SPDP制备酶结合物及其应用于ELISA检测HBV血清学标志的初步研究

在ELISA中,以异型双功能试剂—N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)作为交联剂制备酶结合物(S-ELISA),比同型双功能试剂制备的结合物活性要高。我们以SPDP制备的抗-HBS-HRP与抗-HBe-HRP结合物,较过碘酸钠法制备的同种结合物敏感性高,实验证明其特异性,可重复满意。     

免疫球蛋白G-葡萄糖脱氢酶结合物的研究

介绍一种新的酶结合物的制备方法,研究了该结合物在酶联免疫吸附测定中的初步应用。通过2-亚氨硫杂戊烷的修饰反应,在葡萄糖脱氢酶、抗体(IgG)分子上分别引入新的游离巯基。巯基化的葡萄糖脱氢酶和免疫球蛋白G之间,通过双功能试剂二马来酰亚胺甲醚(进行)偶联,偶联产物由Sephacryl S-300柱层析纯化。按非竞争性固相双抗体夹心法,将精制的IgG-葡萄糖脱氢酶(A)结合物用于人白蛋白(Ⅰ),人甲胎蛋白(Ⅱ)和牛胰岛素(Ⅲ)的定量检测。在0～10 ng/mL范围内,Ⅰ和Ⅱ与A活性均呈良好的线性相关;但Ⅲ与A活性之间没有任何相应关系。     

5-氟尿嘧啶-花生凝集素结合物的反应条件优化及性质研究

目的优化5-氟尿嘧啶(5-Fu)-花生凝集素(PNA)结合物的反应条件，以期制备得到既有生物活性又有较高药物结合率的结合物。方法采用单因素法优化反应条件，考察结合物稳定性，以药物结合率和体外活性为判断指标。结果以优化条件：5-Fu；EDC；NHS-1；5：2，D-半乳糖；PNA(w／w)-2．5：1，连接反应时间12h制备得到了既有生物活性又有较高药物结合率的结合物。结论D-半乳糖能保护花生凝集素的活性中心，在D-半乳糖保护下可以制备出既有生物活性又有较高药物结合率的结合物。结合物性质比较稳定。     

异型双功能交联剂SPDP等试剂研制成功

N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯[N-succinimidyl 3-(2-pyridyl-dithio)propionate)简称SPDP,是迄今用于共价结合蛋白质等生物活性分子最好的异型双功能试剂(Heterobifunctional reagent)。国外自1978年合成以来,已     

抗人食管癌单克隆抗体和争光霉素A_6结合物的制备及其对食管癌细胞的细胞毒作用

研究目的探索食管癌导向化疗的途径研究设计用异双功能基试剂SPDP联接抗人食管癌单抗和争光霉素A_6,然后用MTT法测定该结合物对食管癌细胞的特异性细胞毒作用。研究单位新乡医学院基础医学部处理方法采用MTT法,通过测定细胞代谢活性来反映单抗—A_6结合物对食管癌细胞的特异性杀伤作用。靶细胞为食管癌细胞Eca8714,非靶细胞为宫颈癌细胞HL,设有结合物组和对照组(游离A_6)。结果结合物对食管癌细胞的杀伤率比游离争光霉素强10倍。0.1μM时即显示杀伤癌细胞活性。首次发现争光霉素A_6对宫颈癌细胞HL的杀伤率明显高于对食管癌细胞Eca8714的杀伤率。结论单抗和争光霉素A_6的结合物显示出较好的特异性细胞毒作用.为食管癌导向化疗迈出了有益的探索性的一步。     

抗人肺腺癌单克隆抗体—天花粉蛋白新型免疫毒素的制备及体外抗肿瘤活性研究

应用异型双功能连接剂ＳＰＤＰ将抗人肺腺癌单克隆抗体ＣＭＵ１５Ａ与天花粉蛋白（ＴＣＳ）交联，制备出新型免疫毒素。应用的ＭＴＴ法检测其对人肺腺癌细胞系ＡＧＺＹ—８３Ａ的选择性杀伤活性。结果表明，ＣＭＵ１５Ａ—ＴＣＳ结合物具有高效靶向杀伤肺腺癌细胞能力，优于游离ＴＣＳ及单抗与ＴＣＳ混合物；与对非靶细胞的细胞毒作用相比较差异非常显著。提示该结合物是一种很有价值的免疫治疗剂，为今后的实验和临床应用提供了资料。     

应用新型交联技术制备胃癌单抗－丝裂霉素C结合物

应用新型交联技术制备胃癌单抗－丝裂霉素Ｃ结合物｜｜［黎松，张素胤，张学庸等．中华微生物学和免疫学杂志，１９９４；１４（２）：１０８～１１１］作者建立一种新型交联方法，使抗癌药物丝裂霉素Ｃ通过中介体定量地、选择性地引入胃癌单抗Ｆｃ段．首先制备丝裂霉素Ｃ...     

两种不同制备酶标记结合物方法的比较

①目的 对过碘酸盐经典法（经典法）和过碘酸盐改良法（改良法）制备的酶标结合物进行比较。②方法 两种方法均用过碘酸盐氧化辣根过氧化物酶（HRP）使醛基暴露以提高酶与抗体（或抗原）的结合率。但在用NaIO4氧化前应将酶蛋白分子上的氨基进行处理，以防酶经氧化后形成醛基造成自身交联，为此，经典法是用二硝基氟苯将氨基封闭，而改良法是在低PH条件下用NaIO4直接氧化HRP。用二硝基氟苯封闭仍有35%的HRP发生自身交联，而且酶的活性受影响。而改良法在低PH条件下直接氧化HRP，仅5%HRP有自身交联而且活性不受影响。我们用上述方法分别制备了两种酶结合物，并对两种酶结合物作了质量对比试验，包括对流电泳、酶活性测定。③结果 改良法酶结合物活性及产率明显比经典法高。④结论 过碘酸盐改良法制备的酶结合物活性及产率均较过碘酸盐经典法好。     

关于制备第二抗体方法的探讨

用双抗体方法作为放射免疫分析测定中的分离剂,早在1962年就被Utiger、Daughaday、Parker等所采用。双抗分离法是利用抗免疫球蛋白(IgG)抗体(第二抗体)结合可溶的抗原与第一抗体形成之结合物的能力,使整个结合物沉淀,达到分离游离和结合的标记抗原的目的。自1959年Yalow和Berson创速放免测定以来,分离技术有了很大进展,     

靶向DC-SIGN的Le(x)-OVA抗原的制备

目的制备用于靶向DC-SIGN受体的Le(x)寡糖介导的靶向抗原.方法利用Sulfo-SMCC异源双功能交联试剂交联链霉亲和素(streptavidin,SA)和模式抗原卵白蛋白(ovalbumin,OVA),再利用SA与生物素高亲和力结合的特性,将SA-OVA复合物与生物素修饰的Le(x)寡糖反应,由此获得由Le(x)寡糖介导的靶向抗原Le(x)-OVA复合物.结果应用SDS-PAGE蛋白质电泳和Western免疫印迹方法证实SA与OVA蛋白成功交联,ELISA方法证实SA-OVA复合物中的SA仍具有与生物素反应的功能,根据SA-OVA复合物与生物素修饰的Le(x)寡糖饱和反应的比例,获得所需要的靶向抗原Le(x)-OVA复合物.结论获得Le(x)寡糖介导的靶向抗原Le(x)-OVA复合物,为进一步研究经由DC-SIGN靶向后的抗原特异性免疫应答奠定了基础.