大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎CD4+/CD8+改变及细胞间黏附分子1表达的意义

目的探讨急性实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠外周血CD4 /CD8 和脑及脊髓ICAM-1的表达及意义。方法采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂注射诱发大鼠EAE模型,分别注射生理盐水/福氏佐剂、左旋咪唑作为对照,注射后16d时取材,采用Loyez氏髓鞘染色法和免疫组化法观察脑和脊髓髓鞘改变及ICAM-1表达,流式细胞仪检测外周血CD4 /CD8 改变,并与对照组比较。结果正常组、NS/CFA组和LMS对照组髓鞘结构未见异常;模型组髓鞘染色见髓鞘结构疏松、部分髓鞘脱失。EAE大鼠脑和脊髓中I-CAM-1主要表达于血管内皮细胞,其面密度为(5.08!0.39),显著高于对照组(P<0.05)。结论EAE大鼠存在外周血CD4 /CD8 比值及脑和脊髓ICAM-1表达异常,CD4 /CD8 比值增高和ICAM-1表达异常在EAE的发生过程中发挥重要作用。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的研究

目的 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽（MOG35-55）诱发实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型。研究EAE的病理变化，探讨多发性硬化（MS）发病机制。方法 应用MOG35-55。抗原加完全弗氏佐剂免疫C57BL／6小鼠，用光镜、电镜观察EAE小鼠神经组织病理学改变。结果 免疫10～16d后小鼠即发病，发病率为100％。光镜下可见小血管周围炎性细胞浸润，呈袖套状改变，血管周围神经元脱髓鞘，神经元变性。Biesehowsky银染显示轴索肿胀和轴索卵形体形成。11／NEL标记可见神经元和淋巴细胞凋亡。电镜下可见髓鞘结构松散、断裂和融合，轴索细胞器消失。脊髓病变广泛，程度重于脑部。结论 以MOG35-55为抗原免疫C57BL/6小鼠诱发EAE，具有模型稳定，发病率高和慢性一非缓解特点，是研究MS较理想的动物模型。其病理改变除血管周围炎性浸润及髓鞘脱失外，还有轴索损害和神经元凋亡。提示EAE模型髓鞘脱失和轴索损害并存；轴索损害与临床症状进行性加重相关。     

糖皮质激素在实验性变态反应性脑脊髓炎中对调节性T细胞的作用

目的:研究糖皮质激素在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)治疗中对调节性T细胞的调变作用. 方法:采用从新鲜牛脊髓中提取的髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫诱导Balb/c小鼠成功诱发EAE后,分组注射糖皮质激素或者安慰剂,在采用指标评估基础上,分别采用流式细胞术和ELISA方法检测CD4 CD25 调节性T细胞特异性FOXP3和血中IL-10的表达水平. 结果:与对照组相比,糖皮质激素注射组小鼠发病程度轻,调节性T细胞特异性FOXP3和血中IL-10的表达水平均有明显差异. 结论:糖皮质激素可能通过增加调节性T细胞的数量及活性,减轻EAE的症状,为临床治疗多发性硬化(MS)提供理论基础.     

负性协同刺激分子PD-L1在EAE小鼠模型中的表达

目的：检测PD-L1分子在实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）中的表达,为进一步探讨PD-L1在EAE病理过程中的作用奠定基础。方法：用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG35-55）免疫C57BL/6J小鼠制备EAE模型,进行神经功能评分,对小鼠脊髓进行HE染色、Fast-Blue染色,免疫组化检测脊髓组织PD-L1的表达,并用流式细胞术、Western Blot检测两组动物脾细胞上PD-L1的表达。结果：免疫组化显示实EAE小鼠脊髓PD-L1的表达较对照组明显增加,免疫荧光标记、流式细胞仪计数、Western Blot检测显示实验组动物脾细胞上PD-L1的表达较对照组明显增加。结论：EAE实验组小鼠PD-L1的表达在脾细胞和脊髓都较对照组明显增加。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立及病理特征

目的建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠模型,观察其组织病理特征。方法 采用豚鼠全脊髓匀浆制备抗原免疫Lewis大鼠建立EAE模型。每天监测动物体质量和行为学变化。应用HE染色观察脑和脊髓炎性浸润、血管袖套等变化,罗克沙尔坚牢蓝(luxol fast blue,LFB)染色观察脊髓脱髓鞘变化,电子显微镜观察脊髓髓鞘超微结构。结果 随着病程进展,EAE模型组大鼠体质量下降明显;从第8天起出现行为学异常,神经功能损伤评分逐渐增高,于第12天达峰值。病理形态学检查显示,EAE模型组大鼠脑组织血管周围和脑实质有大量炎性细胞浸润;脊髓腰膨大脊膜出现炎性水肿,并有炎性细胞浸润;脊髓血管周围有大量炎性细胞密集环绕,呈"袖套样"改变;脊髓髓鞘大面积脱失,且髓鞘板层松散。结论 采用该模型作为急性MS的研究模型较为理想。     

补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠血脑屏障保护作用的研究

目的:探讨补阳还五汤(BYHWD)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)在发病潜伏期、高峰期和缓解期的血-脑屏障(BBB)保护的机制。方法:采用髓鞘MOG35-55诱导C57BL/6雌性小鼠建立EAE模型,随机分为EAE组和BYHWD组。于免疫后第3天开始灌胃给药,EAE组给予生理盐水,BYHWD组给予BYHWD,在免疫后的第9天、第17天和第28天,分别采集小鼠脑和脊髓标本,行HE染色和固蓝染色;采用Western Blot法检测脊髓和脑内细胞紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达。结果:补阳还五汤治疗后可抑制中枢神经系统炎细胞浸润,减轻髓鞘脱失;与EAE对照组比较,BYHWD治疗9 d、17 d和28 d,脊髓和脑内紧密连接蛋白Occludi和ZO-1表达增加。结论:补阳还五汤可以通过上调脊髓和脑内细胞紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达,发挥血脑屏障(BBB)完整性的保护,从而发挥神经保护的作用。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎鼠模型建立及其病理特点

目的建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG35-55)诱发的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型,并观察其病理特点。方法应用MOG35-55多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫雌性C56BL/6小鼠,观察其临床症状、病理改变及影像学变化。结果模型组小鼠发病时间为免疫后(12±4)d(8~16d),发病率83.3%,呈慢性单向过程;H-E染色模型鼠脊髓白质见大量炎症细胞浸润;罗克沙尔坚牢蓝染色显示,脊髓白质呈片状髓鞘脱失;电镜显示,髓鞘内层呈板层剥脱,轴索肿胀,结构疏松;脊髓MRI检查可见髓内斑片状T2异常高信号。结论慢性EAE模型具有发病率高、死亡率低、模型稳定、重复性高、制作方便的特点,模型病理改变接近多发性硬化(MS),是研究MS较为理想的动物模型。     

自身免疫性脑脊髓炎大鼠CD4+CD25+T细胞、CD86分子的变化及意义

目的:探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠CD4 CD25 T细胞、CD86分子的变化及意义。方法:模型组用豚鼠脊髓和完全弗式佐剂混匀乳剂诱发大鼠EAE,观察两组的发病情况;HE染色和髓鞘染色观察病理改变;流式细胞仪检测外周血CD4 CD25 T细胞、CD86分子。结果:模型组大脑、脑干、脊髓炎性细胞浸润明显,髓鞘改变明显;模型组CD4 T细胞、CD86分子显著增多,CD4 CD25 T细胞显著减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的CD86分子阳性率增高,与EAE的发病相关,CD4 CD25 T细胞对其有一定的保护作用。     

温阳补肾方对EAE豚鼠脊髓内NF-κB p65表达的影响

采用完全弗氏佐剂和碱性髓鞘蛋白成功地诱发了实验性过敏性脊髓炎(EAE)豚鼠模型.免疫组化ABC法显示EAE豚鼠脊髓内NF-κB p65阳性细胞表达增强;脊髓前侧、背侧静脉和白质内小血管周围也可见多层NF-κB p65的阳性细胞表达.温阳补肾方可减少脊髓内NF-κB p65阳性细胞的表达,提示此中药复方可能通过抑制中枢内NF-κB p65的表达,阻断或减弱免疫炎性分子基因的诱导,在一定程度上减轻多发硬化的发生和发展.     

阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的影响

目的 观察不同剂量阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓内核转录因子-κB(NF-κB)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,探讨阿托伐他汀对EAE发病的保护机制.方法 以豚鼠脊髓匀浆诱发Wistar大鼠建立EAE模型,采用量化评分法,比较不同剂量的阿托伐他汀对EAE发病率、潜伏期、临床症状和组织学的影响,并用免疫组化方法检测脊髓中NF-κB和GFAP的表达.结果 高剂量阿托伐他汀延长了大鼠发病的潜伏期,改善了大鼠发病的严重程度,下调NF-κB及上调GFAP在脊髓中的表达(P＜0.05).结论 高剂量阿托伐他汀对EAE大鼠有保护作用,可能与其对中枢神经系统的免疫机制有一定影响有关.