氧化应激促进凋亡相关因子在糖尿病大鼠坐骨神经中表达的研究

目的观察糖尿病早期大鼠坐骨神经组织中氧化应激损伤和凋亡相关因子表达情况及其相关性,进一步探讨糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型。随机选取成模大鼠17只作为模型组(M组),另设正常对照组(N组)大鼠15只。8周后,取大鼠左侧坐骨神经,采用HE染色观察形态学改变,并采用免疫组化法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和Caspase-3表达,Western blot分析检测发动相关蛋白-1(Drp-1)和Bax的表达。结果与N组相比,M组大鼠坐骨神经形态学改变明显,体重增加不明显,血糖明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);Drp-1、Bax、8-OHdG及Caspase-3表达均增多,差异有统计学意义(P<0.05)。M组8-OHdG与Caspase-3表达呈明显正相关(r=0.798,P<0.05)。结论早期糖尿病大鼠坐骨神经组织中氧化应激损伤促进凋亡相关因子表达增多,最终促发细胞凋亡可能是DPN发病原因之一。     

Study on oxidative stress promoting the expression ofapoptosis- associated factors in sciatic nerve of diabetic rat

目的 观察糖尿病早期大鼠坐骨神经组织中氧化应激损伤和凋亡相关因子表达情况及其相关性,进一步探讨糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制.方法 采用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型.随机选取成模大鼠17只作为模型组(M组),另设正常对照组(N组)大鼠15只.8周后,取大鼠左侧坐骨神经,采用HE染色观察形态学改变,并采用免疫组化法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和Caspase-3表达,Western blot分析检测发动相关蛋白-1(Drp-1)和Bax的表达.结果 与N组相比,M组大鼠坐骨神经形态学改变明显,体重增加不明显,血糖明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);Drp-1、Bax、8-OHdG及Caspase-3表达均增多,差异有统计学意义(P＜0.05).M组8-OHdG与Caspase-3表达呈明显正相关(r=0.798,P<0.05).结论 早期糖尿病大鼠坐骨神经组织中氧化应激损伤促进凋亡相关因子表达增多,最终促发细胞凋亡可能是DPN发病原因之一.     

Effect of heme oxygenase-1 on protection of myocardial cells by resveratrol against doxorubicin-induced apoptosis

目的 探讨血红素加氧酶1(HO-1)在白藜芦醇(RES)抑制阿霉素(DOX)致心肌细胞凋亡中的作用.方法 60 只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DOX组、DOX+ RES组和DOX+ RES+HO-1抑制剂锡原卟啉(ZnPP)组,每组15只;除对照组外,均采用经腹腔注射DOX(总剂量12 mg/kg)建立心肌损伤模型.苏木精-伊红(HE)染色后光学显微镜下观察心肌组织病理学改变.采用化学比色法测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;分光光度法检测心肌组织HO-1和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性;Western blotting法检测心肌组织HO-1蛋白表达;免疫组织化学法检测心肌组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率.结果 与对照组比较,DOX组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P＜0.01).与DOX组比较,DOX +RES组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著降低(P＜0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P＜0.01);与DOX+ RES组比较,DOX+ RES+ZnPP组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论 HO-1参与RES对DOX致心肌细胞凋亡的抑制作用.     

血红素加氧酶1在白藜芦醇抑制阿霉素致心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨血红素加氧酶1(HO-1)在白藜芦醇(RES)抑制阿霉素(DOX)致心肌细胞凋亡中的作用。方法 60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DOX组、DOX+RES组和DOX+RES+HO-1抑制剂锡原卟啉(ZnPP)组,每组15只;除对照组外,均采用经腹腔注射DOX(总剂量12 mg/kg)建立心肌损伤模型。苏木精-伊红(HE)染色后光学显微镜下观察心肌组织病理学改变。采用化学比色法测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;分光光度法检测心肌组织HO-1和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性;Western blotting法检测心肌组织HO-1蛋白表达;免疫组织化学法检测心肌组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。结果与对照组比较,DOX组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著升高(P0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P0.01)。与DOX组比较,DOX+RES组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著降低(P0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P0.01);与DOX+RES组比较,DOX+RES+ZnPP组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡率均显著升高(P0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论 HO-1参与RES对DOX致心肌细胞凋亡的抑制作用。     

“调脏通络”电针对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经细胞凋亡的影响

目的观察"调脏通络"电针对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经细胞凋亡的影响。方法将86只大鼠随机分为电针干预组、药物干预组、模型对照组、正常对照组,采用链脲佐菌素(STZ)一次注射法诱导建立DM大鼠模型。12周后,采用TUNEL法检测大鼠坐骨神经细胞凋亡比例。结果与正常对照组相比,模型对照组、电针干预组及药物干预组大鼠凋亡细胞比例均显著升高(P0.01);与模型对照组相比,电针干预组及药物干预组大鼠凋亡细胞比例均显著降低(P0.01);电针干预组及药物干预组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 "调脏通络"电针可以明显降低糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经细胞凋亡比例,对坐骨神经起到一定的保护作用。     

补肾益冲抗衰汤对卵巢储备功能下降大鼠卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3的影响

[目的]观察补肾益冲抗衰汤对卵巢储备功能下降模型大鼠卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。[方法]以70只8周龄雌性SD大鼠为研究对象,采用雷公藤多苷片制作卵巢储备功能下降大鼠模型。观察大鼠一般情况、卵巢指数、卵巢组织病理形态、血清E2、FSH、FSH/LH水平及卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。[结果]补肾益冲抗衰汤能使卵巢储备功能下降大鼠动情周期缩短、子宫、卵巢重量增加,大鼠血清FSH水平、FSH/LH降低,血清E2水平增高（P〈0.05或P〈0.01）,使卵巢颗粒细胞抑制细胞凋亡因子Bcl-2蛋白表达增加,促进细胞凋亡因子Bax、Caspase-3蛋白表达减少（P〈0.05或P〈0.01）。[结论]雷公藤多甙片致DOR大鼠模型与人类卵巢储备功能下降的临床表现基本一致。细胞凋亡调节因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白与卵巢储备功能密切相关,补肾益冲抗衰汤有抑制卵巢颗粒细胞凋亡、减少卵泡闭锁从而改善卵巢储备功能的作用。     

通络益肾汤对大鼠糖尿病性周围神经病变的治疗作用

[目的]观察通络益肾汤对糖尿病性周围神经病变的治疗效果.[方法]用链脲佐菌素制作大鼠糖尿病模型,12周后糖尿病治疗组大鼠每日灌胃给予通络益肾汤浓缩液78 mL/kg,4周后用电子显微镜观察大鼠坐骨神经的形态学变化.[结果]通络益肾汤对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经的损伤有明显好转.[结论]通络益肾汤对糖尿病性周围神经病变有治疗作用.     

川芎嗪对过氧化氢诱导星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对过氧化氢(H202)所致大鼠星形胶质细胞凋亡的保护作用.方法 利用SD新生鼠(24～48h)分离、培养星形胶质细胞,按随机数字表法分为空白对照组(以正常培养液培养)、模型组(100 μmol/L的H202作用24 h)、TMP剂量组(25、50、100 μmol/L TMP预处理48 h后,加入H202作用24 h).采用CCK-8检测各组细胞存活率;GFAP染色观察细胞形态;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力;Real-time PCR 检测各组细胞中PI3K、AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA 的表达;Western blot检测各组细胞PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组细胞存活率明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),LDH含量增加(P＜0.05),SOD活性降低(P＜0.05),PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA 表达下调,Bax、Caspase-3 mRNA 表达上调(P＜0.05),PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高(P＜0.05);与模型组比较,TMP预处理后细胞存活率明显升高(P＜0.05),其中50 μmol/L组的细胞存活率最高(P＜0.05),细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),LDH含量降低(P＜0.05),SOD活性升高(P＜0.05),PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA表达上调,Bax、Caspase-3 mRNA 表达下调(P＜0.05),PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 TMP对H202所致的大鼠星形胶质细胞氧化应激损伤具有保护作用,可改善损伤后细胞形态并抑制凋亡,该作用可能与PI3K、p-AKT蛋白活化有关.     

糖尿病大鼠肾皮质细胞过度凋亡

目的 研究糖尿病大鼠肾皮质细胞凋亡的可能机制及其对糖尿病肾病的影响.方法 20只雄性SD大鼠随机分为糖尿病组和对照组.糖尿病大鼠模型采用链脲佐菌素65 mg/kg腹腔注射诱导建立.12周后观察2组体质量、血糖以及血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白等肾功能指标;采用透射电镜和原位末端标记法（TUNEL法）检测大鼠肾皮质细胞凋亡,并用免疫组织化学的方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）以及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达.结果 建模12周的糖尿病组肾小球和肾小管细胞凋亡明显增多（P＜0.01）,肾小球和肾小管细胞PCNA表达无明显差别（P＞0.05）;与对照组比较,糖尿病组肾小管Bax和Caspase-3表达明显增加（P＜0.01）,Bcl-2表达明显减少（P＜0.05）;2组肾小球都不表达Bax和Bcl-2,糖尿病组肾小球有少量Caspase-3表达.结论 糖尿病大鼠肾皮质细胞过度凋亡.包括Bax、Bcl-2和Caspase-3在内的Caspase依赖的线粒体凋亡途径可能参与了糖尿病状态下肾小管细胞的凋亡;细胞凋亡的增多可能是糖尿病肾病发展的原因之一.     

黄芪多糖对乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤的修复机制

[目的]探讨半仿生提取的黄芪多糖对乙醇诱导大鼠胃黏膜损伤的修复作用及机制.[方法]将50只雄性SD大鼠随机分成正常组,模型组,胃乃安组,黄芪多糖低、高剂量组,每组10只.各组分别灌胃给药,1次/d,连续2 d.末次给药2 h后,除正常组外,其余各组分别按照1.4 mL/只灌胃给予无水乙醇诱导急性胃黏膜损伤.1 h后处死大鼠,取胃进行胃黏膜损伤评分和病理损伤评分,免疫组织化学法检测凋亡信号通路B细胞白血病2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的蛋白表达.[结果]黄芪多糖高、低剂量组均能显著降低胃黏膜的损伤分数和病理损伤评分(P<0.05),呈剂量依赖关系.与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平降低(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平增加(P<0.01).与模型组比较,黄芪多糖低、高剂量组胃黏膜组织中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平增加(P<0.05或P<0.01),促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平降低(P<0.05或P<0.01).[结论]半仿生提取黄芪多糖对乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤具有明显的修复作用,可通过升高抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,降低促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达发挥作用.     

推拿疗法对骨骼肌纤维化大鼠MMP-1和TIMP-1表达的影响

[目的]观察推拿疗法对大鼠急性腓肠肌钝挫伤后纤维修复的影响,探讨其可能的作用机制。[方法]将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、推拿治疗组(n=10),运用自制砸伤装置复制经典骨骼肌钝挫伤模型。治疗组进行推拿治疗,每次干预10 min,每日1次,连续实施25 d。通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠腓肠肌纤维化程度;qPCR和蛋白印迹检测大鼠腓肠肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达情况。[结果]HE染色镜下发现对照组大鼠骨骼肌纤维排列整齐,形态结构完整;模型组大鼠骨骼肌纤维排列紊乱,甚至断裂,肌成纤维细胞增多,细胞外基质ECM)增多且胶原纤维明显沉积;治疗组大鼠骨骼肌纤维排列较整齐、间距小,且大小均一,胶原纤维生成减少,仅有少量ECM生成,损伤基本恢复。qPCR和蛋白印迹结果显示模型组大鼠损伤腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白表达量及MMP-1/TIMP-1比值明显降低(P<0.01),而TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平明显升高;给予推拿治疗后可明显提高损伤大鼠腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白水平及MMP-1/TIMP-1的比值(P<0.01,P<0.05),且降低TIMP-1的转录水平(P<0.01,P<0.05)。[结论]推拿治疗可有效减轻骨骼肌钝挫伤后纤维化程度,其作用可能与上调MMP-1/TIMP-1比值有关。     

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的] 基于中医"通肾络、益脾肾"治法，探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法] 成熟无特定病原体（SPF）级SD雄性大鼠40只，随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度：高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/mL，灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组，正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集，Hoechst33342荧光染色，观察各组足细胞凋亡状况及形态变化；流式细胞仪检测足细胞凋亡率；Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果] 流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率（P<0.01或P<0.05），高剂量组不能改善凋亡情况（P>0.05）；Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率；蛋白印迹结果显示，与高糖组相比，通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高，自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降（P<0.05或P<0.01），高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变（P>0.05）。[结论] 中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡，降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

益气养阴活血化瘀法治疗微小残留白血病凋亡机制*

[目的]探讨益气养阴活血化瘀法诱导微小残留白血病细胞凋亡的发生机制.[方法]建立微小残留白血病大鼠型,通过FCS法观察细胞凋亡率和脾细胞周长.[结果]治疗组凋亡率明显高于模型组,而模型组中G2+M期细胞率明显高于中药治疗组.[结论]益气养阴活血化瘀法可以诱导白血病细胞凋亡,有效治疗微小残留白血病.     

脑心康片对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡相关基因Caspase-3表达的影响

[目的]观察脑心康片对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,进一步探讨其作用机制。[方法]Wistar大鼠雄性70只,按照体质量随机分为7组,每组10只。即脑心康片高剂量组、中剂量组、低剂量组、尼莫地平组、银杏叶片组、模型组和假手术组,分别给等体积生理盐水,各组均连续灌胃给药7d。末次给药30min后,采用大鼠大脑中动脉线栓法制备不完全脑缺血模型,观察脑心康片给药前后大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠神经功能缺损导致的行为学变化;免疫组织化学法检测脑心康片对脑缺血后24、48、72h脑组织半胱氨酰天冬氨酸激酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。[结果]脑心康片能明显改善脑缺血大鼠的神经功能缺损症状,抑制Caspase-3蛋白的表达。[结论]脑心康片对脑缺血具有保护作用,遵循一定的时效关系和量效关系,其机制可能与脑心康片抑制凋亡相关基因的表达,进而抑制神经元细胞凋亡有关。     

化痰通络法联合尿激酶溶栓对急性脑梗死大鼠不同脑区PAF、MCP-1的影响*

[目的]通过观察化痰通络法联合尿激酶溶栓对急性脑梗死大鼠不同脑区血小板活化因子（PAF）和核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的影响。[方法]SD大鼠136只,随机分为5组,即正常组、假手术组、模型组、尿激酶组、化痰通络法联合尿激酶组,采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,分别给予中药灌胃及尿激酶溶栓,Elisa法检测化痰通络法联合尿激酶溶栓对急性脑梗死后6h、72h、7d、14d脑组织PAF、MCP-1蛋白表达的影响。[结果]化痰通络法联合尿激酶溶栓能明显抑制PAF、MCP-1蛋白的表达。[结论]中药联合溶栓可减少溶栓后再梗死,其机制可能与抑制PAF、MCP-1表达有关。     

通络糖泰防治糖尿病性周围神经病变的实验研究

目的：研究临床治疗糖尿病性周围神经病谱（ＤＰＮ）的有效复方通络糖泰对实验性ＤＰＮ大鼠坐骨神经电生理及糖醇代谢的影响。方法：ＳＤ大鼠随机分为模型组（ＭＧ）,通络糖泰高剂量组（ＨＧ,相当于成人公斤体重用药量的１０倍）及低剂量组（ＬＧ,相当于成人公斤体重用药量的５倍）,正常对照组（ＮＧ）。动物模型用四氧嘧啶塑造。     

通络救脑注射液对氧糖剥夺大鼠脑微血管内皮细胞胎盘生长因子表达的影响

[目的]探讨通络救脑注射液对氧糖剥夺大鼠脑微血管内皮细胞胎盘生长因子(PLGF)及其受体血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)表达的影响。[方法]通过氧糖剥夺(OGD)方法复制脑微血管内皮细胞拟缺血损伤模型。实验分为正常对照组、氧糖剥夺模型组、通络救脑注射液干预组,分别采用酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测脑微血管内皮细胞条件培养液中PLFG的含量,以及内皮细胞VEGFR-1的表达。[结果]通络救脑注射液可以显著提高氧糖剥夺模型大鼠脑微血管内皮细胞PLGF及其受体的表达,与模型组相比,差异具有统计学意义(P0.01)。[结论]通络救脑注射液能够增加拟缺血损伤大鼠脑微血管内皮细胞PLGF及其受体的表达,提示提高PLGF及其受体的表达是该中药复方发挥清热、解毒、通络药效的分子途径之一。     

益气活血解毒方加减治疗卵巢癌紫杉醇化疗后外周神经毒性临床观察

[目的]观察益气活血解毒方加减治疗卵巢癌患者经紫杉醇化疗后导致的外周神经毒性的疗效。[方法]采用治疗前后自身对照方法进行观察,符合标准的患者均予益气活血解毒方加减口服及外洗治疗。1个月后观察90例患者神经毒性的等级及周围神经的传导速度的变化。[结果]两种不同兼夹症外周神经毒性发生例数减少,治疗前后比较差异均有统计学意义(P0.01)。治疗后正中神经和腓神经的运动和感觉神经传导速度均有变化,除湿邪阻络者正中神经的感觉神经传导速度差异无统计学意义(P0.05),其余治疗前后比较差异均有统计学意义(P0.05)。[结论]益气活血解毒方加减的内服和外用有改善卵巢癌患者经紫杉醇化疗后外周神经毒性的作用。     

中医药在治疗癌性疼痛中的研究进展*

随着社会的进步,人们生活水平的提高,饮食结构的变化,糖尿病的发病率也逐年升高,据统计中国已成为全球糖尿病第2大国,目前约有糖尿病患者3 000万,患病率为2%至4%,其中2型糖尿病患者占绝大多数。在最近20年中,中国糖尿病发病率增