胃癌单克隆细胞球和CD44~+及CD133~+亚群成瘤能力的比较

目的研究胃癌干细胞亚群的筛选方法,探讨建立胃癌干细胞稳定亚群的可行性。方法利用流式细胞仪从MKN45、MKN25、SGC7901细胞株和人胃癌组织中分选出不同CD44和CD133表型的亚群,比较不同亚群和无血清培养基培养的单克隆细胞球细胞在裸鼠移植瘤模型中的成瘤能力。结果不同细胞的CD44+和CD133+亚群在低数量级时几乎不具有裸鼠皮下成瘤能力,在高数量级接种时成瘤能力与母系细胞差异无统计学意义;单克隆细胞球细胞在各数量级下的成瘤能力、瘤体积和生瘤速度均显著高于母系细胞。结论与CD44和CD133等细胞表面标志物筛选法相比,单克隆细胞球细胞可更好的作为胃癌干细胞研究的细胞学基础。     

As2O3在HuH7及CD13+ CD133+LCSCs增殖和分化中作用的初步观察

目的 观察As2O3对人肝癌细胞系HuH7及CD13+ CD133+肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)增殖和分化的作用.方法 用荧光激活流式细胞术(fluorescence activated cell sorter,FACS)从HuH7细胞系分选CD13+CD133+ LCSCs,MTF和EdU法分析As2O3刺激HuH7及CD13+ CD133+ LCSCs增殖作用.流式细胞术检测As2O3处理第3、5天HuH7细胞凋亡,和As2O3处理第3天细胞周期变化.Western blot分析HuH7粒细胞白血病(promyelocytic leukaemia,PML)蛋白表达情况.观察As2O3处理前后HuH7对吡柔比星敏感性和肿瘤球形成能力变化.结果 早期(5 d)低浓度As2 O3促进HuH7和CD13+ CD133+ LCSCs增殖,高浓度As2O3则抑制CD13+ CD133+ LCSCs增殖.As2O3虽然没有阻滞HuH7细胞周期,但使G0/G1期细胞降低2.32％.As2O3处理3d的HuH7细胞凋亡与正常对照HuH7细胞相似,凋亡率在8％～9.5％,第5天使HuH7细胞凋亡率上升到12％～15％,1.0 μg/ml As2O3组晚期凋亡率比0.5μ/ml As2O3高.As2O3改变HuH7细胞对THP敏感性,还显著降低CD13+ CD133+ LCSCs成球能力.HuH7细胞表达PML蛋白,As2O3可使HuH7细胞PML蛋表达降低,而且与HuH7细胞和CD13+ CD133+ LCSCs增殖有刺激作用,HuH7细胞凋亡及CD13+ CD133+LCSCs分化结果一致.结论 低浓度As2O3不仅刺激HuH7及CD13+ CD133+ LCSCs增殖,促进HuH7细胞凋亡,而且可能诱导CD13+ CD133+ LCSCs分化,其作用通过PML蛋白介导.     

CD105/CD133筛选鉴定SMMC-7721株干细胞表面标志物的实验研究

目的：观察人肝癌细胞株 SMMC-7721中膜抗原CD133、CD105的表达情况并对不同亚群的生物学性状进行体内外实验研究。方法以含10%胎牛血清的 DMEM 对SMMC-7721株细胞培养;采用流式细胞仪方法分选检测CD133、CD105在SMMC-7721中表达情况并分选出CD133+/CD105+、CD133+/CD105-、CD133-/CD105+、CD133-/CD105-4个亚群;CCK-8和 Transwell侵袭实验分别检测4个亚群和未分选细胞组的增殖及侵袭能力,软琼脂克隆实验检测5组细胞成球能力;裸鼠成瘤实验了解 CD133+/CD105+、CD133-/CD105-亚群和未分选组的成瘤能力。结果流式细胞仪分选的 CD133+/CD105+、 CD133+/CD105-、CD133-/CD105+、CD133-/CD105-4种细胞亚群的比例分别为1．61%、0．01%、97．88%和0．50%。 CD133+亚群的增殖和成球能力较 CD133-亚群及未分选细胞组强,而CD105+亚群侵袭能力较 CD105-亚群及未分选细胞组强。CD133+/CD105+组与CD133-/CD105-组及未分选细胞组相比成瘤所需的时间短、所需细胞数少、成瘤的体积大。结论 CD133在人肝癌细胞株 SMMC-7721中的表达与其增殖成球能力有关,CD105与其侵袭能力有关,CD133+/CD105+具有体内高度的成瘤能力。 CD133+/CD105+亚群在人原发性肝癌细胞株SMMC-7721中具有肿瘤干细胞特性。     

人肝癌细胞系Huh-7中CD133+细胞的分离及鉴定

目的 通过表面标志分选法富集人肝癌Huh-7细胞中CD133+细胞,并初步鉴定其特性.方法 采用流式细胞分选技术从人肝癌细胞系Huh-7中分选出CD133+细胞,并进行干细胞比例分析;通过对CD133+细胞体外成球能力及增殖能力检测,考察CD133+细胞的自我更新能力;观察CD133+细胞在非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷小鼠(NOD/SCID)体内的成瘤情况.结果 分选获得的CD133+细胞经无血清培养后阳性比例达90％以上;CD133+细胞体外无血清培养3d即可成球且生长速度较CD133-细胞快;CD133+细胞在NOD/SCID小鼠体内21 d左右即可形成异种移植瘤.结论 CD133+表面标志物分选方法可以高纯度富集CD133+细胞,利用CD133抗体分选获得的CD133+细胞具有肿瘤干细胞样特性.     

Notch 1信号通路对人肝癌SMMC 7721细胞中CD133+细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究人肝癌SMMC 7721细胞中CD133+细胞的干细胞特性,初步探讨调控Notch 1信号通路对CD133+细胞亚群增殖和凋亡的影响.方法 流式分选和检测SMMC 7721细胞中的CD133+细胞.利用软琼脂集落实验及裸鼠成瘤实验验证CD133+细胞的干细胞特性.RT-PCR法检测CD133+细胞中Notch信号系统的表达;将分选出来的CD133+细胞分为激活组(加入Notch 1激活剂Jagged 1)、抑制组(加入Notch 1抑制剂DAPT)和空白对照组(加入PBS缓冲液),RT-PCR法检测3组细胞Hes-1基因的表达,MTT法和流式细胞仪检测各组细胞增殖能力和凋亡能力.结果 成功分选出CD133+亚群细胞;软琼脂集落实验和裸鼠成瘤实验表明CD133+细胞较CD133-细胞具有较强集落形成能力和体内成瘤能力;RT-PCR检测CD133+细胞中仅表达Notch 1/Jagged 1信号通路;激活组Hes-1表达强度增强,抑制组表达强度减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).MTT检测激活组、抑制组和空白对照组吸光度值差异均有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测激活组总凋亡率大于空白对照组,反之,抑制组总凋亡率小于空白对照组,各组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CD133+细胞是人肝癌SMMC 7721细胞中干细胞标志物之一,Notch 1信号通路对CD133+细胞的增殖和凋亡发挥着重要作用.     

RNA干扰抑制CD133表达对CD133~+肝癌干细胞增殖和化疗敏感性的影响

目的利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调CD133+HepG2肝癌干细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响。方法利用流式分选技术筛选CD133+HepG2细胞并检测分选前后CD133表达量,体外成球及体内成瘤实验鉴定其"干性";随后以CD133 mRNA编码序列为干扰靶点,采用慢病毒介导的shRNA转染CD133+细胞。应用RT-PCR和Western Blot检测CD133 mRNA及蛋白表达,克隆形成实验检测转染前后细胞增殖情况,CCK-8法和流式细胞仪检测在化疗药物顺铂作用下转染前后细胞的生长抑制率及凋亡情况。结果分选前后CD133表达率分别为(3.36±1.80)%,(88.74±3.19)%;CD133+细胞相对于CD133-细胞有更强的体外成球和体内成瘤能力;转染CD133 shRNA后的细胞CD133 mRNA表达明显受到抑制(P<0.05),蛋白表达水平降低,增殖能力显著下降(P<0.01)。顺铂对转染CD133 shRNA后细胞生长抑制作用明显提高(P<0.01),且其在顺铂作用下的凋亡率也显著增加(P<0.05)。结论慢病毒介导的shRNA能显著下调CD133+肝癌干细胞CD133基因的表达,抑制其增殖并提高其对顺铂的敏感性。     

原发性干燥综合征患者T细胞亚群及CD4~+CD25~+ T细胞检测的意义

目的探讨T淋巴细胞亚群及CD4+CD25+T细胞在原发性干燥综合征(PSS)患者中的检测意义。方法用流式细胞仪检测18例PSS患者以及20例健康体检者外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞(CD3-/CD16+56+)、CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞及CD4+CD25+调节T细胞水平。结果 PSS患者与正常对照组比较,CD3+CD4+细胞亚群的百分率明显升高(P<0.05);CD4+/CD8+与对照组比较有明显升高(P<0.05);CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞及CD4+CD25+调节性T细胞的百分率明显降低(P<0.01),其它T细胞亚群无明显变化。结论 PSS患者T淋巴细胞亚群的水平是异常的。T细胞亚群的比例异常与疾病的病程和临床表现相关联。CD3+CD4-CD8-和CD4+CD25+调节性T细胞水平降低导致机体自身免疫反应抑制功能减弱,免疫耐受状态被打破,可能是引发PSS发生发展的重要因素。     

原发性肝癌患者CD8+CD28-和CD8+CD28+细胞亚群的分析

目的研究原发性肝癌(HCC)病人外周血CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子的表达.方法用流式细胞仪对20例原发性肝癌病人的CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子(即CD8+CD28+和CD8+CD28)的表达进行检测.结果HCC病人CD8+细胞百分率升高,CD8+CD28+细胞百分率降低,CD8+CD28细胞百分率升高,与对照组相比具有显著性差异.CD8+CD28+、CD8+CD28-细胞百分率与CD8+T细胞百分率的相关性研究表明,CD8+CD28-细胞数与CD8+T细胞数之间呈正相关.结论HCC病人CD8+细胞升高,CD8+细胞上CD28分子的表达是异常的,即CD8+CD28-细胞数升高,CD8+CD28+细胞数降低;CD8+T细胞的升高是CD8+CD28-细胞亚群升高的结果.     

肝癌干细胞CD90+和ESA+亚群生物学特性研究

目的　研究肝癌干细胞不同亚群CD90+和ESA+细胞的生物学特性,为肝癌的治疗及预后判定提供新的思路。方法　采用活细胞流式细胞术检测肝癌细胞系MHCC97L中肝癌干细胞标志物CD90、ESA的表达情况,并分选ESA+,CD90+细胞,通过甲基纤维素成球实验、Transwell、CCK8法进行体外生物学特征研究。结果　肝癌细胞系MHCC97L中CD90+和ESA+细胞表达比例分别为2.37%和3.70%。ESA+细胞成球率明显高于ESA-细胞［成球率（35.6±2.1）% vs.（9.6±1.4）%, P<0.01］,CD90+细胞成球率明显高于CD90-细胞［成球率（29.2±1.3）% vs.（7.4±0.6）%］（P<0.01）,ESA+细胞成球率明显高于CD90+细胞且ESA+细胞sphere球体积明显大于CD90+细胞体积;ESA+细胞较ESA-细胞侵袭能力提高2.12倍［（282±15.1 vs. 133±12.4）,P<0.01］,CD90+细胞较CD90-细胞侵袭能力提高2.04倍［（231±18.1 vs. 113±10.2）,P<0.01］。CD90+细胞耐药性明显强于ESA+细胞［IC50（0.98 μg/mL vs. 0.36 μg/mL）］,ESA+细胞增殖能力明显强于CD90+细胞。结论　肝癌组织中存在不同的干细胞亚群ESA+细胞及CD90+细胞,这些亚群具有不同的生物学特性,影响肝癌的耐药、侵袭,了解肝癌中不同干细胞亚群的表达情况可用于指导临床个体化治疗。     

CD133+细胞的干性鉴定及131I-CD133抗体对其体内外抑制作用

目的：研究CD133+细胞的干性鉴定和131I-CD133抗体在体内外对人肝癌CD133+-HepG2干细胞的抑制作用。方法：氯胺T法制备并鉴定131I-CD133抗体;免疫磁珠（magnetic-activated cell sorting,MACS）分选CD133+-HepG2细胞;流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测分选前后CD133表达率;体外克隆形成实验、成球实验和体内成瘤实验验证其干细胞特性;将分选出的CD133+细胞分组为CD133抗体、131I、131I-CD133抗体和131I+CD133抗体 4个组,MTT法检测不同处理后不同组中CD133+细胞生长抑制率;成功构建人肝癌CD133+-HepG2移植瘤模型;随机分4组,1次/2 d给予尾静脉用药,共14次。4周后,处死小鼠,比较肿瘤的体积、质量、计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤组织病理学改变。结果：131I-CD133抗体标记率为89.34%,放化纯度为98.21%。流式显示分选前后CD133表达率分别为（1.78±0.54）%和（98.46±0.97）%。成球实验、克隆形成实验和裸鼠成瘤实验显现CD133+细胞相对于CD133-细胞更具有干细胞特性。131I-CD133抗体治疗组体外对细胞抑制率及体内抑瘤率明显高于其余各实验组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：131I-CD133抗体在体内外均能有效抑制人肝癌CD133+-HepG2细胞的生长。     

偶联 CD133 核酸适体的载紫杉醇 PLGA-PEG 纳米载体靶向清除CD133阳性肺癌干细胞

目的 构建偶联CD133核酸适体载紫杉醇的聚乳酸-乙醇酸-聚乙二醇（PLGA-PEG）纳米载体（N-Pac-CD133）拟清除肺癌干细胞。方法 采用乳液/溶剂蒸发的方法制备 N-Pac-CD133,同时对 N-Pac-CD133 进行表征,利用磁珠分离法分离出CD133+ 肺癌干细胞后并对该群体的肺癌干细胞特异性进行检测,同时对肺癌细胞的靶向性和杀伤活性进行检测。小鼠体内接种A549肿瘤后,肿瘤治疗分组：生理盐水,空纳米载体链接CD133核酸适体（N-CD133）,紫杉醇,负载紫杉醇的纳米载体（N-Pac）和N-Pac-CD133,8只/组,5 mg/kg紫杉醇,分别于第10、15和20天进行注射。在第40天时,处死小鼠后,对肿瘤进行摘除并称重,同时测量小鼠的体质量。结果 N-Pac-CD133的粒径为100 nm左右,包封率>80%,载药量>8%,在48 h内都显示出持续的药物释放。肺癌细胞的CD133+细胞群体表现出肺癌干细胞的特征：更快的肺癌生长速度（30 d,P=0.001）和更高的肿瘤干细胞基因表达：OV6（P<0.001）、CD133（P=0.001）、OCT3/4（P=0.002）、EpCAM（P=0.04）、NANOG（P=0.005）和 CD44（P=0.02）。与非靶向 N-Pac 和紫杉醇相比,N-Pac-CD133 对肺癌干细胞的靶向性（P<0.001）和细胞毒性作用显著增强。另外,N-Pac-CD133可显著减少肿瘤球的形成（P<0.001）。在治疗终点时,取小鼠肿瘤并对肿瘤进行称量,N-Pac-CD133治疗组和其他治疗组相比,肿瘤体质量显著减小（P<0.001）。结论 CD133核酸适体可以促进紫杉醇纳米载体靶向递送至CD133+肺癌干细胞并杀伤肺癌干细胞。N-Pac-CD133可能是一种有效的靶向肺癌干细胞的治疗手段。     

5-氟尿嘧啶筛选残存结肠癌细胞的生物学特点及其与CD133表达的关系

目的 研究5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)筛选残存结肠癌细胞(drug surviving cells,DSCs)是否具有癌症干细胞(cancer stem cells,CSCs)属性及其增殖过程中免疫表型的改变.方法 应用5-FU对体外培养的结肠癌细胞株SW480进行处理,收集残存DSCs,检测...     

肿瘤干细胞标记CD44和CD133在鼻咽癌细胞株中的表达检测

目的 探索肿瘤干细胞标记物CD44和CD133在鼻咽癌(NPC)中的表达量及其有效分选方式.方法 常规培养SUNE-1 5-8F细胞,采用免疫荧光技术及流式细胞学技术检测SUNE-1 5-8F细胞中CD44、CD133的表达,并用流式细胞仪分选CD44+、CD44+CD133+细胞.结果 激光共聚焦镜下鼻咽癌SUNE-...     

Proliferation characteristics of CD133+ cell population in colorectal cancer

In this study,CD133+ subpopulations were isolated from 41 primary colorectal cancer tissues,the proliferation and cell cycle distribution of the cells were examined without in vitro expansion,and then compared to those of cell lines.The detection of CD133 in colorectal cancer tissues,isolation of CD133+ and CD133-epithelial subpopulations,Ki-67/DNA multiparameter assay and cell volume analysis were flow cytometrically conducted.The results showed that Ki-67 expression was correlated with CD133 level in primary cancer tissues,while cell cycle G 2 /M phase distribution or clinicopathological characteristics was not.In addition,the CD133+ cells showed larger cell volume and higher Ki-67 expression as compared with CD133-cells.But there was no statistically significant difference in G 2 /M phase distribution between the two subpopulations.Our results demonstrated that the CD133+ subpopulation in colorectal cancer tissue contained more actively cycling and proliferating cells,which was not correlated to clinicopathological factors but might contribute to tumor progression and poor clinical outcome.     

内皮细胞对结肠癌细胞系SW480中CD133~+细胞表达VEGF的影响

目的 从结肠癌细胞系SW480中分离结肠癌干细胞,并检测内皮细胞对这些细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响.方法 分别利用免疫磁珠分选技术和尤血清培养法富集CD133+细胞,利用MTT法和平板克隆形成实验检测其生物学特性;采用细胞免疫荧光法检测SW480细胞和CD133+细胞中CD133及VEGF的表达;将SW480细胞或磁珠分选CD133+细胞分别在6种培养条件下进行培养:SW480细胞在含血清培养基(serum-supplied medium,SSM)中培养、SW480细胞在尤血清培养基(serum-free medium,SFM)中培养、磁珠分选CD133+细胞在SFM中培养、SW480细胞与内皮细胞在SSM中共培养、SW480细胞与内皮细胞在SFM共培养、磁珠分选CD133+细胞与内皮细胞在SFM共培养,利用免疫组织化学法检测不同培养条件下结肠癌细胞中CD133及VEGF的表达情况.结果 SW480细胞系中存在少量的CD133+细胞,这些细胞能够连续传代并且表现出更强的增殖潜力以及克隆形成能力.经细胞免疫荧光法检测发现SW480细胞高表达VEGF,低表达CD133,而免疫磁珠分选的CD133+细胞所形成的细胞球低表达VEGF,高表达CD133.无血清培养条件下的SW480细胞随着时间的延长CD133表达率逐渐增加,添加内皮细胞诱导后无血清培养的SW480细胞与前者相比CD133阳性率显著增加(P<0.05).经过1周的连续培养后,CD133+细胞表达VEGF的比例没有变化,添加内皮细胞诱导1周后,CD133+细胞表达VEGF的比例显著增加(P相似文献   

小细胞肺癌细胞系H446中肿瘤干细胞的分选与鉴定

 目的 明确能否以表面黏附分子CD133为干细胞标志物,使用免疫磁珠分选（magnetic cell separation,MACS）法分离小细胞肺癌细胞系H446细胞中的肿瘤干细胞。方法 以CD133为特异性分子标志物,使用MACS方法分选H446细胞,比较CD133阳性（CD133+）细胞与CD133阴性（CD133-）细胞在集落形成、自我更新、增殖分化、侵袭性、耐药性和成瘤性方面的不同。结果 CD133+细胞和CD133-细胞在集落形成能力、自我更新能力、增殖能力、分化能力、侵袭能力和耐药性方面基本相同。集落形成和成瘤性实验结果显示：CD133+或CD133-细胞中40%以上的细胞都能够形成含有100个细胞以上的大集落,增殖成为与未分选细胞相同的细胞群,并能在裸鼠身上成瘤。结论 表面黏附分子CD133不能作为分选小细胞肺癌H446细胞系中肿瘤干细胞的分子标志物,分选后的CD133+与CD133-细胞中含有相同的肿瘤干细胞。     

免疫磁珠法分离纯化人肾癌CD133~+细胞实验研究

目的:本研究通过分析CD133+细胞在肾细胞癌患者肿瘤组织的表达情况,寻找肾癌中CD133+细胞分离纯化方法,探寻CD133+细胞与肾癌发生中的作用。方法:①应用胎盼蓝拒染试验检测细胞活性。②应用免疫磁珠法分离纯化肿瘤组织中CD133+细胞。③应用流式细胞仪检测肾透明细胞癌标本中CD133+细胞表达情况。结果:30例肾透明细胞癌中CD133+比为(13.08±1.39)%,与病理分级、临床分期无关。免疫磁珠法分离纯化CD133+纯度为(75±2.4)%,细胞活性不受影响。结论:免疫磁珠技术纯化肾癌CD133+细胞成熟有效,CD133+细胞可能是肾癌干细胞。     

Research on the effects of CD137 signaling on the function of CD3-CD56+NK cells

Objective:To investigate the effects of CD137 signaling on the regulation of CD3-CD56+NK cells function. Methods: CD3-CD56+NK cells were treated with CD137 mAb or mouse IgG1 isotype control to study the effects of CD137 signaling on the function of CD3-CD56+NK cells. Cytotoxicity was measured by LDH activity in the supernatants of cell cultures; NKG2D and LFA-1 expression on CD3-CD56+NK cells were analyzed by flow cytometry. Results: CD137 was expressed on activated CD3-CD56+NK cells. The CD137 mAb enhanced...