三尖杉酯碱通过下调Mcl-1蛋白诱导NB4细胞凋亡

目的:考察三尖杉酯碱(HT)对人急性早幼粒白血病(APL)细胞株NB4细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其杀伤白血病细胞的作用机制。方法:采用台盼兰染色法,细胞计数,考察HT对NB4细胞的生长抑制作用和细胞毒性作用;采用AO-EB荧光染色法和细胞形态学观察,考察HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;采用PI染色的流式细胞术,考察HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;采用Western Blotting技术,考察HT对NB4细胞凋亡相关蛋白的影响;采用siRNA干扰技术,沉默目的蛋白证明推论;提取APL患者血液样本,验证HT的凋亡诱导作用及作用机制。结果:HT能够呈剂量依赖和时间依赖地抑制NB4细胞生长并杀伤NB4细胞,HT处理72h后GI50为(32.0±2.5)nmol/L;HT能够呈现剂量依赖和时间依赖的诱导NB4细胞凋亡,HT处理6h后其诱导凋亡百分率为66%;HT诱导NB4细胞凋亡,引起PARP蛋白裂解,并不下调Bcl-2,不影响Bax和Bak的表达,但显著下调Mcl-1蛋白水平;siRNA沉默Mcl-1的蛋白表达可以显著提高HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;HT诱导APL患者白血病样本细胞凋亡,并下调Mcl-1蛋白。结论:HT通过抑制细胞生长和诱导细胞凋亡杀伤NB4细胞,HT可能通过下调Mcl-1蛋白发挥诱导NB4细胞凋亡的抗白血病作用。     

RNA干扰对NB4细胞凋亡的影响

目的:探讨靶向PML-RARαmRNA的siRNAs对急性早幼粒白血病NB4细胞株凋亡的影响。方法:体外培养人白血病细胞株NB4细胞,以不同浓度的siRNAs分别转染细胞,MTT法检测siR-NAs对NB4细胞的抑制作用,细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:siRNA转染NB4细胞后,对细胞的增殖有明显的抑制,siRNA1244的24hIC50为46.578nM;细胞形态学观察可见明显的细胞凋亡现象,流式细胞仪检测也证明转染siRNA后细胞凋亡率增加,转染50nM siRNA1244的NB4细胞,24h后凋亡率从4.29%增至59.35%。结论:siRNA1244诱导NB4细胞凋亡效果最为明显,并且与抑制细胞增殖的效应一致,具有抗急性早幼粒细胞白血病效应,它的作用分子机制很可能是下调PML-RARα基因的表达而抑制增殖并诱导凋亡。     

急性早幼粒细胞白血病的治疗进展

维甲酸和砷剂对急性早幼粒细胞白血病进行诱导分化和凋亡治疗的成功,成为分子靶向性治疗的典范。本文对急性早幼粒细白血病的治疗进展进行综述。     

三氯化锑对Raji细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的实验研究

目前,诱发细胞凋亡已成为治疗恶性肿瘤的新思路.近年来,我国学者利用砷剂对白血病细胞凋亡原理治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的有关研究取得了重大进展,三氧化二砷以及复方青黛片(主要成分为四硫化四砷)对APL治疗均有较高完全缓解率[1-2],因此细胞凋亡已成为白血病治疗的新思路,锑剂可用于黑热病的治疗[3],不同锑剂可诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡[4].     

柠檬醛抑制急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖并诱导其凋亡的作用

目的 探讨柠檬醛(citral)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4的生长抑制及诱导凋亡作用.方法 采用CCK-8比色法检测citrall对细胞生长的抑制作用;光学显微镜观察citral作用后细胞形态的变化;DNA Ladder检测药物作用后NB4-细胞有无断裂DNA;应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度citral作用后细胞凋亡的比例.结果 Citral对NB4细胞的生长抑制作用呈现时间和剂量依赖性.NB4细胞经10～20 μg/ml citral作用16 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征,光学显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体;流式细胞术结果 表明,细胞凋亡率在citral作用16 h时随着药物浓度的增加而逐步增高.结论 Citral抑制NB4细胞增殖呈时间和剂量依赖性,并诱导NB4细胞凋亡.     

维生素K2诱导白血病细胞凋亡的体外研究

目的：研究维生素K2（VK2）对白血病细胞生长及凋亡的诱导作用。方法：通过四唑盐比色法、镜下观察凋亡细胞形态及流式细胞仪检测细胞早期凋亡率研究维生素K2对急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4）及白血病患者骨髓单个核细胞（BMNC）的影响。结果：NB4细胞经VK2作用后增殖受到抑制。VK2作用NB4细胞72h后，部分细胞呈现凋亡细胞的特征。5、10、50μmol／LVK：作用NB4细胞72h后细胞早期凋亡率分别为8．06％、20．02％、29．60％，与对照组比较及两两比较差异均有极显著性（P〈0．01）。10μmol／LVK。作用白血病细胞及正常对照BMNC48h后，正常人及淋系白血病患者BMNC细胞早期凋亡率较空白对照组无明显增高（P〉0．05），慢性髓系白血病患者BMNC早期凋亡率较空白对照组增高（P〈0．05），急性髓系白血病患者BMNC早期凋亡率较空白对照组明显增高（P〈0．01）。结论：VK2对白血病有生长抑制作用，可选择性诱导髓系白血病细胞凋亡，且呈剂量依赖性。     

三氧化二砷与维甲酸联合作用在NB4,MR2细胞系中的体外研究

目的：观察三氧化二砷(As2O3)和全反式维甲酸(ATRA)联合作用对NB4，MR2不同亚型急性早幼粒白血病细胞株，诱导分化、增殖、凋亡的影响。方法:以NB4，MR2为体外模型，利用细胞生长曲线、台盼蓝拒染法、MTT法、NBT、细胞形态Wrigh‘s-Gimesa染色，观察细胞增殖、分化、凋亡的相互作用。结果：NB4细胞株：0．5μmol/L As2O3与10^-6mol/L ATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现拮抗，而0．5μmol/L As2O3与(10^-7--10^-8mol/L)ATRA呈现协同；MR2细胞株：0．5μmol/L As2O3与10^-6mol/L ATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现协同。结论：As2O3与全反式维甲酸协同效应呈现不同细胞、剂量的特异性，MR2细胞株协同效应明显强于NB4细胞株。     

维甲酸对多种肿瘤细胞生长影响的实验研究

目的 应用全反式维甲酸(ATRA)作用前列腺癌DU—145细胞、早幼粒白血病HL—60细胞和乳腺腺癌MCF—7细胞，观察维甲酸对多种肿瘤细胞生长的影响。方法 应用全反式维甲酸作用HL—60细胞、DU—145细胞和MCF—7细胞，分别以光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态及超微结构的改变，并用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果 全反式维甲酸作用前列腺癌DU—145细胞、早幼粒白血病HL—60细胞和乳腺腺癌MCF—7细胞后，导致肿瘤细胞生长减缓，肿瘤细胞超微结构出现细胞核固缩、核碎裂、染色质凝集于核膜周边等细胞凋亡的典型形态学改变，流式细胞仪检测肿瘤细胞出现亚二倍体“凋亡小峰”。结论 全反式维甲酸可以诱导多种肿瘤细胞产生凋亡，凋亡的产生与药物的浓度及作用时间密切相关。     

尿多酸肽诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的实验研究

目的探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞NB4及耐维甲酸的NB4-R1细胞的凋亡作用。方法以NB4和NB4-R1细胞作为体外模型,观察CDA-Ⅱ作用前后细胞的形态和生长增殖情况。流式细胞术检测细胞凋亡特征。Western印迹法检测凋亡调控蛋白蛋白激酶C(PKCδ)及Caspase-3的水解活化。结果 CDA-Ⅱ作用于NB4和NB4-R1细胞后,细胞生长受到抑制;形态上观察到分化和凋亡现象;Annexin V-PI法发现,用药24 h后NB4和NB4-R1细胞凋亡比例分别上升至(58.7±3.1)%和(87.8±0.5)%;PKCδ和Caspase-3水解活化。结论 CDA-Ⅱ作用于细胞后,水解活化Caspase-3,裂解PKCδ生成活性片段,诱导细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA与三氧化二砷协同诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究

目的 研究丹参酮ⅡA(TanⅡ A)与三氧化二砷(ATO)联合对急性早幼粒白血病细胞(NIM)分化以及凋亡有无协同作用.方法 用TanⅡA联合ATO作用于NB4细胞.观察药物作用不同时间段的活细胞数,计算实验各时段的生长抑制率;Giemsa染色与透射电镜观察细胞形态学变化;流式细胞术Annexin V法测定细胞凋亡率,并进行细胞周期和细胞凋亡分析.结果 ①TanⅡ A与ATO联合对NB4细胞生长有协同抑制作用,这种抑制作用随作用时间及联合ATO浓度的增加而增加.1.0 μg/mL TanⅡA分别与0.125、0.25以及0.5 μmol/LATO联合作用5 d对NB4细胞的生长抑制率均强于相应浓度ATO单独作用对NB4细胞的生长抑制率(P＜0.01);②TanⅡA与ATO联合对诱导NB4细胞凋亡有协同作用.1.0 μg/mL TanⅡA分别与0.5 μmol/L和1.0μmol/L ATO联合作用NB4细胞1 d,NB4细胞的凋亡率分别比相应ATO单独用药组的促凋亡效应增强(P＜0.05),TanⅡA与0.5 μmol/L ATO联合的促凋亡协同效应持续3 d;③TanⅡA与ATO联合对NB4细胞增殖有协同抑制作用,使G_0/G_1期细胞增多,S期细胞减少.1.0 μg/mL TanⅡA分别与0.125、0.25和0.5 μmol/L ATO联合作用NB4细胞3 d的增殖指数(PI)均低于相应单药的PI值(P＜0.05).结论 TanⅡA联合ATO对诱导NB4细胞凋亡有明显的协同作用,这种协同作用和联合使用的ATO的浓度密切相关;TanⅡA联合ATO对NB4细胞诱导分化未显示明显的协同作用.     

In vitro study on arsenic sulfide(realgar)-induced apoptosis of retinoic acid susceptible or resistant acute promyelocytic leukemia cell lines

Objective: To further understand the possible mechanisms of arsenic sulfide (realgar) in the treatment of acute promyelocytic leukemia (APL). Methods: All-trans retinoic acid (ATRA)-susceptible APL cell line (NB4 cells) and ATRA-resistant APL cell line (MR2 subclone) were used as models in vitro. At various times after incubated with various concentrations of realgar, NB4 and MR2 cells were observed by cell viability , cell proliferation and cell morphology; cell cycle and the expression of Annexin V were assayed by flow cytometry. Results: Cell viability and proliferation of NB4 and MR2 cells were inhibited after the treatment, to some extent, in a dose and time dependent manner. 177 - 711g/L of realgar treated NB4 and MR2 cell presented morphologically some features of apoptotic cells such as intact cell membrane, chromatin condensation and nuclear fragmentation, apoptosis body could be found by electron microscopy as well. Sub-Gl cells and cell cycle arrest were observed by flow cytometry. The proport     

硫化砷对急性早幼粒白血病细胞PNAS-2基因表达的影响

目的探讨硫化砷诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞凋亡的分子机制。方法应用基因表达谱芯片、RT-PCR技术，检测硫化砷作用前后NB4细胞、APL原代细胞PNAS-2基因表达的变化。结果基因表达谱芯片杂交显示，硫化砷作用于NB4细胞后，PNAS-2基因表达下调；RT-PCR结果发现，NB4细胞在硫化砷作用后PNAS-2表达有明显下调，并呈时间依赖性；APL原代细胞经硫化砷作用后，PNAS-2表达也呈下降趋势。结论硫化砷能够下调PNAS-2基因在NB4细胞株和APL原代细胞中的表达，推测PNAS-2基因可能是硫化砷治疗APL的靶基因之一。     

c-Myb在急性早幼粒细胞白血病发病过程中的作用

目的探讨转录因子c—Myb在急性早幼粒细胞白血病（APL）发病过程中的作用。方法通过分析患者的表达谱数据,比较在正常早幼粒细胞和APL细胞中c—Myb的表达水平;然后通过全反式维甲酸（ATRA）诱导NB4细胞分化和PR9加ZnSO4模拟APL发病,研究c—Myb是否参与APL发病过程;利用RNAi干扰c—Myb表达的技术,明确c—Myb对逆转APL的作用。结果在APL细胞中c—Myb的表达水平高于正常早幼粒细胞;c—Myb的表达随着ATRA的诱导分化逐渐下降,在ZnSO。诱导PR9模拟APL发病的过程中逐渐上升;c—Myb的敲除可以促进NB4细胞的分化,使NB4细胞的CD11b阳性率增加约20％。结论APL细胞中c—Myb的表达高于正常早幼粒细胞,它对APL的发病有着重要的作用,对其选择性敲除可以部分逆转APL细胞的分化阻滞。     

Berbamine selectively induces apoptosis of human acute promyelocytic leukemia cells via survivin-mediated pathway

Background Currently, resistance and relapse are still major problems in acute promyelocytic leukemia （APL） cases. Thus, new agents that override the resistance are crucial to the development of curative therapies for APL. In this study, we investigated the effects of berbamine on the proliferation of APL cell line NB4 and its possible mechanisms. Methods NB4 cells were treated with berbamine at different concentrations （0-64 μg/ml） for 72 hours. MTT assay was used to determine proliferation inhibition of NB4 cells. Cell apoptosis was evaluated by both flow cytometry （FCM） and morphological examination. PML/RAR-α and survivin mRNAs were measured by nested-RT-PCR and RT-PCR, respectively. Activated-caspase 3 was determined by FCM. Results Berbamine greatly inhibited the proliferation of NB4 cells in dose- and time-dependent manners, and its IC50 value was 3.86 μg/ml at 48 hours. Both morphological observations and FCM results showed that berbamine induced apoptosis of NB4 cells with concomitant increase of activated caspase-3 and decrease of survivin mRNA. After treatment with berbamine at 8 μg/ml for 48 hours, the percentage of apoptotic cells increased from 2.83% to 58.44% （P〈0.01）, and the percentage of cells with activated-caspase 3 elevated from 2.06% to 70.89% （P〈0.01）, whereas, level of survivin mRNA was reduced to 38.24% of control （P〈0.01）. However, no significant change was observed in PML/RAR-α mRNA. Conclusions Berbamine induces caspase-3-dependent apoptosis of leukemia NB4 cells via survivin-mediated pathway, suggesting that berbamine may be a novel potential agent against APL with a mechanism distinct from that of all-trans retinoic acid （ATRA） and arsenic trioxide （ATO）.     

Combination of all-trans retinoic acid with butyric acid and its prodrugs markedly enhancing differentiation of human acute promyelocytic leukemia NB4 cells

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｕｓｅＮＢ４,ａｎａｕｔｈｅｎｔｉｃｈｕｍａｎａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｉｎｅ,ａｓｗｅｌａｓｔｈｅｍａｒｏｗｃｅｌｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋ...     

鼠尾草酸联合1,25-二羟基维生素D3对NB4细胞的影响

目的 研究鼠尾草酸(carnosic acid,CA)与1,25-二羟基维生素D3[1,25( OH)2D3]联合应用对NB4细胞生长及凋亡、分化的诱导作用.方法 通过四氮唑蓝(MTT)法观察细胞的生长,光学显微镜观察细胞形态,应用流式细胞仪测定细胞周期、凋亡率及CD14的表达,观察联合应用鼠尾草酸与低浓度1,25(O...     

蟾蜍灵增强全反式维甲酸对 NB4细胞的诱导分化作用

目的研究蟾蜍灵与全反式维甲酸(ATRA)联合对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞的诱导分化作用。方法细胞存活率测定采用锥虫蓝拒染法,诱导分化采用形态学分析、四唑氮蓝(NBT)还原试验及细胞分化抗原CD11b的流式细胞仪解析。结果蟾蜍灵5 nmol/L与ATRA30 nmol/L联合明显诱导NB4细胞向成熟粒细胞分化、联合应用较单独应用ATRA时NBT还原率增加了59.7%及CD11b表达增加了22.4%。结论蟾蜍灵与ATRA联合应用可显著增强ATRA对NB4细胞的诱导分化作用。     

Modulation of Gene Expression Networks underlying Realgar-Induced Differentiation of Acute Promyelocytic Leukemia Cells

Objective: To elucidate the molecular mechanism of the differentiation of acute promyelocytic leukemia (APL) cell line NB4 induced by realgar. Methods: The response of NB4 cell to realgar was explored with a cDNA microarray representing 1003 different human genes. Results: The analysis of gene expression profiles indicated that 8 genes were up-regulated and 33 genes were down-regulated 48 hrs after realgar treatment. Among the 8 up-regulated genes, 2 genes were involved in ubiquitin proteasome degradation pathway. Some genes related to RNA processing, protein synthesis and signal transduction were down-regulated. Conclusion: The ubiquitin-proteasome degradation pathway may play an important role in the degradation of PML/RAR α fusion protein and the differentiation of NB4 cells.     

丹参酮ⅡA与全反式维甲酸协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株的分化和凋亡

目的研究丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA, TanⅡA)联合全反式维甲酸(ATRA)对早幼粒细胞白血病细胞(NB4)诱导分化及凋亡的协同效应.方法0.5 μg/ml TanⅡA分别联合0.5 μg/ml、0.25 μg/ml和0.125 μg/ml ATRA作用NB4细胞5 d,观察NB4细胞形态学变化,检测硝基蓝四氮唑(NBT)还原能力;流式细胞术检测CD11b,CD33的表达,并进行细胞周期和细胞凋亡分析.结果TanⅡA联合ATRA可协同诱导NB4细胞分化和凋亡.联合作用组第5 d细胞生长抑制率均超过80%;90%左右的NB4细胞分化,其中杆状和分叶核细胞比例超过65%;NBT还原能力显著升高.流式细胞术分析显示CD11b表达升高,CD33表达降低;G0/G1期细胞增加,有明显的细胞凋亡,与TanⅡA或ATRA单独作用组相比均有显著性差异(P<0.01).TanⅡA与ATRA(0.125 μg/ml～0.5 μg/ml)联合对NB4细胞的影响没有明显的浓度依赖倾向.结论TanⅡA联合ATRA对NB4细胞诱导分化和凋亡有协同作用;在ATRA一定浓度范围内,这种协同作用无ATRA剂量依赖性.