天麻素通过下调ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞

目的研究天麻素(gastrodin,Gas)通过调控ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞。方法建立谷氨酸损伤的PC12细胞模型;甲基噻唑基四唑比色法测定细胞活力;Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态;罗丹明123染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞内p38、ERK1/2、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达。结果天麻素明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量范围内呈一定的量效关系;天麻素升高谷氨酸损伤引起的细胞线粒体膜电位的降低,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白的表达。结论天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与升高线粒体膜电位水平,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白表达,抑制细胞凋亡有关。     

右美托咪定对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制

目的 研究右美托咪定(Dex)对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及机制.方法 应用高浓度谷氨酸处理PC12细胞以建立细胞缺氧损伤模型.应用MTT法测定细胞存活率,采用试剂盒分别测定细胞培养液中乳酸脱氢酶释放量,细胞丙二醛含量和超氧化物歧化酶活力,DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,Fluo-8染色流式细胞仪检测细胞内钙离子含量,JC-1染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位.结果 在0.01～100 μmol/L浓度范围内,Dex浓度依赖性地拮抗谷氨酸所致PC12细胞损伤,至100 μmol/L时,细胞存活率达到正常组的(86.6±2.2)％,显著高于模型组(P＜0.01),乳酸脱氢酶释放量为正常组的1.4±0.1倍,显著低于模型组(P＜0.01).1μmol/L Dex预处理谷氨酸损伤的PC12细胞,与模型组相比,能够显著降低丙二醛含量(P＜0.01),提高超氧化物歧化酶活力(P＜0.01),抑制胞内活性氧过度生成(P＜0.01),降低细胞内Ca2+浓度(P＜0.01),稳定细胞线粒体膜电位(P＜0.01).结论 Dex对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与Dex抗氧化和抑制细胞内钙超载,保护线粒体功能相关.     

3-溴丙酮酸诱导人乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡及对细胞线粒体膜电位的影响

目的探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BrPA)诱导乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的作用及其可能相关机制。方法 MTT法检测3-BrPA对乳腺癌细胞SK-BR-3增殖的抑制作用;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞凋亡;ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平;DHE荧光探针标记法检测细胞内超氧阴离子水平;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位。结果MTT结果显示,3-BrPA可抑制SK-BR-3细胞的增殖活性,且呈浓度和时间依赖性。80、160、320μmol·L-1的3-BrPA诱导SKBR-3细胞24 h的凋亡率分别为6.7%、22.3%、79.6%。80、160、320μmol·L-13-BrPA作用于SK-BR-3细胞5 h后,细胞内ATP水平与对照组相比分别为87.7%、60.6%、23.7%。160μmol·L-1的3-BrPA增加SK-BR-3细胞中活性氧的生成,同时使细胞线粒体膜电位降低。结论 3-BrPA可以抑制乳腺癌细胞SK-BR-3的增殖活性,引起线粒体膜电位降低,并且诱导其凋亡,机制可能与抑制肿瘤细胞的糖酵解从而减少ATP的产生并升高细胞内活性氧的水平有关。     

姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察姜黄素(Curcumin,Cur)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机理。方法采用MTT法检测细胞存活率,碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(ROS)的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24h后,细胞存活率显著下降(P<0.01),与单纯MPP+处理组比较,20μmol/L Cur和不同浓度的MPP+同时处理PC12细胞24h后,细胞存活率显著升高(P<0.01);一定浓度的Cur对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但可使MPP+处理组细胞凋亡率下降(P<0.01);20μmol/L Cur可抑制MPP+引起的PC12细胞△Ψm降低及细胞内ROS含量增多。结论姜黄素可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机理可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,清除ROS有关。     

黄芪和三七主要有效成分配伍对氧化损伤所致的PC12细胞凋亡及其活性氧、线粒体膜电位的影响

目的：探讨黄芪主要有效成分黄芪甲苷和三七主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1配伍抗氯化钴（cobalt chloride,CoCl2）诱导的PC12细胞氧化损伤的作用及其机制。方法：应用CoCl2诱导经神经生长因子转分化的PC12细胞氧化损伤模型,经不同药物处理后,采用Hocchst33258荧光染色检测细胞凋亡,罗丹明123荧光染色检测细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）,2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光染色检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。结果：CoCl2能引起转分化后的PC12细胞凋亡,同时PC12细胞MMP水平显著降低,ROS生成显著增加。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1均能不同程度地抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,减少损伤后ROS的生成和MMP的下降,4个有效成分配伍的效应强于各有效成分单用。结论：黄芪和三七的主要有效成分能抑制氧化损伤后的PC12细胞凋亡,有效成分配伍后作用加强,其机制可能与抑制细胞活性氧的生成,提高线粒体膜电位有关。     

盐酸小檗碱抑制乳腺癌MDA－MB－231细胞增殖及诱导凋亡的作用研究

目的:观察盐酸小檗碱对乳腺癌MDA－MB－231细胞抑制增殖及诱导凋亡的作用,并探讨其可能的机制?方法:不同浓度(0?25?50?75?100 μmol/L)盐酸小檗碱处理MDA－MB－231细胞不同时间(48?72 h),MTT法检测盐酸小檗碱对细胞的增殖抑制率,选择盐酸小檗碱50 μmol/L作为机制研究浓度,Annenxin Ⅴ/PI EGFP染色流式细胞仪检测盐酸小檗碱对细胞凋亡的影响;2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH－DA)荧光探针检测盐酸小檗碱对细胞内活性氧簇的影响;5,5′,6,6′-四氯-1,1′,3,3′-四乙基苯丙咪唑羰花青碘化物(JC－1)荧光探针检测盐酸小檗碱对细胞线粒体膜电位的影响;Caspase3试剂盒检测盐酸小檗碱对细胞内Caspase3活性的影响?结果:盐酸小檗碱作用MDA－MB－231细胞48?72 h,呈浓度及时间依赖性抑制MDA－MB－231细胞增殖?盐酸小檗碱(50 μmol/L)呈时间依赖性诱导MDA－MB－231细胞凋亡并诱导MDA－MB－231细胞内活性氧簇大量生成,线粒体膜电位降低,Caspase3活性增高?结论:盐酸小檗碱对MDA－MB－231细胞的增殖抑制作用可能是通过诱导细胞内活性氧簇的生成?降低线粒体膜电位,升高Caspase3活性,由线粒体途径诱导细胞凋亡?     

莫达非尼抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡

目的:研究莫达非尼(modafinil)对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用,并对其机制进行探讨.方法:以噻唑兰(MTT)法测定PC12细胞存活率;用流式细胞术检测PC12细胞凋亡的百分率;测定细胞内罗丹明123(Rhodamine123)的荧光强度,反映细胞线粒体膜电位的改变.结果:莫达非尼能抑制过氧化氢(200 μmol/L)、硝普钠(500μmol/L)和连二亚硫酸钠(2 mmol/L)对PC12细胞的损伤.过氧化氢(200 μmol/L)24h可以诱导PC12细胞凋亡(凋亡率为32.65%).莫达非尼(15,7.5 μmol/L)显著降低凋亡细胞的百分率(凋亡百分率分别为7.95%、15.46%).并且莫达非尼可以抑制过氧化氢引起的线粒体膜电位降低.结论:莫达非尼对PC12细胞有保护作用.能抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡,这一作用可能与其抑制过氧化氢引起的线粒体膜电位降低有关.     

丁基苯猷对老化的小胶质细胞诱导多巴胺能神经元损伤的影响

【摘要】 目的 探讨dl-3-丁基苯gk(NBP)衰老的小胶质细胞诱导的帕金森病细胞模型中的保护作用及机制。方 法 采用大鼠小胶质细胞原代培养和PC12细胞株的传代培养法，佛波酯诱导小胶质细胞异常活化，不同剂量的NBP 预处理PC12细胞，然后加入低剂量鱼藤酮以建立与衰老小胶质细胞共育系统，模拟帕金森病体外细胞模型，在倒置显 微镜下观察PC12细胞形态，同时用流式细胞仪检测各组PC12线粒体膜电位及细胞内活性氧监测，Annexin V-PI双染 法监测PC12凋亡。结果 与正常组相比，老化小胶质细胞共育的PC12细胞线粒体膜电位下降，细胞内ROS生成增多 (P＜0.01),而0.01?100μM的NBP均可不同程度地抑制这一变化。结论 NBP通过抑制线粒体通透性、减少氧化应激等机制来降低PC12细胞凋亡，对神经元起保护作用。     

促红细胞生成素对MPP+所致的PC12细胞线粒体氧化损伤的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导PC12细胞变性损伤的保护作用及其机制.方法 以MPP+损伤PC12 细胞作为帕金森病(PD)细胞模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rh123)染色检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),双氯荧光黄乙酸乙酯(DCF-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)的含量,免疫印迹法检测pAkt蛋白表达.结果 ①500 μmol/L的MPP+可以导致PC12细胞的存活率下降,凋亡率增加,0.1~10 U/mL的EPO可以使PC12细胞的存活率增加,凋亡率降低,并在1 U/mL时达到最大保护效应;②MPP+导致ROS含量增加、ΔΨm降低;EPO可以抑制MPP+所致ROS和ΔΨm水平的变化;③EPO增加了Akt磷酸化水平,PI3K抑制剂LY294002拮抗了EPO的保护作用和对ROS产生的抑制作用.结论 EPO对MPP+损伤PC12细胞具有保护作用,其机制是通过PI3K/Akt通路实现的.     

过表达OGCP对鱼藤酮和突变型Parkin致HEK293细胞毒性的保护作用

目的 研究а-酮戊二酸载体蛋白(2-oxoglutarate carrier protein,OGCP)和Parkin对HEK293细胞功能的影响.方法 采用流式细胞术检测经鱼藤酮、OGCP和/或Parkin处理的HEK293细胞细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞内活性氧水平.结果 ①野生型Parkin和OGCP能够提高经鱼藤酮诱导的HEK293细胞的线粒体膜电位,降低细胞内活性氧和细胞凋亡率,而突变型Parkin(R42P和T240R)则降低HEK293细胞尤其是经鱼藤酮诱导的HEK293细胞的线粒体膜电位,增加细胞内活性氧,促进细胞凋亡;②此外,还发现OGCP可以抑制由于Parkin突变(R42P和T240R)导致的线粒体膜电位降低和活性氧增加,减少Parkin突变(R42P和T240R)导致的细胞凋亡.结论 ①Parkin蛋白和OGCP可能与维持线粒体正常功能相关;②过表达突变型Parkin(R42P和T240R)蛋白可能抑制线粒体功能,促进细胞凋亡;③过表达OGCP可能对鱼藤酮和突变型Parkin蛋白细胞毒性有一定的保护作用.     

雷公藤甲素可损伤肝脏分类线粒体及HL7702细胞株线粒体

Objective: To observe the impairing effects of triptolide on liver mitochondria in isolated rat-liver mitochondria and human normal liver HL7702 cell line. Methods: Rat-liver mitochondria were isolated from adult female Sprague–Dawley (SD) rats. Liver mitochondria were incubated with 0, 1.25, 2.5, 5 and 10 μmol/L triptolide for detecting mitochondrial swelling and with 0, 2.5, 5 and 10 μmol/L triptolide for mitochondrial permeability transition pore (MPTP) activity. Mitochondrial swelling was estimated by measuring the apparent absorbance change during 600 s in the mitochondrial suspensions at 520 nm with a mitochondrial swelling examining kit. The effect of triptolide on MPTP was determined with a fluorescence detection kit by detecting the fluorescence intensity at an excitation wavelength of 488 nm emitted at 527 nm. Human normal liver HL7702 cells were treated without or with 0.02, 0.1 and 0.5 μmol/L triptolide for 24 h for analyzing mitochondrial transmembrane potential (△Ψm) and reactive oxygen species (ROS). △Ψm was measured using the fluorescent probe 5,5'',6,6''-tetrachloro-1,1'',3,3''-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide (JC-1). ROS was measured using fluorescent probe 2'',7''-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA). The cells were harvested and dyed with JC-1 and DCFH-DA, and analyzed by flow cytometry, respectively. Results: Incubation of isolated mitochondria with triptolide results in swollen mitochondria in a concentration-dependent manner. Moreover, triptolide significantly activated mitochondrial permeability transition at 5 and 10 μmol/L (P<0.05 and P<0.01). When HL7702 cells were exposed to a various concentration triptolide for 24 h, mitochondrial membrane depolarization and increase of ROS were caused by triptolide in a concentration-dependent manner. Triptolide significantly induced the mitochondrial membrane depolarization at 0.1 and 0.5 μmol/L (P<0.05 and P<0.01) and the increase of ROS at 0.1 and 0.5 μmol/L (P<0.05 and P<0.01). Conclusion: Triptolide could induce mitochondrial impairment, which may be one of the mechanisms by which hepatotoxicity occurs.     

类黄酮衍生物DMF诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的实验研究

目的:检测3-(2-氯苯基)-1-(2-羟基-4,6-二甲氧基-3-((-N,N-甲基乙基胺)甲基)苯基)-丙-2-烯-1-酮(DMF)对人前列腺癌PC3细胞的抗肿瘤活性,并对相关作用机制进行研究。方法:采用MTT法测定DMF对PC3细胞增殖的体外抑制作用;流式细胞术检测PC3细胞凋亡率;JC-1染色观察线粒体ΔΨm变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果:DMF对PC3细胞具有显著的抗增殖作用。流式细胞术结果表明,这种抗增殖作用是通过诱导细胞凋亡实现的。DMF可诱导PC3细胞的线粒体膜电位(ΔΨm)下降,并呈明显的时间和剂量依赖效应。Western blot结果显示,DMF促进PC3细胞内procaspase-3活化及其下游底物PARP降解。同时,DMF还促进Bax蛋白表达上调和Bcl-2蛋白表达下调,使Bax/Bcl-2比值明显增加。此外,DMF可抑制PC3细胞内p38蛋白的磷酸化。结论:DMF可显著抑制PC3细胞增殖,其促凋亡作用可能是通过线粒体信号转导途径实现的。     

Protective effect of cyclophilin A against Alzheimer＇s amyloid beta-peptide （25-35）-induced oxidative stress in PC12 cells

Background β-amyloid peptide （Aβ） is considered responsible for the pathogenesis of Alzheimer＇s disease （AD）. Possible mechanisms underlying Aβ-induced neuronal cytotoxicity include excessive production of reactive oxidative species （ROS） and apoptosis. Cyclophilin A （CypA）, exhibits antioxidant properties and protects neurons against oxidative stress induced injury. This study was conducted to demonstrate whether CyPA added to cultured PC12 cells could alleviate Aβ-induced oxidative stress and protect them from apoptosis.
Methods PC12 cells were pre-incubated for 30 minutes with recombinant human cyclophilin A （rhCyPA） in 0.1 nmol/L, 1.0 nmol/L, 10 nmol/L and 100 nmol/L and then incubated with 10 μmol/L Aβ25-35. In every group, cell viability, apoptotic morphology, apoptotic rate, intracellular ROS accumulation, the activities of superoxide dismutase （SOD） and glutathione peroxidase （GSH-Px） of PC12 cells and mitochondrial transmembrane potential were detected. Subsequently, the expression of the active form of caspase-3 was determined by Western blotting.
Results It was shown that cultures treated with 1.0 nmol/L, 1U nmol/L or 100 nmol/L rnL, rhCyPA＋Aβ25-35 had significantly higher cell viability and a lower rate of apoptosis compared with the cultures exposed only to Aβ25-35. In addition, rhCyPA attenuated Aβ25-35-induced overproduction of intracellular ROS and Aβ25.35-induced a decrease in activity of the key antioxidant enzymes SOD and GSH-Px. Furthermore, rhCyPA also attenuated Aβ25.35-induced mitochondrial dysfunction and the activation of caspase-3.
Conclusion CyPA may act as an ROS scavenger, and prevent Aβ25-35-induced neurotoxicity through attenuating oxidative stress induced by Aβ25-35.     

硫化氢对化学性缺氧诱导PC12细胞凋亡的影响

【目的】 探讨硫化氢(H2S)对抗二氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的作用及其初步机制&#65377;【方法】 应用化学性缺氧模拟剂CoCl2在PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型;以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率; Hoechst33258 染色检测细胞凋亡的形态学变化; 罗丹明123(Rh123) 染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位(MMP); 2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧 (ROS)水平&#65377;【结果】 CoCl2引起PC12细胞的存活率显著降低及凋亡率明显增加, 同时引起PC12细胞的MMP 明显降低及ROS 生成显著增加&#65377;在600 μmol/L CoCl2处理PC12细胞前,应用100 ~ 400 μmol/L NaHS 预处理30 min,呈浓度依赖性地阻断CoCl2引起PC12细胞的存活率降低; 200 μmol/L&#65380;400 μmol/L NaHS 预处理能显著地降低600 μmol/L CoCl2 引起PC12 细胞的凋亡率增加并阻断CoCl2 引起的MMP降低及ROS升高&#65377;【结论】 H2S 具有神经细胞保护作用, 能明显地对抗CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,此作用可能与其减少ROS生成,提高MMP有关&#65377;     

N-乙酰半胱氨酸拮抗鱼藤酮致PC12细胞凋亡的研究

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对PC12细胞的保护作用及机制。方法采用鱼藤酮(1μmol/L)处理PC12细胞24 h,建立帕金森病细胞模型;在该模型中,N-乙酰半胱氨酸(500μmol/L)预处理PC12细胞30 min。采用AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,以双氢溴化乙啶(DHE)和双氢罗丹明123(DHR123)为染料,采用流式细胞术检测细胞内活性氧水平;比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)水平,同时检测细胞Caspase-3酶活性和线粒体膜电位。结果 1μmol/L鱼藤酮处理PC12细胞后,细胞凋亡率为42.0%,DHE和DHR123荧光强度分别为正常组的230%和333%,GSH含量为101 nmol/mg prot,细胞线粒体膜电位为正常组的46%,Caspase-3酶活性为正常组的141%,与正常组比较,上述指标的差异均具有统计学意义。而N-乙酰半胱氨酸预处理后,细胞凋亡率降至26.0%,DHE和DHR123荧光强度分别为正常组的177%和290%,GSH含量为120 nmol/mg prot,线粒体膜电位为正常组的53%,Caspase-3酶活性为正常组的116%,与鱼藤酮组相比,差异均具有统计学意义。结论 N-乙酰半胱氨酸对PC12细胞具有保护作用,保护机制与其抗氧化活性有关。     

紫菀肽类组分诱导肝脏L-02细胞凋亡的机制

探讨紫菀肽类组分Fr-2的肝细胞毒性及其作用机制。采用二甲基噻唑蓝(MTT)检测人正常肝脏L-02细胞的活力,试剂盒检测LDH、ROS、GSH、细胞色素C和Caspase-9、Caspase-3的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白p-JNK、Bax、Bcl-2的表达。实验结果显示,紫菀肽类组分Fr-2可剂量/时间依赖性地抑制L-02细胞的生长,诱导细胞内的氧化应激反应,降低线粒体膜电位,促进细胞色素C的释放,升高Bax/Bcl-2的比值并激活Caspase-9、Caspase-3。以上结果表明,紫菀肽类组分Fr-2导致肝细胞毒性的主要诱因是氧化应激,主要作用机制是诱导线粒体依赖途径的细胞凋亡。     

Necroptosis与细胞凋亡在激素诱导成骨细胞死亡中的相互作用

目的探讨Necroptosis与凋亡在激素诱导成骨细胞死亡中的相互作用。方法向MC3T3-E1细胞内添加浓度为10-6 mol/L 的地塞米松诱导细胞死亡，随后在本组细胞中分别添加凋亡抑制剂z-VAD-fmk（40 μmol/L）和Necroptosis抑制剂Necrostatin-1 （40 μmol/L），作用2 h 后，AV/PI 双染观察细胞死亡的变化情况，并对细胞进行Hoechst 染色计算凋亡率，用透射电镜观察细 胞超微结构的改变，测定细胞线粒体膜电位和ATP水平，对Necroptosis 和凋亡通路的相关蛋白进行Western blot 检测。结果 10-6 mol/L地塞米松可以诱导MC3T3-E1细胞同时发生凋亡和Necroptosis。AV/PI双染的结果发现，当凋亡受到抑制后，更多的 细胞发生坏死（P<0.01），而透射电镜结果也证实细胞发生了坏死样改变，Hoechst 染色结果发现，凋亡细胞数明显减少（P< 0.01）；当使用Necroptosis特异性抑制剂Necrostatin-1将这种作用阻断后，包括Hoechst染色和AV/PI双染的结果都证实凋亡的 细胞数明显增多（P<0.01），同时，在这一作用过程中伴随着MMP及ATP的明显变化（P<0.01）。结论在激素诱导成骨细胞死亡 过程中，Necroptosis和凋亡在一定条件下可以相互转化，这一转化过程中伴随着线粒体功能的明显改变。