用荧光差异显示法分离新的肝细胞癌相关基因

目的 :寻找新的肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)相关基因。方法 :应用荧光 差异显示 (fluorescentdifferentialdisplay)技术分析人HCC、配对非癌肝、胎肝、正常肝等组织之间的基因差异表达 ,差异表达cDNA片段 ,经测序后 ,再用RNA狭缝杂交对部分差异片段在上述 4种组织中的表达进行验证。结果 :共得到差异表达cDNA片段 110条。经狭缝杂交筛选 ,获得了 4条阳性片段 ,未知cDNA片段L2和与人醛缩酶B 99.5 %同源的cDNA片段L7在部分HCC中特异性低表达 ,未知cDNA片段LC2 7和与人Nip3基因 99.4%同源的cDNA片段LC2 0在部分HCC中特异性高表达。结论 :确认了 4条HCC相关基因。其中L2和人醛缩酶B基因可能为阻抑HCC发生、发展的基因 ,而人Nip3基因和LC2 7可能为促进HCC发生、发展的基因。L2和LC2 7为目前未知的新基因。     

Generation and analysis of 113 adult stage Schistosoma japonic um (Chinese strain) expressed sequence tags

目的：运用表达序列标签（Expressed Sequence Tag,EST）技术快速、节约、有效地获得有关日本血吸虫（中国大陆株）成早表达基因的知识。方法：随机挑取日本血吸虫（中男大陆株）成虫cDNA库单个重组克隆进行部分测序以获得EST,获得的EST通过BLAST程序同EMBL寄生虫数据库和GeneBank数据库进行比较及同源性分析。结果：本研究共随机挑取日本血吸虫（中国大陆株）成虫cDNA库单个重组克隆314个,获得了132个有EST价值的序列,其中113个成功在GeneBank dbEST中登录。7.6％有EST价值的序列为日本血吸虫已知序列,4.5％为日本血吸虫同源序列。曼氏血吸虫或其他生物的同源序列占有EST价值的序列的23.5％,未知序列占57.6％。通过同源性分析,发现了几个令人感兴趣的基因,另外,大多数同源序列具有看家基因功能。结论：EST方法具有快速、有效地获得有关日本血吸虫（中国大陆株）成虫表达基因的知识的价值。     

新生大鼠大脑特异表达基因的初步筛选

目的 获得新生大鼠大脑特异表达的cDNA序列,筛选与新生大鼠大脑发育相关的未知的表达序列标签（expressed sequence tag,EST）。方法 以新生大鼠的大脑mＲＮＡ逆转录cDNA作为实验组（tester）,成年大鼠大脑mRNA逆转录cDNA作为对照组（driver）,经抑制消减杂交（suppression subtractive hybridization,SSH)方法消除同成年大鼠大脑相同的cDNA,并富集低丰度基因,克隆建立新生大鼠大脑特异表达的cDNA文库。结果 获得11个cDNA基因片段,同时将测序结果与Genebank进行同源性比较,发现5个首次在大鼠大脑中检测到的基因序列。结论 SSH是目前寻找差异表达基因的最为简便有效的方法,为寻找大鼠大脑发育差异表达基因提供了一些线索。     

人膀胱癌异质性表型相关基因的筛选与鉴定

目的 筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因。方法 以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料，采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段，构建cDNA文库；挑取克隆进行筛选，获得差异表达片段，测序并与Genbank比对，Northernblotting验证差异片段在两株细胞系的不同表达。结果 建立了两个消减文库，分别含有168和206个白色克隆，白色克隆含有约200～700bp的插入片段，对这些克隆进行筛选，获得35个差异表达基因片段，其中15个对应于细胞骨架蛋白、细胞代谢酶基因等已知基因，另外19个为未知功能基因，1个为新EST片段，注册Genbank（注册号为DR008207）。结论 抑制性消减杂交技术是筛选、克隆差异表达基因的有效手段；keratin7、Vimentin等细胞骨架蛋白的不同表达，与细胞形态的表型差异有关；DDH等代谢基因的不同。与细胞的药物敏感性差异相关；筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。     

精子细胞中基因表达谱的研究

目的 研究成熟精子细胞中的基因表达。方法 采用限制性显示PCR（RD－PCR）获得大量正常和异常精子细胞中基因表达序列标签（EST）并以表达谱图的方式显示出来。结果 通过RD－PCR技术得到大量正常精子细胞和异常精子细胞的EST及部分差异表达EST。结论 RD－PCDR技术既能针对已知基因又能针对未知基因，快速收集大量长度适宜、大小均一、适于芯片制备的EST，较通过cDNA文库等方法得到靶基因片段具有独特的优势。     

肝细胞癌候选相关基因IDD01的克隆与鉴定

目的鉴定表达序列标签(EST)在肝细胞癌(HCC)和癌旁非癌组织表达,扩增其全长.方法采用半定量RT-PCR方法,对21例HCC患者的癌组织和癌旁非癌组织EST mRNA的表达情况进行检测,通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增、测序获得全长,Blast检索GenBank.结果此EST在HCC癌组织中高表达,癌旁非癌组织中低表达(P＜0.05);序列全长为1 333 bp,含有完整开放阅读框(ORF)和Poly(A)尾;Blast检索为一功能未知基因.结论获得一个和HCC相关候选新基因,为进一步研究其功能打下基础.     

用差别显示法寻找细胞凋亡的相关基因

目的 寻找参与细胞凋亡的相关基因。方法 天花粉蛋白诱导Ｕ９３７细胞凋亡后,用锚定引物和随机引物进行差别显示ＰＣＲ,回收差异条带,进行ＲＮＡ点杂交。用细胞凋亡时高表达的差异片段筛选胎肝ｃＤＮＡ库,阳性克隆测序,并与凋亡细胞ＲＮＡ行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。结果 用细胞凋亡时高表达的差异片段筛选胎肝ｃＤＮＡ文库,获得一个１．４ｋｂ的ｃＤＮＡ克隆,该ｃＤＮＡ序列中部分碱基与人Ｂｒｕｔｏｎ酪氨酸激酶高度同源。     

人胎脑未知基因EST的发现

目的：在人胎儿脑组织cDNA中钓取并克隆新基因。方法：以RT－PCR方法用人FGF－19特异性引物从人胎脑cDNA中扩增到一大小约660bp的片段,并连入TA克隆载体测序,得到一个表达序列标签（EST）,输入GeneBank、Swissprot、dbEST等数据库中进行同源比较分析。结果：分析表明它是人胎儿脑组织未知基因EST,是一个663个碱基可编码220个氨基酸的开放读码框架。结论：在人胎儿脑组织cDNA中钓取并克隆一个人胎脑新基因EST。     

3号染色体短臂21-22区域63个新基因在鼻咽癌组织中的差异表达

目的寻找与鼻咽癌发病密切相关的未知基闪。方法对63个定位于3号染色体短臂21-22 D3S1609-D3S1295区域的单拷贝并代表未知基因的EST簇进行网上克隆，在获取基因大片段或全长cDNA序列的基础上，应用半定量逆转录．聚合酶链反应检测63个未知基因在4种鼻咽癌细胞铢、32例鼻咽部低分化鳞状细胞癌组织和16例鼻咽部慢性炎症组织中的表达状况。结果49个未知基因在鼻咽癌组织和鼻咽部慢性炎症组织问的表达水平无显著性差异；8个未知基因在鼻咽癌和鼻咽部慢性炎症组织中均不表达；2个未知基因在鼻咽癌组织中表达明显增强；4个未知基因在鼻咽癌组织中表达明显减弱，其中Hs．27566基因在鼻咽癌细胞和组织中均显著低表达或不表达。结论在染色体3p21-22D3S1609．D3S1295区域构建了63个未知基因在鼻咽癌的表达差异谱：筛选出6个在鼻咽癌组织中差异表达的未知基因。     

精子细胞中基因表达谱的研究

目的研究成熟精子细胞中的基因表达。方法采用限制性显示PCR(RD-PCR)获得大量正常和异常精子细胞中基因表达序列标签(EST)并以表达谱图的方式显示出来。结果通过RD-PCR技术得到大量正常精子细胞和异常精子细胞的EST及部分差异表达EST。结论RD-PCR技术既能针对已知基因又能针对未知基因,快速收集大量长度适宜、大小均一、适于芯片制备的EST,较通过cDNA文库等方法得到靶基因片段具有独特的优势。关键词:精子;基因表达谱;限制性差异显示-聚合酶链反应     

肝癌内高表达新基因的部分cDNA克隆

目的寻找人肝癌相关的基因。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，对表达序列标记（ＥｘｐｒｅｓｓｅｄＳｅ－ｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ，ＥＳＴ）基因克隆进行筛选，以得到的基因片段为探针，筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库。结果得到一个在肝癌内高表达的ＥＳＴ基因片段。进一步筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库，得到一命名为ＦＬ６的ｃＤ－ＮＡ克隆，核苷酸序列测定表明，ＦＬ６长度为１４６４个碱基，检索最新版本ＧｅｎｅＤａｔａｂａｓｅｓ（ＥＭＢＬ９６．６），未发现同源基因。实验结果还显示该基因在胎儿各组织内有不同的表达特性。结论该基因可能与细胞的增殖、癌变过程相关。     

人类肝脏细胞色素P-450 4F新基因的分离与表达

目的 从人类胎肝ｃＤＮＡ基因文库中分离细胞色素Ｐ－４５０４Ｆ新基因并在体外表达。方法 用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）方法从人类胎肝ＣＤＮＡ基因文库分离中全长ｃＤＮＡ克 ，用ＤＮＡ自动测序仪双方测序，体外酵经平细胞中表达蛋白质。结果 ＤＮＡ序列分析示ＣＤＮＡ全长１９８０碱基对，编码一个５２０个氨基酸的蛋白质，相对分子量５９７００，ｃＤＮＡ编码的氨基酸序列与人类白细胞的白三烯Ｂ４Ｗ－羟化酶不（ＣＹＰ４Ｆ３     

Differential screening captopril responsive genes in the heart of spontaneously hypertensive rats

Cedac h~ or remodeling is closely "dated tothe development Of caliliac failare in essenhal hnyrtension. There is abundant evidence that ~-angiotensinsystem Plays a crucial I'Ole in the cedac remedeling. Administlation of mpotenSin converting enZyTne (ACE) inhibitoIS can efficiendy prevent the cabal hypeltIDPhy inhUInan and experimental hypertenSion[". The ~ndousefficiency Of ACE ~tor in treatment of cedovasculardiseases was kllown as itS diVerse mechanisms such as inhibition of angio…     

人源性肝细胞生长刺激因子cDNA克隆和序列分析

目的 :阐明人源性肝细胞生长因子 (HDSSF)的本质 ,为进一步基因克隆奠定基础。方法 :以简并PCR扩增获取目的基因片断 ;杂交筛选人胎肝cDNA文库 ;末段终止法进行HDSSF核苷酸序列分析。结果 :简并PCR扩增出接近HDSSF分子量 6 0 0bp片断 ;人胎肝cDNA文库经初筛和复筛获得含有目的基因的单克隆噬斑 ;测定了HDSSF基因序列 ,其cDNA链为 74 8bp ,含有 5 94bp的完整开放读码框架和 5′及 3′末端非编码区序列。序列分析显示HDSSF应为一含有 1 98个氨基酸残基的新的促肝细胞生长物质。结论 :本研究成功获得目的基因HDSSF克隆 ,人HDSSF克隆成功为开展人源性HDSSF的重组产品研制奠定了基础     

大鼠肝再生中1个表达上调新基因的克隆表达及分析

目的　克隆肝再生相关新基因。方法　以抑制性消减杂交得到的1个EST为模板制备探针,运用Southern印迹方法,从构建的再生肝76 h c DNA文库中调取了它的c DNA全长,并利用基因原核表达技术,表达并纯化出它的蛋白产物,制作了该蛋白的兔源多抗,分别用所制该基因的探针,采用点杂交技术检测了0～76 h的再生肝材料。结果　获得了1个新基因全长,BL AST检索结果为1未知功能基因,暂时命名为liver regeneration relatedprotein(L RRP) ,大鼠基因组数据库中检索结果证实L RRP位于19q12且由4个外显子和3个内含子组成,递交Gen Bank获登录号为AY0 98917。表达纯化出了它的融合蛋白产物,并得到了它的多克隆抗体。点杂交结果也证实了基因在肝切除后76 h明显上调。结论　L RRP基因全长的克隆和它的高效多克隆抗体的获得为进一步研究该基因的功能奠定了基础。     

人源性肝细胞生长刺激因子cDNA克隆和序列分析

目的：阐明人源性肝细胞生长因子(HDSSF)的本质，为进一步基因克隆奠定基础。方法：以简并PCR扩增获取目的基因片断；杂交筛选人胎肝cDNA文库；末段终止法进行HDSSF核苷酸序列分析。结果：简并PCR扩增出接近HDSSF分子量600bp片断；人胎肝cDNA文库经初筛和复筛获得含有目的基因的单克隆噬斑；测定了HDSSF基因序列，其cDNA链为748bp，含有594bp的完整开放读码框架和5′及3′末端非编码区序列。序列分析显示HDSSF应为一含有198个氨基酸残基的新的促肝细胞生长物质。结论：本研究成功获得目的基因HDSSF克降．人HDSSF克隆成功为开展人源性HDSSF的重组产品研制奠定了基础。     

肝癌相关基因HCCA2的克隆及其与肝癌的相关性研究

目的　研究和克隆新的肝癌相关基因,探索肝癌发生的分子基础。方法　采用mRNA差异显示技术,分析肝细胞癌和癌旁组织间基因的差异表达情况,获得差异表达基因片断。用此基因片断作为探针,通过筛选胎盘cDNA文库,以获得该基因cDNA全长,并用Northern印迹杂交的方法,分析所获得的新基因在43对肝细胞癌、对应癌旁组织中的差异表达和在正常组织中的分布。结果　克隆了一个新的肝癌相关基因HCCA2的全长cDNA,其在人体正常组织中分布较为广泛,在正常肝组织中不表达。该基因在43对肝癌组织中表达的阳性率是79%(34/43)。它的表达与肝癌包膜的完整性、Ki-67蛋白的表达相关（P<0.01）。结论　肝癌差异表达新基因HCCA2可能与肝癌细胞的浸润和增殖能力有关。     

人血小板生成素的基因克隆及序列分析

目的为获得人血小板生成素全长cDNA克隆。方法用RT-PCR技术，以特异性寡核苷酸为上、下游引物自胎肝总RNA中扩增目的基因。结果PCR扩增产物克隆至pUCl8-T载体，获得重组质粒pUCT-TPOM。结论序列分析显示，获得的血小板生成素cDNA序列与国外文献一致。     

HP8: The cDNA clone of a novel member of C/EBP gene family

ＨＰ８：ＴｈｅｃＤＮＡｃｌｏｎｅｏｆａｎｏｖｅｌｍｅｍｂｅｒｏｆＣ／ＥＢＰｇｅｎｅｆａｍｉｌｙ￥（徐砺新）（万大方）（刘彦仿）（李宏年）（张萍萍）（隋延仿）（顾健人）ＸｕＬｉｘｉｎ，ＷａｎＤａｆａｎｇ，ＬｉｕＹａｎｆａｎｇ，ＬｉＨｏｎｇｎｉａｎ，Ｚｈ...