局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑皮质caspase-3,bcl-2的表达

既往大量研究证明，脑缺血再灌注（ischemia and reperfusion，IR）后神经元死亡有坏死和凋亡两种形式。坏死是不可逆的，而凋亡早期是可逆的，所以神经元凋亡的研究成为热点。神经元凋亡发生发展过程中，caspase家族、bcl-2家族起了重要作用。caspase-3被认为是caspase家族中细胞凋亡最关键的效应蛋白酶，它的激活很大程度上依赖细胞色素C从线粒体释放人胞质。bcl-2是bcl-2家族中抑制凋亡的代表，与bax或bid促凋亡基因形成异源二聚体，通过调控细胞色素C在线粒体膜的释放调控凋亡。本文通过局灶性脑缺血再灌注（focal cerebral ischemia and reperfusion，FCIR）损伤动物模型，观察caspase-3，bcl-2在SD大鼠FCIR损伤后大脑皮质的时相免疫表达，用TUNEL法即寡核苷酸末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记法检测细胞凋亡时相变化，探讨凋亡过程中二者与凋亡的相互关系，为阐明凋亡的机制及IR损伤的防治提供实验依据。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax的表达

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后凋亡相关基因Bcl-2和Bax在缺血皮层表达的变化。方法：线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，免疫组化法观察Bcl-2和Bax的表达变化。结果：再灌注2h后皮层神经元Bcl-2表达开始明显上调，为高峰，之后开始下降。缺血再灌注后早期Bax在皮层神经元的表达明显增强，随着再灌注时间的延长，其表达不断增加，24－48h达高峰。Bcl-2／Bax的比率在再灌注开始时升高，再灌注6h达高峰，随后开始下降。结论：Bcl-2和Bax的比率改变与缺血再灌注后的神经元存亡相关。     

清热化瘀方对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的观察清热化瘀方对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法将模型大鼠随机分组,运用免疫组化法分别观察其缺血再灌注后第6、12、24小时Bcl-2和Bax的数据。结果缺血再灌注6h时Bcl-2表达最高,以后随时间逐渐下降。而Bax在缺血再灌注后第6小时开始出现,随时间增加。清热化瘀方能增加Bcl-2表达,降低Bax表达（P〈0.05）。结论清热化瘀方能通过上调Bcl-2,下调Bax和增加Bcl-2/Bax表达比来降低大脑缺血再灌注大脑的凋亡细胞的数量。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织神经细胞凋亡与Bcl-2、Bcl-xl蛋白检测

目的：探讨Bcl-2、Bcl-xl与神经细胞凋亡在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织中的表达。方法：栓线法阻断健康雄性大鼠大脑中动脉(MCA)血流2h后再灌注,分别于再灌注0．5h,3h,6h,12h,24h和48h断头取脑,在前联合处连续切片,分别进行TUNEL染色及Bcl-2、Bcl-xl蛋白免疫组化染色。以假手术组作对照。结果：①脑缺血区部分神经细胞发生凋亡,再灌注0．5∽48h,凋亡细胞逐渐增多,凋亡指数随再灌注时间的延长而逐渐升高。至48h时达高峰。②Bcl-2、Bcl-xl蛋白在脑缺血再灌注早期开始表达,36∽h达到高峰,24h开始逐渐降低,至48h时与对照组差异无统计学意义。③凋亡细胞,Bcl-2及Bcl-xl蛋白均分布在脑缺血梗死灶的周边,梗死中心区及正常区无表达。结论：局灶性脑缺血再灌注损伤过程中神经细胞凋亡起着重要的作用,而Bcl-2及Bcl-xl抑制神经细胞的凋亡。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血核心区NCCa-ATP通道的表达变化

目的了解局灶性脑缺血再灌注后磺酰脲类受体1(SUR1)调控的非选择性阳离子通道(nonselective cation channel,NCCa-ATP通道)表达的变化与脑缺血损伤的关系,探索脑缺血的治疗时间窗.方法以颈内动脉线栓法建立大鼠大脑左侧中动脉梗塞模型,缺血2 h后恢复再灌注.取实验性脑缺血再灌注损伤后3h、6 h、8 h、12 h、24 h等不同时间缺血核心区的脑组织,采用RT-PCR及Western-blot技术,测定SUR1的mRNA及蛋白表达水平.采用免疫荧光双标法技术,观察SUR1在缺血后脑微血管内皮细胞的表达情况.结果缺血再灌注核心区组织在缺血再灌注后3 h、6 h、8 h、12 h及24 h各时间点SUR1 mRNA和SUR1蛋白的表达量均上调,再灌注后8 h达高峰(P<0.05),缺血再灌注后12 h,SUR1在脑微血管内皮细胞的表达非常明显.结论局灶性脑缺血再灌注过程中SUR1调节的NCCa-ATP通道参与了脑缺血损伤,在脑缺血再灌注后其mRNA和蛋白的表达量均上调.推测应用SUR1受体的特异性抑制剂最佳时机在缺血再灌注后8~12 h.     

清热化瘀方对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的观察清热化瘀方对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法将模型大鼠随机分组,运用免疫组化法分别观察其缺血再灌注后第6、12、24小时Bcl-2和Bax的数据。结果缺血再灌注6h时Bcl-2表达最高,以后随时间逐渐下降。而Bax在缺血再灌注后第6小时开始出现,随时间增加。清热化瘀方能增加Bcl-2表达,降低Bax表达(P<0.05)。结论清热化瘀方能通过上调Bcl-2,下调Bax和增加Bcl-2/Bax表达比来降低大脑缺血再灌注大脑的凋亡细胞的数量。     

吡那地尔对大鼠心肌缺血/再灌注时细胞凋亡及fas基因表达的影响

目的　探讨 ATP敏感性钾通道 (KATP)开放剂吡那地尔对大鼠心肌缺血 /再灌注时心肌细胞凋亡及 fas基因蛋白表达的调节作用 .方法　 4 0只大鼠随机分成 4组 :1假手术组 (仅穿线而不结扎 ,观察 6 .5 h) ;2缺血 /再灌注组(缺血 30 min,再灌注 6 h) ;3吡那地尔组 (缺血前 10 m in静推吡那地尔 0 .2 mg· kg- 1 ,然后缺血 30 min/再灌注 6 h) ;4吡那地尔 +优降糖组 (缺血前 10 min静推吡那地尔 0 .2 m g·kg- 1 +优降糖 3mg·kg- 1 ,然后缺血 30 min/再灌注 6 h) .称质量法计算心肌梗死范围 ,以缺口末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,以 SABC免疫组化法检测 fas蛋白的表达 .结果　缺血 /再灌注组出现显著的心肌细胞凋亡 ,伴有 fas蛋白表达指数升高 (P<0 .0 1vs假手术组 ) ;吡那地尔可抑制心肌细胞凋亡 ,并显著下调 fas蛋白的表达 (P<0 .0 5 ) ,而优降糖可取消吡那地尔的作用 .结论　细胞凋亡及 fas基因表达改变参与了心肌缺血 /再灌注损伤过程 ,KATP开放剂 (吡那地尔 )可抑制心肌细胞凋亡、下调 fas基因的蛋白表达 .     

雌激素对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2蛋白表达的影响

实验表明 [1 ,2 ] ,雌激素在缺血性脑损伤中具有神经保护作用 ,但其作用机制还不十分清楚。Bcl- 2 [3] 是凋亡抑制基因 ,在缺血性脑损伤模型中 ,主要在存活的神经细胞中表达 ,其表达峰值在缺血后 2 4 h[4 ]。本研究采用去卵巢雌性大鼠制作大脑中动脉阻断 (MACO)局灶性脑缺血模型 ,观察雌激素对脑缺血时 Bcl- 2蛋白表达的影响 ,探讨雌激素在缺血性脑损伤中的作用机制。1　材料和方法1.1　动物分组及预处理　采用健康雌性 Wistar大鼠 30只 ,3～ 4个月龄 ,体质量 2 5 0～ 30 0 g(由北京大学医学部实验动物中心提供 )。全部大鼠于脑缺血手术…     

腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤Bcl-2蛋白表达的影响

目的观察腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的改善作用及其脑保护机制。方法线栓法建立大鼠局灶性脑缺血2h后再灌注损伤模型，通过HE染色在光镜下观察神经细胞损伤变化，免疫组化法检测Bcl-2蛋白的阳性表达。结果光镜下，假手术组（F组）神经细胞结构正常，腺苷预处理组（AP组）和缺血再灌注组（IR组）均有不同程度的缺血再灌注损伤，腺苷预处理组较缺血再灌注组损伤轻；假手术组Bcl-2蛋白表达极弱，缺血再灌注组和腺苷预处理组在脑缺血再灌注后2h在缺血半暗带周围出现Bcl-2蛋白弱阳性表达，6h后表达增多，24h达到高峰，72h开始减少。与假手术组相比，腺苷预处理组和缺血再灌注组Bcl-2蛋白阳性细胞数显著增多（P〈0．05）；与缺血再灌注组相比，腺苷预处理组Bcl-2蛋白阳性细胞数显著增多（P〈0．05）。结论腺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用，腺苷可通过上调Bcl-2蛋白的表达发挥脑保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血核心区NCCa-ATP 通道的表达变化

［摘要］目的　了解局灶性脑缺血再灌注后磺酰脲类受体1（SUR1）调控的非选择性阳离子通道（nonselective cation channel,NCCa-ATP通道）表达的变化与脑缺血损伤的关系,探索脑缺血的治疗时间窗．方法 以颈内动脉线栓法建立大鼠大脑左侧中动脉梗塞模型,缺血2 h后恢复再灌注．取实验性脑缺血再灌注损伤后3 h、6 h、8 h、12 h、24 h等不同时间缺血核心区的脑组织,采用RT-PCR及Western-blot技术,测定SUR1的mRNA及蛋白表达水平．采用免疫荧光双标法技术,观察SUR1在缺血后脑微血管内皮细胞的表达情况．结果　缺血再灌注核心区组织在缺血再灌注后3 h、6 h、8 h、12 h及24 h各时间点SUR1 mRNA和SUR1蛋白的表达量均上调,再灌注后8 h达高峰（P＜0.05）,缺血再灌注后12 h,SUR1在脑微血管内皮细胞的表达非常明显．结论　局灶性脑缺血再灌注过程中SUR1调节的NCCa-ATP 通道参与了脑缺血损伤,在脑缺血再灌注后其mRNA和蛋白的表达量均上调．推测应用SUR1受体的特异性抑制剂最佳时机在缺血再灌注后8～12 h     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达的改变及银杏叶提取物的保护作用

目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达的变化及银杏叶提取物对其表达的影响.方法制造大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.40只Wistar雄性大鼠被随机分为A假手术组、B缺血组、C小剂量治疗组和D大剂量治疗组.于术前30min及术后1 h分别给予银杏叶提取物20mg/kg和40mg/kg腹腔内注射.应用TTC染色及HE染色观察梗死体积及缺血坏死程度,应用免疫组化染色及POD法检测Bcl-2蛋白表达及凋亡细胞数.结果C、D两组梗死体积明显小于B组(P＜0.01),D组梗死体积小于C组(P＜0.05);C、D两组凋亡细胞数明显少于B组(P＜0.01),D组凋亡细胞数少于C组(P＜0.05);C、D两组Bcl-2蛋白表达明显高于B组(P＜0.01),D组Bcl-2蛋白表达高于C组(P＜0.05).结论银杏叶提取物可通过上调Bcl-2蛋白表达,减少神经细胞凋亡,对脑缺血再灌注损伤起保护作用,疗效与剂量有关.     

Effect of Hypoxic Preconditioning on Neural Cell Apoptosis and Expression of Bcl-2 and Bax in Cerebral Ischemia-Reperfusion in Rats

Hypoxic preconditioning(HP)is a phenome-non,which can initiate the internal protectionmechanism after one or more ti mes of low-gradehypoxia in the body and prevent the subsequentgreat damage following severe hypoxia and ische-mia.The previous study has demonstratedthat hy-poxic preconditioning with11%O2for48h beforecerebral occlusion could reduce46%-64%in-farct area24h after the ligation of the middle cere-bral artery(MCA)for90min[1].However,theunderlying mechanism how the hypoxic precondi-…     

低氧预适应对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的 :探讨低氧预适应对大鼠大脑中动脉 (MCA)缺血再灌注神经细胞凋亡 ,Bcl 2、Bax的表达及行为学计分的影响。方法 :成年Wistar大鼠 75只 ,随机分为 3组 :假手术组 ,缺血再灌注组 (对照组 )和低氧预适应组。采用动脉线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型 ,假手术组除不插线外 ,其余同缺血再灌注组 ,低氧预适应组在低氧预适应后 12h制作脑缺血再灌注模型 ,低氧预适应后在大鼠MCA缺血 3h再灌注 1h、6h、12h、2 4h、4 8h不同时间点 ,进行脑切片的TUNEL染色 ,Bcl 2、Bax的免疫组化检测及大鼠的行为学计分。结果 :低氧预适应大鼠的神经细胞凋亡、Bax的表达和行为学计分均较对照大鼠减少 ,Bcl 2的表达较对照组增高 ,差异均有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :低氧预适应的脑保护及改善神经功能的作用与其抑制神经细胞的凋亡有关 ;而增加Bcl 2及减少Bax的表达 ,可能是实现保护作用、改善大鼠神经功能的机制之一。     

黄芪对大鼠脑缺血再灌注损伤c-fos和Bcl-2表达及细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡和凋亡基因c-fos、Bcl-2表达的影响。方法 40只Wistar大鼠,体质量180～220 g,随机分为黄芪组、缺血4 h再灌注1 h组(Ⅰ组)、缺血4 h再灌注12 h组(Ⅱ组)、缺血4 h再灌注24 h组(Ⅲ组)和对照组。线栓法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型。切片分别行HE染色,应用免疫组织化学染色检测神经细胞凋亡基因c-fos、Bcl-2蛋白表达。结果对照组、Ⅰ组脑细胞未见明显变化,Ⅱ组轻度脑细胞水肿,Ⅲ组脑细胞明显水肿,黄芪组损伤区范围变小,肿胀减轻。与对照组比较,其余各组脑细胞c-fos和Bcl-2阳性表达率增高(P<0.01);黄芪组c-fos和Bcl-2阳性表达率较Ⅱ、Ⅲ组降低(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和黄芪组细胞凋亡指数较对照组明显增加(P<0.01);黄芪组较Ⅱ、Ⅲ组明显降低(P<0.01)。结论黄芪在脑缺血再灌注损伤后可抑制c-fos表达、增加Bcl-2表达,减轻脑细胞凋亡。     

异丙酚对缺氧复氧损伤人血管内皮细胞caspase-3和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨异丙酚对缺氧复氧损伤所致人血管内皮细胞凋亡及caspase-3、Bcl-2蛋白表达的影响。方法建立人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤模型。将细胞缺氧培养30min再复氧,或加入不同浓度异丙酚孵育30min后再进行缺氧复氧处理,在复氧不同时相点（2、6、24和48h）以流式细胞仪计数凋亡细胞数量,并采用免疫细胞化学方法检测caspase-3和Bcl-2蛋白表达的变化。结果缺氧复氧后内皮细胞呈现典型的凋亡形态,复氧2h凋亡细胞数量开始增加,复氧6h时升高显著,至24h达峰值;异丙酚明显抑制复氧后细胞凋亡的发生。正常体外培养人血管内皮细胞Bcl-2蛋白表达较低,随复氧时间延长Bcl-2表达明显下调;25μmol/L异丙酚预处理可使复氧后内皮细胞Bcl-2表达升高,与相应缺氧复氧组比较差异有显著性（P〈0.01）,50、100μmol/L异丙酚组作用相似,不同浓度异丙酚作用呈现一定的剂量效应关系。缺氧复氧损伤使caspase-3蛋白表达增强,复氧24h后达高峰;异丙酚预处理以剂量依赖方式显著下调caspase-3表达（P〈0.01）。结论异丙酚降低缺氧复氧损伤所致的内皮细胞凋亡,可能与其抑制缺氧复氧引起的caspase-3活化、上调Bcl-2蛋白表达有关。     

雌二醇对大鼠脑缺血/再灌注损伤脑组织bcl-2、caspase-3表达的影响

目的：观察雌二醇时大鼠脑缺血／再灌注损伤脑组织hcl-2．capase-3表达的影响。方法：Wistar大鼠72只，随机分为假手术组、局灶性脑缺血2h／再灌注3h、6h．12h、24h组及雌二醇治疗(100μg／kg) 脑缺血2h／再灌注3h、6h、12h、24h组，每时间点8只，假手术组8只。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤模型，采用连续切片免疫组化技术检测脑组织中bel-2、caspase-3表达部位及数量。结果：雌二醇治疗组皮层bcl-2免疫阳性细胞数与脑缺血／再灌注及似手术组比较，在再灌注后12h、24h增高，而纹状体bcl-2免疫阳性细胞数与脑缺血／再灌注组及假手术组比较筹异无统计学意义。假手术组无caspase-3表达，雌二醇治疗组caspase-3阳性细胞数，在皮层12h、24h明显减少．纹状体区caspase-3阳性细胞数治疗组各时间点稍减少，但与脑缺血／再灌注组比较无统计学意义。结论：雌二醇治疗可以诱导皮层bcl-2表达及下调caspase-3活性。     

参附对大鼠肠缺血再灌注时肠上皮细胞Caspase-3,Bcl-2基因表达的影响

目的研究参附注射液(简称参附)对大鼠肠缺血再灌注期间黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法采用大鼠肠缺血再灌注模型.24只大鼠随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和参附治疗组(SF组),SF组于阻断前30 min静注SF液2 mL/100g.再灌注2 h检测回肠黏膜上皮细胞Cas-pase-3,Bcl-2蛋白的表达及细胞凋亡;同时观察小肠黏膜病理形态学改变.结果凋亡细胞检测显示I/R组凋亡细胞显著增多,SF组凋亡细胞数较I/R组显著减少而多于C组(均P＜0.05);Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达Caspase-3表达I/R组显著多于SF组和C组(P＜0.01),SF组与C组无明显差异;Bcl-2表达SF组显著高于I/R组(P＜0.05),后者显著低于C组(P＜0.05);SF组小肠黏膜病理损伤程度明显减轻I/R组(P＜0.01).结论参附注射液通过抑制Caspase-3表达和促进Bcl-2基因表达减少缺血再灌注期间肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而减轻肠黏膜缺血再灌注损伤.     

异氟醚延迟预处理对兔心肌缺血再灌注时 Bcl-2和caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察异氟醚延迟预处理对兔心肌缺血再灌注时Bcl-2和caspase-3蛋白表达的影响,并探讨其心肌延迟保护效应的机制。 方法：40只成年雄性新西兰大白兔随机分成4组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、异氟醚预处理组(S组)、异氟醚预处理+阿片类受体阻断剂组(N组)。除C组外,各组均接受左冠状动脉前降支阻断40 min,再灌注120 min。S组在缺血前24 h时吸入2.0%异氟醚2 h,N组在吸入2.0%异氟醚前10 min,静脉注入阿片类受体阻断剂纳络酮6 mg/kg。再灌注结束后,测心肌梗死面积,免疫印迹法测Bcl-2和caspase-3蛋白的表达,透视电镜下观察心肌超微结构变化。 结果：与I/R组比,S组心梗面积(19.7%±2.8% vs 37.8%±1.7%)显著降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达增高,caspase-3蛋白活性降低(P＜0.05),心肌病理损伤减轻。结论：异氟醚预处理对心肌延迟保护效应可能与其上调Bcl-2蛋白表达和下调caspase-3蛋白活性,抑制心肌细胞凋亡有关。     

颈内动脉注射pLXSN-Bcl-2cDNA对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积、神经细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的研究经颈内动脉注射质粒PLXSN介导人Bcl-2基因对大鼠局灶性脑缺血后脑梗死体积,神经细胞凋亡及Bcl-2、Bcl-xl和Bax表达的影响。方法健康Wistar雄性大鼠72只,采用线栓法制备大鼠MCAO模型,随机分为空质粒PLXSN对照组和PLXSN-Bcl-2治疗组。再灌注3h后分别经颈内动脉注射质粒PLXSN、PLXSN-Bcl-2。采用TTC染色法检测脑梗死体积,TUNEL法标记凋亡细胞,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax蛋白表达。结果MCAO后24、48和72h,脑梗死体积和凋亡神经细胞率治疗组显著小于对照组(P<0.05和P<0.01),治疗组Bcl-2和Bcl-xl蛋白的表达较对照组显著增加(P<0.01和P<0.05),而Bax蛋白表达治疗组较对照组显著减少(P<0.05)。结论颈内动脉注射质粒PLXSN介导Bcl-2基因对脑缺血有脑保护作用。促进bcl-2、bcl-xl表达升高,下调bax蛋白表达,从而抑制神经细胞凋亡,可能为其治疗脑梗死的机制之一。     

Effects of magnesium sulfate on neuron apoptosis and expression of caspase- 3， bax and bcl-2 after cerebral ischemia-reperfusion injury

Objective To investigate the effects of magnesium sulfate on neuron apoptosis and the expressions of caspase-3,bax and bcl-2 after cerebral ischemia-reperfusion injury. Methods Thirty-six gerbils were randomly divided into three groups: Sham-operation group (So, n=12), ischemia-reperfusion group (I-R, n=12) and magnesium sulfate group (Ms, n=12). The neuron apoptosis was detected by the terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP-fluorescence nick end labeling (TUNEL stain), and the protein expressions of caspase-3, bax and bcl-2 were detected by immunohistochemisty stain.Results Apoptotic neurons and the expressions of caspase-3 and bax were significantly increased in I-R and Ms groups, compared with those in So group. Apoptotic neurons and the expressions of bax and caspase-3 in Ms group were significantly less than those in I-R group. There was no significant difference in the expression of bcl-2 among three groups.Conclusions Magnesium sulfate decreases neuron apoptosis after cerebral ischemia-reperfusion injury, which may be related with the suppressed expressions of caspase-3 and bax.