硫氧还蛋白互作蛋白在乳腺癌中的研究进展

硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)可以与硫氧还蛋白(TRX)直接结合,作为其内源性抑制蛋白,参与调节细胞内氧化应激水平。TXNIP作为一种抑癌蛋白,在人乳腺癌组织细胞中处于低表达状态,并且与细胞增殖、凋亡、患者预后等相关。本文就乳腺癌中TXNIP的结构、调节氧化应激的功能及抑癌机制做一综述,以证明TXNIP作为乳腺癌分子治疗的新靶点具有潜在价值。     

硫氧还蛋白及硫氧还蛋白相互作用蛋白在结肠息肉癌变中的表达及意义

【摘要】 目的 探讨硫氧还蛋白（thioredoxin,Trx）与硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin interacting protein,TXNIP）在结肠息肉、结肠腺瘤及结肠癌中的表达,分析Trx、TXNIP在结肠息肉癌变中的作用。 方法 收集河北北方学院附属第一医院2019年1月～2019年10月就诊的结肠息肉（结肠息肉组）20例、结肠腺瘤（结肠腺瘤组）40例、结肠癌（结肠癌组）20例以及正常结肠(正常结肠组)20例,通过ELISA法检测血清Trx、TXNIP的含量,采用胰岛素还原法检测血清Trx活性,苏木精-伊红染色（HE）法观察各组织的形态学,应用免疫组织化学法检测组织中Trx、TXNIP的表达,实时荧光定量PCR检测组织中Trx mRNA与TXNIP mRNA的表达水平。 结果 与正常结肠组比较,结肠腺瘤组与结肠癌组患者血清中Trx含量和活性明显升高,结肠息肉组、结肠腺瘤组患者与结肠癌组患者血清中TXNIP含量较正常结肠组明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）;在结肠腺瘤组和结肠癌组组织中Trx阳性表达率明显高于正常结肠组,而TXNIP阳性表达率明显低于正常结肠组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与正常结肠组比较,结肠息肉组、结肠腺瘤组及结肠癌组组织中Trx mRNA的表达水平均明显上调,TXNIP mRNA的表达水平均明显下调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论 Trx在结肠息肉癌变中高表达,而TXNIP表达降低,表明两者都参与结肠癌前病变与癌组织的发生及发展,两者均在结肠息肉癌变过程中起着重要的作用。     

缺血性脑卒中后认知障碍患者血清肺腺癌转移相关转录因子-1及硫氧还蛋白互作蛋白水平的变化及意义

目的 分析缺血性脑卒中后认知障碍患者血清肺腺癌转移相关转录因子1（MALAT1）及硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）水平变化及意义。方法 本研究为前瞻性研究。选取2019年2月—2021年4月就诊于唐山市工人医院的150例缺血性脑卒中患者,根据蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评分将患者分为研究组（缺血性脑卒中后认知障碍）和对照组（缺血性脑卒中未伴有认知障碍）。对比两组血清MALAT1水平、TXNIP水平、MoCA评分、磁共振波谱水平;采用Pearson法分析血清MALAT1、TXNIP水平与MoCA评分、磁共振波谱水平的相关性;绘制ROC曲线分析血清MALAT1、TXNIP单独及联合预测认知障碍发生的价值。结果 150例缺血性脑卒中患者中,有58例为缺血性脑卒中认知障碍,占比38.67%;研究组血清MALAT1、TXNIP水平高于对照组,MoCA量表各维度及总评分低于对照组（P <0.05）;研究组NAA1/NAA2低于对照组,Cho1/Cho2、Lac1/Cr2高于对照组（P <0.05）;缺血性脑卒中后患者血清MALAT1、TXNIP水平与MoCA总分（r =-0.623和-0.512,均P =0.000）、NAA1/NAA2（r =-0.459和-0.413,均P =0.000）呈负相关,与Cho1/Cho2（r =0.569和0.496,均P =0.000）、Lac1/Cr2（r =0.523和0.475,均P =0.000）呈正相关;ROC曲线结果显示,血清MALAT1、TXNIP及两者联合预测缺血性脑卒中后认知障碍发生的AUC为0.860（95% CI：0.796,0.924）、0.780（95% CI：0.703,0.856）、0.890（95% CI：0.834,0.945）,敏感性分别为86.7%（95% CI：0.776,0.933）、78.3%（95% CI：0.711,0.863）、90.2%（95% CI：0.839,0.951）,特异性分别为79.7%（95% CI：0.702,0.869）、71.2%（95% CI：0.612,0.798）、85.1%（95% CI：0.736,0.915）。结论 缺血性脑卒中后认知障碍患者血清MALAT1、TXNIP水平呈高表达,两者水平与患者认知功能、磁共振波谱水平密切相关,且两者联合可有效预测认知障碍的发生。     

硫氧还蛋白系统与中枢神经系统疾病

有关中枢神经系统疾病发病机制的学说很多，自由基学说一直倍受关注。即如果中枢神经系统产生的自由基过多且未能及时清除，将会引起细胞结构的破坏进而功能丧失，最终导致中枢神经系统疾病的发生。广泛存在于各种组织细胞中的硫氧还蛋白(thioredox in，Trx)与疏氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase，TR)和NADPH一起组成     

硫氧还蛋白在凋亡途径中的作用机制

硫氧还蛋白(Trx)是体内广泛存在的氧化还原蛋白,其家族中两种重要的硫氧还蛋白:硫氧还蛋白1(thioredoxin1,Trx1)和硫氧还蛋白2(thioredoxin2,Trx2)都含有保守的-Cys-Gly-Pro-Cys-还原序列。由于Trx具有调节细胞生长增殖和抗凋亡的作用,因此Trx在凋亡途径中的作用机制就成为了对抗肿瘤的研究热点。     

硫氧还蛋白与阿尔茨海默病的研究进展

硫氧还蛋白（Thioredoxin,Trx）是一种高度保守且广泛表达的小分子蛋白,具有维持体内细胞内外氧还原平衡、清除自由基、抑制细胞凋亡以及调节转录因子活性等功能,在细胞信号转导中也发挥重要的作用。阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease,AD）发病机理与体内自由基清除能力下降、神经元的丢失与凋亡有紧密的联系,近年来有关Trx与AD的发病机理的研究日渐增多。本文拟对Trx与AD的关系进行综述,理清Trx在AD中的作用,旨在为AD的治疗挖掘新途径。     

硫氧还蛋白2的研究进展

硫氧还蛋白2(Trx2)是特异位于线粒体的小分子蛋白,它在抗氧化应激、阻止线粒体介导的细胞死亡、调节某些基因的表达等方面起着关键作用。最新研究表明,Trx2还可促进血管再生、减少高血压病理生理改变,抑制神经退行性变、保护脑细胞,且高表达Trx2的细胞对致癌剂有更强的抵抗力。因此,Trx2与心血管、神经系统、肿瘤等疾病的发病机制密切相关。现综述Trx2的结构、生物学功能和有关机制,以及该蛋白在相关疾病中的基础研究。     

用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素

目的 利用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素（endostatin）.方法 采用PCR技术从pMFGendo质粒上扩增出小鼠endostatin完整的cDNA序列,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体pThiohisA中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导表达重组融合蛋白,SDS-PAGE分析表达产物为包涵体,将包涵体纯化后通过镍柱亲和层析得到纯化的、可溶性的小鼠内皮抑素,经SDS-PAGE分析鉴定.结果 高效表达出相对分子量约32KD的重组融合蛋白,灰度扫描软件分析显示,其表达量占菌体总蛋白质的35.9%,经镍柱亲和层析获得了高纯度的小鼠内皮抑素重组融合蛋白,纯度可达95%,得率为0.27g/L.结论 用硫氧还蛋白融合表达系统在大肠杆菌中表达的小鼠内皮抑素重组融合蛋白易纯化并具有高活性.     

用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素的方法研究

目的探索用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素(endostatin)重组蛋白的最佳生产工艺路线.方法用pThioHis-endo重组质粒转化不同的大肠杆菌BL21、JM109、DH5α,经几种不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(isopropylthio-galactoside,IPTG)诱导表达重组融合蛋白,或诱导表达不同时间后,采用SDS-PAGE分析表达产物;按所优化的条件进行重组内皮抑素的表达、包涵体的提取、洗涤、变性和复性,最后经Ni 柱纯化,再通过SDS-PAGE分析纯化的结果.结果3种大肠杆菌表达效果相差无几,最佳IPTG的浓度0.9 mmol/L,最佳诱导时间为5 h,经Ni 柱纯化后可获得可溶性的重组内皮抑素.结论利用本实验的优化条件可获得高产量、高纯度、可溶性的小鼠内皮抑素重组蛋白.     

硫氧还蛋白在宫颈癌中的表达及作用机制

目的 研究硫氧还蛋白（Trx1）在宫颈癌中的表达水平及其作用机制。方法 在3对宫颈癌和癌旁组织中,采用蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测Trx1蛋白的表达水平;同时在3对宫颈癌和癌旁组织中,通过逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测与宫颈癌密切相关的SND1分子的表达水平;用免疫组织化学(IHC)检测宫颈癌组织中Trx1蛋白的表达水平以及亚细胞定位;用免疫荧光（IF）实验检测蛋白Trx1和HLA-DR在宫颈癌细胞中的表达水平以及通过不同的荧光标记后分析两种蛋白的荧光共定位情况。结果 Trx1蛋白在宫颈癌组织中显著高表达;SND1分子在宫颈癌组织中显著高表达;免疫组化显示Trx1在主要定位于宫颈癌细胞的细胞质中并且表达显著增加;细胞内绿色荧光标记的Trx1和红色荧光标记的HLA-DR在荧光显微镜下存在共定位现象（均P＜0.05）。结论 Trx1蛋白在宫颈癌组织中显著高表达,并且与HLA-DR共定位于细胞质中。     

丙肝病毒感染对C反应蛋白表达的影响

目的：探讨丙型肝炎病毒(HCV)在体内外对C反应蛋白(CRP)表达的影响。方法收集武汉大学中南医院2015年1月至2016年2月HCV感染患者标本106例和健康体检者标本110例,免疫透射比浊法检测其血清CRP水平,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCV感染的Huh7.5.1细胞及其对照细胞中CRP mRNA的表达。结果 HCV感染患者血清CRP水平为(8.62±5.56) mg/L,显著高于健康体检者的(1.35±0.71) mg/L,差异有显著统计学意义(P<0.01);HCV感染的Huh7.5.1细胞中CRP mRNA的表达水平较对照细胞高,其CRP/β-actin灰度比值分别为0.31和1.5。结论 HCV感染能够上调肝细胞CRP的表达。     

丙型肝炎病毒的垂直传播研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)的垂直传播机制。方法选择6对抗-HCV与HCV RNA均阳性的母亲与胎儿,2对父亲抗-HCV与HCV RNA阳性、母亲阴性的胎儿为研究对象,检测父、母亲与子代HCV的感染标志,同时比较两代间所携HCV的基因型别与HCV C/E1区的序列同源性。结果6对母亲与胎儿HCV RNA阳性,基因型均一致,其中5对基因型别属Ⅱ型,1对属Ⅲ型。母亲与子代间所携HCV C/E1区的序列同源性极高,与其他母亲间、胎儿间的HCV同源性显著差异。2对父亲HCV RNA 阳性其胎儿未检测到HCV RNA。结论母亲与子代间存在出生前期的HCV的垂直传播。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对核转录因子stat3活性的调控作用

目的:探讨丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白对核转录因子stat3活性的调控作用。方法:将表达HCV核心蛋白的真核细胞表达质粒pcDNA3.1-core转染人源肝细胞系QSG7701,建立稳定表达HCV核心蛋白的细胞株QSG7701-core,利用免疫细胞化学、Western blot及凝胶电泳迁移实验（EMSA）等方法检测stat3的磷酸化及DNA结合活性。结果:在表达HCV核心蛋白的QSG7701细胞中,stat3的磷酸化水平明显低于空白质粒转染组和未转染组,而总stat3的表达水平3组无明显差别;核内磷酸化的stat3阳性信号明显减弱; stat3的DNA的结合活性明显低于空白质粒转染组和未转染组。结论:在人源永生化肝细胞系中HCV核心蛋白的表达可能具有抑制stat3的磷酸化和DNA结合活性的作用,从而抑制JAK/ stat3信号转导通路活化,这可能是HCV干扰素治疗效果不佳的原因之一。     

转染丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B对P53表达的影响

目的了解丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B对肝细胞内p5 3表达的影响 ,探讨其在肝癌发生中的作用 ,及其发生机制。方法使用脂质体介导法 ,转染丙型肝炎病毒非结构蛋白重组质粒PCXN2 NS4B及突变型p5 3基因重组质粒P5 3 CX2 2AN3进入Chang肝细胞内 ,并用G4 18筛选获得稳定表达细胞 ,分别采用细胞化学法检测p5 3表达率。设置空白对照组、空白载体组、转染NS4B组 ,转染p5 3组、共转染NS4B及p5 3组。结果空白对照组无p5 3表达 ,空白载体组及转染NS4B组呈弱阳性表达 ,转染p5 3组及共转染组呈阳性表达 ,与空白对照组、空白载体组及转染NS4B组比较有显著差异 ,P <0 .0 1。结论NS4B可能抑制突变型p5 3表达 ,也可能阻止其进入细胞核。     

丙型肝炎病毒核心蛋白抑制shRNA介导的RNA干扰作用

目的研究丙型肝炎病毒编码的蛋白对RNA干扰的抑制作用,筛选出有作用的RNA干扰抑制因子。方法构建丙型肝炎病毒不同蛋白质的真核表达质粒,加入萤火虫荧光素酶基因的RNA干扰体系,共转染HeLa细胞,检测萤火虫荧光素酶活性以观察RNA干扰效果的变化,筛选出有作用的RNA干扰抑制因子。在针对内源性GFP的RNA干扰体系中进一步确证该种抑制作用。利用共转染方法观察该蛋白抑制RNA干扰的剂量效应关系、在不同细胞系中的作用以及对siRNA介导的RNA干扰是否有相同的拮抗作用。结果加入核心蛋白后,萤火虫荧光素酶活性恢复到80%,与空白对照比较有显著性差异(P<0.05)。在绿色荧光蛋白RNA干扰体系中,核心蛋白使绿色荧光蛋白的表达强度明显增加。该种对抗RNA干扰的作用在HepG2、HEK293和HeLa细胞中均存在,且呈剂量依赖关系。在siRNA介导的RNA干扰体系中,加入核心蛋白后萤火虫荧光素酶活性无显著性变化(P>0.05)。结论核心蛋白能够对抗shRNA介导的RNA干扰作用,但不能对抗siRNA介导的RNA干扰作用,这种作用具有普遍性。核心蛋白对抗RNA干扰的作用可能有利于提高丙型肝炎病毒在宿主细胞内的生存能力并导致持续感染,亦可能在丙型肝炎病毒致病机制中发挥重要作用。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B基因酵母表达载体的构建及表达

目的：构建丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS4B基因的酵母细胞表达载体，为探索HCVNS4B在细胞内的相互作用蛋白奠定基础。方法：用多聚酶链反应（PCR）的方法在HCV全长质粒pBRTM／HCV-1为模板扩增HCVNS4B基因，克隆到pGEM-T载体中，双酶切后回收连接到酵母表达质粒pGBKT7中表达。提取酵母蛋白质，进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western免疫印迹分析。结果：成功构建HCVNS4B基因酵母表达载体，Western免疫印迹分析显示了HCVNS4B在酵母细胞中融合表达。表达产物在胞内存在，融合蛋白的相对分子量约为48ku左右。结论：HCVNS4B蛋白在酵母中表达成功。     

HCV不同编码区重组基因的蛋白表达丰度分析

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)不同基因片段重组载体在pET大肠杆菌系统中的蛋白表达情况.方法:分别将构建好的含有HCV C、NS3、NS5片段基因的pET重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中.通过卡那霉素抗性筛选转化子.经过IPTG诱导表达相应的重组蛋白,通过Ni-NTA凝胶亲和层析纯化各目标蛋白,并分别计算各重组蛋白的浓度.结果:分别诱导表达含有HCVC、NS3、NS5片段基因的重组蛋白,各蛋白的浓度分别为:3.557(1型NS3)、4.238(6型NS3)、2.087(NS5)、1.490g/L(C).结论:在相同条件下,诱导表达含有HCV不同基因片段的重组载体,所得到的蛋白丰度存在差异.     

Detection of hepatitis G virus RNA in hepatitis C patients and hepatitis C virus infected hemodialysis patients

AlthoughsensitiveandspecificimmunoassayandmolecularbiologicaltechniquesforthedetectionofthehepatitisA--Evirusesareavailable,theetiologyofasubstantialfractionofpost--transfusionandcommunity--acquiredhepatitiscasesremainsundefined[1],suggestingtheexistenceofadditionalcausativeagents.Anewhumanhepatitisviruswasisolatedbytwoindependentgroups.ThenewvirusisprovisionallydesignatedashepatitisGvirus(HGV)[ZJorGBvirusC(GBV~C)[3'4),whichwasthoughttobetheagentofpartofthenon--A--Ehepatitispatients.Fro…     

Allele polymorphisms of interleukin-lO and hepatitis B,C virus infection

Background Interleukin 10 （IL-10） is an important cytokine with anti-inflammatory, anti-immune and anti-fibrotic functions. This study aimed at evaluating the relationship between allele polymorphisms in the IL-10 promoter region and hepatitis B virus （HBV） or hepatitis C virus （HCV） infection. Methods The odds ratios （ORs） of IL-10 allele distributions in patients with HBV or HCV infection were analyzed against healthy controls. All the relevant studies in PubMed were identified, and poor qualified studies were excluded. The meta-analysis software REVMAN 4.2 was applied for investigating heterogeneity among individual studies and summarizing all the studies. The publication bias was also evaluated. Results This study demonstrated a significant association between the IL-10-592 A/C polymorphism and HBV infection in the Asian population under the overall effect size of allele A versus C. In our subgroup meta-analysis, we found a significant association of IL-10-592 A/C polymorphism to HCV infection susceptibility in Asian populations, although sensitivity analysis showed that the combined result was not associated with the worldwide population. Other IL-10 allele polymorphisms were not associated with HBV or HCV infection. Conclusion IL-10-592 A/C allele might be a risk factor for HBV or HCV in Asians but not in Europeans.     

原发性肝癌患者乙型肝炎病毒与丙型肝炎病毒感染标志物的分析

了解原发性肝癌患者乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的感染状况,并探讨原发性肝癌与乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的关系。用酶联免疫吸附法对８２例肝癌患者、８０例肿瘤对照组和１０３例健康对照组进行了乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染标志物的检测。