壳聚糖-聚乙二醇纳米粒介导的Survivin RNAi基因纳米复合物的制备及其特性研究

目的 制备壳聚糖-聚乙二醇纳米粒介导的survivin RNAi基因纳米复合物,并对其相关性质进行评价.方法 通过接枝共聚法制备出空白壳聚糖-聚乙二醇纳米粒;通过静电吸附作用连接基因质粒形成基因纳米复合物.并对基因纳米复合物的包封率进行测定;通过Dnase Ⅰ消化壳聚糖-聚乙二醇纳米-质粒结合物以观察纳米载体对质粒的保护作用;通过对比基因-纳米复合物与裸基因对基因-纳米复合物的转染效率进行评价.结果 经电镜检测表明壳聚糖-聚乙二醇纳米粒呈球形,粒度分布均匀,粒径集中在60 nm左右;琼脂糖凝胶电泳的结果显示纳米粒能有效地保护基因质粒;不同基因纳米比的基因-纳米复合物对质粒的保护作用不同;Dnase Ⅰ消化试验证实壳聚糖纳米载体对质粒DNA有保护作用.结论 制备出的壳聚糖-聚乙二醇纳米粒粒度均匀,并且能有效地连接上质粒并对其有保护作用.壳聚糖-聚乙二醇纳米粒介导的survivinKNAi基因纳米复合物克服了KNA干扰在肿瘤的基因治疗中作用短暂和不能持久作用的不足.     

组织因子小干扰RNA壳聚糖纳米粒的制备及其特征

目的 探讨壳聚糖-组织因子小干扰RNA(TFsiRNA)纳米粒制备方法并研究其特性.方法 采用三聚磷酸钠(TPP)离子胶凝法分别制备包封型和吸附型壳聚糖-TPP-TFsiRNA纳米粒.检测纳米粒平均粒径和Zeta电位、载药率,并分析血清稳定性、体外生物活性及其细胞毒性.结果 两种纳米粒粒径均小于550 nm,粒径大小主要取决于壳聚糖类型、分子量及其浓度.酸碱度、壳聚糖TPP质量比也影响粒径大小.包封型纳米粒siRNA载药率为100%.壳聚糖-TPP-TFsiRNA纳米粒中的siRNA在5%血清中孵育24 h开始降解,60 h完全降解;50%血清孵育6 h保持完整,48 h完全降解.结论 壳聚糖纳米粒可能成为有效的siRNA转运载体.     

聚乙二醇化壳聚糖纳米粒的制备及局部滴眼给药性能评价

目的 制备一种聚乙二醇修饰的壳聚糖纳米粒,评价其局部滴眼给药性能.方法 以伏立康唑为模型药物,采用离子交联法制备载药的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒,对其进行表征后,分别考察纳米粒的药物缓释能力、对眼表药物代谢动力学的影响及其角膜渗透性.结果 聚乙二醇化壳聚糖纳米粒粒径为(235±23)nm,Zeta电位为(+23.1±0.6) mV,载药量为11.16％,包封率为61.35％.纳米粒体外释放药物非常缓慢,可持续释药48 h;相比于伏立康唑水溶液,纳米粒的药物浓度-时间曲线下面积明显增加,药物半衰期延长,清除率减少,眼表药物平均滞留时间延长(P＜0.05).荧光标记的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒可穿透角膜上皮逐渐向角膜基质渗透.结论 与药物水溶液相比,聚乙二醇化壳聚糖纳米粒能够有效减少眼表药物的流失,改善药物的生物利用度.     

可生物降解聚合物纳米胶囊型药物载体及组合胶囊的药物控制释放

该文通过缩合、偶联、自由基聚合等方法制备出了聚乙二醇(PEG)接枝或嵌段的可生物降解共聚物,分别为:聚(D,L-乳酸)-聚乙二醇二嵌段共聚物(PEDLLA)和聚(L-乳酸)-聚乙二醇二嵌段共聚物(PELLA),聚乙二醇-聚己内酯-聚乙二醇三嵌段共聚物(PECL),聚乙二醇-聚己二酸酐嵌段共聚物,聚(-氰基丙烯酸酯-聚乙二醇接枝共聚物(PECA),壳聚糖-聚乙二醇接枝共聚物(PECS).这些嵌段或接枝共聚物都能够在水中自组装形成纳米胶束,作为疏水性药物和生物药物的纳米载体,具有优良的性能.该文采用固相熔融分散法、自乳化溶剂蒸发法、透析法及复乳法制备出了疏水性药物的纳米胶束,采用复乳法制备出胰岛素纳米粒,研究表明这些药物纳米粒具有很好的稳定性、粒径小且分布较窄、药物包封率高.通过胶束型纳米药物的释放行为的研究,笔者开发了组合聚合物纳米药物胶束控制药物释放的有效方法.体外经鼠皮透皮吸收试验结果表明,这种载有药物的聚合物组装胶束能够以完整的形态通过鼠皮,具有传递药物经皮释放的功能性.     

载绿色荧光蛋白基因壳聚糖纳米粒载体的制备和转染的研究

目的 优化试验条件，制备合适的壳聚糖纳米粒，并连接上质粒，研究壳聚糖纳米粒对DNA的结合能力。方法 以离子交联法制备壳聚糖纳米粒，并送激光微粒度仪及扫描电子显微镜检测，了解粒径的分布与形态；通过静电吸附作用连接上增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1(报告基因)；经琼脂糖凝胶电泳分析载体与：DNA结合能力，并通过紫外分光光度计检测其载药量和包埋率。结果 微粒度分析仪及电镜检测证实壳聚糖纳米粒呈均匀分散的球形颗粒，最小粒径为50nm，平均直径为95nm，琼脂糖凝胶电泳的结果显示壳聚糖纳米粒能有效地结合增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,紫外分光光度计检测不同比例结合(纳米粒：质粒)pEGFP-C1,质粒的壳聚糖纳米粒的包埋率分别为：100％(50：10)，100％(50：20)，92％(50．75)和65％(50．100)。结论 制备出粒径较小、均匀的壳聚糖纳米粒，并且壳聚糖纳米粒能有效地连接上质粒。     

纳米基因载体介导RNA干扰沉默Survivin基因对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨纳米基因载体介导RNA干扰沉默Survivin基因对大肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响.方法 用壳聚糖-聚乙二醇纳米粒介导的Survivin shRNA(基因纳米复合物)转染结肠癌细胞株HT-29,并以携带相同shRNA的脂质体载体,以及阴性对照shRNA为对照,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后的HT-29细胞中Survivin mRNA的变化,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞凋亡率.结果 和脂质体载体比较,转染基因纳米复合物后,HT-29细胞中Survivin mRNA拷贝数及蛋白表达显著降低,其细胞死亡率和凋亡率显著提高(P<0.05).结论 壳聚糖-聚乙二醇纳米粒里介导的Survivin shRNA较之脂质体载体具有更高的干扰效率,且能长期、高效地诱导结肠癌细胞凋亡并抑制其增殖.     

驻极体外电场对季铵化壳聚糖生长因子纳米粒制备的影响

目的 研究驻极体外电场对季铵化壳聚糖生长因子纳米粒制备及表征的影响,探究季铵化壳聚糖生长因子纳米粒的经皮载药转运机制.方法 以表皮生长因子为模型药物、季铵化壳聚糖为材料、三聚磷酸钠为交联剂,在不同表面电位驻极体产生的外静电场作用下,采用离子交联法制备不同电场条件下的季铵化壳聚糖生长因子纳米粒.透射电镜观察纳米粒的表面形态,粒径-zeta电位仪测定纳米粒的粒径和zeta电位.结果 (1)用离子交联法制备的季铵化壳聚糖生长因子纳米粒呈球形,分布均匀、分散性较好,且具有良好的稳定性.(2)季铵化壳聚糖生长因子纳米粒的粒径随季铵化壳聚糖浓度的增加而增大,季铵化壳聚糖的浓度可能是调控季铵化壳聚糖生长因子纳米粒粒径的主要因素.(3)外静电场能引起壳聚糖生长因子纳米粒极化.季铵化壳聚糖生长因子纳米粒的粒径随静电场场强的增大而减小,zeta电位的变化也与外加电场的极性密切相关.(4)经静电场处理后的季铵化壳聚糖生长因子纳米粒的粒径随存放时间的推移而减小.结论 季铵化壳聚糖生长因子纳米粒的形态、粒径和zeta电位与外加电场的场强大小和极性密切相关,要制备粒径适当、稳定性好的纳米粒,必须合理选择电场参数.     

载表柔比星磁性壳聚糖纳米粒的制备与表征检测

目的制备一种新型磁性纳米高分子聚合物-载表柔比星的磁性壳聚糖纳米粒,并对其表征、载药率进行检测。方法选用可生物降解的壳聚糖作为骨架材料。与具有超顺磁性的Fe3O4纳米粒、丙烯酸单体及抗癌药物表柔比星制备磁性纳米粒,并通过透射电镜、振动样品磁强计等考察磁性纳米粒的理化性质及体外磁场响应性。结果载表柔比星的磁性壳聚糖纳米粒直径约200nm,磁化曲线提示其超顺磁性,测得载药率15%、包封率20％。结论磁性表柔比星纳米粒粒径小,载药率和包封率高,体外具有良好的磁场响应性。     

巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒的构建和对HeLa细胞体外转染活性的研究

目的 制备巯基化壳聚糖,构建巯基化壳聚糖-质粒DNA (pDNA) 纳米粒,并研究该纳米粒对HeLa细胞的体外转染活性.方法 1- (3-二甲胺基丙基) -3-乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDAC) 催化巯基乙酸与壳聚糖反应生成巯基化壳聚糖,傅里叶变换红外光谱仪测量产物的红外光谱,5-5'-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB) 法检测产物的巯基含量;以pcDNA 3.1 (+) -EGFP为报告基因,巯基化壳聚糖为载体,用复凝聚法制得巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒,Zeta电位和粒度分析仪检测该纳米粒的表面电位和粒径.纳米粒经DNase I处理、再在肝素作用下解聚,用琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性.评价巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1(+) -EGFP纳米粒对HeLa细胞的体外转染活性,MTT法测定该纳米粒对HeLa细胞的毒性.结果 红外光谱图显示壳聚糖在EDAC的作用下被巯基化.DTNB法显示1 g巯基化壳聚糖的巯基含量为 (202.85±3.05) μ moL (n=6) .Zeta电位及粒度分析仪的结果表明巯基化壳聚糖-pcDNA3.1 (+) -EGFP纳米粒的平均粒径为288.7nm,Zeta电位为+ (25.2±2.1) mV.DNase I保护实验证明该纳米粒能有效抑制DNase I对内部pDNA的降解.体外转染实验表明巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒能有效转染HeLa细胞系,且对HeLa细胞生长无抑制作用.结论 该制备工艺生产的巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒能将质粒DNA导入HeLa细胞,使报告基因有效地表达.所以巯基化壳聚糖是基因转运和基因治疗中有应用潜力的非病毒类载体.     

重组水蛭素-2鼻腔给药纳米粒制备工艺研究

目的 优选重组水蛭素-2（rHV2）鼻腔给药纳米粒最佳制备工艺。方法 采用壳聚糖与三聚磷酸钠复凝聚法,以包封率、载药量等为评价指标,以单因素考察和正交试验设计,对壳聚糖黏附纳米粒制备过程中有关影响因素及工艺参数进行优化。结果 壳聚糖的类型、壳聚糖溶液的pH值、壳聚糖与多聚磷酸钠的最终质量比以及搅拌速率对rHV2纳米粒的包封率和载药量均有较显著影响;优选工艺的包封率可达到70%以上,载药量＞8%。结论 经优选的工艺稳定可靠,可用于rHV2鼻腔给药纳米粒的制备。     

两种连接臂的mPEG-羟基喜树碱纳米粒的性能研究

目的设计两种连接臂的聚合物纳米粒,研究其自组装性能及酸度调控下的缓释性,为肿瘤组织外酸度调控下的药物定位释放提供研究基础。方法使用丁二酸酐(succinic anhydride, SA)、乌头酸酐(cis-aconitic anhydride, CA)作为连接臂,将10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin, 10-HCPT)与聚乙二醇单甲醚(methoxypolyethylene glycols, mPEG)连接,形成mPEG-SA-HCPT(PSH)、m PEG-CA-HCPT(PCH)聚合物。透析法制备纳米粒,核磁共振氢谱、动态光散射、透射电镜、紫外光谱对纳米材料进行性能研究及其体外释放性能测定。结果核磁共振氢谱结果表明,聚合物成功合成。动态光散射测定PCH纳米粒径约为84.27 nm,负载HCPT后约为90.67 nm,PSH纳米粒径约为94.42 nm,负载HCPT后粒径约为110.8 nm,透射电镜显示纳米粒形态为均匀的圆形。紫外光谱测定载药的PSH纳米粒载药量约为22.1%,载药的PCH纳米粒的载药量约为25.8%。载药后的PSH纳米粒具有明显缓释性,48 h药物释放量达53.26%,pH值为6.8的释放介质下,药物释放明显加快,48 h药物释放量达到85.53%。而载药的酸敏感性的纳米粒子在48 h药物释放率为46.73%,在pH为6.8的条件下48 h释放率为95.77%。结论两亲性聚合物可以自组装形成圆形纳米粒,通过化学连接和物理包埋两种手段可以得到高负载药物量的纳米粒。聚合纳米材料中的酸敏感连接臂能调控聚合物纳米粒的缓释性。     

GC-MS结合化学计量学解析法分析臭冷杉针叶挥发油成分

目的 分析臭冷杉Abies nephrolepis针叶挥发油中化学成分。方法 利用GC-MS联用技术进行分离检测,通过直观推导式演进特征投影（HELP）法对重叠峰进行解析,并结合程序升温保留指数（PTRI）进行辅助定性分析,采用峰面积归一化法对各组分进行定量分析。结果 共分辨出72个色谱峰,鉴定了其中63个组分,占臭冷杉挥发油化学成分总量的99.31%,其主要成分为醋酸龙脑酯、龙脑、α-红没药醇、柠檬烯等。结论 HELP法结合PTRI能够提高质谱定性的准确性,更全面、准确地反映臭冷杉针叶挥发油的化学成分。     

磁性介孔二氧化硅用于药物传输和光动力治疗

Objective: To prepare temperature-pH responsive and core-shell-structured magnetic fluorescent mesoporous silica nanoparticles for antitumor drug delivery and photodynamic therapy. Methods: First, the core of nonporous silica coated Fe₃O₄ was prepared via solvothermal reaction and reverse micelle method, then mesoporous silica as the middle layer was further coated on the core by modified sol-gel process, and finally the Fe₃O₄@SiO₂(F)@mSiO₂(P)@P(NIPAM-co-AA) nanoparticles were prepared with the polymer shell modified on the middle layer through seed precipitation polymerization. Transmission electron microscopy (TEM) was carried out to characterize the morphology of the nanoparticles. Doxorubicin hydrochloride (DOX) was used as a model drug to investigate the drug loading and releasing behavior. And MTT assay was adopted to evaluate the biocompatibility and cytotoxicity of the nanoparticles. Results: The results of TEM showed that the average diameter of the nanoparticles was 300 nm. The drug loading and releasing results indicated that the nanoparticles exhibited an excellent drug loading content of (206.75±17.59) μg/mg and encapsulation efficiency of (68.91±5.86) wt%, and controlled drug releasing could be obtained by changing the temperature or pH values. MTT assay showed that the cytotoxic effect of DOX-loaded nanoparticles irradiated with a 680 nm LED lamp was significantly higher than that achieved by chemotherapy and photodynamic therapy alone. Conclusion: Fe₃O₄@SiO₂(F)@mSiO₂(P)@P(NIPAM-co-AA) nanoparticles could be used as an antitumor drug carrier to achieve a synergistic effect by combining chemotherapy and photodynamic therapy.     

Thrombus precursor protein for monitoring anticoagulation in patients with mechanical valve prosthesis

Objective： To evaluate the plasma concentration of thrombus precursor protein （TPP） in patients after mechanical heart valve replacement, and to explore whether it can be used as a marker for monitoring anticoagulation. Methods： Totally 60 patients who took warfarin after mitral valve replacement and 20 control patients with non-valvular heart diseases were subjected in this study. Their plasma TPP concentration and international normalized ratio （INR） were determined, and compared not only between the anticoagulant patients and the control patients, but also between the patients with atrial fibrillaiton （AF, n-37） and the patients with sinus rhythm （SR, n-23） after mechanical valve replacement. The relationship between plasma TPP concentration and INR in the 60 anticoagulant patients was analyzed with linear regression. Results： It was found that the anticoagulant therapy effectively decreased plasma TPP concentration and elevated INR. In the anticoagulant group, the patients with AF had higher plasma TPP concentration than the others with sinus rhythm （P〈0.05）, although there was no significant difference in INR level between these 2 groups of patients （P〉0.05）. No significant correlation was found between plasma TPP concentration and INR in the anticoagulant patients （P〉0.05）. INR did not accord with plasma TPP concentration in several patients. Conclusion： INR can＇t reflect the coagulation status and guide the anticoagulation correctly sometimes; TPP may be a valuable assistant marker for monitoring anticoagulation in patients with mechanical heart valve prothesis; Patients with AF may require higher density of anticoagulation and TPP is strongly suggested to be monitored in these patients.     

多西紫杉醇壳聚糖纳米粒制备及其特性研究

目的制备负载多西紫杉醇(DTX)的壳聚糖纳米粒(DTX-CTNPs),并研究其体外释药性能及细胞毒性。方法采用离子交联法制备DTX-CTNPs,扫描电镜观察其形态学特征,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径大小及分布,在磷酸盐缓冲液(PBS)中对载药纳米粒进行体外释药试验。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测DTX-CTNPs对人肺腺癌细胞株A549的增殖抑制以评估其细胞毒性及抗瘤效应。结果壳聚糖和三聚磷酸钠投药比为5.3∶1.0时制备的壳聚糖纳米粒(CTNPs)形态规则,粒径分布较为均匀,平均粒径为175nm,载药率与包封率分别为(22.4±2.7)%、(59.2±8.6)%。对A549细胞株的体外增殖抑制作用具有浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)为(26.87±1.35)μg/mL,而同一实验体系下的普通注射用DTX的IC50则为(5.51±0.37)μg/mL(P<0.001),证明载药纳米粒的细胞毒性远低于普通注射用DTX。结论 DTX-CTNPs具有一定的控释性能,能明显降低普通注射用DTX的细胞毒性,可以成为一种理想的化疗药载体。     

结素蛋白多肽检测活动性结核

用结素蛋白多肽为抗原，硝酸纤维素膜为固相支持物进行斑点免疫结全试验，检测７６例活动性结核血清中抗结素蛋白多肽ＩｇＧ水平。结果显示，６９例呈阳性反应；而７６例健康人血清标本，仅１０例为阳性。此外，又与两种不同来源的ＰＰＤ抗原进行对比。实验表明，结素蛋白多肽抗原有良好的灵敏性和特异性，可用作斑点免疫结合试验检测活动性结核的可靠抗原。     

用于肿瘤靶向性X线CT造影剂和抗肿瘤药物传递的多功能含碘纳米粒子的制备和表征

目的:制备用于肿瘤靶向性X线CT造影剂和抗肿瘤药物传递的多功能含碘纳米粒子,用于肿瘤诊断和治疗。方法:利用沉淀聚合法制备含碘聚合物纳米粒子P（MATIB-co-MBA-co-GMA）-FA-AuNP,该纳米粒子以2-甲基丙烯酰（3-酰胺-2,4,6-三碘苯甲酸）（MATIB）为单体,以N,N′-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂（MBA）,通过甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA）和乙二胺（EDA）将叶酸分子修饰到该纳米粒子表面,并原位沉积金纳米粒子（AuNP）。结果:TEM结果显示该纳米粒子分散均匀,平均粒径为135 nm。体外X线CT成像检测结果表明AuNP的掺杂显著增加了该纳米粒子的X线衰减性能。该纳米粒子同时可高效负载抗肿瘤药物（DOX）,载药量为51.3%,并具有pH敏感的可控释放性能。体外药物输送结果显示有FA修饰的纳米粒子能更好地携载抗肿瘤药物进入肿瘤细胞。细胞毒性的结果显示该P(MATIB-co-MBA-co-GMA)-FA-AuNP纳米粒子在浓度低于100 μg/mL时未显示明显毒性。载药后,有叶酸修饰的纳米粒子对肿瘤细胞具有更好的杀伤性能。结论:该纳米粒子可同时作为肿瘤靶向性X线CT造影剂和抗肿瘤药物载体,用于肿瘤诊断和治疗。     

磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒的制备及其特性

目的:研究磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒(M-PLGA-PAO-NP)的制备工艺,并对纳米粒子进行评价.方法:运用超声乳化-溶剂挥发法制备磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒,通过透射电镜(TEM)观察微粒形态,振动样品磁强计(VSM)确证纳米微粒磁性的存在,并对纳米微粒的平均粒径、载药量、包封率等进行评价.结果:纳米微粒外观呈规则球形,粒径在140～500 nm占总数的80%,载药量为3.2%,包封率为34.2%,药物磁性较好.结论:获得了较满意的磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒制备工艺,其过程简单,粒子性状符合要求.