不同性别MTHFR基因多态性协同叶酸水平差异对血清同型半胱氨酸的影响研究

目的:探讨不同性别MTHFR基因多态性协同叶酸(Fol)水平对血清同型半胱氨酸(Hcy)的影响。方法:收集18～75岁受检者88例,检测其血清Fol、Hcy等指标,并进行MTHFR基因多态性检测。分析不同性别的血压(BP)、血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)等各基本健康参数水平的差异性。不同性别MTHFR基因多态性分布特点及差异性。不同性别MTHFR基因多态性血清Hcy水平的差异性及与Fol水平的关系。结果:不同性别的年龄、Glu、TG、TC各参数比较无统计学差异,而BP比较有统计学差异(P<0.05);88例中MTHFR C677C型占14.8%,C677T型占47.7%;T677T型占37.5%,不同性别间比较差异无统计学意义。三种MTHFR基因多态性样本组间血清Hcy水平比较有统计学差异,其中MTHFR T677T型合并叶酸缺乏者血清Hcy水平与本组叶酸不缺乏者比较,有统计学差异(P<0.05);不同性别叶酸缺乏组间血清Hcy水平比较,有统计学差异(P<0.05)。结论:MTHFR 677基因多态性突变型占比较高,野生型占比较低。MTHFR杂合突变基因型(C677T)与纯合突变基因型(T677T)导致Hcy水平升高,T677T基因型合并叶酸缺乏更易导致血清Hcy水平升高,且叶酸缺乏者中男性较女性更易导致高Hcy血症。     

轻中度高血压患者中MTHFR基因多态性对血清叶酸-血浆同型半胱氨酸相关性的影响

目的观察轻中度高血压患者血清叶酸水平与血浆总同型半胱氨酸水平（tHcy）的相互关系,探讨MTHFR基因C677T单核苷酸多态性位点对叶酸-tHcy相互关系的影响。方法在中国6个城市收集轻中度高血压合格患者445例。采用聚合酶链式反应-限制性酶切片断长度多态性测定基因型、高效液相色谱法测定血浆同型半胱氨酸水平。分析血浆tHcy水平与叶酸水平的相关性;然后按MTHFR基因C677T单核苷酸多态性,分层建立叶酸水平与血浆tHcy水平的回归预测模型,比较模型之间的差异,分析不同基因型对叶酸-tHcy相关性的影响。结果轻中度高血压患者中,血浆tHcy水平与叶酸水平呈负相关（r=-0．29,P〈0．01）。在按MTHFR基因C677T单核苷酸多态性分层的叶酸水平与血浆tHcy水平的回归预测模型中,TT基因型的回归系数（绝对值）高于CC、CT组（P〈0．01）,TT基因型中叶酸水平对血浆tHcy水平的影响最大,叶酸缺乏或补充后,TT基因型的血浆tHcy的变化幅度将最大。结论轻中度高血压患者中,血浆Hcy水平与叶酸水平呈负相关;在回归预测模型中,MTHFR677 TT基因型患者叶酸水平对Hcy水平的影响最大。     

老年人群血浆HCY水平与MTHFRC677T基因多态性

目的:对血浆同型半胱氨酸(HCY)水平与N5,N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因位点的基因多态性进行分析,了解其在健康老年人群中的分布情况。方法:采用酶联免疫吸附法进行血浆HCY水平测定;采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)对MTH-FRC677T进行基因多态性分析。结果:健康老年人群血浆HCY水平为(11.0±2.8)μmol/L,老年男、女性人群血浆HCY水平无显著性差异。老年男、女性人群中MTHFRC677T基因的CC、CT和TT基因型频率与C、T等位基因频率差异均无显著性。MTHFRC677T位点各基因型间,血浆HCY水平亦无显著性差异。结论:本试验数据可为MTHFR基因突变与HCY代谢相关疾病病因研究假设提供遗传学数据。     

育龄女性MTHFR基因多态性与HCY关系的研究

目的:通过对育龄女性叶酸代谢关键酶5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶MTHFR C677T的基因多态性检测,分析MTHFR C677T基因多态性与外周血中同型半胱氨酸HCY的关系。方法:选取孕前或孕期育龄女性100名,基因芯片法检测外周血中MTHFR C677T的基因多态性,并对所有育龄女性口服800μg叶酸1个月,循环酶法检测口服叶酸前后不同基因型女性外周血中HCY水平。结果:本地区育龄妇女中MTHFR C677T基因CC型、CT型、TT型的检出频率分别为26%、54%、20%;口服叶酸前CC型、CT型、TT型受试者HCY水平分别为9.5±3.4、11.8±3.1、15.3±3.5,口服叶酸后CC型、CT型、TT型受试者HCY浓度较口服前低,分别为8.1±2.8、8.4±2.7、11.0±3.3,CC型受试者口服叶酸前后平均HCY水平之间差异无统计学意义(P>0.05),CT型和TT型受试者口服叶酸前后平均HCY水平之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:口服叶酸可以改善由于MTHFR C677T基因突变引起的高HCY血症,合理补充叶酸可以避免由于高HCY血症引起的出生缺陷。     

亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性及同型半胱氨酸与高脂血症的关联性

目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T多态性及血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平与高脂血症的关联性.方法 收集1591例研究对象,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测MTHFR C677T基因多态性,采用酶循环法检测血浆Hcy,同时检测血脂水平,按血脂水平将研究对象分组,其中高脂血症组694例,健康对照组897例,比较两组MrHFR C677T基因多态性及血浆Hcy的差异.统计工具采用SPSS17.0统计软件.结果 高脂血症组的MTHFRC677T基因CC、CT、TT三种基因型频率和C、T两种等位基因频率,以及血浆Hcy水平与健康对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05).CC、CT、TT三种不同MTHFR C677T基因型的血浆Hcy水平差异有极显著性意义(P＜0.01),而六种血脂水平差异无显著性意义(P＞0.05);通过进一步两两比较结果显示,TT基因型的血浆Hcy水平与CC、CT基因型比较差异有极显著性意义(P＜0.01),TT基因型的血浆Hcy哆水平明显高于Cc、CT基因型;而CC基因型的血浆Hcy水平与CT基因型比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论 MTH限c67TT基因多态性和血浆Hy水平两者与高脂血症均不具关联性,而MTHFR C677T基因多态性与血浆Hcy水平显著相关,TT基因型的血浆Hcy水平明显高于CC、CT基因型.     

高血压病人同型半胱氨酸与MTHFR 677C/T基因多态性相关性研究及不同剂量叶酸干预效果评价

目的探讨高血压病人同型半胱氨酸(Hcy)水平与MTHFR 677C/T基因多态性的相关性,评价不同剂量叶酸治疗不同基因型高Hcy血症效果。方法筛选高血压病人359例,进行Hcy筛查及MTHFR 677C/T基因检测,根据基因类型分为CC型、CT型和TT型,每种基因类型筛选50例病人,随机分为2组,各25例,给予0.8 mg和5 mg叶酸治疗8周,评价治疗效果。结果359例高血压病人中合并有高Hcy血症119例,发病率为55.43%。男性病人高Hcy血症发生率及血浆Hcy水平均明显高于女性(P < 0.01)。MTHFR 677C/T基因检测结果显示,359例病人中CC型161例,CT型118例,TT型80例,TT型高血压病人发生高Hcy血症的比例及血浆Hcy均高于CC型和CT型(P < 0.01)。干预前后同种基因型在0.8 mg组和5 mg组血浆Hcy水平差异无统计学意义(P > 0.05)。0.8 mg组和5 mg组不同基因类型干预后的血浆Hcy水平较干预前均明显下降(P < 0.01);干预后组内不同基因型Hcy水平差异有统计学意义(P < 0.01),0.8 mg组和5 mg组中CC型Hcy水平低于CT和TT型(P < 0.05);0.8 mg组CT型Hcy水平低于TT型(P < 0.05)。结论Hcy水平与MTHFR 677C/T基因多态性存在相关性,叶酸能有效降低Hcy水平,大剂量叶酸与较小剂量叶酸干预效果无明显差异。基因类型不同,叶酸干预效果存在差异。     

亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性与冠心病患者冠状动脉病变及叶酸水平相关性研究

目的:探究冠心病患者冠状动脉病变及叶酸水平与其亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T多态性的相关性。方法:将98例冠心病患者以及同期接受健康检查的35例正常人作为研究对象,将其分为冠心病组与正常组,对两组受检者MTHFR C677T多态性和叶酸水平进行检验并分析患者的冠状动脉病变程度差异,对其之间的关系进行详细分析。结果:两组受检者MTHFR C677T基因型及等位基因频率分布无统计学差异(P>0.05),冠心病组患者的同型半胱氨酸(Hcy)水平显著高于正常组(P<0.05)。从受检患者MTHFR C677T基因型分布情况来看,随着患者冠状动脉病变情况的程度加深患者TT及TC基因型频率分布和患者Hcy水平逐渐增加,CC基因型频率分布逐渐下降,TC、CC基因型和Hcy水平组间对比差异无统计学意义(P<0.05),TT基因型频率分布组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。从MTHFR C677T基因型与叶酸水平的关系来看,TT、TC基因个体的叶酸水平均较CC基因个体高(P<0.05)。结论:MTHFR C677T基因多态性与叶酸水平以及冠心病患者发病风险之间存在明显的关系,患者血清Hcy水平上升也就是叶酸浓度降低以及MTHFR C677T基因型多态性尤其是携带T基因型的患者具有较高的冠心病患病风险,同时MTHFR C677T基因型多态性还与冠心病患者的病情进展存在一定联系,能够对冠心病患者的病情进展状况进行判断,增加了临床针对性治疗和患者疗效评价的有效参考指标。     

高同型半胱氨酸血症与深静脉血栓形成

目的研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T位点基因多态性及血清叶酸、维生素B12(VitB12)与血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平和深静脉血栓形成DVT的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测111例对照者和69例DVT患者的MTHFRC677T基因型,放射免疫法(RIA)测定血清叶酸和VitB12浓度,荧光偏振免疫法(FPIA)测定血浆Hcy水平。结果DVT组与对照组MTHFRC677T的TT基因型频率和T等位基因频率均无显著性差异;DVT组的血浆Hcy水平为(13.03±8.74)μmol/L,明显高于对照组的(10.14±4.30)μmol/L(P<0.05),两组叶酸和VitB12的差异均无显著性;高同型半胱氨酸血症增加了DVT患病的危险性(OR=2.53,95%CI1.08～5.92)。低叶酸水平和TT基因型共同作用增加DVT危险性(OR=3.1295%CI1.17～8.38)。结论高同型半胱氨酸血症是汉族人DVT发病的独立危险因素;血清叶酸水平、MTHFRC677T位点基因多态性均不是DVT的独立危险因素,但两者间存在的交互作用可共同影响血浆Hcy水平。     

亚甲基四氢叶酸还原酶C677T基因多态性与精子DNA碎片率的相关性研究

目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)C677T基因多态性与男性患者精子DNA碎片率的相关性.方法 观察1026例男性不育患者DNA碎片率,并检测其MTHFR C677T基因型.分析男性精子DNA异常发生率与MTHFRC677T基因型的相关性.结果 不同基因型组间,DNA碎片率存在统计学差异(H=9.276,P=0.010),而在年龄差异无统计学意义(H=1.533,P=0.465).精子DNA异常组和正常组的MTHFRC677T基因分布存在统计学差异(x2=9.897,P=0.007),男性突变纯合子基因型(TT型)与野生型(CC型)相比,发生精子DNA碎片异常的风险显著增加(OR=1.773,P=0.002).结论MTHFR C677T基因型与男性精子异常相关,TT基因型是精子DNA异常发生的独立危险因素.     

叶酸及亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性与心肌梗死的关系

目的:研究血清叶酸浓度与亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性与老年心肌梗死的关系.方法:选择96例老年急性心肌梗死患者为实验组和82例对照,采用PCR-RFLP检测MTHFR基因677位点的基因型,并检测血清叶酸浓度.结果:两组基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05).实验组TT基因型和T等位基因频率均高于对照组,为0.27∶0.12和0.52∶0.32(P均<0.01).实验组的血清叶酸浓度明显低于对照组,为(5.91±2.08)μmol/L∶(7.85±2.60)μmol/L(P<0.01).实验组的血清叶酸浓度按基因型分类时,CC型、CT型和TT型分别为(6.82±2.70)μmol/L、(6.02±1.84)μmol/L和(4.92±1.47)μmol/L, TT型分别与CC、CT型比较,差异均存在显著(P均<0.01).经Logistic回归分析得出:血清叶酸水平与TT基因型均是心肌梗死的危险因素, OR分别为4.646(95%CI:2.198-9.820)和3.286(95%CI:1.321-8.170).血清叶酸浓度低于6 μmol/L时合并TT基因型与心肌梗死的关系更明显,OR从3.286增大至7.393(95%CI:1.639-33.343).结论:血清叶酸水平、MTHFR基因C677T多态性与老年心肌梗死相关.低血清叶酸水平时携带MTHFR基因TT型使老年心肌梗死的患病几率明显增加.     

中国汉族人血管紧张素转换酶基因多态性与糖尿病视网膜病变相关性Meta分析

目的对中国汉族人血管紧张素转换酶基因(ACE)内含子16插入(Ⅰ)／缺失(D)多态性与糖尿病视网膜病变(DR)的关联性进行Meta分析。方法以糖尿病视网膜病变组和糖尿病对照组基因型分布的比值比(OR)为统计量,应用REVMAN 4．2软件对各研究结果进行一致性检验和数据合并。结果相关文献未发现显著发表偏倚。研究共包括糖尿病视网膜病变组729例,糖尿病对照组903例,数据合并结果DD／(ID Ⅱ)0R值为1．80,95％可信区间(CI)为1．29～2．50。Ⅱ／(ID DD)OR值为0．67,95％CI为0．54～0．84。结论汉族人群ACEL／D多态性与DR有关联,糖尿病视网膜病变组DD基因型增多,Ⅱ基因型减少。     

噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库的构建

目的构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,研究IgA结合分子结构与功能的关系。方法基因合成IgA亲和体ZA1、ZA2片段。片段两端引入Kpn I酶切位点,3′端引入随机连接肽序列,Kpn I酶切,随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S的Kpn I克隆位点上,转化大肠杆菌TGI,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示随机组合文库。结果基因合成IgA亲和体;构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,容量为3·4×107,滴度为1·6×1012TU/L;文库中含79%以上的阳性克隆;序列分析显示组合文库由ZA1、ZA2随机组合而成,连接方式符合随机连接的特点,各亲和体之间连接肽序列也呈随机分布。结论合成IgA亲和体,构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,该文库库容量、多样性和随机性可满足体外分子进化研究的要求。     

hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体。方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A,E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(GreenFluorescenceProtein,GFP)。采用一系列分子生物学方法构建pShuttle-GFPSV55K穿梭质粒,应用此穿梭质粒与AdEasy-1腺病毒DNA在BJ5183细菌内重组得到重组腺病毒质粒,将其转染293细胞获得Ad-GFPSV55K重组腺病毒。PCR法鉴定重组腺病毒,噬斑形成实验测病毒滴度。结果经过酶切鉴定成功地构建了分别携带GM-CSF基因和GFP报告基因的腺病毒载体,病毒滴度为7×1010pfu/ml。结论成功获得由hTERT启动子驱动的条件复制型腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗打下良好的基础。     

两个家系血管母细胞瘤病调查报告

报告两个家系血管母细胞瘤病的发病特点,结合相关文献,阐述了血管母细胞瘤病的诊断与治疗,指出扩大“楔形”手术切除应作为首选治疗方式。     

高血压血瘀证血管紧张素转换酶基因插入或缺失的多态性分析

【目的】探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因插入或缺失(I/D)的多态性与原发性高血压血瘀证的关系。【方法】选择原发性高血压(EH)血瘀证组100例、非血瘀证组120例和正常对照组100例,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测ACE基因I/D多态性。【结果】高血压血瘀证组的DD基因型及D等位基因频率(分别为0.410和0.590)高于高血压非血瘀证组(分别为0.250和0.467)和正常对照组(分别为0.220和0.455)(P<0.05或P<0.01),高血压非血瘀证组与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)。【结论】ACE基因插入或缺失(I/D)多态性与血瘀证具有相关性,D等位基因可能是血瘀证的易感基因之一。     

HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的分段表达及免疫原性分析

目的研究对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型HXB2株调控蛋白Tat原核表达产生影响的区域和Tat蛋白重要的抗原表位。方法用PCR方法获得Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)和Tat(38-101aa)DNA片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa),并转入E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物。采用间接ELISA方法用兔抗pET32a-Tat抗血清对三种肽段进行免疫原性分析。结果成功构建了pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa)质粒,分别表达出相对分子质量(Mr)为23×103、23×103和25×103的融合肽段,其浓度分别为4.26、3.35和5.11mg/ml。间接ELISA结果表明三种融合肽段与兔抗pET32a-Tat抗血清均呈特异性结合反应,其抗体滴度分别为1:128000、1:32000、1:64000,而抗血清与pET32a蛋白仅有较弱结合。结论半胱氨酸富集区(22-37位氨基酸)对Tat蛋白的原核表达有较显著影响;Tat蛋白的N端区、碱性区和C端区是其重要的抗原表位,其中N端区的免疫原性最强。     

单纯型大疱性表皮松解症的角蛋白基因突变分析

目的检测单纯型大疱性表皮松解症(EBS)致病基因角蛋白5(K5)和角蛋白14(K14)基因突变,分析基因型和表型之间的相关性。方法采用PCR和直接测序法对中国汉族人3个EBS家系进行K5基因和K14基因的突变检测,以100例健康人作为正常对照。结果K5基因发现2个突变,一个为移码突变c.1649delG,另一个为错义突变c.508G>A;K14基因发现一个错义突变,为c.1237G>A;在正常对照中未发现上述突变。结论K5或K14基因突变导致该3个家系中患者发病。     

细胞因子基因修饰人口腔鳞癌细胞株的建立及鉴定

用ＰＡ３１７包装的携带人ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α或ＩＬ－２ｃＤＮＡ３种逆转录病毒载体用来转染人口腔鳞癌细胞株Ｔｃａ－８１１３。经新霉素衍生物Ｇ４１８筛选出抗性克隆并扩增产生子代株。ＰＣＲ和细胞因子生物活性测定证实细胞因子基因整合入基因修饰细胞并通过细胞分泌相应活性蛋白产物。本研究显示对口腔鳞癌细胞的逆转录病毒介导细胞因子的基因转移方法切实、可靠。基因修饰细胞株的建立为研究其生物学行为提供了实验对象。     

家族性糖尿病中线粒体tRNA~(Leu(UUR))基因突变的发生率及临床特点

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法，对１４０例有家族史的糖尿病患者的线粒体ｔＲＮＡ１ｅｕ（ＵＵＲ）基因ｎｔ３２４３Ａ→Ｇ突变进行筛查，结果发现６例（４．３％）该突变基因阳性者。总结其主要临床特征为：①呈母系遗传，②起病早（＜４０岁），③多消瘦（ＢＭＩ＜２４ｍｇ／ｍ２），④继发性口服降糖药失效需用胰岛素治疗，⑤多伴有神经性耳聋。本研究提示该突变在中国人家族性糖尿病群体中有较高的发生率；在临床上属于另一种糖尿病亚型。     

46例原发性消化道肿瘤的细胞遗传学研究

采用两次连续低渗及大幅度缩短细胞固定时间，解决了实体瘤染色体分散不良及显带困难的问题。用此改良法进行了１４例食道鳞状上皮癌，２４例胃腺癌及８例结肠腺癌的细胞遗传学研究。食道癌染包体改变复杂，以１号，３号，７号和１２号染色体最常累及。胃癌和结肠癌患者可分二类：一类具简单染色体变化，只涉及一至几条染色体，以三体为主。另一类患者涉及广泛的染色体数目及结构异常，其中，胃癌中７ｑ￣－最常见，结肠癌中１ｐ￣－最常见。