁殖细胞膜上的异常整流钾通道

作者用斑片钳技术,在传代培养的大鼠肾上腺髓质瘤无性繁殖细胞(PC12 cell)膜上记录电压依赖性钾离子通道活动。观察到两种超极化时激活的内向离子流,电导为30～60皮西门(PS)及大于100 pS。电导大的通道活动常呈大的闪动样关闭及簇状猝发。电导30～60 pS的钾通道具有如下特征:①明显的电压依赖性。在膜超极化到阈电位水平(30 mV)时,通道开放。同一电压下,单通道电流幅度基本一致,呈正态分布。不同钳位电压下,随着超极化程度增大,电流幅度渐增大。②平均开放时间和开放概率随超极化程度增大而增大,关闭时间则随之而减小。③I-V曲线上显示翻转电位接近K~ 的平衡电位。④钾通道阻断剂TEA能阻断该通道。     

急性分离大鼠新皮层神经元KATP通道特性

为研究急性分离大鼠皮层神经元上ＡＴＰ敏感钾通道的特性,本实验采用了膜片钳技术之膜内面向外记录方法。ＡＴＰ敏感钾通道电导为２００ｐＳ左右,翻转电位为０ｍＶ,有外向整流现象;通道开放常呈簇状猝发样开放,平均开放时间和开放概率随去极化程度增大而增加,随超极化程度增大而减少;低浓度ＡＴＰ有促进通道开放作用,并可激活二级电流;高浓度ＡＴＰ抑制通道开放概率并随浓度增大而增强;ＡＴＰ浓度增高到１或２ｍｍｏｌ／Ｌ时,通道电流被阻断。０.１ｍｍｏｌ／Ｌ优降糖可立即抑制通道活动。急性分离的皮层神经元上ＡＴＰ敏感钾通道特性与培养神经元有差别;低浓度ＡＴＰ可激活ＡＴＰ敏感钾通道,防止神经细胞过度兴奋,从而起到保护脑缺血缺氧损伤的作用。     

法乐四联症儿童肥厚右心室细胞瞬间外向钾电流的研究

目的观察压力增高导致的人肥厚心室组织离子通道的特性.方法应用酶解分离技术从法乐四联症(F4)患儿的心脏右室得到单个细胞,应用膜片钳全细胞记录技术观察了细胞Ito1的特征.结果将钙电流阻断后,去极化至-20mV～+60mV时均可记录到Itn1,激活后电流衰减速度不随去极化程度的增强而改变,在0、20、40、60mV时分别为123ms±6ms、131ms±10ms、122ms±6ms、122ms±6ms,去极化至60mV时的电流密度为4.7pA/pF±0.8pA/pF,半数最大激活电位为4.1mV±2.8mV,半数最大失活电位出现在-41mV±4mV,失活后再激活的恢复时间常数为83ms±4ms.这种电流可被10mM4-AP基本抑制.结论肥厚的人右室细胞存在Itn1,通道动力学特征与成人心房肌细胞类似.     

急性分离大鼠新皮层神经元KATP通道特性

为研究急性分离大鼠皮层神经元上ＡＴＰ敏感钾通道的特性，本实验采用了膜片钳技术之外记寻方法。ＡＴＰ敏感钾通道电导为２００pＳ左右，翻转电位为０mＶ，有外向整流现象；通道开放常呈簇状猝发样开放，平均开放时间和开放概率随支极化程度增大而增加，随超极化程度增大则减少；低浓度ＡＴＰ有促进通道开放作用，并可激活二级电流；高浓度ＡＴＰ抑制通道开放概率并随浓度增大而增强；ＡＴＰ浓度增高到１或２mmol/Ｌ时，通道电流被     

应用膜片钳制技术对豚鼠耳蜗外毛细胞高电导钾通道电生理特性的研究

为了研究耳蜗外毛细胞的基本电生理特性，应用细胞膜片钳制技术对豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜的高电导的钾通道进行了初步研究。结果显示，其高电导钾通道有以下典型特征：①具有明显的电压依赖性。在膜去极化时，通道被激活，其去极化程度越高，通道活动越强。在非对称性钾浓度梯度下，其反转电位为－３０ｍＶ，斜率电导约１３３±３ｐＳ（ｎ＝５）；②通道活动能被特异性阻断剂四乙胺（ＴＥＡ）在较高浓度下（＞１０ｍｍｏｌ／Ｌ）阻断，ＴＥＡ的阻断效应呈浓度依赖性；③胞浆内钙浓度的增高，能显著激活该通道，增加其开放概率和平均开放时间。上述结果表明：豚鼠耳蜗外毛细胞存在着高电导的电压依赖的钙激活的钾通道。该研究为进一步开展通道活动的调控，以及药物等因素对通道活动影响的研究，提供了有价值的资料。     

异搏定影响交感神经节的突触后机制

本文采用细胞内记录技术,以压力注射仪喷注外源性乙酰胆碱(ACh)诱发的 ACh 电位为指标,观察了异搏定对离体蟾蜍椎旁交感神经节阻滞效应的突触后机制.结果表明,较高浓度(100μmol/L)异搏定引起膜轻度去极化并抑制 N 和 M 型胆碱能电位.这种作用似乎与异搏定的Ca~(2+)通道阻滞效应无关,更可能是因突触后膜非失活性钾外向电流减小和非特异性地阻滞 Na~+、K~+通道所致.     

UMR106细胞膜钾离子通道的记录及鉴定方法研究

目的 :建立一种研究大鼠成骨肉瘤细胞 (UMR10 6 )钾离子通道的方法。方法 :采用膜片钳技术 ,在细胞贴附方式下用内面向外的方法记录。并用TTX、CdCl2 分别阻断电压依赖性钠通道和钙通道。结果 :首次在URM10 6细胞上记录到一种电导为 8.79ps电压依赖性钾通道的通道电流。并观察了开放时间、关闭时间以及开放概率随电压的变化。结论 :通过使用钾通道阻断剂证实本方法记录的是一种电压依赖性内向整流型钾通道。     

人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞Ca2+通道的电生理特性

目的研究人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞L型Ca2+通道的特性及其激动剂BayK 8644对通道的影响.方法培养SK-N-SH细胞,用膜片钳细胞贴附式技术记录和研究L型Ca2+通道的特性.结果SK-N-SH细胞L型Ca2+通道电导为(27.8±2.56)pS,平均开放时间为(0.65±0.08)ms,平均关闭时间的短关闭时间常数(0.53±0.05)ms,长关闭时间常数(6.02±3.46)ms.Bay K 8644使Ca2+通道平均开放时间延长(P＜0.05),但不影响其电导(P＞0.05).结论人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞上存在L型Ca2+通道,与其他神经元上L型Ca2+通道特性相近.     

肾上腺髓质瘤无性繁殖细胞延时整流钾离子通道的门控动力学

用片膜钳技术在细胞贴附式和内面向外式的膜片上观察和分析了作者新近发现的PC12细胞上的延时整流钾通道的开放与关闭规律:开放时间分布直方图由双指数密度函数拟合,关闭时间分布直方图也由两个指数密度函数拟合;随着去极化的增大,首次开放潜伏期缩短,通道开放概率增大,表明有明显的电压依赖性。在通道串式开放簇之间常有一个长时间的关闭,表明通道还有一个很慢的门控过程。据此,提出一个含有两个开放状态与3个关闭状态的模型。     

人外周血淋巴细胞膜电压依赖性钾通道特性分析及试分型

目的 :研究人淋巴细胞膜电压依赖性钾〔K(v)〕通道的特性 ,为某些疾病状态下该通道特性变化提供对照。并试观察该通道是否存在不同亚型。方法 :膜片钳全细胞电流记录方法。结果 :在记录到的 39个细胞中 ,K(v)通道的激活电压为 - (40 .3± 2 .5) m V,在重复去极化状态下通道无失活 ,复极过程中通道的关闭时间为 (116 .3± 8.2 ) ms,且通道电流可被 10 mmol/ L的四乙基铵 (TEA)所阻断。结论 :人外周淋巴细胞膜可能仅具有一种〔K(v)〕通道 ,其特性与鼠 n型〔K(v)〕通道基本一致。     

Characteristics of single Ca2+channel kinetics in feline hypertrophied ventricular myocytes

目的　慢性压力负荷导致的心肌肥厚所伴有的动作电位时程的延长可能与L型钙流失活延迟有关。本文的目的是探索左室高血压所致的家猫肥厚心肌的单通道L型钙流的特征 ,以及在动作电位延长中的作用。方法　应用膜片钳技术研究正常和压力负荷所致的肥厚家猫心肌单通道L型钙流的特征。左室高血压模型用部分结扎降主动脉的方法。结果　从 - 40mV去极化到 0mV时 ,正常心肌和肥厚心肌的单通道L型钙流的振幅分别为 1 0 2± 0 0 3pA和1 0 5± 0 0 3pA ,斜率电道分别为 2 6 2± 1 0pS和 2 5 8± 0 9pS ,两者相比均无差别。但脉冲终末部分的平均振幅 ,肥厚心肌明显大于正常心肌。通道开放时间直方图分析表明 ,正常心肌细胞的开放时间分布呈单指数曲线 ,而肥大心肌细胞为双指数曲线。肥大心肌的平均开放时间明显长于正常心肌细胞。结论　左室压力负荷所致的肥大细胞的动作电位时程延长与L型钙流的失活时间延迟有关。     

大豆皂甙AI对心肌作用的单钙通道分析及ESR谱研究

利用细胞贴附式膜片钳技术，在Ｗｉｓｔａｒ大鼠单个心室肌细胞上记录了Ｔ、Ｌ、Ｂ型钙通道的单通道活动，大鼠皂甙单体ＡＩ２０μｍｏｌ／Ｌ显著抑制三型钙通道的活动，使其开放概率减少，开放时间缩短，对通过通道的离子流幅值无明显影响，用电子自旋共振法测定了培养心肌细胞的自由基含量。大豆皂甙单体ＡＩ２μｇ／ｍｌ显著抵消黄嘌呤０．４２ｍｍｏｌ／Ｌ－黄嘌呤氧化酶５．３ｎｍｏｌ／Ｌ所致的自由基含量增多。     

马桑内酯对大鼠海马锥体神经元钙激活钾通道的影响

目的　了解致痫剂马桑内酯 (CL)对培养的大鼠海马锥体神经元细胞膜钙激活钾通道 (KCa)的调节作用及癫痫的发病机理。方法　采用膜片钳单通道电流记录技术进行定量研究。结果　 1在内面向外式膜片下 ,KCa(12 0 .34± 2 5 .12 ) p S表现出钙离子浓度依赖性 (n=6 )、电压依赖性 (n=17)和四乙基胺 (TEA)阻断特点 ;2在细胞贴附式膜片下 ,浴液中加入 CL 可明显激活 KCa(P<0 .0 1) ;3在对称性高钾溶液中 ,使浴液 [Ca2 + ]i 为 10 - 8m ol/L,维持神经元膜电位为 2 0 m V,当 CL 为 0 μl/ m l和 1.0 μl/ m l时 ,可分别使 KCa开放概率从 0 .0 2 5增加到 0 .5 5 3(P<0 .0 1) ,通道活动的平均开放时间 (ms)从 1.875± 0 .4 12增加到 6 .82 9± 0 .136 ,平均关闭时间 (m s)从 179.342±13.831降低到 6 .4 12± 1.383(n=2 5 ,P<0 .0 1)。结论　在 CL 诱导的癫痫发病中 ,钙激活钾通道活化可能起重要的负反馈调节作用。     

钙激活钾通道在钙离子致神经细胞损伤中的作用

采用膜片钳单通道记录方法,观察原代培养新生ＳＤ大鼠皮层神经元的钙激活钾通道比（Ｋｃａ）特征及胞内不同游离钙水平对通道开放动力学的调节,结果显示：培养ＳＤ大鼠皮层神经元的Ｋｃａ以大电导活动占优势,胞内游离钙为１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ时,通道几乎不开放,在１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ时达最大激活。由此表明神经元上Ｋｃａ通道开放概率明显依赖于胞浆中钙离子和膜电位,Ｋｃａ对胞内钙离子浓度变化极为敏感,钾通道的开放剂可     

钙激活钾通道在钙离子致神经细胞损伤中的作用

采用膜片钳单通道记录方法,观察原代培养新生ＳＤ大鼠皮层神经元的钙激活钾通道（ＫＣａ）特征及胞内不同游离钙水平对通道开放动力学的调节。结果显示：培养ＳＤ大鼠皮层神经元的ＫＣａ以大电导活动占优势,胞内游离钙为１０－８ｍｏｌ／Ｌ时,通道几乎不开放,在１０－６ｍｏｌ／Ｌ时达最大激活。由此表明神经元上ＫＣａ通道开放概率明显依赖于胞浆中钙离子和膜电位,ＫＣａ对胞内钙离子浓度变化极为敏感。钾通道的开放剂可能有一定的神经细胞保护作用。     

Single voltage-dependent potassium channels in isolated habenula neurons(Preliminary report)

目的：观察和探讨缰核细胞膜上延迟整流钾电流（Ｉｋ）的性质。方法：应用细胞吸附式膜片钳记录技术。结果：去极化阶跃电压激活该通道电导为３０～３５ｐＳ的外向单通道电流；呈电压依赖性；平均开放时间随去极化电位的增长（０ｍＶ～６０ｍＶ）由３．７２±１．５ｍｓ提高到３２．２±５．６ｍｓ。可以认为，通道的开放不依赖于电极内Ｃａ２＋的存在，四乙基胺明显抑制通道的开放。结论：由以上结果判断，此电流为外向延迟整流钾电流（Ｉｋ）。     

Sodium channels in the apical membrane of human nasal epithelial cells

目的　明确人鼻粘膜上皮细胞Na 通道的特性 ,为研究Na 通道在鼻粘膜病理性改变及治疗中的作用奠定理论基础。方法　利用膜片钳技术对经无血清气 液界面培养的鼻源性鼾症患者手术切除下鼻甲标本的鼻上皮细胞进行Na 通道基本特性研究。结果　在细胞贴附式膜片上 ,可记录到典型的单通道电流 ,其电导为 2 1 0 9pS ,反转电位为 - 50 96mV ,且 77 78%反转电位 <- 4 0mV ,离子通透性比率PNa/PK>5 80。在Na 通道抑制剂 10 4 mmol/LAmiloride存在于电极液内时 ,Na 通道发生率从 2 6 7%减少到 5 13% (P <0 0 5) ,表明大部分Na 通道可被Amiloride抑制。 10 3mmol/LCa2 存在于浴液时 ,Na 通道的发生率无明显增加 (P >0 0 5)。电压对开放概率无明显影响。结论　在细胞贴附式膜片上 ,人鼻粘膜上皮细胞具有大部分Amiloride敏感型的Na 选择性通道及小部分Amiloride非敏感型的Na 通道。细胞外液的Ca2 不能激活Na 选择性通道的开放 ,通道的开放概率是非电压依赖性的     

川芎嗪对单个心室肌细胞电生理的影响

采用全细胞膜片钳（Ｗｈｏｌｅｃｅｌｌｐａｔｃｈ ｃｌａｍｐ） 技术研究川芎嗪（ 四甲基吡嗪,ｔｒｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ,ＴＭＰ） 对豚鼠心室肌细胞Ｌ型钙通道电流（Ｌ ＩＣａ）的浓度依赖性影响。当维持电位为－ ４０ ｍ Ｖ,刺激频率为０－５ Ｈｚ,钳制时间为４００ ｍｓ,步进电压为１０ ｍ Ｖ,去极到６０ ｍＶ,发现３ μｍｏｌ／ＬＴＭＰ对Ｌ ＩＣａ无影响（Ｐ＞ ０－０５） ;１０ ,３０ 和１００ μｍｏｌ／ＬＴＭＰ对Ｌ ＩＣａ的抑制为３６－３４ ％ ,５８－９４ ％ 和７４－２４％ （Ｐ均＜ ０－０１） ,且浓度愈大,其抑制作用愈强,但都不使Ｉ Ｖ曲线的峰值发生偏移。提示ＴＭＰ具有阻断Ｌ ＩＣａ的作用,且呈浓度依赖性阻滞效应。     

NO-cGMP通路对下丘脑钙激活钾通道的调控研究

目的研究一氧化氮（ＮＯ）对ＳＤ乳鼠下丘脑神经元钙激活钾（ＫＣａ）通道的作用及其机制。方法采用内面向外 式及细胞贴附式膜片钳技术比较浴槽液中加入１００μmol/L硝普钠（ＳＮＰ）前后动物下丘及神经元ＫＣａ通道动力学 的改变。结果细胞贴附式时浴槽液中加入１００μmol/L ＳＮＰ,通道开放概率由（７．３±１．５）％升高至（４０．２±６．５）％,开放时 间由（７．１２±１．４１） ｍｓ增大至（１５．３４±３．４５） ｍｓ,开放频率由（１１．３±３．５）Ｈz升高为（２６．６±４．２） Ｈz（ｎ＝１０, Ｐ＜０．０５）。结论 ＮＯ－cＧＭＰ通路可显著提高通道的开放概率,这种增强作用是通过延长通道开放时间及增加开放频率实现的,它的 病理或生理作用还有待于进一步研究。