姜黄素纳米粒(NanoCurcTM)联合索拉非尼对肝细胞癌(HCC)的协同抑制作

 目的 探讨姜黄素纳米粒(NanoCurcTM,NC) 单药或联合索拉非尼对人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的作用。方法 采用体外细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)、体外划痕试验和Transwell侵袭试验法检测NC和/或索拉非尼对肝癌细胞株MHCCLM3增殖、迁移、侵袭能力的影响;应用流式细胞术分析其对细胞凋亡的作用。建立裸鼠MHCCLM3原位移植模型并观察NC和/或索拉非尼对肿瘤大小和肺转移率的影响。应用RT PCR、ELISA、Western blot法检测基质金属蛋白酶 9 (matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1 （tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)、细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2) mRNA或相应蛋白表达变化;并测定ERK1/2的磷酸化变化。结果 NC与索拉非尼联合应用可显著抑制HCC体外增殖和侵袭能力(P<0.01),抑制体内肿瘤生长和肺转移(P<0.01)。单独应用NC和索拉非尼时肺转移率分别为50.0%和66.7%,两者联合用药时则显著降低至16.7%。两药联合应用可协同抑制ERK磷酸化,从而下调MMP 9的表达。结论  NC联合索拉非尼可通过协同诱导细胞凋亡、抑制MMP-9的表达而抑制肝癌生长和转移。     

肝细胞癌中索拉非尼耐药性机制的研究进展

索拉非尼(Sorafenib)是一种多激酶抑制剂，具有促进细胞凋亡、减缓血管生成和抑制肿瘤细胞增殖的作用。在晚期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中，索拉非尼是目前有效的一线治疗药物。然而，索拉非尼耐药性的发展正变得越来越普遍。近年来的研究表明，表观遗传学、细胞转运过程以及调节性细胞死亡均能介导HCC索拉非尼耐药，并在其中发挥关键作用。本文归纳总结了近年在索拉非尼耐药机制研究方面取得的进展，为探索克服耐药性的新方法奠定了理论基础。     

E26特异性转化变异体4在体外促进肝癌细胞对索拉非尼和顺铂耐药

目的研究E26特异性转化变异体4（ETV4）对肝细胞癌（HCC）顺铂和索拉非尼耐药的影响。方法顺铂耐药HCC细胞株 SMMC-7721（对索拉非尼敏感）和HCC-LM3（对索拉非尼不敏感）经质粒转染诱导ETV4过表达或用siRNA干扰ETV4后，分别 用DMSO、索拉非尼（5 μmol/L）或顺铂（5 μmol/L）刺激48 h并收集总蛋白或总RNA。采用Western blotting、流式细胞术、EdU增 殖检测法检测处理后HCC细胞凋亡水平和增殖能力的变化。利用实时荧光定量PCR（q-PCR）技术检测11例HCC患者肿瘤组 织及配对的癌旁组织中ETV4 mRNA的表达水平。肝癌细胞株经干扰ETV4后，分别用DMSO、索拉非尼或顺铂刺激48 h，利用 q-RCR技术检测早期反应基因3（IER3）的mRNA表达水平。结果肝癌组织中ETV4 mRNA的表达水平显著高于对应的癌旁 组织。在两株肝癌细胞中过表达ETV4能显著减少索拉非尼或顺铂诱导的细胞凋亡，而干扰ETV4能显著增加索拉非尼或顺铂 诱导的细胞凋亡，并显著抑制索拉非尼或顺铂刺激下的细胞增殖能力。此外，在索拉非尼或顺铂的刺激下ETV4能调节IER3的 mRNA表达水平。结论ETV4过表达能促进HCC细胞对索拉非尼或顺铂产生耐药。     

转移性结直肠癌抗EGFR治疗耐药机制的研究进展

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer, mCRC)的主要治疗靶点之一,然而抗EGFR治疗的耐药一直是亟待解决的临床难题。肿瘤细胞本身EGFR相关信号通路异常激活,基因组不稳定性等遗传学或表观遗传学改变是引发耐药最常见的机制,近期也有研究发现肿瘤微环境中细胞丰度和细胞因子的变化等也是引发抗EGFR治疗耐药的重要机制。我们将从肿瘤细胞和肿瘤微环境两个方面,对mCRC抗EGFR治疗的耐药机制进行综述。     

肝细胞肝癌(HCC)中PDGF-A的表达及其临床意义

 目的    阐明血小板源性生长因子A(platelet-derived growth factor A,PDGF-A)在人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况及临床意义。方法  在手术切除的50例HCC组织中,应用定量RT-PCR的方法检测PDGF-A mRNA水平,并分析其与临床病理分期之间的关系。采用Western blot检测正常肝细胞株L02和7株肝癌细胞株中PDGF-A蛋白质水平。运用免疫组化方法在43例HCC石蜡组织中检测PDGF-A蛋白质水平。再利用免疫荧光双染色方法检测HCC组织中间质区域炎症细胞中PDGF-A与炎症细胞标志物(CD4、CD8、CD19和CD68)共表达情况。结果    与相应癌旁肝组织相比,HCC癌组织PDGF-A mRNA水平升高,约50%(24/50例)癌组织PDGF-A mRNA水平是癌旁肝组织的2倍及以上,这种差异在BCLC 0期和C期的HCC病例中更为显著。PDGF-A蛋白质见于L02、SMMC-7721、HCCLM3和MHCC97-H细胞株,而HepG2、Hep3B、Huh7和BEL-7402细胞株未检测到该蛋白质。近60%的HCC病例中,肝癌细胞表达PDGF-A,阳性染色有两种分布方式:弥漫于胞质内及在细胞质/细胞膜局部聚集。PDGF-A也大量分布于肿瘤间质区域和紧邻癌组织间质区域的炎症细胞(CD4+、CD8+、CD19+和CD68+)中。结论    HCC癌组织PDGF-A基因表达高于癌旁肝组织,在早期和进展期(BCLC 0和C期)病例更为明显;PDGF-A蛋白表达于HCC癌细胞和间质炎症细胞。     

GP73调控PI3K/Akt通路介导肝癌细胞索拉非尼耐药机制的实验研究

目的 研究高尔基体糖蛋白73(Golgi protein 73,GP73)与PI3K/Akt信号通路在肝癌细胞索拉非尼耐药中的作用机制。 方法 MTT法检测索拉非尼对肝癌细胞活性的抑制率,采用浓度递增法对肝癌HepG2亲本细胞进行长时间培养,建立索拉非尼耐药细胞株模型,倒置显微镜观察细胞形态变化。应用质粒转染技术对耐药细胞HepG2进行GP73过表达和敲低干预,观察GP73的不同表达水平对索拉非尼敏感性的影响。Western blot法检测亲本细胞和耐药细胞中GP73、EMT标记蛋白及PI3K/Akt信号通路的蛋白表达。 结果 不同浓度索拉非尼对肝癌细胞Bel-7404、SK-Hep-1及HepG2的活性均有抑制作用。长期低浓度索拉非尼刺激HepG2细胞形态向长梭形改变。GP73过表达减弱了肝癌细胞对索拉非尼的敏感性;GP73敲低增加其敏感性。HepG2耐药细胞中GP73、N-cadherin及Vimentin蛋白表达上调,E-cadherin水平下调(均P<0.05)。此外,HepG2耐药细胞中GP73、PI3K及p-Akt蛋白表达增加。 结论 GP73表达上调及PI3K/Akt通路激活,促进EMT可能是肝癌索拉非尼的耐药机制。      

LINC00662通过调控miR-106a-5p/CAV1轴影响肝癌细胞对索拉非尼药物的敏感性

目的：探究长链非编码RNA-LINC00662对诱导肝细胞癌（HCC）细胞索拉非尼耐药的机制。方法：以HCC细胞（HepG2、HCCLM3），索拉非尼耐药肝癌细胞HCC-SR(HepG2-SR、HCCLM3-SR)为研究对象，通过实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blotting检测各组细胞中LINC00662、miR-106a-5p和小窝蛋白-1(CAV1)表达水平。将si-LINC00662、miR-106a-5p模拟物分别转染HCC-SR细胞，通过细胞活性试剂盒（CCK-8）检测细胞对索拉非尼药物敏感性。且进一步通过双荧光素酶报告实验、RT-qPCR、Western blotting确定LINC00662与miR-106a-5p、miR-106a-5p与CAV1之间的靶向关系。结果：HCC-SR细胞中LINC00662和CAV1相对表达显著升高，miR-106a-5p表达显著降低（P<0.01,P<0.001）；干扰LINC00662表达或过表达miR-106a-5p,HCC-SR细胞对索拉非尼药物敏感性显著升高（P<0.05,P<...     

正常人外周血单个核细胞对雷公藤内酯醇的耐药特征和机制的研究

目的 探讨正常人外周血单个核细胞 (peripheral blood mononuclear cells, PBMC) 对雷公藤内酯醇 (triptolide, TP) 的耐药特征和机制。方法 采用递增 TP 剂量的浓度梯度诱导法使 PBMC 产生耐药。MTT 比色法测定细胞对药物的敏感性及耐药指数 (resistance index, RI),逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR) 法分别检测正常对照组和耐药组 PBMC 中多药耐药相关基因 (multidrug resistance gene, MDR1)、多药耐药相关蛋白 (multidrug resistance-associated protein, MRP) 和肺耐药蛋白 (lung resistance-related protein, LRP) 的表达。酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测上清液中 IL-1β 的量。结果 和正常细胞组相比,耐药组细胞的群体倍增时间延长 2.7 h,RI 是 1.99,并且 MDR1 mRNA、MRP mRNA、LRP mRNA 表达量明显增加 (P＜0.01)。TP 能显著抑制正常组 PBMC 分泌 IL-1β (P＜0.05),但对耐药组的抑制作用不明显 (P＞0.05)。结论 TP 体外持续诱导可使正常人 PBMC 产生耐药,其耐药性的产生涉及多个相关基因的表达,这可能是导致类风湿关节炎 (RA) 病人临床服用雷公藤一段时间后产生耐受的原因之一。     

重视对肿瘤多细胞耐药的研究

肿瘤细胞耐药是影响化疗疗效和患者预后的主要原因之一。为克服肿瘤耐药 ,多年来人们对肿瘤的耐药机制进行了大量研究 ,并在细胞乃至分子水平有了诸多进展 ,这其中包括某些耐药基因 (如ＭＤＲ)和细胞表面蛋白 (如 ρ 糖蛋白和多药耐药相关蛋白等 )等介导的多药耐药[1 ] 。然而针对这些耐药机制所设计的治疗方法 ,尽管在体外研究中非常有效 ,但在临床上却难以奏效 ,特别对实体瘤的治疗更是令人失望。因此不难想象体内情况下肿瘤作为一个细胞群集体 ,其生物学特性和对药物的敏感性可能与体外单层培养时的单个癌细胞有着明显的差异。纵观既往的…     

染料木素对非小细胞肺癌A549/DDP细胞的耐药逆转及其机制

目的:探讨染料木素(genistein)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞的耐药逆转及对肺耐药相关蛋白(LRP)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响。方法:采用细胞计数法绘制A549/DDP及A549细胞生长曲线;MTT法测定12.5μg/ml染料木素预处理对A549/DDP细胞耐药的逆转作用,并在荧光显微镜下观察细胞形态变化;用RT-PCR和Western blotting分别检测染料木素对肿瘤细胞LRP和MRP的mRNA及蛋白表达的影响。结果:A549/DDP和A549细胞生长曲线相似,倍增时间分别为(27.38±0.25)h和(18.15±0.36)h;染料木素预处理后耐药倍数从2.28倍下降至1.57倍;镜下观察细胞形态出现体积过大、伪足过度伸展、细胞边缘模糊等变化;LRP及MRP mRNA表达均出现明显下调(P<0.05),但二者蛋白表达无明显改变。结论:A549/DDP细胞基本保留了亲代细胞的生长特性;染料木素可以逆转A549/DDP细胞的耐药性,作用机制可能与下调LRP及MRP mRNA表达有关。     

索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株的建立及基因表达分析

目的 建立索拉菲尼诱导的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)耐药细胞株,筛选出耐药细胞株中的高表达基因,进一步探讨肝细胞癌中与索拉菲尼耐药的相关基因.方法: 选取人肝癌细胞株PLC及Huh7,采用药物间歇诱导法分别建立索拉菲尼诱导的耐药细胞株,运用高通量测序技术(RNA-Seq)测定两株耐药细胞株中高表达基因,运用生物信息学数据库分析高表达基因与肝癌临床生物学指标相关性,筛选出肝癌耐药机制中可能参与的基因.结果: 通过基因测序得到两株肝癌耐药细胞株中的高表达基因,在设定的限定条件下进行进一步筛选, 限定条件为两株耐药细胞中共同表达的基因且表达差异倍数大于4倍,差异具有统计学意义(P<0.05),发现两株耐药细胞共同表达前12位基因符合限定条件,进一步运用Ualcan数据库分析12个基因与肝癌组织表达水平,分期,分级及生存的关系,筛选出符合条件的基因CBX4.结论: 成功构建了索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株,并筛选出与索拉菲尼耐药相关基因CBX4,为进一步耐药机制探讨提供依据.     

索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株的建立及基因表达分析

目的 建立索拉菲尼诱导的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)耐药细胞株,筛选出耐药细胞株中的高表达基因,进一步探讨肝细胞癌中与索拉菲尼耐药的相关基因.方法: 选取人肝癌细胞株PLC及Huh7,采用药物间歇诱导法分别建立索拉菲尼诱导的耐药细胞株,运用高通量测序技术(RNA-Seq)测定两株耐药细胞株中高表达基因,运用生物信息学数据库分析高表达基因与肝癌临床生物学指标相关性,筛选出肝癌耐药机制中可能参与的基因.结果: 通过基因测序得到两株肝癌耐药细胞株中的高表达基因,在设定的限定条件下进行进一步筛选, 限定条件为两株耐药细胞中共同表达的基因且表达差异倍数大于4倍,差异具有统计学意义(P<0.05),发现两株耐药细胞共同表达前12位基因符合限定条件,进一步运用Ualcan数据库分析12个基因与肝癌组织表达水平,分期,分级及生存的关系,筛选出符合条件的基因CBX4.结论: 成功构建了索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株,并筛选出与索拉菲尼耐药相关基因CBX4,为进一步耐药机制探讨提供依据.     

Case analysis of complete remission of advanced hepatocellular carcinoma achieved with sorafenib

Background

To evaluate the feasibility and security of complete remission (CR) of advanced hepatocellular carcinoma (HCC) achieved with sorafenib treatment, and investigate the previously described predictive factors in CR.

Methods

The case of a patient who achieved CR of advanced HCC with sorafenib treatment was analyzed. The case analysis was performed by a literature review of relevant reports retrieved from the PubMed database.

Results

A 58-year-old male patient achieved CR of advanced HCC after 23 weeks of oral treatment with sorafenib alone for 41 months and maintained CR for more than 35 months. Eleven reports worldwide have documented a total of twelve patients who achieved CR of advanced HCC, including six with nonsurgical oral sorafenib treatment, four with surgical resection in the descent stage following oral sorafenib treatment and two with oral sorafenib treatment for postoperative metastasis.

Conclusions

For unresectable advanced HCC, sorafenib can significantly improve progression-free survival and overall survival, achieving CR in some cases. In addition, surgical resection of advanced HCC in the descent stage is possible following oral sorafenib treatment. For patients with postoperative distant metastasis of HCC, sorafenib treatment also provides clinical benefits and can even achieve CR. Besides, long-term sorafenib administration is safe, and patients should continually receive sorafenib to avoid recurrence after complete remission of cancer. Furthermore, early HFSR, rapid decline of AFP levels and rapid tumor shrinking observed by imaging are known parameters describing sorafenib’s effects. Finally, it is important to assess the gene locus of sorafenib sensitivity in HCC patients in future research.     

Unusual computed tomography features of ruptured sarcomatous hepatocellular carcinoma

Sarcomatous change in hepatocellular carcinoma (HCC) is an uncommon histologic variant of HCC, characterized by the proliferation of spindle cells or bizarre giant cells. Poor outcome has been reported in most cases after diagnosis. Here, we report the first case of a sarcomatous HCC with complete central necrosis and rupture of the liver capsule. The patient received target therapy with sorafenib, but died of progressive intra-abdominal carcinomatosis 3 months after treatment. We reviewed the published reports of 13 patients with sarcomatous HCC that included computed tomography features and found that our patient was the only one to have received sorafenib. It appears that this patient's life span was not significantly prolonged with the use of sorafenib.     

泛癌分析长链非编码RNA MIR22HG的表达特征

目的 泛癌分析长链非编码RNA（lncRNA）MIR22HG的表达及其与临床特征的关系。方法 R语言分析癌症基因组图谱（TCGA）中MIR22HG在不同肿瘤组织中的表达及其与临床分期、淋巴结转移、肿瘤突变负荷（TMB）及微卫星不稳定（MSI）的关系;应用TIMER比较MIR22HG表达与免疫浸润的关系;使用cBioPortal分析MIR22HG的突变频率及其与预后的关系;使用GDSC在线数据库分析MIR22HG与化疗药物敏感性的关系。利用GEO数据库肝癌数据集和12对肝癌标本验证MIR22HG在肝癌中的表达及其与索拉非尼治疗反应的关系;分析MIR22HG表达与索拉非尼治疗预后的关系;在肝癌细胞株HCC-LM3中过表达MIR22HG（NC组,MIR22HG过表达组）,在肝癌细胞株MHCC-97H中敲除MIR22HG（NC组,sh-MIR22HG组）,采用CCK-8检测肝癌细胞中MIR22HG对索拉非尼IC50的影响。结果 MIR22HG在大多数肿瘤中低表达（P<0.05）,且多数肿瘤中MIR22HG基因存在缺失突变,其突变与肿瘤不良预后相关（P<0.05）。MIR22HG的表达水平与多种肿瘤的临床分期及淋巴结转移相关（P<0.05）。在多种肿瘤中MIR22HG的表达水平与TBM、MSI、免疫评分、免疫检查点相关基因表达及化疗药的药物敏感性显著相关（P<0.05）。6种常见免疫细胞中,中性粒细胞浸润水平与MIR22HG的表达水平相关性最强,尤其在乳腺癌、直肠癌及肾乳头状细胞癌中明显。多个数据集的分析结果验证MIR22HG在肝癌中低表达,且其低表达与肝癌进展相关（P<0.05）。MIR22HG低表达的患者经索拉非尼治疗后预后较好（HR=2.94, P=0.075）,其低表达能有效预测肝癌患者索拉非尼治疗效果（AUC=0.8095）。过表达MIR22HG能降低肝癌细胞对索拉非尼的敏感性（IC50 NC vs IC50 MIR22HG=7.731 vs 15.61）;而敲除MIR22HG的表达则能增加肝癌细胞对索拉非尼的敏感性（IC50 NC vs IC50sh-MIR22HG=7.986 vs 5.085）。结论 MIR22HG的表达与多种肿瘤的分期、有否淋巴结转移、肿瘤突变负荷、微卫星不稳定、免疫细胞浸润及化疗药物敏感性相关。     

索拉非尼联合经肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝细胞癌的疗效和安全性

目的 评估索拉非尼联合经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗原发性肝癌的疗效和安全性。方法 回顾性分析在中国医科大学附属第一医院介入放射科行索拉非尼系统治疗并联合TACE治疗的10例不可切除肝癌患者的临床资料,按照修订的实体瘤疗效评估标准评价疗效,采用Kaplan-Meier法分析患者生存情况,采用美国国立癌症研究所常见毒性反应分级标准3.0版评价安全性。结果 10例患者中,2例为完全缓解,3例为部分缓解,3例为疾病稳定,2例为疾病进展,中位总生存期为29.5个月。有9例出现不同程度的不良反应,均为3级或以下级别,最常见的不良反应为手足皮肤反应(7/10)和腹泻(6/10)。结论 索拉非尼联合TACE治疗原发性肝癌是一种安全、有效的治疗方法。     

利用集落形成实验和成瘤实验初步研究新基因的成瘤作用

目的 探讨新基因尤其是肝癌相关新基因的功能。方法 利用集落形成实验和成瘤实验初步分析HC90和HC3898基因的功能。结果 ①HC90基因的转染能增加SMMC－7721肝癌细胞形成的集落数量;②注射转染了HC90基因的SMMC－7721细胞形成的肿瘤平均瘤重大于注射SMMC－7721细胞的自身对照组;③HC3898全长cDNA转染SMMC－7721细胞能显著抑制集落的形成;④注射转染HC3898基因的SMMC－7721细胞组平均瘤小于注射SMMC－7721细胞的自身对照组的瘤重,抑瘤率为50％;⑤HC3898实验组瘤块切片检查可见凋亡细胞及凋亡小体,瘤块的组织DNA经1．5％琼脂糖电泳分析,可发现典型的凋亡“阶梯状DNA条带”。结论 HC90可能是与肝癌恶性表型相关的新基因,转染SMMC－7721肝癌细胞后能促进肝癌细胞的生长。HC3898基因可能诱导凋亡并抑制肝癌细胞的生长。集落形成实验和成瘤实验是对基因功能进行初步分析的有效方法,可为进一步研究提供线索。     

MT1G 在中晚期肝细胞癌组织中的甲基化状态 及对索拉非尼治疗预后的预测价值

目的 探讨MT1G 在中晚期肝细胞癌组织中的表达和甲基化状态,以及对索拉非尼治疗预后的 预测价值。方法 调取西安交通大学第一附属医院病理室保存的2016 年11 月—2018 年5 月行肝切除术的 86 例中晚期肝细胞癌患者的病理组织蜡块。分别采用免疫组织化学法和甲基化特异性聚合酶链反应（MSP） 检测肝细胞癌组织中MT1G 蛋白的表达和甲基化状态,并分析其与患者临床病理特征的关系。所有患者术 后接受索拉非尼治疗,随访患者停药时间和总生存期。结果 肝细胞癌组织样本MT1G 蛋白阳性表达率低 于癌旁组织[34.88% VS 66.28%],且MT1G 基因启动子甲基化率高于癌旁组织[60.46% VS 37.21%]（P <0.05）。 MT1G 蛋白阳性表达率与MT1G 基因启动子甲基化率呈负相关（r =-0.787,P =0.000）。肝细胞癌组织 MT1G 蛋白表达与肿瘤Child-Pugh 分级、BCLC 分期、术前血清甲胎蛋白水平有关（P <0.05）。MT1G 蛋白 阳性表达患者中位停药时间为15.0 个月,短于MT1G 蛋白阴性表达患者20.0 个月（P <0.05）。MT1G 蛋白阳 性表达患者与阴性表达患者中位生存时间[20.0 个月 VS 25.0 个月] 和总生存率[43.33% VS 60.71%] 比较,差 异无统计学意义（P >0.05）。结论 MT1G 蛋白在中晚期肝细胞癌组织中表达降低,可能与MT1G 基因启动 子过度甲基化有关。而且MT1G 阳性表达预示中晚期肝细胞癌患者接受索拉非尼治疗预后不良。