三氧化二砷对肝癌裸鼠移植瘤模型作用的实验研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡以及对骨髓抑制等作用.方法建立肝癌裸鼠移植瘤模型,应用TUNEL法观察不同浓度的As2O3对裸鼠移植瘤凋亡指数(AI)的影响;应用免疫组化SABC法检测不同浓度的As2O3对增殖细胞核抗原阳性细胞指数(PI)的影响;检测移植瘤裸鼠的WBC并进行骨髓涂片检查.结果经As2O3治疗的移植瘤裸鼠的骨髓有核细胞增生活跃,粒红比例正常,巨核细胞多见;低、中浓度As2O3治疗裸鼠移植瘤的AI高于对照组(P<0.01和P<0.05);高浓度组AI与对照组比较,无显著性差异(P>0.05).低、中浓度组PI低于对照组(P<0.01);高浓度组PI与对照组比较,无显著性差异(P>0.05).结论As2O3通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡而达到其抗肝癌的效果,As2O3对移植瘤裸鼠骨髓无抑制作用.     

三氧化二砷和顺铂联用对乳腺癌裸鼠移植瘤生长作用的研究

①目的探讨三氧化二砷(As2O3)和顺铂(DDP)联合应用对人乳腺癌细胞系MCF-7裸鼠移植瘤生长抑制的增效作用。②方法MCF-7乳腺癌细胞株接种于裸鼠皮下构建移植瘤模型。分别测量瘤质量、瘤体积,计算抑瘤率,电镜观察移植瘤的形态学变化,流式细胞仪计算凋亡率情况。③结果在瘤质量及瘤体积方面,联合组与As2O3组、DDP组比较有显著性差异;联合组细胞凋亡率明显高于As2O3组和DDP组。联合组肿瘤细胞内可见核碎裂,染色质浓缩、边集。④结论As2O3与DDP联合用药比两药单独应用其抑制肿瘤生长的作用更强,As2O3和DDP联合应用能起增效作用。     

三氧化二砷联合偏钒酸钠对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)联合偏钒酸钠(NaVO3)对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测不同浓度的As2O3、NaVO3单药或联合(1×10-8 mol/L NaVO3联合5×10-3 mol/LAs2O3)对HL-60细胞的生长抑制作用;琼脂糖电泳检测DNA条带;Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察不同处理组中细胞核的变化;以AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测5×10-3mol/L As2O3、1×10-8 mol/L NaVO3单药或联合对HL-60细胞凋亡的影响.结果 MTT结果显示As2O3能抑制HL-60细胞的增殖,并呈剂量和时间效应;低浓度的NaVO3促进细胞增殖,高浓度(≥1×10-8 mol/L)的NaVO3抑制细胞的生长;两药联合抑制作用强于对应浓度单药抑制作用(P＜0.05).HL-60细胞经As2 O3和较高浓度(≥1×10-8 mol/L)的NaVO3处理24 h后均可见到DNA梯形条带.Hoechst 33258染色结果发现HL-60细胞经As2O3和较高浓度(1×10-9 mol/L NaVO3)的NaVO3处理24 h后可见细胞核呈现核浓缩现象.流式细胞术结果显示5×10-3 mol/L As2O3和1×10-8 mol/LNaVO3联合作用于HL-60细胞所诱导的早期凋亡细胞显著多于单独用药(P＜0.05).结论 As2O3及浓度大于1×10-8 mol/L NaVO3均可有效地抑制体外白血病细胞HL-60的增殖并诱导细胞凋亡,两药联合对于抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡具有加强作用.     

三氧化二砷联合顺铂治疗乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的初步研究

目的：观察联合应用三氧化二砷（As2O3）和顺铂（DDP）治疗人乳腺癌MCF-7裸鼠皮下移植瘤的疗效。方法：建立裸鼠皮下人乳腺癌移植瘤模型,应用As2O3和DDP联合治疗,计算抑瘤率并用透射电镜观察瘤体细胞凋亡情况。结果：联合用药组的抑瘤率为76．47％,明显高于单独应用As2O3,或DDP的抑瘤率（P〈0．01）;且联合用药组的肿瘤细胞呈明显凋亡形态改变。结论：As2O3与DDP联合用药比两药单独应用具有较强的抑制肿瘤生长作用,二者具有协同抗癌作用。     

硼替佐米联合柔红霉素对HL-60细胞的凋亡实验

目的研究蛋白酶体抑制剂Bor单用或联合DNR对HL-60细胞的凋亡作用。方法将不同浓度Bor、DNR及两药联合组和对照组作用于HL-60细胞,采用MTT法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果5nmol/LBor作用24h对HL-60细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡,随着浓度增加及作用时间的延长可使细胞凋亡率明显增加;10nmol/LBor与1.0μmol/LDNR联合作用72h细胞凋亡率最高,与同剂量两药单独作用相比有显著的差异（P〈0.01）。结论Bor能显著抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,Bor联合DNR对HL-60细胞有协同作用。     

三氧化二砷抑制食管癌细胞EC-9706体内增殖及机制研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对食管癌细胞系EC-9706的体内增殖抑制作用及可能机制。方法:以不同剂量的As2O3作用于裸鼠移植瘤模型,每周测量裸鼠移植瘤的大小,绘制肿瘤生长曲线;采用Western blot法检测Pim-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白的表达变化。结果:不同剂量的As2O3均能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,以4 mg/kg As2O3组的抑制作用最强,肿瘤重量抑制率和肿瘤体积抑制率分别为81.13%和81.48%。Pim-3和Bcl-2蛋白的表达受到抑制。结论:As2O3可能通过抑制Pim-3使Bcl-2表达降低,促进肿瘤细胞凋亡。     

丹参酮与三氧化二砷协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的体外研究

目的 为评估丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）与三氧化二砷（As2O3）联合应用抑制NB4细胞增殖、诱导其凋亡的效应,观察二药的相互作用和相互影响,期望对两药的临床应用提供理论依据。方法 以不同浓度的As2O3、TanⅡA单独及联合应用作用于急性早幼粒细胞白血病细胞（NB4）作为实验组,通过观察细胞形态学改变,MTT法测定细胞存活率,并采用流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布,分析不同浓度的As2O3、TanⅡA单独及联合应用对NB4细胞的增殖、凋亡的影响。结果 TanⅡA、As2O3均能抑制NB4细胞生长,以1.0 μmol/L As2O3作用更显著,二者联合应用后的增殖抑制作用表现为协同效应;经TanⅡA组处理后的NB4细胞,其形态改变更多显示一定程度的成熟粒细胞的特征,As2O3组则更多表现为细胞凋亡的形态学改变,并经电镜检查证实,两药联合应用可加强NB4细胞的凋亡形态改变;处理后的NB4细胞G0/G1期比例增高,S期细胞比例降低,细胞增殖指数（PI）下降,两药联合应用后具有协同效应。结论 1. TanⅡA、As2O3对NB4细胞均有增殖抑制作用,二者的增殖抑制作用具有协同效应,并与剂量相关;2. TanⅡA与As2O3联合作用于NB4细胞具有诱导凋亡作用,两药的诱导凋亡作用具有协同效应;3. 小剂量的As2O3联合TanⅡA即可对NB4细胞产生促进凋亡的效应,故临床可以选择小剂量的As2O3,以减轻砷剂的毒副作用。     

索拉菲尼联合三氧化二砷对肝癌细胞株的抑制作用

目的 检测索拉非尼单药、As2O3,单药以及两药联合对肝癌细胞株nepG2的作用.探讨两药联用的协同抗肿瘤机制.方法 以不同浓度的索拉非尼和不同浓度的As2O3分别组成单药组和索拉非尼 As2O3联合用药组,另设不加药的对照组,作用于HepG2细胞.MTT法检测索拉非尼、As2O3单药及联用对HepG2细胞的增殖抑制作用,Annexin V-FITC/PI双染检测肿瘤细胞凋亡,罗丹明123染色观察细胞线粒体膜电位.Westernblotting检测ERK、P-ERK蛋白表达.结果 索拉非尼、As2O3单药与联用均能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量.时间依赖效应,两药联用有交互效应(P<0.05).索拉非尼、As2O3单药与联用均能诱导HepG2细胞凋亡,联合组更为明显(P<0.05).两药联用能使线粒体膜电位明显下降,较两药单用和对照组有统计学意义.用药后ERK蛋白表达无明显改变,而pERK表达下降,联合用药组尤显.结论 索拉非尼、As2O3单药及联用均能抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡.索拉非尼与As2O3联合作用于人肝癌HepG2细胞具有协同作用,其机制可能是共同诱导线粒体膜电位下降及抑制Raf/MEK/ERK信号传导通路.     

As2O3对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B皮下移植瘤抗肿瘤作用

目的 检测不同浓度As2O3对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞裸鼠皮下移植瘤的抗肿瘤作用及对瘤细胞内磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)表达的影响,进一步探讨As2O3的抗肿瘤机制.方法 建立人子宫内膜癌HEC-1-B细胞皮下移植瘤模型,随机分为实验组,即As2O3低剂量(1.0 mg/kg)、中剂量(2.5 mg/kg)、高剂量(5.0 mg/kg)剂量组,生理盐水(NS)组及顺铂组(5 mg/kg),腹腔内注射给药,连续8 d.观察用药前后裸鼠体质量改变.剥取瘤组织,计算药物的抑瘤率.检测用药后裸鼠的肝肾功能及血常规.透射电镜观察细胞变化,流式细胞仪检测细胞凋亡周期和细胞凋亡率,免疫组化法检测p-ERK的表达.结果 不同浓度As2O3和顺铂均有不同程度抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡的作用,其中As2O3低剂量组的抑瘤率为34.3%,p-ERK的表达率为37.5%,该组在亚G1期出现典型的凋亡峰,且As2O3低剂量组与NS组比较,凋亡率、瘤质量差异均有显著意义(F=27.20、33.92,q=9.19、13.34,P<0.05).As2O3低剂量组与顺铂组相比,无明显血液及肝肾毒性.结论 低剂量As2O3组能明显抑制肿瘤细胞HEC-1-B生长,且毒副作用轻,可能与阻滞细胞周期,抑制p-ERK表达有关.     

三氧化二砷抑制宫颈癌生长的体内实验研究

目的 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO,As2O3)对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤体内作用及其机制.方法 建立裸鼠宫颈癌移植瘤模型,用低浓度As2O3[2 mg/(kg·d)],高浓度As2O3[5 mg/(kg·d)],顺铂(DDP)[3 mg/(kg·d)]及0.9％NaCl腹腔连续给药10d,观察移植瘤的生长情况和抑瘤率,药物对裸鼠体重、肝肾组织的影响.通过流式细胞仪检测瘤细胞凋亡率,应用免疫组化方法检测P38和Caspase-3的表达.结果 低浓度As2O3,高浓度As2O3及DDP组的抑瘤率分别为31.48％,33.61％和53.11％,高浓度As2O3和DDP组的抑瘤率与阴性对照组的差异有统计学意义(P＜0.05),DDP组药物的毒副作用大.两种浓度As2O3引起的细胞凋亡率明显高于阴性对照组(P＜0.05).P-P38和Caspase-3蛋白在As2O3治疗组的表达明显高于阴性对照组(P＜0.05),且二者呈正相关(r=0.5164,P=0.01).结论 As2O3能明显抑制宫颈癌移植瘤的生长,且毒副作用明显小于DDP,其抑癌机制之一为诱导肿瘤细胞凋亡.     

硼替佐米或联合三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的 探讨硼替佐米单独或联合三氧化二砷对HL-60细胞凋亡的影响.方法 不同浓度硼替佐米、三氧化二砷处理细胞12～48 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性;DNA凝胶电泳、细胞形态学观察、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 10～50 nmol/L硼替佐米可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其发生凋亡.其中10nmol/L剂量处理12 h,即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量,细胞凋亡率明显增加.选择15 μmol/L三氧化二砷与10nmol/L硼替佐米联合应用,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加.结论 硼替佐米对HL-60细胞存在时间和剂量依赖性的细胞凋亡效应,与三氧化二砷联合具有明显的协同作用.     

三氧化二砷对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨三氧化二砷对人雌激素受体阴性乳腺癌细胞系MDA—MB-435s在裸鼠体内生长的影响及其作用机制。方法建立乳腺癌细胞系MDA—MB-435s的裸鼠体内移植瘤模型,将24只荷瘤裸鼠随机分成4组,即生理盐水（Ns）组、顺铂（DDP）组、低剂量三氧化二砷组（1．5mg／kg）、高剂量三氧化二砷组（3．0mg／kg）。比较各组的抑瘤作用及应用免疫组化技术分别检测PCNA、Caspase-3在各组之间表达情况。结果用药后不同剂量三氧化二砷组和顺铂组均能显著抑制人乳腺癌移植瘤在裸鼠体内的生长,移植瘤的大小和重量显著低于生理盐水组（P〈0．05）。免疫组化结果表明：生理盐水组移植瘤组织中PCNA蛋白大量表达,Caspase-3蛋白少量表达。经不同剂量三氧化二砷或顺铂处理后PCNA蛋白的表达下降,而Caspase3蛋白的表达上调,与生理盐水比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论三氧化二砷可以通过抑制PCNA的增殖及增加Caspase-3的凋亡作用来抑制肿瘤生长,且呈剂量依赖性。     

HIFU联合化疗对裸鼠皮下胶质瘤细胞凋亡及增殖的影响研究

目的:探讨高强度聚焦超声(High intensity focused ultrosound,HIFU)联合化疗对裸鼠皮下胶质瘤靶区周围细胞凋亡和增殖的影响.方法:建立人(U251)胶质瘤移植模型,随机分入3组,局部分别行单HIFU治疗、单盐酸尼莫司汀(Nimustine,ACNU)及HIFU联合ACNU治疗.治疗24 h后切取肿瘤组织,行HE染色观察组织病理变化,免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达和TUNEL法检测细胞凋亡.治疗7d后分别测量3组瘤块体积.结果:HIFU联合化疗组靶区周围组织凋亡细胞数较单HIFU组及单化疗组高(P＜0.01);而PCNA阳性细胞数较后两者降低(P＜0.01).联合治疗组肿瘤体积较单HIFU组及单化疗组缩小(P＜0.01).结论:HIFU治疗及化疗在胶质瘤的治疗中具有协同作用.HIFU联合化疗能明显提高HIFU治疗疗效,诱导靶区周围胶质瘤细胞凋亡并抑制其增殖发挥抗肿瘤作用,有利于胶质瘤的治疗.     

博来霉素A6对裸鼠移植的人体大肠癌的抑制作用

在裸鼠移植人结肠癌HT-29和人盲肠癌Hce-8693细胞,使用裸鼠可耐受的博来霉素A_6剂量,结果博来霉素A_6对肿瘤生长有明显的抑制作用,抑制率达90％左右。与等毒性剂量的5-氟脲嘧啶和丝裂霉素C比较,博来霉素A_6不仅对裸鼠移植的人结肠癌HT-29生长的抑制作用明显较强,且残存的非坏死肿瘤组织也较少。提示博来霉素A_6是一种对大肠癌有较强抗肿瘤活性的药物。     

三氧化二砷对人肺腺癌裸鼠模型作用的超微结构观察

目的 研究三氧化二砷（As2O3 )对人肺腺癌细胞（AGZY）裸鼠模型超微结构的影响。方法 利用国内已建株的肺腺癌细胞株（AGZY）制造了裸鼠肺腺癌模型，分别用不同浓度的As2O3、顺铂、生理盐水治疗肺腺癌裸鼠，在电镜下观察四种不同用药方法作用后肿瘤细胞超微结构的改变，并探讨As2O3的作用机制。结果 有腺癌裸鼠经As2O3、顺铂治疗后，超微结构观察发现，As2O3能引起细胞核染色南聚集、边移，线粒体肿胀，细胞性发生凋亡。结论 动物实验证明，As2O3可诱导人肺腺癌细胞发生凋亡。     

多沙唑嗪对前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:探讨α1肾上腺素能受体拮抗剂多沙唑嗪对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3在裸鼠体内生长的影响及其作用机制.方法:建立前列腺癌细胞系PC-3的裸鼠体内移植瘤模型,将30只荷瘤裸鼠随机分为5组[A组(对照组),B组(多沙唑嗪3 mg/kg),C组(多沙唑嗪10 mg/kg),D组(多沙唑嗪30 mg/kg),E组(多沙唑嗪100mg/kg)].接种肿瘤细胞1周后每天1次灌胃给药,每周测量肿瘤体积2次,给药2周后处死裸鼠,取肿瘤组织做免疫组织化学Ki67及细胞凋亡DNA原位标记法(TUNEL法)检测,并用免疫印迹法研究蛋白Smad-4及IκBα在各组肿瘤组织中的表达情况.结果:多沙唑嗪给药组肿瘤体积较对照组显著缩小,肿瘤的重量较对照组亦显著减轻,而不同剂量的多沙唑嗪给药组间肿瘤大小差异无统计学意义.免疫组织化学结果显示前列腺癌细胞Ki67的阳性率在A至E组依次为36.5%±8.5%,37.7%±11.3%,40.1%±12.7%,37.2%±12.3%,39.3%±13.1%,各组间差异无统计学意义(P＞0.05);而前列腺癌细胞的TUNEL阳性率在A至E组依次为9.5%±3.5%,24.7%±8.3%,25.7%±9.7%,28.2%±12.1%,27.5%±11.3%,各用药组明显高于对照组(P＜0.01);免疫印迹结果表明用药组蛋白Smad-4及IκBα的表达显著高于对照组.结论:α1肾上腺素能受体拮抗剂多沙唑嗪对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3裸鼠体内移植瘤的生长具有明显抑制作用,其作用机制可能是药物诱导了前列腺癌细胞凋亡,对细胞的增殖并没有明显的影响;而TGF-β1信号转导通路的激活可能是多沙唑嗪引起前列腺癌细胞凋亡的重要机制.     

绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤超微结构的影响

目的通过复制人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,观察绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）干预对HepG2移植瘤的作用及其超微结构的影响。方法瘤体接种复制HepG2移植瘤模型,荷瘤裸鼠随机分组,实验组给予EGcG干预3用后处死裸鼠,剥离移植瘤,称重、测量长短径,计算抑瘤率;运用透射电镜观察移植瘤超微结构。结果实验组HepG2移植瘤体积、重量均明显小于对照组（P〈0．05）,抑瘤率达31．63％士4．09％;透射电镜观察,实验组HepG2移植瘤组织见不同时期凋亡细胞,部分形成凋亡小体,可见坏死瘤细胞及崩解细胞碎片;对照组呈现细胞形态怪并,核大畸形、电子密度不均,染色质明显,线粒体丰富等恶性肿瘤特有超微结构特点。结论EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤具有生长抑制作用;对比实验组与对照组移植瘤超微结构特点,推测EGCG可诱导HepG2移植瘤细胞凋亡。     

亚砷酸抗裸鼠人肝癌作用及机制研究

目的：探讨亚砷酸体内对人肝癌细胞的作用、毒副作用及机制。方法：人肝癌细胞BEL-7402体外培养，取指数生长期细胞裸鼠皮下接种，成瘤后腹腔分别连续注射不同浓度亚砷酸、5—Fu及生理盐水，观察不同浓度亚砷酸治疗组及对照组瘤块大小、抑癌率和裸鼠一般状态的变化，光镜下观察肝肾结构的改变，并进行血常规检测。结果：亚砷酸可明显抑制瘤块增长，2．5mg／Lg亚砷酸10天的抑瘤率为53．42％，5mg/kg亚砷酸5天、10天的抑瘤率分别为79．28％、96．58％，而且无明显肝肾损害，对造血系统无影响。结论：亚砷酸可抑制体内肝癌结节生长，而且对肝、肾及造血系统没有明显的毒副作用。