8-甲氧补骨脂素脂质体对小鼠黑素瘤细胞黑素生成影响的研究

目的探讨 8 -甲氧补骨脂素脂质体 (LMOP)对B16F小鼠黑素瘤细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法采用体外培养的小鼠B16F黑素瘤细胞株 ,以等浓度的 8-甲氧补骨脂素 (MOP)为对照 ,用MTT法测定细胞增殖情况 ;NaOH裂解法测定黑素合成 ;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果与等浓度MOP相比 ,LMOP低浓度 (10～ 5 0 μmol/L)时显著提高酪氨酸酶活性和黑素含量 (P <0 .0 5 ) ,高浓度 (10 0～ 2 0 0 μmol/L)时对细胞的抑制作用更显著 (P <0 .0 5 )。 结论用脂质体作为MOP的载体可以显著提高MOP对靶细胞的作用 ,为LMOP制剂治疗白癜风的临床应用提供了实验依据。     

强脉冲光及5-氨基酮戊酸对小鼠B16黑素瘤细胞的作用

目的 研究强脉冲光(IPL)及5-氨基酮戊酸(5-ALA)对小鼠B16黑素瘤细胞的影响.方法 以小鼠B16黑素瘤细胞为实验对象,分为阴性对照组(不加5-ALA,未辐射)、UVA阳性对照组(3、4、5 J/cm~2 UVA辐射)、5-ALA组(含5 mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育)、IPL组(20、30、40 J/cm~2 IPL辐射)及5-ALA+IPL组(含5 mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育细胞4 h后予20、30、40 J/cm~2 IPL辐射).辐射后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d以噻唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖情况、NaOH溶解法测定黑素含量、氧化多巴反应法测定酪氨酸酶活性的变化.结果 5 mmol/L 5-ALA不影响B16黑素瘤细胞增殖、细胞黑素含量及酪氨酸酶活性.3～4 J/cm~2 UVA可促进B16黑素瘤细胞增殖,5 J/cm2时细胞增殖受到抑制.3～5 J/cm~2 UVA可提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成,其作用呈剂量依赖性.IPL及5-ALA+IPL可降低黑素含量,5-ALA+IPL的作用较IPL更明显.IPL及5-ALA+IPL对细胞增殖及酪氨酸酶活性无明显影响.结论 UVA可提高酪氨酸酶活性,促进B16黑素瘤细胞的黑素合成.IPL及5-ALA+IPL可使B16黑素瘤细胞黑素合成减少,对细胞增殖、酪氨酸酶活性无影响.     

驱虫斑鸠菊不同提取部位对小鼠B16细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响

目的 观察驱虫斑鸠菊不同提取部位对体外培养的小鼠B16细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响.方法 由驱虫斑鸠菊得到3种不同部位提取物,分别为母液(Q1)、乙酸乙酯提取物(Q2)及萃取后物质(Q3).以体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞为模型,以3个色素合成途径中的关键点为多靶点评价体系,其中采用MTT法测定提取物对B16小鼠黑素瘤细胞增殖的影响,采用L-DOPA氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响,采用NaOH裂解法检测黑素含量.结果 3种提取部位对B16细胞都有一定的增殖作用,其中Q1、Q2促进增殖作用明显(P＜0.01),Q3有轻微的促进增殖的作用.Q1、Q3对酪氨酸酶有不同程度的激活作用并促进黑素的合成,其中Q3 在20～80 μg/ml 范围内促进B16细胞黑素合成作用明显(P＜0.05或P＜0.01),且Q3以浓度依赖方式上调酪氨酸活性.结论 驱虫斑鸠菊残留的水溶性部分是稳定的调节B16细胞黑素合成的活性部位.     

Effects of Qingban Capsules on Melanin Synthesis of Murine B16 Cells

目的 测定大豆异黄酮清斑软胶囊对小鼠B16细胞黑色素合成的影响,研究其对黄褐斑的治疗作用. 方法 小鼠B16黑素细胞作为受试细胞,选择氢醌作为阳性对照物,用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响,采用酶学方法检测对酪氨酸酶活性的影响,NaOH溶解法测定黑素含量. 结果 不同浓度大豆异黄酮清斑软胶囊对黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素含量均有抑制作用,呈现剂量依赖性关系. 结论 大豆异黄酮清斑软胶囊能有效抑制黑素细胞增殖和降低酪氨酸酶活性,从而减少黑素合成.     

中药何首乌促进黑色素生成的作用机理研究

目的;研究中药何首乌在B16黑素瘤细胞中促进黑色素生成的作用机理。方法;用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法测定何首乌对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。RTPCR和Western blotting法分别检测何首乌作用前后酪氨酸酶、小眼相关转录因子（MITF）,酪氨酸酶相关蛋白1（TRP1）和酪氨酸酶相关蛋白2（TRP2）基因表达和蛋白合成的变化。结果;随何首乌加药浓度的增大,细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素合成能力明显增强;何首乌可明显促进酪氨酸酶和MITF的基因表达和蛋白合成,但对TRP1、TRP2的表达几乎没有影响。结论;何首乌在体外能显著刺激B16细胞中黑色素的生成,上述变化可能是通过促进酪氨酸酶和MITF的基因表达和蛋白合成以及激活酪氨酸酶的活性来实现的。      

壬二酸对人黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成功能的影响

目的 建立体外培养的正常人表皮黑素细胞系，检测壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成的影响。方法 体外人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B．。细胞培养，TRP-1染色观察壬二酸作用后，细胞形态的变化；测定壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑色素瘤B16细胞酪氨酸酶活性及黑素含量变化观察壬二酸的脱色素作用。结果 壬二酸作用于人表皮黑素细胞后，可见细胞树突明显减少；壬二酸作用于B16细胞后，细胞形态无明显改变。壬二酸抑制人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性，细胞黑素合成减少，而且具有浓度依赖性。结论 壬二酸对体外培养的人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用，可临床应用于治疗色素性疾病。     

当归对体外黑素细胞和酪氨酸酶的激活作用

目的观察中药当归对黑素细胞和酪氨酸酶的影响。方法采用MTT法测定黑素细胞增殖情况,NaOH裂解法测定黑素合成,以蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性。结果(1)当归对黑素细胞具有促增殖作用,其最佳促增殖浓度为1 g/L;(2)当归可增强黑素合成能力,其最佳促合成浓度为1 g/L;(3)当归对酪氨酸酶亦具有激活作用,其最佳激活浓度为1g/L(P<0.05)。结论当归可促进黑素细胞增殖、黑素合成以及激活酪氨酸酶活性,可能是当归治疗皮肤色素性疾病的机制之一。     

疏风活血方通过自噬途径对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞黑素代谢起调节作用

目的观察自噬在疏风活血方对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成中的作用。方法体外培养鼠B16细胞,设 立空白对照组（C组）,0.12、0.25、0.49、0.98、1.96 mg/mL疏风活血方组（S组）,自噬诱导剂雷帕霉素组（R组）,自噬诱导+疏风活 血方组（RS组）,采用MTT法测定各组对B16细胞增殖的影响,酶标仪检测法测定各组酪氨酸酶活性及黑素含量,Western blot 法测定自噬相关蛋白P62、p-mTOR、LC3B、Beclin1含量,比较分析结果。结果与C组相比,S组及RS组对B16细胞增殖均起浓 度依赖的抑制作用（P<0.05）;对酪氨酸酶活性及黑素合成有促进作用（P<0.05）;0.98 mg/mL疏风活血方组（R0.98）、自噬诱导+ 0.98 mg/mL疏风活血方组（RS0.98）、50 nmol/L自噬诱导剂雷帕霉素组（Rap50）均能上调自噬相关蛋白LC3B-II、Beclin1,下调 P62、p-mTOR含量。结论疏风活血方能通过激活自噬途径对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞黑素代谢起调节作用,对其细胞增 殖有抑制作用;对酪氨酸酶活性及黑素合成起促进作用。     

刺蒺藜对培养人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨刺蒺藜对培养的人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定刺蒺藜对人A375黑素瘤细胞活力的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,并与8-MOP的结果进行比较。结果0．1、0．2和0．5mg／ml刺蒺藜对于人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量依赖性激活作用,0．2mg／ml及0．5mg／ml刺蒺藜与对照组相比有显著差异（P〈0．01）。结论刺蒺藜对于培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量依赖性激活作用。     

六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的 :研究六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法 :采用MTT法测定细胞增殖情况 ;NaOH裂解法测定黑素合成 ;Takahashi法测定酪氨酶含量。结果 :六味地黄丸对黑素细胞的增殖有抑制作用 ,能使细胞数明显减少 (P<0 .0 5 ) ,并能使黑素合成显著下降 (P <0 .0 1) ,使酪氨酸酶活性逐渐减弱 (P <0 .0 1)。结论 :六味地黄丸能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性 ,这可能是临床应有六味地黄丸治疗皮肤色素性疾病的机制。     

负载酪氨酸酶抑制肽的牛奶外泌体抑制酪氨酸酶活性及黑色素生成研究

目的:探讨酪氨酸酶抑制肽（YRS）功能化的牛奶外泌体（mEXOYRS）,对酪氨酸酶活性及黑色素生成的抑制作用。方法:通过超速离心法获取牛奶外泌体（mEXO）;利用外泌体特异锚定肽CP05将YRS修饰在mEXO表面,获得mEXOYRS,随后通过流式细胞仪分析YRS的负载效率;在黑色素瘤细胞B16-F10中,检测细胞对mEXOYRS的摄取效率以及YRS与酪氨酸酶的共定位效率,评估mEXOYRS对B16-F10黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性的抑制效果及对黑色素合成的抑制作用;进一步将mEXOYRS均匀涂抹于Nude BALB/c小鼠黑色素瘤细胞B16-F10所成皮下瘤模型上,评估其在体内对黑色素合成的抑制作用;通过对C57BL/6小鼠表面皮肤涂抹mEXOYRS,评估其对小鼠毛囊的着色程度及小鼠皮肤的美白效果。结果:YRS通过外泌体特异锚定肽CP05高效负载至mEXO,并且不影响mEXO的形态结构及标志性蛋白的表达;在B16-F10黑色素瘤细胞摄取实验中,mEXO能够增强YRS与细胞内酪氨酸酶共定位的效率,在1周、2周及6周时均显著抑制细胞产生黑色素（F=56.117、48.954、560.006,均P＜0.05）;在Nude BALB/c小鼠黑色素皮下瘤模型中,与YRS组相比,mEXOYRS更好的抑制了黑色素的产生;在C57BL/6小鼠模型中,mEXOYRS降低了黑色素的产生,并显著降低了黑色素含量（F=173.083,P＜0.05）及酪氨酸酶活性指标（F=34.156,P＜0.05）,取得了美白效果。结论:YRS修饰的mEXO可通过内体转运途径,靶向运输到酪氨酸酶处,降低酪氨酸酶活性,并有效抑制黑色素生成,提高YRS的美白效果。     

蟛蜞菊乙醇提取物促进黑色素生成及其机理的初步研究

目的观察中药蟛蜞菊乙醇提取物促进黑色素生成的作用,并初步探讨其作用机理。方法 MTT法、L-Dopa氧化法、NaOH裂解法探讨不同浓度蟛蜞菊乙醇提取物作用于小鼠恶性黑色素瘤细胞(B16)72 h后,对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响。RT-PCR检测药物作用前后酪氨酸酶、小眼相关转录因子(MITF)等基因表达的影响。结果与对照组比较,蟛蜞菊乙醇提取物能促进B16细胞的增殖,促进酪氨酸酶活性增加和黑色素生成增多;可剂量依赖性上调酪氨酸酶和MITF的mRNA表达。结论蟛蜞菊乙醇提取物可促进B16细胞黑色素生成,其机制可能是通过促进B16细胞增殖、增强酪氨酸酶和MITF的基因表达来实现。     

龙胆草对人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨龙胆草对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定龙胆草对人A375黑素瘤细胞增殖的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,并与8-MOP的结果进行比较。结果0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.5 mg/mL龙胆草对人A375黑素瘤细胞增殖无影响,0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.5 mg/mL龙胆草对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性激活作用,0.2 mg/mL及0.5 mg/mL龙胆草与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论龙胆草对培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性激活作用。     

甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞代谢的影响

目的 研究甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞的作用，并与一些美白药物进行比较，探讨其美白的作用及安全性。方法 测定药物对体外培养的B16黑色素瘤细胞系的细胞活力、细胞酪氨酸酶活性及细胞内黑素含量的影响，并与氢醌、熊果苷及维生素C磷酸酯的结果比较。结果 几种化合物对B16细胞酪氨酸酶活性均有抑制作用，且呈浓度依赖性；药物作用后细胞黑素生成量显著减少。甘草黄酮和维生素C磷酸酯的细胞毒性较低，而氢醌和熊果苷具有明显的细胞毒性。结论 甘草黄酮有较强的抑制酪氨酸酶活性和黑素生成的作用，同时对黑素细胞的细胞毒性较低，是较为安全有效的美白药物。     

α和β-熊果苷对共培养小鼠黑素细胞黑素生成的影响研究

目的 比较观察熊果苷分子苯环侧链上的糖苷基团α和β-构象对共培养小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的影响.方法 体外melan-a小鼠黑素细胞(MC)与SP-1小鼠角质形成细胞(KC)共培养体系,两种细胞的初始接种比例为1:5.共培养细胞分别用含有0.04、0.2、1 mg/ml的α-熊果苷、β-熊果苷、烟酰胺及10、50、100 μmol/L的甲氧沙林(8-MOP)新鲜培养基换液,药物处理共4 d.用相差倒置显微镜观察细胞表型的改变;用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖率;用放射性核素L-[14C]-酪氨酸底物标记法测定酪氨酸羟化酶与多巴氧化酶活性;用分光光度计法测定细胞总黑素含量.结果 除8-MOP能明显促进共培养细胞(主要是MC)发生增殖外,其他3种化合物对细胞增殖率均无影响.两种熊果苷均能剂量依赖地抑制酪氨酸酶活性和黑素含量.1 ms/mlα-熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制作用比同等浓度的β-熊果苷强(酪氨酸酶活性:37%±4%vs54%±9%,P=0.034).经两种熊果苷(1 mg/ml)处理的MC树状突延长纤细,黑素产生较对照组明显减少,以α-熊果苷更为明显.相反,100 μmol/L 8-MOP处理组的MC数目较对照组显著增加,树状突增加,胞质与树状突内有大量黑褐色黑素堆积.结论 α-熊果苷能明显抑制共培养小鼠黑素细胞的黑素生成,其临床应用价值有待体内实验进一步确认.     

双花对人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨双花对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定双花对人A375黑素瘤细胞活力的影响，以NaOH裂解法测定黑素合成，并与氢醌的结果进行比较。结果100μmol／L、500μmol／L和1000μmoL／L双花对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性抑制作用，500μmol／L及1000μmol／L双花与对照组相比有显著差异（P〈0．01）。结论双花对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用。