寻常型天疱疮抗原细胞外区1-2表位抗体亚型的致病性

目的探讨不同寻常性天疱疮（PV）抗体亚型在PV中的作用。方法分别用完全弗氏佐剂（CFA）、铝[Al（OH）3]佐剂联合重组寻常型天疱疮抗原（PVA）细胞外区1～2融和蛋白免疫C57BL/6小鼠。免疫后对其细胞因子的类别、特异性抗体滴度和抗体亚型进行检测;并通过诱导新生鼠的动物模型评价其致病性。结果免疫后经细胞因子检测显示CFA组小鼠产生较多的Th1型细胞因子γ-干扰素（IFNγ）,Al（OH）3组则以Th2型细胞因子白介素-4（IL-4）为主;抗体亚型的型别在CFA组中以IgG2a为主,而Al（OH）3组以IgG1为主。新生鼠被动转移实验显示,转移Al（OH）3组小鼠的抗血清可使被转移鼠皮肤出现糜烂,组织病理、免疫荧光均符合PV的表现,而CFA组小鼠的抗血清不能出现上述表现。结论相同PVA在不同免疫佐剂作用下可诱导产生不同抗体亚型;不同亚型的抗PVA抗体其致病性不同。     

寻常型天疱疮抗原表位重组、致病性与临床应用研究

天疱疮是一危及人类生命的自身免疫性大疱性皮肤和粘膜疾病,其中的寻常型天疱疮(Pemphigus vulgaris, PV)在所有类型的天疱疮中具有最多见、病情重、死亡率高的特点。寻常型天庖疮患者的角质形成细胞间粘附能力丧失,其原因是患者血清中存在针对寻常型天疱疮抗原(Pemhpigus vugaris antigen,PVA)即角质形成细胞的桥粒芯糖蛋白-3(desmoglein3,Dsg-3)的IgG型抗体。为了确定PVA中的致病性表位,美、日学者     

CpG 2006佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导体液免疫应答的作用

目的研究CpG 2006佐剂对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗诱导的体液免疫应答的作用。方法重组RSV疫苗G1F/M2与CpG佐剂混合,鼻腔或腹腔注射免疫BALB/c小鼠3次,最后一次免疫2周后取血,分离血清,用间接ELISA检测特异性抗体IgG、IgG1和IgG2a水平。结果鼻腔免疫途径:CpG佐剂组诱导的IgG1均显著低于无佐剂组(t=3.365,P0.05),而IgG2a显著高于无佐剂组(t=2.675,P0.05),佐剂组IgG1/IgG2a的比值(1.05)明显低于无佐剂组(1.25)。腹腔免疫途径:CpG佐剂组的IgG1明显低于无佐剂组(t=6.869,P0.05),而IgG2a显著高于无佐剂组(t=2.893,P0.05),且前者IgG1/IgG2a的比值(0.97)明显低于后者(1.30)。结论CpG 2006作为G1F/M2的佐剂,对体液免疫应答无增强作用,但可以调节免疫应答的类型,使Th1型应答升高,Th2型应答降低。     

吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制剂联合铝佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的效应分析

目的 探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂联合对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其复合佐剂效应.方法 分别将三种不同剂量的INCB024360类似物(150 μg,100 μg,50 μg)与Al(OH)3(300 μg)复合后与HepA-1共同免疫ICR小鼠分别作为复合佐剂1组,2组,3组,同时设空白对照组、单纯疫苗组、铝佐剂对照组和单一INCB024360类似物(100 μg)组,共免疫一次,于免疫后4周、8周、12周、16周进行尾静脉采血,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清抗甲型肝炎病毒(HAV) IgG抗体水平.结果 除空白对照组外,各组小鼠免疫后4周、8周、12周、16周,均产生抗HAV IgG抗体,抗体水平随免疫时间的延长逐渐升高,于12周达到峰值.复合佐剂2组[HepA-118 EU+Al(OH)3 300 μg+INCB024360类似物100 μg]产生的抗体水平最高且持续时间较长,在8周和12周时,其对HepA-1的免疫增强效应显著高于单一佐剂组以及铝佐剂对照组(P＜0.05,t值分别为3.169、2.439).4周、8周、12周、16周,单一佐剂组与单纯疫苗组差异均不具有统计学意义(P＞0.05).结论 IDO抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂复合后具有较强的复合佐剂效应,免疫增强效应优于铝佐剂对照组;但是单一的INCB024360类似物不具有显著佐剂效应.     

皮肤型寻常型天疱疮:天疱疮罕见的临床表型

天疱疮是一种皮肤、黏膜或二者都有的自身免疫疱病。主要分落叶性天疱疮(PF)和寻常型天疱疮(PV)。根据皮损内容物,PV更进一步分为黏膜型和黏膜皮肤型。这些天疱疮的亚型有明显的组织病理和血清学特征,大多数病例可归为这些亚型。作者报道4例临床表现为仅在皮肤有水疱和糜烂,不伴黏膜受累的天疱疮。皮损的组织病理显示基底层上部棘松解,为寻常型天疱疮的典型表现。这些患者做酶联免疫吸附试验可见显著的抗桥粒核心糖蛋白1(Dsg1)IgG和抗桥粒核心糖蛋白3(Dsg3)IgG。桥粒核心糖蛋白补偿理论断定这种罕见的表型是由大量的抗Dsg1IgG中致病性…     

CpG寡脱氧核苷酸作为人用疫苗佐剂的初步研究

目的：研究活化人免疫细胞的CpG寡脱氧核苷酸（CpG-ODN)在动物模型中的疫苗佐剂活性。方法;通过体外试验确定研究人CpG-ODN的动物模型,评价人 CpG-ODM在动物模型中对HBsAg的疫苗佐剂活性。结果：CpG2006等含有5′GTCGTT3′基元的人Cp-ODN能够活化小鼠脾细胞分泌IgM和IFN－γ,而CpGT7等含有5′GTCGTC3′基元的人CpG-ODN对小鼠活性很弱,具有较强人特 异性,对两类序列均能够较好活化恒河猴B细胞。以上结果提示小鼠和恒河猴可能用作研究人CpG-ODN的动物模型。在BALB／c小鼠中含有5′GTCGTT3′基元的序列能够显著提高抗－HBs总抗体、IgG1和IgG2a亚型抗体水平,而含有5′GTCGTC3′基元的序列作用稍弱,但两者均能够显著逆转Al(OH3)对Th1类免疫应答的抑制作用,使IgG2a/IgG1从0．014提高到1左右。然而在恒河猴体内的疫苗佐剂活性较弱,CpGT7能够使特异性抗体滴度提高2倍,而CpG2006没有作用。结论：动物模型结果表明CpG-ODN是一种良好的Th11类候选人用疫苗佐剂。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3功能区片段的制备及其免疫原性分析

目的构建恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3功能片段MSP3(69)与谷胱甘肽(GST)的融合蛋白,并在大肠杆菌中进行表达,分析其免疫原性。方法采用大肠杆菌系统表达融合蛋白GST-MSP3(69),以疟疾病人血清进行Western-blot,并以ISA720、佛氏、氢氧化铝与CpG联合3种佐剂与GST-MSP3(69)融合蛋白乳化,免疫Balb/ca小鼠,分析其免疫原性。结果在大肠杆菌系统中成功表达GST-MSP3(69)融合蛋白,疟疾病人血清能与融合蛋白反应。3种佐剂免疫Balb/ca小鼠均能诱发Balb/ca小鼠产生较高水平的特异抗体,3次免疫后的抗体滴度分别为4.5×105,4.1×105和3.5×105。3次免疫后血清抗体亚型分析显示该蛋白能够诱导Balb/ca小鼠产生较高滴度的亲细胞亚型IgG1和IgG2b,ISA720、佛氏、氢氧化铝与CpG联合佐剂组IgG1分别为8×104、7.8×104、6.8×104,IgG2b分别为1.2×104,1.25×104、1.5×104。统计学分析显示不同佐剂组的抗体滴度及抗体亚型滴度之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论制备了在大肠杆菌表达的GST-MSP3(69)融合蛋白,该蛋白具有高免疫原性,并产生亲细胞亚型抗体,这些为研究MSP3蛋白功能区的免疫保护作用打下了基础。     

日本血吸虫重组SjTsp2/Sj29 ku蛋白疫苗对小鼠免疫效果的研究

目的探讨日本血吸虫重组Tsp2/Sj29 ku表膜蛋白疫苗对小鼠的抗病免疫效果。方法 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷( IPTG)诱导表达,制备纯化的重组蛋白。29只6周龄雌性昆明鼠随机分为蛋白疫苗组、硫氧还蛋白组和空白对照组,前两组各10只,空白对照组9只。蛋白疫苗组,第一次免疫每鼠经背部皮下多点注射用等体积弗氏完全佐剂乳化的50μg SjTsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白,第12、24天每鼠皮下多点再次注射用等体积弗氏不完全佐剂乳化的50μg该重组蛋白。硫氧还蛋白组的免疫方法同蛋白疫苗组。空白对照组用生理盐水代替蛋白,免疫方法同前。末次免疫后第10天,每鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)条。于感染45 d后剖杀全部实验小鼠,计算减虫率和减卵率。眼眶取血,分离血清,间接性ELISA法检测IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM抗体亚型,同时检测血清细胞因子γ干扰素( IFN-γ)、白介素4( IL-4)水平。结果 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku菌经IPTG诱导可大量表达,经变性、复性获得纯化的日本血吸虫Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白。蛋白疫苗组与空白对照组比较,减虫率和减卵率显著升高( P<0.05)。硫氧还蛋白组与空白对照组之间比较,减虫率和减卵率差异均无统计学意义( P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG2b显著高于空白对照组(P<0.05),而IgG3和IgM较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清IFN-γ、IL-4细胞因子显著高于空白对照组( P<0.01)。结论日本血吸虫 Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白疫苗对小鼠抗感染有一定的保护性;该重组蛋白免疫引起的是 Th1/Th2混合型免疫反应。     

过继转输抗L3T4单抗治疗的心肌病小鼠脾细胞对心肌抗体的影响

目的 通过对心肌自身抗体的分析探讨Th细胞在自身免疫性心肌病发病机制中的作用.方法 用含有人线粒体ADP/ATP载体肽的免疫液多次免疫Balb/c小鼠得到心肌病组(n=6),单抗组(n=6)小鼠在给予ADP/ATP肽免疫的第0、1和2天,同时接受尾静脉注射400 μg抗L3T4单抗;第180天时,将单抗组小鼠的脾细胞取出转输到正常小鼠体内(转输组,n=6),此小鼠亦同时给予多肽免疫,方法同心肌病组.对照组(n=6),以不含多肽的盐水免疫小鼠,时间和剂量同心肌病组.以ELISA法检测各组小鼠血清抗ADP/ATP载体自身抗体水平及IgG亚型的变化;以实时荧光定量PCR法检测各组小鼠T细胞中的细胞因子mRNA的表达.结果 转输组小鼠血清自身抗体在各时间点均为阴性,类似于单抗组和对照组,而心肌病组抗体水平在各时间点均显著高于对照组(P<0.01);转输组IgG1亚型的生成受到明显抑制;细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6)表达在单抗组和转输组均受到显著抑制.结论 Th细胞介导的免疫应答在自身免疫性心肌病的发病机制中起重要作用.     

Aβ3-10多价腺病毒疫苗鼻黏膜免疫BALB/c鼠的免疫原性鉴定及Aβ蛋白表达检测

目的 探讨Aβ3-10多价腺病毒疫苗鼻黏膜免疫BALB/c鼠的免疫原性鉴定及蛋白表达.方法 18只12月龄BALB/c小鼠,随机分为3组,分别为Ad-Aβ(3-10)10-CpG组,空腺病毒载体组和Aβ1-42组,分别以Aβ3-10多价腺病毒疫苗Ad-Aβ(3-10)10-CpG鼻黏膜免疫、空腺病毒载体鼻黏膜免疫、Aβ1-42肌内注射免疫.各组均每2周免疫1次,共免疫6次.ELISA法检测血清抗Aβ抗体滴度及亚型,免疫组化法检测免疫后的BALB/c小鼠抗血清能否与转基因鼠脑内Aβ斑块结合,免疫组化法检测鼻黏膜内Aβ蛋白的表达.结果 Ad-Aβ(3-10)10-CpG组和Aβ1-42组抗体滴度随着免疫次数逐渐增加.6次免疫后Ad-Aβ(3-10)10-CpG组血清中抗Aβ抗体滴度为(83.71±16.69) μg/mL,明显高于空载体组(P＜0.01),而低于Aβ1-42组(P＜0.05).Ad-Aβ(3-10)10-CpG组和Aβ1-42组的IgG1/IgG2a比值分别为10.85±2.02和1.95 ±1.82,Ad-Aβ(3-10)10-CpG组IgG1/IgG2a比值明显高于Aβ1-42组(P＜0.05).Ad-Aβ(3-10)10-CpG组和Aβ1-42组小鼠的抗血清能和转基因鼠脑内的Aβ斑块结合.Ad-Aβ(3-10)10-CpG组鼻黏膜内可以检测到Aβ蛋白表达,而其他各组小鼠鼻黏膜内未检测到Aβ蛋白表达.结论Aβ3-10多价腺病毒疫苗鼻黏膜免疫主要产生Th2型免疫应答,减少了由T细胞介导的免疫应答引起的炎症反应.     

Th1/Th2细胞因子在眼肌型重症肌无力转基因小鼠模型中的作用机制

目的 观察重组人乙酰胆碱受体(H-AChR) γ亚单位免疫HLA-DQ8转基因小鼠眼肌型实验性自身免疫性重症肌无力(oEAMG)模型体外培养上清液中Th1/Th2细胞因子水平变化,探讨其与oEAMG免疫学发病机制的联系。方法 HLA-DQ8转基因小鼠用乳化于完全弗氏佐剂(CFA)的重组H-AChR γ亚单位,或E. Coli提取物,或纯CFA分别免疫,分别于第0天、第30天和第60天共免疫3次。第3次免疫后28 d,处死小鼠后取淋巴结和脾淋巴细胞体外培养,收集培养上清液,采用ELISA法检测白细胞介素(IL)-2、γ-干扰素(IFN-γ)、IL-6和IL-10水平。结果 H-AChR γ组小鼠淋巴结及脾淋巴细胞体外培养上清液中IL-2(F=42.835,P<0.001;F=38.030,P<0.001)和INF-γ水平(F=76.332,P<0.001;F=34.865,P<0.001)均明显高于E. coli组和CFA免疫组;IL-6(F=1.325,P=0.284;F=1.935,P=0.166)和IL-10水平(F=0.908,P=0.417;F=1.189,P=0.322)与E. coli 组和CFA组差异无统计学意义。结论 Th1细胞因子在重组H-AChR γ亚单位诱导HLA-DQ8转基因小鼠所建立oEAMG模型的发病机制中可能发挥重要作用,而Th2细胞及其细胞因子作用尚不十分明确。     

微囊化转mIL-12基因CHO细胞皮下移植及联合5-FU对荷瘤小鼠的治疗作用

目的：观察微囊化CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞皮下移植及联合5-FU对荷瘤小鼠的治疗作用。方法：将微囊化的CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞移植到荷瘤小鼠的皮下,观察肿瘤的生长速度、荷瘤小鼠的生存期,20d后,检测小鼠血清Th1和Th2类细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12和IL-4、IL-10的水平及NK细胞和CTL细胞的活性。结果：经微囊化CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞皮下移植干预治疗后,小鼠血清Th1细胞因子水平明显升高,NK细胞和CTL细胞的活性明显增强,而Th2类细胞因子则明显降低;小鼠肿瘤的生长速度明显减慢,生存期明显延长;同时可部分改善化疗引起的免疫抑制作用。结论：微囊化的CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞皮下移植可以明显改善荷瘤小鼠的细胞免疫功能,部分减轻化疗引起的免疫抑制作用 ,对减慢肿瘤的生长速度和延长荷瘤小鼠的生存期均有明显的效果。     

重组IL-35-BCG新生儿期接种对实验性哮喘模型Tregs及Th17的影响

目的 建立重组卡介苗(recombinant Bacillus Calmette-Guérin,rBCG)新生期接种的小鼠哮喘模型,观察生命早期进一步加强Tregs类免疫反应后,哮喘发作阶段气道炎症受到的干预作用及其机制。 方法 清洁级BALB/c新生小鼠随机分为3组:IL-35-BCG组、OVA组、对照组,IL-35-BCG组新生期接种后分别在生后第4周和第6周进行OVA致敏,OVA组新生期给予BCG稀释液(不含BCG)接种后分别在生后第4周和第6周进行OVA致敏,除对照组外小鼠哮喘模型均在第7周开始使用OVA激发,连续激发1周,最后一次激发后24 h内,进行相关检测。 结果 IL-35-BCG组与OVA组支气管肺泡灌洗中白细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞等比例都比对照组明显升高,而IL-35-BCG组上述细胞均显著低于OVA组。流式细胞术显示IL-35-BCG组与OVA组肺部Tregs细胞比例均明显高于对照组(均P<0.05),且与OVA组相比,IL-35-BCG新生期接种组哮喘小鼠Tregs细胞比率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-35-BCG组与OVA组肺部Th17细胞比例均明显高于对照组(均P<0.05),但与OVA激发的哮喘组比较,新生期IL-35-BCG接种小鼠激发后Th17细胞比例明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 新生期接种IL-35-BCG在哮喘期,促进Tregs分化,抑制Th17细胞分化,明显减轻哮喘小鼠模型气道炎症细胞浸润。提示Tregs及Th17细胞在实验性哮喘小鼠发病中起作用,新生期接种IL-35-BCG在生命早期增强Tregs介导的免疫应答,以便诱导Tregs细胞在发生哮喘时发挥抗哮喘作用。      

抗L3T4单抗早期干预对心肌病小鼠细胞因子的影响

目的研究早期应用抗L3T4单抗对心肌病小鼠血清和心肌组织中细胞因子的影响，探讨抗L3T4单抗治疗自身免疫性心肌病的机制。方法用含有人线粒体ADP／ATP载体肽的免疫液免疫近交系Balb／C小鼠建立类扩张型心肌病模型（心肌病组）；以不合肽免疫液免疫小鼠作为对照组；在同时用含有ADP／ATP载体肽的免疫液免疫小鼠的前1d连续3d以400μg抗L3T4单抗免疫小鼠获得单抗组。采用流式细胞术检测小鼠脾脏中CD44T细胞内IFN-γ／IL-4的表达；以ELISA法检测其血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α水平；实时荧光定量PCR法检测其心肌细胞因子基因表达。结果心肌病组小鼠血清IFN-γ和IL-4水平明显高于对照组，而单抗早期干预使其生成受到抑制，此结果与流式细胞仪检测到的T细胞内IFN-γ和IL-4水平相-致；血清中IL-2含量在3组小鼠差异均无显著性；TNF-α则在单抗组显著高于对照组和心肌病组。从心肌组织中细胞因子表达情况来看，心肌病组各种细胞因子合成均增多，而早期应用单抗能够抑制其基因表达。结论抗L3T4单抗能够阻断绝大部分细胞因子的生成，从而能够治疗实验鼠自身免疫性心肌病。     

耐受性树突状细胞对哮喘小鼠气道变应性炎症反应的抑制作用

目的: 用卵白蛋白(OVA)刺激的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell, imDC)免疫小鼠,观察其对小鼠OVA激发的气道过敏性炎症反应的抑制作用,探讨耐受性树突状细胞疫苗诱导免疫耐受的可能机制,为临床防治哮喘提供新的思路.方法: 制备BALB/c小鼠髓性imDC.其余BALB/c小鼠分4组,10只/组:其中两组于第-7天分别注射无菌PBS(PBS组)、OVA刺激的imDC(imDC组),第三组于第13～20天注射地塞米松(地塞米松组),第四组不作任何处理(健康对照组);除健康对照组外,其余各组诱导哮喘反应:第0天和第9天分别注射OVA致敏,14～20天每日予OVA气雾攻击.第21天每组处理5只小鼠,检测肺部炎症细胞浸润及嗜酸性粒细胞比例、气道黏液分泌、脾细胞Th1/Th2型细胞因子表达及脾细胞中CD4 CD25 细胞比例;第49天,处理剩余动物,观察哮喘预后.结果: mDC注射组肺部炎症浸润较轻,脾细胞表达白细胞介素(IL)-13、4降低而γ-干扰素(IFN-γ)无显著影响,脾细胞中CD4 CD25 细胞比例较高,气道黏液分泌则少于PBS组,且预后良好. 结论: 过敏原特异性imDC疫苗注射可在一定程度上缓解哮喘小鼠气道的变应性炎症反应.     

人呼吸道合胞病毒Long株的免疫原性初探

目的 评价人呼吸道合胞病毒（HRSV） Long株的免疫原性,为进一步的研究疫苗提供实验数据.方法 将HRSV制备成纯化抗原,取40只ICR鼠,随机分为4组,分别用纯化HRSV、纯化HRSV＋ Al（OH）3、并设0.01 mol/L PBS、Al（OH）3对照组,0天、28天免疫小鼠,采用中和试验检测血清中和抗体,流式检测7种细胞因子.结果 初免后28天,加Al（OH）3组与无Al（OH）3组抗体阳转率分别为60％和50％,抗体几何平均效价（GMT）分别为1∶4.49和1∶5.27;加强免疫后,Al（OH）3组与无Al（OH）3组小鼠血清抗体阳转率均达100％,抗体几何平均效价（GMT）分别为1∶17.15和1∶10.56,平均增长3.8倍和2.0倍;中和抗体在组间无差异,而组内初免与再免的中和抗体有统计学差异（P＜0.01）.加Al（OH）3样品组与无Al（OH）3样品组,所检测7种细胞因子均诱导IL-6及TNF,与两个对照组间有统计学差异（P＜0.05）,而另外5种细胞因子则无明显升高.结论 人呼吸道合胞病毒Long株可产生良好的免疫效应.     

抗白介素-9抗体对BALB/c哮喘小鼠T细胞功能的影响

目的通过比较不同干预措施对小鼠哮喘模型的影响情况,研究其对免疫系统中CD^4＋T辅助细胞2型（Th2细胞）活性的影响,旨在了解外源性抗白介素（IL）-9抗体（Anti-IL-9 Ab）在哮喘中的潜在治疗价值.方法30只BALB/c小鼠随机均分为阳性对照组、Anti-IL-9 Ab组和地塞米松（Dex）组,建立小鼠哮喘模型,采取不同干预措施.比较各组血清、脾和骨髓细胞培养上清液细胞因子的含量.结果Anti-IL-9 Ab组小鼠血清中TH2细胞因子较阳性对照组明显降低（P＜0.01）,Dex组小鼠血清和脾细胞培养上清液中Th2、Th1细胞因子均较阳性对照组明显降低（P＜0.01）,两组骨髓细胞培养上清液细胞因子的含量较阳性对照组均无明显变化.结论Anti-IL-9 Ab和Dex均能明显减轻哮喘小鼠的肺部炎症,在气道建立起新的Th1/Th2平衡.与Dex相比,应用Anti-IL-9 Ab建立的新平衡不会造成因细胞免疫功能受抑引起的一系列不良反应.     

Analysis of Specific Th1/Th2 Helper Cell Responses and IgG Subtype Antibodies in Anti-CD4 Monoclonal Antibody Treated Mice with Autoimmune Cardiomyopathy

The cytokine repertoire of ADP/ATP carrier-specific humoral immune responses and the cytokine-dependent anti-ADP/ATP carrier antibody IgG subclasses were examined in a cohort of ADP/ATP carrier-immunized BALB/c mice treated with anti-CD4 monoclonal antibody. Eighteen male BALB/c mice （6–8 weeks old） were randomized into 3 groups： dilated cardiomyopathy （DCM） group, DCM-tolerance （Tol） group and control group. The mice in DCM group were immunized with the peptides derived from human ADP/ATP carrier protein for 6 months and mice in the control group were sham-immunized, while the mice in DCM-Tol group were immunized with ADP/ATP carrier protein and anti-CD4 McAb simultaneously. Serum autoantibody against ADP/ATP carrier and IgG subclasses were measured by ELISA, intracellular cytokines IFN-γ and IL-4 of Th cells were moni- tored with flow cytometry, and splenic T cell cytokines IFN-γ, IL-2, IL-4 and IL-6 were detected by using real-time fluorescent quantitative PCR. The results showed that the autoantibody against ADP/ATP carrier was found in all mice in DCM group, and the antibody level, serum IgG1 and IgG2a subclasses, cytokines in T cells and Th cells were all elevated in DCM group, as compared with those in control group （P〈0.01）. On the other hand, in DCM-Tol group, the autoantibody level and contents of all the cytokines were significantly different from those in DCM group （P〈0.01）, and were close to those in control group. And the levels of IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG3 were influenced, to varying degrees, by anti-CD4 McAb as compared with those in DCM group. All these four types of IgG subclasses were substantially decreased in DCM-Tol group as compared with DCM group. It is concluded that the treatment with anti-CD4 McAb could prevent the activation of T cells, reverse the abnormal secretion of cytokines and the imbalance between Th1/Th2 cell subsets and abnormal production of autoantibody against ADP/ATP carrier, and eventually avoid myocardial injuries.