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相似文献
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1.
四肽AC-DEVD-CHO对硫芥诱导淋巴细胞凋亡的干预作用   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 探讨caspase-3活性在硫芥诱导淋巴细胞凋亡中的变化和其四肽抑制剂AC-DEVD-CHO对细胞凋亡的干预作用。方法 荧光分光光度法检测caspase-3活性变化,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分别检测DNA ladder,细胞凋亡率。结果 硫芥可诱导淋巴细胞caspase-3活性升高,其多肽抑制剂可部分阻断细胞凋亡,主要表现在抑制剂作用下DNA ladder。现象减弱,细胞凋亡百分数下降。结论 硫芥通过激活caspase-3诱导淋巴细胞凋亡,其多肽抑制剂对淋巴细胞凋亡具有干预作用。  相似文献   

2.
目的观察硫芥对大鼠脾脏淋巴细胞线粒体的损伤作用.方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养.用琼脂糖DNA凝胶电泳观察细胞凋亡的发生;用Western blot观察Cyt-c释放.用MTT法检测线粒体功能状态,以罗丹明123标记的荧光探针检测线粒体跨膜电位.结果 100 μmol/L硫芥作用4 h线粒体功能就有降低,线粒体跨膜电位降低,二者间呈直线相关.硫芥中毒早期即可引起淋巴细胞线粒体细胞色素C释放和细胞凋亡(DNA ladder).结论硫芥可引起大鼠脾淋巴细胞线粒体明显损伤,线粒体参与了硫芥的细胞毒性作用过程.  相似文献   

3.
王仕丽  杨清武  董兆君 《医学争鸣》2002,23(14):1271-1273
目的 探讨硫芥中毒动物淋巴细胞的损伤特点及中毒早期白细胞介素的浓度变化作为硫芥毒性损伤诊断的可能性 .方法 分离大鼠脾淋巴细胞培养 ,经 10~ 10 0 0 μmol·L- 1 芥子气染毒 30 min,以单细胞凝胶电泳法 (SCG )检测DNA损伤 ;同时测定硫芥中毒大鼠血液 IL- 2和 IL- 6浓度 .结果 中毒后淋巴细胞 DNA迁移率和受损细胞百分率呈时间和剂量依赖关系 (r=0 .6 3,P<0 .0 1) ;培养液中 IL- 2和IL- 6浓度明显降低 ,IL- 6含量为 (46 8± 16 ) μg· L- 1 ,4 h开始下降 ,72 h降至 (177± 16 )μg· L- 1 (P<0 .0 1) ,12 0 h有所回升 ,但仍然明显低与对照 (P<0 .0 1) .其中 IL- 2几乎难以检出 .结论 硫芥中毒早期机体免疫系统受到明显抑制 ,SCG检测 DNA损伤用作评价硫芥细胞毒性指标在诊断方面具有一定价值  相似文献   

4.
目的探讨松茸多糖对MPP~+诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法 MTT法检测细胞活性,q RT-PCR检测Caspase-3基因表达水平,并用Westernblot法检测Caspase-3蛋白表达。结果在MPP~+(800μmol/L)处理PC12细胞48h后,与模型组相比,在5ng/ML的松茸多糖保护组,细胞活性显著增高,Caspase-3基因及蛋白的表达水平均明显降低。结论在一定剂量范围内的多糖松茸对MPP~+诱导的PC12细胞的损伤具有保护作用,此作用可能与抑制细胞凋亡有关。  相似文献   

5.
硫芥对大鼠淋巴细胞毒性作用的研究   总被引:7,自引:7,他引:0  
目的 探讨硫芥中毒对淋巴细胞的作用机制,为寻找硫芥中毒早期改变的敏感指标和提高中毒的防护水平奠定其础。方法 建立硫芥中毒淋巴细胞模型,分别用单细胞凝胶电泳法检测淋巴细胞DNA损伤;用镀铜镉还原法和一氧化氮合成酶试剂盒检测中毒后淋巴细胞培养上清液一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的变化;用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳支检测细胞凋亡。结果 硫芥中毒后4h淋巴细胞DNA明显损伤,72h最明显,5d开始恢复;中毒后NO、NOS的变化相似,4h明显升高,1d达到峰值并于3d开始恢复。NOS的抑制剂(L-NAME)可明显降低NO的含量,但对实验组NOS的活性无明显影响。流式细胞仪检测结果显示4h淋巴细胞凋亡明显,而1、3d几乎无凋亡产生。琼脂糖凝胶电泳结果表明4h出现典型的细胞凋亡的征象,而1、3d则表现为细胞死亡。结论(1)SCG法敏感、经济、简便、可用于硫芥中毒细胞毒性、中毒程度的评价,在早期诊断上有良好的应用前景;(2)中毒后因NOS的活性升高导致NO的升高而产生细胞毒作用可能是硫芥的中毒机制之一;(3)细胞凋亡参与了硫芥的中毒过程,亦可能是其中毒机制之一。  相似文献   

6.
目的 研究硫芥中毒犬外周血IL-2、IL-6变化和淋巴细胞DNA损伤的规律。方法 重庆家犬硫芥中毒(16mg/kg,sc)。中毒后不同时相点取血,分离血清和淋巴细胞。采用放射免疫方法测定血清中IL-2、IL-6含量,以单细胞凝胶电泳技术测淋巴细胞DNA损伤程度。结果 中毒后4h血清IL-2、IL-6含量开始下降,72h达最低值,120h开始恢复。单细胞电泳检测结果提示,硫芥导致明显的淋巴细胞彗星现象。受损细胞率、淋巴细胞DNA片段迁徙度于中毒4h即开始升高,24~72h持续升高。结论 硫芥中毒导致发生早且持续时间较长的犬外周血IL-2、IL-6含量下降和淋巴细胞DNA损伤。  相似文献   

7.
二烯丙基二硫诱导HL-60细胞系凋亡及其与Caspase-3的关系   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究二烯丙基二硫(DADS)诱导白血病细胞凋亡及其机制。方法实验分对照组、DADS处理组、Ae—DEVD—CHO预处理组,进行体外细胞培养,采用形态学观察、MTT法、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法,进行细胞形态学观察、细胞增殖抑制作用研究,检测细胞凋亡率、Caspase-3活性以及DNALadder检测。结果DADS诱导前后,HL-60细胞形态学发生明显改变,DADS以剂量依赖的方式抑制细胞的生长,在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有Caspase-3的活化,且与剂量和作用时间呈依赖关系,Caspase-3抑制剂Ac—DEVD—CHO能抑制DADS诱导HL-60细胞凋亡。结论DADS能有效地诱导HL-60细胞凋亡,其过程与Caspase-3活化相关。  相似文献   

8.
还原型谷胱甘肽对抗硫芥诱导大鼠脾淋巴细胞毒性作用   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的观察还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对硫芥(sulfur mustard,SM)诱导大鼠脾淋巴细胞线粒体功能的保护作用.方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养.用MTT法检测线粒体功能状态;用荧光分光法检测细胞内GSH含量和用琼脂糖DNA凝胶电泳观察DNA的损伤.结果硫芥作用的线粒体功能变化具有剂量和时间依赖性,它与细胞内GSH含量下降呈直线正相关(P<0.01).使用GSH后,对不同剂量组的线粒体功能早期均有保护作用.保护效果最好时间的DNA断裂情况有所减轻,甚至可以逆转坏死向凋亡发展.结论GSH可部分保护线粒体功能.  相似文献   

9.
目的观察GLP-1对H2O2所致的胰岛β细胞氧化损伤的保护作用,探讨其抵抗氧化应激诱导的细胞凋亡作用机制。方法 Ficoll法分离纯化SD大鼠胰岛β细胞,实验分为正常对照组、H2O2诱导胰岛损伤组、GLP-1预处理+H2O2损伤组。采用FDA/PI染色法检测细胞存活,Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测氧化应激和细胞凋亡相关基因i NOX、SOD2、Caspase-3、Bcl-2表达,Western blot检测胰岛细胞Akt、P-Akt、Caspase-3蛋白表达。观察GLP-1预处理能否减少ROS诱导的胰岛β细胞凋亡,以及在此过程中PI3K/Akt信号通路的改变。结果经H2O2损伤后胰岛β细胞的增殖活性、存活率和胰岛素分泌能力显著降低,细胞凋亡率显著升高;i NOS、Caspase-3基因表达显著升高,SOD、Bcl-2基因表达显著降低;Akt蛋白磷酸化水平明显降低,Caspase-3活性明显升高。GLP-1预处理可显著提高β细胞的增殖活性、存活率和胰岛素分泌能力,减少细胞凋亡;显著降低i NOS、Caspase-3基因表达,上调SOD基因表达;增强Akt磷酸化,减少活化Caspase-3水平。结论 GLP-1对H2O2所致的大鼠胰岛氧化应激损伤具有一定的保护作用,其作用机制与增强Akt磷酸化及抑制凋亡信号分子活化相关。  相似文献   

10.
重组人可溶性TRAIL分子诱导细胞凋亡机理探讨   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的 探讨重组人可溶性TRAIL蛋白(rhsTRAIL)诱导细胞凋亡的机理。方法 应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡;流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局,荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性。结果 100ng/ml人可溶性TRAIL蛋白分子对外周血淋巴细胞无明显毒性,但可诱导肿瘤细胞凋亡,不同的肿瘤细胞凋亡率有差异。凋亡范围在26%-57%。不同细胞表面TRAIL受体表达量不同,外周血淋巴细胞的死亡受体DR4,DR5受体表达5%,而诱骗受体DcR1表达55%,相反肿瘤细胞上的DR4,DR5表达高(40%——88%)。而DcR1表达很低(8%-17%),rhsTRAIL诱导HL-60细胞发生凋亡,其细胞内Caspase-3活性增高,ActD可增加TRAIL抑制细胞生长活性。结论 重组人可溶性TRAIL蛋白分子可诱导肿瘤细胞凋亡,凋亡活性TRAIL受体类型及Caspase-3活性增高有关。  相似文献   

11.
目的 :探讨未成熟脑在缺氧缺血 (H1)后海马神经细胞半胱天冬酶 3的激活与DNA损伤之间的关系。方法 :采用 7日龄新生大鼠脑缺氧缺血模型 ,观察HI后不同时间点脑组织海马CA1、CA3区半胱天冬酶 3活性亚单位p17阳性细胞及检测DNA双链断裂的寡核苷酸探针 (HPP)标记阳性细胞的分布。结果 :HI后 3h在海马CAl、CA3区即可检测到p17及HPP阳性细胞 ,并随HI时间延长而增加。在CAl区阳性细胞计数 2 4h达到峰值 ,而在CA3区 72h仍有较多阳性细胞 ,p17和HPP标记的阳性细胞在各时间点具有相同的变化规律。双重染色证实 ,p17和HPP在海马神经元中同时表达。结论 :未成熟脑HI后海马区半胱天冬酶 3被激活并伴随DNA双链的断裂 ,二者均是检测神经细胞凋亡敏感而特异的指标  相似文献   

12.
目的 检测硫芥对小鼠淋巴瘤L5 178Y3 .7.2c tk - 细胞的诱变性。方法 采用 96孔微孔板接种法检测平板接种效率和突变频率。结果 硫芥可诱导L5 178Y3 .7.2c tk - 细胞tk位点的突变 ,诱发突变是自发突变的 2~ 15倍。在tk位点诱发了大克隆和小克隆两种不同表型的突变集落 ,以小克隆为主。结论 硫芥有明确的致突变性和较强的细胞毒性 ,产生了大范围的DNA损伤  相似文献   

13.
硫芥诱导大鼠小肠上皮细胞凋亡的研究   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的:观察硫茶对大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)生长的影响及其引起的细胞死亡的方式。方法:透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳定性硫芥中毒的IEC-6细胞形态变化及DNA的改变。采用Cell Death DetectionELISA试剂盒研究IEC-6细胞凋亡与硫芥浓度之间的关系。结果:0.1-1000μmol/L硫芥对IEC-6细胞的毒性作用与硫芥的深度和作用时间呈正相关。电镜观察到细胞凋亡的形态学改变。细胞膜完整,染色质固缩并聚集于核膜边缘,凋亡小体形态;DNA电泳有“DNA Ladder”出现,0.1-100μmol/L硫芥处理的细胞的凋亡量随硫芥 度的升高而增加,超过100μmol/L测凋亡量反降低。结论:硫芥可诱导大鼠小肠上皮IEC-6细胞凋亡,在低浓度时以凋亡为主,高浓度时则出现坏死。  相似文献   

14.
目的 探讨Fas、caspase-8在昆明山海棠碱(THH碱)对Jurkat淋巴瘤细胞的凋亡诱导中的变化,以进一步研究THH碱诱导凋亡的分子机制。方法 采用Annexin—Ⅴ标记和流式细胞术检测细胞的凋亡发生率,采用western blotting分析FasL、caspase-7、caspase-8、Bid等蛋白表达的变化。结果 THH碱能有效诱导Jurkat细胞凋亡;在其凋亡过程中,FasL逐渐表达增强、caspase-7、caspase-8、Bid剪切激活,并呈时间依赖性。结论 THH碱通过Fas受体—配体介导激活caspase-8,caspase-8再激活caspase-7和Bid等网络途径诱导Jurkat细胞凋亡。  相似文献   

15.
目的观察长波紫外线引起人表皮癌细胞DNA链断裂损伤的情况,以及槲皮素对这种损伤的预防作用。方法用长波紫外线照射细胞,用单细胞凝胶电泳法检测DNA损伤。结果长波紫外线剂量依赖性地诱发表皮癌细胞的DNA链断裂损伤,损伤的高峰出现在照射1 h。表现为慧星细胞百分比的降低和彗星尾巴长度的缩短,并有量效关系。结论槲皮素可以预防长波紫外线照射引起的皮肤癌细胞DNA链断裂损伤。  相似文献   

16.
研究环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂celecoxib抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制。方法:采用celecoxib作用于Bel.7402、SMMC-772l的2种肝癌细胞株,以四甲基偶氮唑蓝(MTY)法测定肿瘤细胞的增殖抑制率、TUNEL实验、流式细胞术检测细胞凋亡率、免疫细胞化学和Westernblot实验测定细胞凋亡及Akt信号转导途径相关蛋白的激活状态。结果:Mrrr法显示celecoxib可抑制上述两株肝癌细胞增殖;TUNEL实验及流式细胞术结果证实,celecoxib处理后的肿瘤细胞可发生细胞凋亡;免疫细胞化学及Westernblot实验显示,celecoxib诱导凋亡主要是通过抑制Akt的Thr308磷酸化,进而激活caspase-9、caspase-3进行的。结论:celecoxib明显抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,其主要机制可能通过Akt信号转导途径、激活caspase通路实现的。  相似文献   

17.
硫芥诱导小鼠染色体畸变和微核形成作用的研究   总被引:2,自引:2,他引:0  
目的 研究硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞 (chinesehamsterfibroblastcellline ,CHL)染色体的诱变作用及对小鼠骨髓微核率的影响。方法 培养CHL细胞 (±S9) ,以不同浓度硫芥处理 2 4h后常规方法制备染色体 ,观察畸变类型并计算畸变率。KM小白鼠皮下注射硫芥染毒 ,2 4h后处死动物 ,取双侧股骨 ,行骨髓涂片和姬姆萨染色 ,计数含微核嗜多染红细胞(polychromaticerythrocyte ,PCE)数。结果 硫芥处理的CHL细胞染色体畸变率显著增加 ,出现裂隙、断裂、缺失、多倍体等多种类型畸变 ,并呈量效依赖趋势。S9不影响硫芥诱导的CHL细胞染色体畸变形式和畸变率。与对照组比较 ,注射硫芥小鼠骨髓PCE微核率显著增加 (P <0 .0 1) ,硫芥剂量越大 ,微核形成率越高。结论 硫芥能直接诱发细胞染色体损伤。  相似文献   

18.
目的 观察5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用效果及其可能机制.方法 体外培养人宫颈癌HeLa细胞,分别应用不同浓度的ADFMChR处理人宫颈癌HeLa细胞,用AO/EB染色观察ADFMChR作用HeLa细胞48h后凋亡形态学改变;流式细胞术(FCM)检测ADFMChR作用HeLa细胞后的凋亡率;Westernblot分析ADFMChR对HeLa细胞caspase-3蛋白和mcl-1蛋白表达的影响.结果 不同浓度的ADFMChR处理HeLa细胞48h后,细胞出现典型的细胞凋亡形态特征,凋亡率呈浓度依赖性,同时细胞caspase-3蛋白表达上调,mcl-1蛋白表达下降.结论 ADFMChR具有体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,呈浓度依赖性,其机制可能与其上调caspase-3及下调mcl-1蛋白表达有关.  相似文献   

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