壳寡糖对急性酒精性肝损伤保护作用的研究

目的 探讨壳寡糖对急性酒精性肝损伤的保护作用.方法 30只大鼠随机分成酒精组(10只),壳寡糖组(10只),对照组(10只).酒精组大鼠按体重15 g/kg一次性灌胃47.5%酒精,壳寡糖组大鼠按体重0.01mL/g灌胃壳寡糖溶液(0.67 g/mL)b 0.5 h再按体重15 g/kg一次性灌胃47.5%酒精.对照组大鼠灌胃生理盐水.灌胃后48 h取血清检测ALT、AST和GGT,取肝组织做病检和TUNEL检测.结果 壳寡糖组ALT较酒精组极显著降低,P<0.01.酒精组大鼠肝组织水变性、脂肪变性、片状坏死和细胞凋亡病变率均为100%;壳寡糖组大鼠肝组织水变性和细胞凋亡病变率均为100%,无脂肪变性、片状坏死.酒精组凋亡肝细胞核数占肝细胞核总数比是48.2%,壳寡糖组是26.7%,P<0.01.对照组未见异常病变.结论 壳寡糖对酒精性肝损伤具有一定的保护作用.     

人芽囊原虫感染大鼠模型的建立

目的:建立人芽囊原虫感染的大鼠实验动物模型,为致病性研究奠定基础。方法:将32只雄性SPF级SD大鼠随机分成对照组和低剂量、中剂量、高剂量实验组,每组8只。低、中、高剂量实验组按102个/mL、103个/mL、104个/mL经灌胃饲喂包囊液1mL,对照组则饲喂等体积的灭菌生理盐水。饲喂第2天开始检查粪便,隔天一次。2周后解剖全部大鼠,并分别制作盲肠与结肠病理切片,HE染色观察盲肠与结肠组织的病理学变化并评分。结果:高、中、低剂量组粪检均查见芽囊原虫滋养体或包囊,盲肠和结肠组织也出现芽囊原虫侵入、粘膜脱落、炎症细胞浸润等病理学改变。实验组与对照组大鼠的病理评分比较均有显著性差异(P<0.05),但各剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:经口饲喂小剂量包囊,即可成功建立芽囊原虫感染大鼠动物模型。     

壳寡糖结合并激活巨噬细胞机制的研究

目的：研究壳寡糖结合并激活巨噬细胞的机制。方法：RT-PCR和ELISA检测壳寡糖对巨噬细胞及经γ干扰素（IFN-γ）预刺激巨噬细胞的白介素1β（IL-1β）基图表达水平的影响；钙离子脂化探针Fluo-3／AM检测壳寡糖对巨噬细胞胞浆游离Ca^＋浓度的影响；用四甲基异硫氰酸罗丹明标记甘露聚糖，激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察标记糖结合及进入巨噬细胞的情况；通过竞争性抑制实验探讨巨噬细胞摄取壳寡糖的可能途径。结果：壳寡糖对巨噬细胞IL-1β基因表达的影响呈浓度与时间依赖性，IFN-γ预刺激巨噬细胞有增强作用；高浓度壳寡糖引起巨噬细胞胞浆游离Ca2^＋浓度升高；壳寡糖竞争性抑制巨噬细胞内吞甘露聚糖，抑制强度达44％。结论：壳寡糖可能是经由巨噬细胞表面的甘露糖受体介导结舍并激活巨噬细胞，钙离子相关的信号转导途径可能参与这一过程。     

白及甘露聚糖抗胃溃疡及抗炎、镇痛作用的实验研究

[目的]观察白及甘露聚糖的抗炎、镇痛及抗实验性胃溃疡作用。[方法]从白及中分离白及甘露聚糖。采用二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀法、小鼠毛细血管通透性进行抗炎试验;采用小鼠醋酸扭体法、热板法进行镇痛实验观察;采用冷水应激、幽门结扎等方法进行胃溃疡试验。[结果]白及甘露聚糖对小鼠耳廓肿胀有明显对抗作用;对小鼠毛细血管通透性有一定对抗作用;白及甘露聚糖能明显抑制热板和醋酸所致小鼠疼痛,减少热板引起的小鼠疼痛反应和减少扭体次数。大鼠幽门结扎实验显示,白及甘露聚糖（3mg／只）能有效降低溃疡指数（P〈0．05）;大鼠应激性溃疡实验显示,白及甘露聚糖（3mg／只）能有效降低溃疡指数（P〈0．01）。[结论]：白及甘露聚糖具有良好抗炎和一定镇痛作用及对实验性胃溃疡有较好治疗作用。     

痛泻安脾汤对腹泻型肠易激综合征大鼠5-羟色胺、5-羟色胺转运蛋白的影响

目的:观察痛泻安脾汤对腹泻型肠易激综合征(diarrhea irritable bowel syndrome,IBS-D)模型大鼠5-羟色胺(5-hydroxytrypta mine,5-HT)、5-羟色胺转运蛋白(serotonintransporter,SERT)影响。方法:48只雌雄各半的SPF级SD大鼠进行适应性饲养1周后,遵循随机原则将大鼠分为正常组12只,造模组36只(模型组、中药组、西药组),每组各12只,采用束缚+番泻叶灌胃法建立IBS-D肝郁脾虚证模型。造模成功后,正常组、模型组给予生理盐水灌胃,西药组给予阿洛司琼溶液,中药组给予痛泻安脾汤灌胃。酶联免疫吸附法检测血清5-HT水平,免疫组织化学法检测结肠组织、脑组织中5-HT、结肠组织SERT水平,Western blot法检测结肠组织中5-HT蛋白的表达。结果:血清5-HT水平比较:与正常组大鼠血清5-HT水平比较,模型组大鼠血清5-HT水平升高明显(P<0.05);与模型组大鼠大鼠血清5-HT水平比较,中药组、西药组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结肠组织Western blot检测结果比较:与模型组大鼠大鼠比较,中药组、西药组大鼠结肠5-HT蛋白表达显著降低(P<0.01);与正常组大鼠比较,模型组大鼠结肠5-HT蛋白表达水平升高(P<0.01)。结肠和脑组织(5-HT)免疫组织化学结果比较:与正常组大鼠比较,模型组大鼠5-HT水平升高明显(P<0.01);中药组、西药组血清5-HT水平显著低于模型组(P<0.01)。结肠免疫SERT结果比较:在模型组大鼠肠黏膜中SERT呈低表达状态,且显著低于正常组(P<0.01);中药组、西药组大鼠肠组织SERT表达水平显著高于模型组(P<0.01)。结论:痛泻安脾汤能够调节IBS-D大鼠5-HT、SERT水平,缓解腹痛、腹泻、腹胀等不适症状。     

多氯联苯对大鼠肾脏bcl-2及TGFβ1表达影响的研究

目的探讨多氯联苯(polychlorinatedbiphenyl,PCB)对大鼠肾脏结构及功能的影响。方法用Wistar雄性大鼠40只随机分为4组,Ⅰ组饲喂正常饲料,Ⅱ组饲喂含10-8mol LPCB饲料,Ⅲ组饲喂含10-7mol LPCB饲料,Ⅳ组饲喂含10-6mol LPCB饲料,饲喂3个月后建立慢性PCB毒性动物模型,用光镜、免疫组化技术研究PCB对大鼠肾脏结构及功能的影响。结果PCB对大鼠肾脏结构的损伤同PCB剂量呈正相关,高剂量PCB组肾脏组织结构受损严重;PCB能诱导细胞凋亡抑制因子(bcl2)和转化生长因子β(transforminggrowthfactorβTGFβ)表达,两者的表达强度同PCB浓度呈正相关;高浓度组bcl2和TGFβ1的阳性率明显高于对照组和其他组(P<0.05);结论PCB对大鼠肾脏组织结构及功能产生明显的损伤作用。     

电针足三里穴对肠易激综合征大鼠平滑肌收缩功能及皮层肌动蛋白表达的影响

【目的】探讨电针足三里穴对肠易激综合征(IBS)大鼠平滑肌收缩功能及皮层肌动蛋白(cortactin)的影响。【方法】将80只3月龄SPF级雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、穴位组、非穴位组4组,每组20只。采用高乳糖饲料喂养与束缚应激相结合的方法制备腹泻型IBS(IBS-D)大鼠模型。穴位组电针大鼠足三里穴,非穴位组选取大鼠足三里穴外侧5 mm区域的非穴位区作为针刺点。治疗结束后,测定各组大鼠全胃肠活性炭排出时间,观察大鼠近端结肠平滑肌肌条收缩水平,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测近端结肠组织蛋白cortactin表达水平以及G/F-actin比值。【结果】与正常组比较,模型组大鼠全胃肠活性炭排出时间缩短(P0.05),结肠平滑肌肌条收缩基础张力、近端结肠组织蛋白cortactin表达水平及G/F-actin比值均升高(P0.05);电针足三里穴治疗后,与模型组与非穴位组比较,穴位组大鼠全胃肠活性炭排出时间延长(P0.05),肠平滑肌肌条收缩基础张力、近端结肠组织蛋白cortactin表达水平以及G/F-actin比值降低(P0.05)。【结论】针刺足三里穴可以有效改善IBS大鼠胃肠功能,并对结肠平滑肌收缩有较好的调节作用。     

甘露聚糖肽应用于颅脑创伤术后感染的临床观察及机制讨论

目的:评价免疫调节剂甘露聚糖肽注射液在颅脑外伤患者术后感染的临床价值及可能机理。方法:回顾性研究我院颅脑外伤术后患者采用甘露聚糖肽注射液治疗的病案,根据入选和排除标准纳入98例术后患者,其中抽取采用了相同手术患者98例,作为空白对照。评价两组术后的感染情况,住院情况,伤口愈合情况,抗生素使用情况,并对血清免疫细胞水平评价。结果:甘露聚糖肽组的总感染率,呼吸道、切口感染率低于空白组。泌尿系统感染率无差异。甘露聚糖肽组平均住院时间、抗生素使用时间均短于空白组,另外甘露聚糖肽组甲级愈合远高于空白组。免疫细胞检测显示,甘露聚糖肽组CD4+,NK细胞水平均高于对照组。结论:甘露聚糖肽可明确降低颅脑术后感染,促进伤口愈合,缩短病程。其机制可能与其激活细胞免疫有关。限于回顾性分析方法,该结局尚需进一步肯定。     

免疫调节剂的应用对带状疱疹患者的病程及后遗神经痛的影响

目的:评价免疫调节剂甘露聚糖肽及匹多莫德在治疗带状疱疹过程中的有效性及安全性。方法:采用回顾性分析我院540例带状疱疹病毒患者,按照纳入排除标准,随机抽取采用了甘露聚糖肽治疗的病例100例,抽取匹多莫德的治疗的病例100例,空白治疗者60例。免疫修饰药物应用疗程均为2周,2周内评价近期疗效,并对随访1年的患者做远期效果分析。结果:甘露聚糖肽组的总有效率和近期痊愈率均高于匹多莫德组及空白组,三组比较具有明显的统计学差异(P<0.05或P<0.01)。另外,甘露聚糖肽组的止疱时间、开始结痂时间、开始脱痂时间与匹多莫德及空白组相比具有显著差异(P<0.05或P<0.01),即甘露聚糖肽可能会缩短带状疱疹的愈合时间。随访至第3周末,甘露聚糖肽组的疱疹完全消失率、疼痛消失率均优于匹多莫德组及空白组(P<0.05或P<0.01),即甘露聚糖肽缩短了患者的病程。随访观察1年,甘露聚糖肽组、匹多莫德组和空白组的后遗神经痛的发生率分别为3.6%,12%,43%。患者治疗前后血常规,肝肾功能检查未见异常,匹多莫德组和甘露聚糖肽组均有少数患者有轻微发热。结论:免疫修饰剂在带状疱疹中的临床受益是缩短病程,减少后遗神经痛的发生。本研究中采用甘露聚糖肽的免疫调节效果似乎好于匹多莫德,限于试验方法学,结论尚须谨慎对待。     

艾灸对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠及下丘脑组织中P物质、血管活性肠肽表达的影响

目的 观察艾灸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠结肠及下丘脑组织中P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)表达的影响。方法 将36只SPF级健康SD雄性大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、艾灸组3组,每组12只。除空白组外,艾灸组和模型组大鼠采用慢性束缚联合番泻叶溶液灌胃的方法制备IBS-D模型。艾灸组采用艾条温和灸干预治疗,穴位选取两侧天枢和上巨虚,每日灸30 min,连续治疗14 d;空白组和模型组不采取任何干预措施。干预结束后,采集各组大鼠的结肠及下丘脑组织,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结肠及下丘脑组织中的SP、VIP的相对表达量;于造模结束后和干预结束后分别计算各组大鼠当日的稀便率,并进行比较。结果 与空白组比较,模型组大鼠结肠及下丘脑组织中的SP、VIP相对表达量均明显升高,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,艾灸组大鼠结肠及下丘脑组织中的SP、VIP相对表达量均明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。干预后,与模型组比较,艾灸组大鼠稀便率明显下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论 艾灸天枢、上巨虚穴可降低IBS-D模型大鼠结肠及下丘脑组织中的SP、VIP表达水平,从而延缓痛觉传递、减轻炎症反应、调节胃肠功能紊乱,这可能是艾灸治疗IBS-D的作用机制之一。     

运脾柔肝方对便秘型肠易激综合征大鼠5-HT、VIP及SP影响的实验研究

目的?通过观察运脾柔肝方对便秘型肠易激综合征（C-IBS）模型大鼠血清、肠组织5-羟色胺（5-HT）、血管活性肠肽（VIP）、P物质（SP）的影响,探讨运脾柔肝方对C-IBS模型大鼠的可能作用机制。方法?将42只Wistar大鼠,随机选取6只作为正常组,剩余36只大鼠采用冰水灌胃法造模14?d,评价模型,随机选取造模成功的30只大鼠,采用随机数字法分为运脾柔肝方中药低、中、高剂量组、莫沙必利组、模型对照组,每组6只。运脾柔肝方低、中、高剂量组分别以12.2、24.4、48.8?g/（kg·d)的给药剂量灌胃,莫沙必利组以莫沙必利混悬液1.35?mg/(kg·d)灌胃,模型对照组及空白组给予等量蒸馏水灌胃。14?d后观察各组大鼠一般情况,并检测各组大鼠血清5-HT、VIP、SP水平和肠组织5-HT、VIP的含量。结果?与空白组相比,模型对照组血清、结肠组织免疫组显5-HT、VIP的表达水平较正常组显著升高（P<0.01）,而血清SP的表达水平则明显降低（P<0.05）,不同剂量运脾柔肝方均可显著降低C-IBS模型大鼠血清5-HT、VIP的表达水平（P<0.01）,明显升高大鼠血清SP水平（P<0.05）,免疫组化结果显示各组均能明显降低5-HT在肠组织中的表达（P<0.05）,显著降低VIP的表达（P<0.01）。结论?运脾柔肝方可显著改善C-IBS模型大鼠便秘症状,可能是通过降低5-HT、VIP和升高SP的表达水平,从而调节肠道功能,发挥治疗C-IBS的作用。      

大鼠慢性溃疡性结肠炎模型建立方法探讨

目的：探讨TNBS/乙醇法诱导大鼠溃疡性结肠炎模型溃疡、炎症持续时间及如何建立持续而稳定的大鼠慢性溃疡性结肠炎模型。方法：SD大鼠70只,随机分成空白组（10只）、模型A组和模型B组（各30只）。除空白组外各模型组采用TNBS/乙醇法诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,模型A组大鼠给予一次性灌肠造模;模型B组每隔7d重复造模,持续至第8周。各模型组大鼠分别于造模第2周、5周、8周（空白组大鼠于造模第8周）随机抽取8只大鼠处死,进行结肠病变肉眼评分及结肠组织病理学评分。结果：与空白组比较,模型A组大鼠的体重、结肠病变肉眼评分及病理学评分在第2周有显著性差异（P〈0.01）,在第5周、第8周无差异（P〉0.05）;模型B组大鼠的体重、结肠病变肉眼评分及病理学评分在第2周、第5周、第8周均有差异或显著性差异（P〈0.05或P〈0.01）。结论：采用TNBS/乙醇法每周灌肠造模可成功构建持续而稳定的大鼠慢性溃疡性结肠炎模型。     

丙酸钠通过抑制NLRP3保护脓毒症大鼠的结肠组织

目的：探究丙酸钠（SP）对大鼠脓毒症模型结肠组织的保护作用并研究其与NLRP3炎性小体的关系。方法：采用盲肠结扎穿刺法建立脓毒症动物模型,随机分为假手术（Sham）组、模型（CLP）组、模型+SP（CLP+SP）组和假手术+SP（Sham+SP）组。建模24 h后处死各组大鼠,收集结肠组织。HE染色观察各组大鼠结肠结构变化,ELISA试剂盒检测结肠组织中IL-6、TGF-β和TNF-α含量,Western blot和免疫组化染色检测结肠紧密连接蛋白（claudin-1和occludin）和NLRP3炎性小体的表达情况。用同样的方法建立脓毒症模型,记录每组大鼠72 h生存率。结果：SP治疗能提高CLP组大鼠的生存率,减少病理损伤。CLP+SP组结肠组织中IL-6、TGF-β和TNF-α水平较CLP组低（P＜0.05）。相比CLP组,CLP+SP组结肠组织中claudin-1和occludin表达有所增加（P＜0.05）。CLP+SP组结肠组织中NLRP3、caspase-1、IL-β和IL-18表达与CLP组比较明显降低（P＜0.05）。结论：SP能提高脓毒症大鼠的存活率。此外,SP可能通过提高脓毒症大鼠结肠组织中紧密连接蛋白的表达,抑制NLRP3炎性小体的激活来减少结肠损伤。     

雷公藤多甙栓对溃疡性结肠炎大鼠SOD和MPO的影响

从病理学和酶学角度观察雷公藤多甙栓对大鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)的治疗效果和作用机理。方法:将SD大鼠制成UC模型,设正常对照组,将模型鼠随机分为模型组和治疗组,同时设治疗对照组,分别以雷公藤多甙栓和柳氮磺胺吡啶(SASP)栓治疗。观察各组大鼠结肠组织的病理变化和测定大鼠血清及结肠组织的SOD、MPO的活性。结果:与模型组比较,治疗组大鼠的结肠组织病理明显改善,血清及结肠组织的SOD活性明显升高,MPO活性下降明显,有非常显著性差异(P<0.01)。结论:雷公藤多甙栓对溃疡性结肠炎大鼠有明显的治疗作用,可能是通过抗炎及抗氧化来实现的。     

大豆蛋白对大鼠抗氧化能力的影响

目的观察大豆蛋白对大鼠抗氧化能力的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠24只,进食基础饲料适应性喂养2周,随机分为2组：大豆蛋白组和酪蛋白组,每组各12只,进食实验饲料28 d。测定大鼠血清及肝脏中各种抗氧化能力指标。结果酪蛋白组和大豆蛋白组大鼠肝脏组织的总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）活性,丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平差异无统计学意义（P〉0.05）。酪蛋白组和大豆蛋白组大鼠血清中T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT活性差异无统计学意义（P〉0.05）,大豆蛋白组大鼠血清中MDA水平低于酪蛋白组（P〈0.05）。结论大豆蛋白对大鼠抗脂质氧化能力有改善作用。     

Effects of pHGF on Hepatocyte DNA Synthesis after Partial Hepatectomy in Rats

Liverplaysanimportantroleinbodymetabolisnlanditsregenerationisoneofthemostimportanttissuerepair.TostudythemechanismsofPHGFonthehepatocyteregenerationofratswithpartial11epalectomy(PH),wehaveobserve(1theeffectsofPllGFonDNAsynthesisunderthepartialhepatectomybyflowcytometry(P'CM).IMATERIALSANDMETIIODS1'1MaterialsTilePHGF10IJg/nllwasmadebyYangjiangPharmaceuticalFactory,Guangdong.1'2GroupingandOperationalProceduresAtotalof0911ealthymaleWistarrats(weight180--220g)weresul)Plledbyt…     

溃结宁膏对慢性非特异性溃疡性结肠炎大鼠血清中炎症因子及结肠组织GFAP、BDNF的影响

目的研究溃结宁膏对于大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor, TNF-α)和结肠组织中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)、脑源性神经营养因子(brain derived neurophic factor, BDNF)的影响。方法选用健康雄性2月SD大鼠48只,随机分为空白组、模型组、水杨酸柳氮磺胺吡啶组、溃结宁膏组,每组12只,采用3%DSS间断性喂养建立慢性非特异性溃疡性结肠炎模型,溃结宁膏组选取"中脘""气海""足三里""天枢"及"脾俞"穴位贴敷,连续治疗21 d。治疗后第1~3周周末观察大鼠体质量变化,进食、活动及粪便情况,并计算结肠组织疾病活动指数(disease activity index, DAI);HE染色观察各组大鼠结肠组织病理变化情况;ELISA法检测各组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠结肠组织中GFAP、BDNF蛋白表达。结果在治疗的第7、14、21天,溃结宁膏组大鼠的DAI评分均明显低于模型组(P<0.01)。电镜下,溃结宁膏组大鼠结肠组织病理改变恢复,炎性浸润减轻。与模型组比较,溃结宁膏组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显降低(P<0.01);结肠组织中GFAP蛋白表达明显降低,BDNF蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论溃结宁膏可能通过减轻血清中炎性因子的表达、调控肠神经系统、修复肠壁神经丛和保护肠黏膜,减轻结肠组织病理性损伤,从而缓解慢性非特异性溃疡性结肠炎的临床症状、降低DAI。     

基于调控大鼠结肠c—kitmRNA表达的中药益智仁燥性及盐炙润燥研究

目的：观察益智仁燥性及盐炙后对正常大鼠结肠c-kitmRNA表达的影响,从而在肠道传输能力方面研究益智仁盐炙润燥作用及其关键环节。方法：将SPF级SD大鼠分为正常动物组、生益智仁组、盐益智仁组、清水炒益智仁组、生益智仁加盐组、生益智仁加增液汤组6组,各组动物灌胃给药1次／d,连续28d,在第28d处死动物剖取结肠组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应对结肠中c-kitmR-NA的表达进行检测。结果：与正常动物组比较,生益智仁组结肠c-kitmRNA表达显著降低（P〈0．01）;与生益智组比较,盐益智仁组、清水炒益智仁组、生益智仁加盐组、生益智仁加增液汤组的结肠c．kitmRNA表达均显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。结论：益智仁生品能降低正常大鼠结肠中c-kitmRNA的表达,进而影响肠道caial间质细胞造成便秘体现其燥性效应;而益智仁盐炙后能降低益智仁引起的肠道燥性效应．具有润燥作用．其作用环节与盐炙过程的加热炒制和辅料食盐均有关。     

Renoprotective Effect of Benazepril on Diabetic Nephropathy Mediated by P42／44MAPK

Mitogen activated protein kinases (MAPKs),which was found in the 1990’s, is a critical growthfactor playing a pivotal role in the control of cellproliferation and differentiation. MAPKs are ser ine/threonine kinases found ubiquitously expressedin tissue, which locate in cytoplasm. Recent studyhave found that high glucose, angiotensin Ⅱ, highfiltration, mechanic drag can induce hypertrophy ofglomerular mesangial cell, cell matrix deposit[1].Recent studies have found tha…