再生障碍性贫血患者造血祖细胞及免疫机制的研究

目的探讨再生障碍性贫血(再障)的发病机制。方法采用甲基纤维素及胶原半固体培养法对56例再障骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K进行培养;采用APAAP法及双抗体夹心酶联免疫吸附法(EL ISA)对再障患者外周血T细胞亚群、血清sIL-2R进行检测。结果再障患者CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K集落数均低于对照组,且严重型再障集落数减少程度与慢性再障相近;再障患者CD 3亚群细胞无变化,CD 4亚群细胞减低,CD 8亚群细胞增高,CD 4/CD 8降低,重型再障患者血清sIL-2R中水平高于正常对照组与慢性再障。结论骨髓造血祖细胞数量减少是再障发病的重要因素,其减少程度与再障的病情有关;细胞免疫功能异常及造血负调控因子可能在再障发病中起一定的作用。     

血液病患者骨髓红系祖细胞体外培养测定

本文采用甲基纤维素培养技术观察了50例血液病患者(男24例,女26例,年龄19～64岁)的骨髓红系祖细胞CFU-E、BFU-E。结果表明,慢性再生障碍性贫血患者骨髓BFU-E和CFU-E集落都减少甚至为重,说明再障是比BFU-E、CFU-E和CFU-D更早阶段的造血干细胞异常所引起的;测定4例急性白血病患者骨髓,其中急淋1例、急粒3例,BFU-E集     

多发性硬化患者骨髓造血干(祖)细胞体外集落培养及其意义

目的：探讨多发性硬化（MS）患者骨髓造血干（祖）细胞体外培养的增殖分化功能及其临床应用意义。方法：采用体外胶原半固体培养法观察19例MS患者骨髓造血干（祖）细胞巨核系集落形成情况，甲基纤维素半固体培养法观察粒单系和红系集落形成情况。并将各系集落形成单位按复发期和缓解期分组及按病程≤3年和病程〉3年分组与健康对照组分别进行比较分析。结果：①MS复发期组的粒-单系集落形成单位（CFU-GM）显著低于健康对照组（P=0．006），也显著低于缓解期组（P=0．001）。MS缓解期组CFU-GM虽比健康对照组高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。MS复发期组、缓解期组的巨核系集落形成单位（CFU-MK）、红系集落形成单位（CFU-E）与健康对照组相比，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。②MS病程≤3年组和病程〉3年组的CFU-MK、CFU-GM、CFU-E与健康对照组相比。差异均无统计学意义（均．P〉0．05）。结论：MS复发期患者骨髓造血干（祖）细胞本身或其分化成粒-单系的过程存在异常；MS复发期造血干（祖）细胞也可能对造血生长因子的反应较缓解期差．     

四川省1996年医学科研进展(下)

(一)造血干细胞体外培养临床应用研究建立了CFU-GM、BFU-E/CFU-E的体外培养技术,在国内首先引进了PICke的L-CFU的培养方法,经过十多年的临床应用和研究取得如下结果: 1.证实了ANLL的CFU-GM和L-CFU的生长方式,和诱导化疗后CR率的生存期有关。提出可作为该病患者预后的二项指标;2.查明了再障和MDS患者CFU-G生长特点,以及此二病的发病机理都与造血干细胞缺陷、免疫抑制或造血微环境受损有关;3.证明了尿毒症患者贫血的发生与其血浆中存在对BFU-E和CFU-E的抑制物质有关;4.证明纯红再障和1例纯白再     

人内皮细胞和4种细胞因子对正常人和再生障碍性贫血患者粒系造血的影响

通过人脐静脉内皮细胞为铺层的双层细胞培养,观察内皮细胞和几种细胞因子对正常人和再障患者粒系造血的影响。方法以人内皮细胞作铺层,作体外骨髓CFU-GM半固体双层培养,并在培养体系中加入细胞因子GM-CSF、IL-2、IL-6和LAK细胞上清,观察内皮细胞和细胞因子对正常人和再障患者粒系造血的影响。结果在有内皮细胞的培养体系中CFU-GM的产率均显著高于无内皮细胞的相应培养体系。在无内皮细胞时,IL-6和LAK上清显示出与GM-CSF相似的粒系造血刺激作用。对15例初诊慢性再障患者骨髓粒系祖细胞培养结果表明,无内皮细胞存在时,无论向培养体系中加入何种细胞因子,均无集落生成,而在有内皮细胞的双层培养中,部分患者骨髓可见CFU-GM集落生成。结论内皮细胞对正常和再障粒系造血均有明显影响,并提示再障造血障碍有微环境因素。     

补肾泻肝方药对再生障碍性贫血患者骨髓造血祖细胞的影响

为研究补肾泻肝方药治疗再生障碍性贫血的机理,将25例再障患（其中肾阴虚14例,肾阳虚11例）的骨髓进行体外培养,观察不同中药复方[滋肾阴（Ⅰ）、泻肝炎（Ⅱ）、温肾阳（Ⅲ）、补肾泻肝（Ⅳ）]和细胞因子（IL-2、IRN-γ）对其红系、粒-巨噬系造血祖细胞（CFU-E、BFE-U、CFU-GM）集落形成的影响。结果：Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ方对CFU-E、BFU-E、CFU-GM均有促进作用,Ⅳ方的作用尤其明显,而Ⅱ方无此作用;IL-2、IFN-γ对上述指标有抑制作用;加入Ⅱ、Ⅳ方后能减除这种抑制,但Ⅰ、Ⅲ方无此作用。提示：补肾泻肝方药是治疗再障的有效处方,减除IL-2、IRN-γ对造血祖细胞的抑制、促进CFU-E、BFU-E、CFU-GM的形成是其治疗再障的重要机理。     

重组人白细胞介素-1β对人红系、粒系造血祖细胞集落形成的影响

为探讨重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)对人红系、粒系造血祖细胞的作用,采用96孔板微量培养法在体外进行培养。在培养中加入不同浓度的rhIL-β1(0～5ug/mL)后,观察BFU-E、CFU-E及CFU-GM的集落形成。结果加入不同浓度的IL-1β后,BFU-E、CFU-E的集落形成均受到抑制,且呈剂量依赖性,在IL-1β剂量为0.1和0.5μg/mL时,抑制作用更明显(JP<0.005,0.05),而IL-1β对CFU-GM的集落形成无明显影响。结果表明,IL-1β对红系造血祖细胞(BFU-E和CFU-E)影响的研究有助于解释某些慢性疾病性贫血(如类风湿性关节炎伴贫血等)的发生机制,提示IL-1β单克隆抗体有可能用于治疗慢性疾病性贫血。     

再生障碍性贫血患者血清抑制CFU-MK的增殖及调控

目的:探讨再生障碍性贫血(再障)患者血小板减少的原因,建立模型并寻找治疗对策。方法:应用甲基纤维素半固体体外培养法建立CFU-MK培养体系;混合再障血清进行培养建立再障患者血小板减少的模型;使用不同的造血细胞生长因子进行组合观察模型中CFU-MK集落生成情况和集落中巨核祖细胞的含量。结果:经过14d的培养,模型组CFU-MK集落、集簇数量明显低于正常对照组,以TPO/IL-3/IL-11/FL细胞因子组合使模型组CFU-MK的数量恢复及巨核细胞的扩增效果最好。结论:本实验建立了CFU-MK体外培养体系及再障血小板减少的模型,体外试验表明治疗再障血小板减少以TPO/IL-3/IL-11/FL为最佳组合。     

急性非淋巴细胞白血病过程细胞克隆的变化

18例未治或复发ANLL,2例慢粒急变及10例完全缓解(CR)的ANLL患者作L-CFU,CFU-E及CFU-GM骨髓体外造血祖细胞培养。ANLL未治和复发组的L-CFU、CFU-E及CFU-GM集落数与正常对照有非常显著差异。ANLL的CR组,CFU-E和CFU-GM恢复正常,但L-CFU仍较正常对照组明显多,提示CR后,骨髓中仍残留有白血病细胞。初步认为PHA-MNCCM作为L-CFU的生长因子,有助于CR后ANLL残留白血病细胞检测意义。     

异基因外周血干细胞移植供者动员后淋巴细胞及造血干细胞的变化

目的:观察异基因外周血干细胞移植供者动员前后淋巴细胞亚群及造血干细胞的变化。方法:粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员外周血,直接免疫荧光法标记淋巴细胞和CD34细胞,用流式细胞仪检测其表达情况,甲基纤维素半固体培养基进行CFU-GM培养评价干细胞克隆生成能力。结果:rhG-CSF动员后淋巴细胞亚群与动员前相比无明显变化,CD34 细胞由动员前的0.12±0.08增加到0.83±0.26,CFU-GM有动员前的12±6增加到102±16。结论:正常供者外周血动员后CD34 细胞明显增加,淋巴细胞无明显变化。