血红素氧合酶-2在糖尿病大鼠结肠组织中的表达及意义

目的：分析血红素氧合酶-2（HO-2）在糖尿病大鼠结肠组织中的表达。探讨一氧化碳（CO）与糖尿病结肠功能紊乱发生发展的关系。方法：应用免疫组化、RT-PCR法检测10例糖尿病大鼠和10例正常大鼠结肠组织中血红紊氧合酶-2的表达。结果：免疫组化结果显示血红素氧合酶．2在糖尿病组和正常组大鼠结肠组织中均有表达．糖尿病大鼠结肠组织中表达较正常大鼠减少（P〈0．05）；RT-PCR结果显示血红素氧合酶-2 mRNA在糖尿病大鼠近端、远端结肠表达均减少（P〈0．05）。结论：血红紊氧合酶-2及其mRNA在糖尿病大鼠结肠中的分布及表达异常．提示胃肠道组织中的一氧化碳可能在糖尿病结肠功能紊乱的发病机制中有一定作用。     

Cajal间质细胞和P物质在糖尿病大鼠结肠组织中的改变

目的：分析糖尿病大鼠结肠组织中Cajal间质细胞和P物质的分布及表达变化,探讨Cajal间质细胞和P物质在糖尿病结肠功能紊乱发病中的作用.方法：建立糖尿病大鼠模型,免疫组化检测Cajal间质细胞和P物质在糖尿病大鼠结肠组织内的分布和表达.结果：Cajal间质细胞和P物质主要分布在大鼠近端和远端结肠的肌间神经丛,糖尿病大鼠结肠组织内Cajal间质细胞和P物质的表达较正常大鼠均明显减少（P＜0.05）.结论：糖尿病大鼠结肠组织内Cajal间质细胞和P物质表达减少,推测与糖尿病大鼠结肠功能紊乱有一定相关性.     

雌激素受体β在大鼠结肠的表达及其对Cajal间质细胞、结肠肌电影响的实验研究

目的探讨雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)在大鼠结肠的表达及其对结肠肌电、Cajal间质细胞(interstitialcells of Cajal,ICC)的影响。方法免疫组化观察ERβ在正常大鼠结肠的表达和分布。20只大鼠随机分为两组,实验组给予他莫昔芬(tamoxifen,TAM)灌胃,3个月后测定结肠慢波频率及振幅;免疫荧光染色观察肠壁ICC数目的变化。结果ERβ在大鼠结肠黏膜、黏膜下及肌间神经丛表达。TAM拮抗雌激素后,大鼠结肠慢波频率及振幅均明显降低(P<0.05),肌间神经丛及黏膜下神经丛ICC数目较对照组明显减少(P<0.01)。结论ERβ信号通路可能通过影响ICC,从而导致结肠动力减弱。     

高糖对体外培养的Cajal间质细胞nNOS?HO-2表达的影响

目的:观察高糖对体外培养的Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)的nNOS、HO-2表达的影响,探讨NO、CO在糖尿病胃肠功能紊乱的细胞机制.方法:以小鼠小肠为ICC的组织来源,应用酶解法分离、培养ICC.实验分组:正常对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L);甘露醇渗透压对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L、甘露醇浓度为27.5 mmol/L);高糖组(葡萄糖浓度为33 mmoI/L).通过倒置显微镜观察细胞形态、MTT比色法检测细胞活力、用Western-Blot方法对细胞内的nNOS、HO-2的表达进行分析.结果:与正常组比较,加入葡萄糖后的ICC细胞变圆,突起变短,与周围的邻近细胞网络不明显、细胞活力也下降,而加入甘露醇后的ICC基本没有变化.免疫印迹法检测到甘露醇组的nNOS、HO-2的表达与正常组无明显差异,而高糖组的nNOS、HO-2与正常组比较其表达明显下降.结论:高糖改变了体外培养的ICC的细胞形态、降低了ICC的细胞活力及其细胞内nNOS、HO-2的表达,提示胃肠道组织中的ICC的形态、活力及其胞内的NO、CO可能涉及糖尿病胃肠功能紊乱的发病机制.     

麻枳化浊方对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦Cajal间质细胞的影响

目的:观察自拟麻枳化浊方对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃窦Cajal间质细胞(ICC)分布数量的影响。方法:将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、西药组、联合组,模型组和正常组分别给予同等体积的生理盐水灌胃,中药组给予麻枳化浊方、西药组给予西沙必利、联合组给予西沙必利加麻枳化浊方进行干预治疗;在光镜下观察大鼠肠道组织的病理改变,应用免疫组化染色法检测各组大鼠胃窦组织中c-kit抗体阳性ICC细胞的表达及分布特点,并使用FR-980复日生物电泳图像分析系统测定大鼠胃窦c-kit抗体免疫反应阳性产物的平均光密度(A)值。结果:中药组、西药组及联合组大鼠小肠推进率较模型组均明显增加(P0.05);模型组大鼠胃窦部c-kit抗体平均光密度值减少,表达减弱(P0.05),中药组、西药组与联合组尚可见着色较深的c-kit阳性细胞,其平均光密度值较模型组升高(P0.05),且中药组及联合组平均光密度值均明显高于西药组(P0.05)。结论:麻枳化浊方能够降低DGP大鼠血糖水平,提高其小肠推进率,可能为其治疗DGP的作用机制之一;麻枳化浊方能够增加DGP大鼠胃窦部c-kit阳性细胞的平均光密度,可能通过调控其胃窦部Cajal ICC的数量,促进大鼠的胃排空。     

诱导型血红素氧合酶-1在溃疡性结肠炎结肠中的表达

目的研究诱导型血红素氧合酶-1(HO-1)在活动性溃疡性结肠炎(UC)患者结肠中的表达,探讨气体信使分子一氧化碳(CO)在UC发病机制中的可能作用.方法采用免疫组织化学SABC染色法,在符合临床和病理诊断标准的33例UC患者肠镜活检标本中分别检测结肠组织的HO-1的阳性细胞,并设立正常对照组.结果HO-1主要表达在结肠黏膜上皮细胞,UC患者表达明显强于对照组(P＜0.01).结论HO-1在UC患者结肠中的异常表达表明气信使分子CO在UC发病机制中可能起重要作用.     

胆碱能受体在大鼠膀胱ICC样细胞的表达

目的 探讨胆碱能受体(musearinie acetylcholine receptors,M受体)各亚型在大鼠膀胱ICC样细胞(interstitialcells of Cajal,ICC)的表达及意义.方法 制备SD大鼠膀胱组织铺片,通过免疫荧法检测大鼠膀胱组织内ICC样细胞分布情况,并进一步采用免疫荧光双标法(c-kit抗体及M受体业型抗体)检测膀胱ICC样细胞上M受体亚型的表达.结果 在大鼠膀胱肌层及肌间发现膀胱ICC样细胞呈散在或者彼此连接的分布,M受体的5种亚型中,ICC样细胞上不表达M_1、M_4、M_5受体亚型,表达M_2和M_3两种受体亚型.结论 胆碱能神经可能通过激活膀胱ICC样细胞上胆碱能受体来调节膀胱功能.     

溃疡性结肠炎小鼠结肠Cajal间质细胞及干细胞因子的变化

目的:探讨结肠Cajal间质细胞(ICC)、干细胞因子(SCF)在溃疡性结肠炎(UC)发病中的作用.方法:将BALB/c小鼠随机分为正常对照组(n=8)和UC组(n=24),于造模后1、4、7天分别处死UC组8只小鼠,取远端结肠,用Western blot方法检测SCF的表达;免疫组化检测结肠ICC的变化,并进行结肠组织学评分.结果:结肠组织学评分在7天达最高值(P＜0.05).与正常小鼠比较,UC小鼠结肠肌间ICC表达明显减少(P＜0.05),结肠SCF的表达也显著减少(P＜0.01),SCF与ICC呈正相关(UC 4天时,r=0.862,P=0.027;UC 7天时,r=0.948,P=0.004).结论:UC小鼠远端结肠组织内SCF表达下降,伴随ICC数量减少,提示UC病变可能与SCF/Kit系统下调有一定的相关性.     

糖尿病大鼠胃窦SCF-Kit信号改变及其对Cajal间质细胞的影响

目的 研究糖尿病胃轻瘫大鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)的形态学改变,测定干细胞因子(stem cellfactor,SCF)及Kit含量变化,探讨糖尿病大鼠胃窦SCF-Kit信号在Cajal间质细胞受损中作用.方法 用链尿佐菌素建立大鼠糖尿病模型,3个月后采用美蓝方法测定胃排空速率,对胃窦组织进行透射电镜观察Cajal间质细胞超微结构变化,采用RT-PCR方法测定胃窦平滑肌组织SCF mRNA的表达,Western blot法检测胃窦平滑肌组织c-kit蛋白变化.结果 与正常大鼠相比,糖尿病大鼠胃排空明显延迟,胃Cajal间质细胞与其他细胞间的缝隙连接显著减少、结构破坏、连接松散;细胞器变性、减少;胞质广泛溶解;核周间隙增宽.糖尿病大鼠胃窦平滑肌组织SCF mRNA以及c-kit蛋白表达均明显低于正常大鼠.结论 SCF-Kit系统受损与糖尿病大鼠胃窦Cajal间质细胞变性、数量减少以及网络结构破坏有关,最终导致胃运动障碍.     

女性激素与结肠动力学的相关性

目的 初步研究女性激素与结肠动力学的相关性.方法 实验组大鼠分别每日皮下注射雌、孕激素,记录大鼠粪便重量及粒数;利用炭沫推进试验比较实验组与对照组大鼠结肠传输功能;利用免疫组化技术比较各组大鼠结肠组织中Cajal间质细胞(ICC)数量.结果 孕激素组较对照组24h粪便重量减轻(P<0.05),大便粒数减少(P<0.05),结肠推进率明显延长(P<0.05),结肠组织中Cajal间质细胞数量减少(P<0.05);雌激素组与对照组差别不明显(P＞0.05);孕激素组与雌激素组间各指标差别明显(P<0.05).结论 孕激素可引起结肠动力学改变,推测孕激素可能与女性便秘的发生相关.     

糖尿病结肠动力障碍大鼠远端结肠平滑肌细胞bax、bcl-2及caspase-3的表达

目的:探讨糖尿病(DM)结肠动力障碍大鼠远端结肠平滑肌细胞凋亡基因的表达。方法:雄性SD大鼠18只应用链脲佐菌素40mg/kg尾静脉注射后成功建立DM结肠动力障碍大鼠模型,分为模型6周和10周组;另18只分为正常对照6周和10周组,各组9只大鼠。应用实时荧光定量PCR检测各组大鼠远端结肠平滑肌细胞的bax、bcl-2和caspase-3mRNA表达,采用免疫组化SP法检测其蛋白的表达。结果:不同组别和作用时间各组大鼠远端结肠平滑肌细胞bax、bcl-2、caspase-3mRNA和蛋白的表达差异均有统计学意义(P均<0.001),模型组与同一时间点正常对照组以及模型10周组与6周组大鼠比较,远端结肠平滑肌细胞bax和caspase-3mRNA和蛋白的表达增强,bcl-2mRNA和蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:远端结肠平滑肌细胞凋亡基因bax、bcl-2及caspase-3表达的改变可能是DM大鼠结肠动力障碍发病机制之一。     

一氧化氮对糖尿病小鼠近端结肠动力有抑制作用

目的:研究一氧化氮(NO)对糖尿病小鼠近端结肠收缩功能的作用.方法:制备C57小鼠糖尿病(DM)模型,用硝酸还原酶法检测近端结肠组织NO水平:用免疫印迹法分析近端结肠组织nNOS和iNOS的含量;用免疫荧光染色观察近端结肠中nNOS的分布:用MD-2000生物信号采集分析系统观察NO前体L-精氨酸(L-Arg)、nNOS的抑制剂7-硝基吲唑(7-NI)、iNOS的抑制剂氨基胍(AG)对糖尿病小鼠近端结肠离体肌条肌张力的影响.结果:nNOS主要分布在近端结肠肌层和黏膜下层,DM组nNOS蛋白和NO水平与正常组比较显著升高,未发现有iNOS蛋白表达.DM组小鼠近端结肠肌张力较正常组降低,但收缩频率无改变.L-Arg可显著抑制正常组和DM组小鼠近端结肠肌的张力,7-NI可显著增强正常组和DM组小鼠近端结肠的肌张力,而加入AG前后结肠张力均无显著变化.所有药物对结肠收缩频率无影响.结论:NO抑制结肠平滑肌收缩能力可能是糖尿病结肠动力功能障碍的重要原因,其作用与nNOS在近端结肠表达增多相关.     

褐藻素通过调控Nrf2/Keap1通路缓解糖尿病大鼠心肌肥大

目的 探索褐藻素（FX）对糖尿病心肌病的保护效应和作用机制。方法 腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,进行分组：糖尿病组（DM）、褐藻素干预糖尿病组（DM+FX）和二甲双胍干预糖尿病组（DM+Met）,另取正常大鼠给予正常喂养作为正常组（Con）。造模成功后连续12周每日灌胃给药,褐藻素组每日给予200 mg/kg褐藻素灌胃,二甲双胍组每日给予230 mg/kg灌胃,糖尿病组同步灌胃生理盐水。HE染色观察各组大鼠心脏细胞肥大情况;Western blot法检测大鼠心脏中纤维化蛋白TGF-β1和FN蛋白表达水平。H9C2细胞分为3组：正常糖组（NG,5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG,45 mmol/L葡萄糖）和褐藻素干预高糖组（HG+1 μmol/L FX）。FITC标记的鬼笔环肽检测大鼠心肌细胞H9C2表面积变化;qRT-PCR法测定各组细胞肥大因子ANP、BNP和β-MHC基因表达变化;Western blot法检测各组大鼠心脏组织和H9C2细胞中Nrf2、Keap1、HO-1、SOD1蛋白表达水平;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化。结果 褐藻素改善糖尿病大鼠心肌纤维化和心肌细胞肥大,同时上调心脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达,抑制Keap1蛋白表达（P<0.05）。褐藻素可抑制高糖诱导H9C2心肌细胞表面积增加,降低ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平（P<0.05）。褐藻素可促进高糖诱导的H9C2细胞中Nrf2入核,上调下游靶蛋白SOD1和HO-1蛋白表达（P<0.05）来增强细胞抗氧化能力,降低细胞内活性氧的水平。结论 褐藻素具有良好的抗糖尿病心肌纤维化和心肌细胞肥大作用,同时上调Nrf2信号通路并促进下游抗氧化蛋白SOD1和HO-1的表达,降低活性氧水平。     

2型糖尿病大鼠大脑皮质HO-1表达的变化

目的:探讨2型糖尿病大鼠大脑皮质血红素加氧酶1(HO-1)表达的变化.方法:20只SD大鼠随机分为正常埘照组和糖尿病模型组,每组10只.正常对照组大鼠不做任何处理;糖尿病模型组大鼠采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,一周后以血糖≥16.7mmol/L作为成模标准.HE染色观察大脑皮质神经细胞的变化,分别采...     

血清心钠素测定与诊断糖尿病心肌病可行性的研究

目的: 探讨血清心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)作为糖尿病心肌病(DC)早期诊断指标的可行性.方法: 采用SD大鼠作为实验对象,腹腔注射链尿佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病大鼠模型.实验前及建成糖尿病大鼠模型后8周分别测定糖尿病组和对照组大鼠的下列参数:病理切片观察心肌形态学改变,超声心动图观察大鼠左室舒张功能的变化,酶联免疫测定法(ELISA)测定大鼠血清ANP水平.结果: 与对照组大鼠比较,糖尿病组大鼠心肌细胞肿胀断裂,纤维组织增生;左室舒张功能下降;血清ANP含量明显增加(0.01).结论: ANP可作为DC早期诊断的一项参考指标.     

金雀异黄酮对糖尿病大鼠心肌Nrf2/HO-1通路的影响

目的：观察金雀异黄酮(genistein,Gen)对糖尿病大鼠心肌组织核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧化酶1(heme oxygenase-1,HO-1)通路的影响。 方法：将32只雄性SD大鼠随机分为 4组：正常对照(NC)组、糖尿病对照(DM)组、低剂量Gen治疗(L-Gen)组和高剂量Gen治疗(H-Gen)组(n=8)。采用腹 腔注射55 mg/kg链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,L-Gen组和H-Gen组大鼠分别灌胃给予Gen溶液10 和50 mg/kg。8周后,测定各组大鼠左心室动力学指标和空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)水平;测定心肌组织丙 二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)水平;采用透射电镜观察心肌超微结构变化;RT-PCR检测心肌组织 HO-1 mRNA表达,蛋白质印迹法检测Nrf2和HO-1蛋白表达。结果：与NC组比较,DM组左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP),左心室内压最大上升/下降速率(maximal rise/fall rate of left ventricular pressure,±dp/dtmax), GSH-Px,SOD和CAT水平明显降低(均P<0.01);左心室舒张末期压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP), FBG和MDA水平明显增高(均P<0.01);心肌超微结构损伤明显,心肌组织Nrf2和HO-1表达明显降低(均P<0.01)。与 DM组比较,L-Gen组FBG无显著差异,±dp/dtmax和LVSP明显升高(均P<0.05),LVEDP和MDA水平明显下降(P<0.05或 P<0.01),GSH-Px,SOD和CAT活性明显增高(P<0.05或P<0.01),心肌超微结构损伤减轻,Nrf2和HO-1表达升高(均 P<0.01);H-Gen组上述指标改善更明显(P<0.05或P<0.01)。 结论：金雀异黄酮可减轻糖尿病大鼠心肌氧化应激损伤, 其机制与调节心肌Nrf2/HO-1通路,提高抗氧化酶活性相关。