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相似文献
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1.
目的研究人bcl—xL基因在显微注射所产生的子代小鼠中的整合、转录和表达情况。方法采用PCR和Southern blot方法检测人bcl—xL基因在小鼠体内的整合;RT—PCR方法检测它们的bcl—xL mRNA水平;用Western blot及免疫组化法检测目的蛋白的表达情况。结果在显微注射所产生的转基因小鼠中,有4只为Southern blot检测阳性,并且在这4只小鼠及其子代中均检测到人bcl—xL的mRNA和过表达的目的蛋白。结论由于在这些小鼠中既有外源基因的整合,又有其mRNA和蛋白质的表达,所以,它们是真正的转基因动物。  相似文献   

2.
不同山羊个体的精子结合和内化外源DNA能力的差异性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨不同山羊个体的精子结合和内化外源DNA能力差异性,以及精子内化能力对制备转基因山羊胚胎阳性率的影响。方法用地高辛标记与检测试剂盒检测12只山羊的精子分别结合、内化质粒DNApEGFP-N1的效率;体外受精实验检测胚胎阳性率与精子内化pEGFP-N1能力的关系。结果不同山羊个体的精子结合和内化pEGFP-N1的效率存在差异,内化效率最高为53.7%,最低为3.1%;3号公羊的精子体外转染外源基因后行体外受精,所得的2~8细胞胚胎表达外源基因pEGFP-N1的阳性率最高,7、8、10、11号公羊的精子体外转染外源基因后行体外受精,所得的2~8细胞胚胎均未表达GFP蛋白。结论不同山羊个体的精子自发结合、内化外源DNA的能力存在差异;不同山羊个体的精子体外转染外源基因后行体外受精,所得的2~8细胞胚胎表达外源基因的比例不同。  相似文献   

3.
目的 深入研究磷酸酪氨酸互作结构域1(PID1)基因与肌内脂肪含量的关系,探究睾丸注射法在转基因动物制备中的可行性。方法 将携带猪PID1基因的重组质粒pIRES2-acGFP-PID1与转染试剂共孵育后,对新西兰兔进行了睾丸打点注射试验。对繁殖的F1代个体进行了活体荧光检测、PCR和western blotting检测,以及抽样屠宰进行肌内脂肪含量等检测;将F1代阳性个体横交,繁殖了F2代兔,对其进行了阳性率检测以及肌内脂肪含量检测。结果 外源PID1基因和荧光蛋白基因在后代中均成功表达,其中,F1代阳性率为35.88%,F2代阳性率为34.33%;转基因阳性兔与阴性和空白对照兔相比,PID1蛋白表达水平有所增加,肌内脂肪含量有显著提高(P<0.05)。结论 PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关,同时,进一步证明了睾丸注射法可以用于制备转基因动物,且外源基因可以稳定遗传。  相似文献   

4.
建立转bcl-xL基因小鼠的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 建立转bcl—xL基因小鼠,继而传代建系,用于缺血性脑血管疾病的研究。方法 采用显微注射法,将人bcl—xL基因注入民明小白鼠受精卵获得子代鼠,然后作PCR、Southern—blot、mRNA、Western—blot检测以获得阳性鼠。结果 实验中注射受精卵1654枚,移植卵数1448枚,受体鼠49只,怀孕鼠7只,子代鼠13只,整合4只并均有表达。注射受精卵的存活率87.54%,受精卵的总存活率0.78%,受体鼠的怀孕率14.28%,整合效率30.77%,总有效率为0.24%。结论 获得了转bcl—xL基因小鼠,但转基因的效率较低,表达不稳定。  相似文献   

5.
人突变型p53和EB病毒LMP1转基因小鼠的建立   总被引:13,自引:0,他引:13  
目的:建立含突变型p53和EB病毒LMP1基因的双转基因小鼠模型,为研究突变型p53和EB病毒LMP1基因在鼻咽癌前病变中的交互作用提供有力的工具.方法:通过分子克隆技术构建含突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的真核表达载体pLMP1-p53mt;采用显微注射法将线性化的表达载体注射至小鼠受精卵的雄性原核中,然后将注射存活的受精卵植入假孕母鼠的输卵管;取其产3wk龄子代鼠进行PCR初选,再通过Southern杂交进一步确证;利用HE染色法观察4mo龄转基因小鼠不同组织病理变化.结果:将转基因载体进行了707枚小鼠受精卵的显微注射,然后植入30只假孕母鼠的输卵管中,其中26只母鼠怀孕,移植成功率为86.67%;共出生子代鼠179只;PCR检测显示179只子代小鼠中有9只整合了p53mt和LMP1基因,转基因阳性小鼠比例为5.03%(9/179),Southem杂交结果进一步证实了9只基因组整合了外源基因的首建者小鼠;随机抽取其中的1只转基因阳性小鼠鼻腔黏膜、鼻咽、食管表现炎症,鼻咽黏膜上皮灶性增生.结论:成功建立整合人突变型p53和LMP1的转基因小鼠,且表现鼻咽黏膜上皮灶性增生,可为鼻咽癌前病变机制的研究提供手段.  相似文献   

6.
目的检测外源基因HBx转入HepG2细胞后对PPARγ表达定量及定位的影响。方法以HBx重组腺病毒感染HepG2细胞,分别用RT—PCR和总蛋白Western blot检测PPARγ表达量的改变,免疫细胞化学检测其定位改变,Western blot分别检测细胞质和细胞核中PPARγ蛋白量的表达改变,MTT法检测HBx对曲格列酮抑制HepG2增殖效率的影响。结果外源基因HBx转入HepG2细胞后,RT—PCR、总蛋白Western blot显示PPARγ表达差异无统计学意义(P〉0.05),免疫细胞化学及细胞质和细胞核中PPARγ蛋白检测提示PPARγ在细胞核内表达降低而在细胞质中出现积聚,曲格列酮对HepG2细胞增殖的抑制效率降低(P〈0.05)。结论外源基因HBx对HepG2细胞中PPARγ的表达量无明显影响,但影响其向核内转移。HBx降低曲格列酮对HepG2细胞增殖的抑制效率。  相似文献   

7.
转基因技术常用的检测方法   总被引:1,自引:0,他引:1  
将外源基因通过一定载体转入靶细胞内的技术称为转基因技术 (GenetransferorGenetrans form )。近十余年来 ,人们广泛利用分子生物学技术对原核细胞和真核细胞进行转基因工作 ,旨在进一步解释人类疾病的发病机制 ,探讨疾病诊断和治疗的新途径。转基因技术一般包括①目的基因获得 ;②将目的基因导入靶细胞内 ;③检测目的基因在靶细胞内表达水平三个重要环节[1] 。因此 ,如何判断外源基因是否导入靶细胞内 ,靶细胞的表达产物是否具有生物效应是转基因技术的重要一环。本文仅就目前常用的有关转基因技术的检测方法…  相似文献   

8.
相对定量法检测nestin-GFP转基因小鼠外源基因整合拷贝数   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的计算出转基因小鼠nestin-GFP的外源基因整合拷贝数,为研究该模型中外源基因遗传及表达的稳定性打下基础。方法用荧光定量PCR的方法对F0代的2只小鼠基因组做检测。先根据已知拷贝数的GFP(green fluorescent protein)和GAPDH来制作标准曲线和方程,然后计算出基因组中二者所含拷贝数的比例来计算外源基因的拷贝数。结果 2只F0的外源基因拷贝数分别是3和4。结论 nestin-GFP转基因小鼠的外源基因整合拷贝数分别是3和4。  相似文献   

9.
Nestin转基因小鼠模型的建立及nestin基因在器官中的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的构建人nestin基因表达载体,制备nestin过表达转基因小鼠。方法以人神经胶质瘤细胞株U251的cDNA为模板,分3段扩增出nestin基因cDNA全序列,并将其克隆入含有强启动子ROSA26的pBROAD3载体,酶切鉴定、测序,除去原核序列,纯化。显微原核注射建立转基因小鼠。PCR验证nestin基因整合,确定建立首建者。将阳性鼠传代。Western blot方法检测F3代转基因小鼠与野生型小鼠主要器官(心、肺、脑、肾)的nestin表达。结果测序结果证明成功构建了受ROSA26启动子调控的nestin转基因载体。出生34只小鼠,PCR检测证实存在首建者2只。Western blot方法证实,与野生型小鼠相比,F3代转基因小鼠脑、肺组织存在较高水平nestin表达。结论首次成功建立nestin过表达转基因小鼠,外源基因可遗传到子代并在脑和肺组织中稳定表达,为深入研究nestin在肿瘤转移、细胞"干性"的维持和细胞的分化等功能提供了良好的实验动物模型。  相似文献   

10.
目的:探索含人多药耐药基因(MDR1)全长cDNA的逆转录病毒载体转染小鼠骨髓造血细胞转染时间及转染效率的关系。方法:采用逆转录病毒上清法转染小鼠骨髓造血细胞,依据转染时间不同分为2日组及4日组,分别行PCR法检测外源MDR1基因;免疫组化法检测MDR1基因表达,柔红霉素排出试验检测表达外源基因的功能。结果:PCR方法证实转入的外源MDR1基因可整合入小鼠骨髓造血细胞基因组中;免疫组化法检测转染率最高达33%,转染4日组转染率大于转染2日组转染率(P<0.05);柔红霉素排出试验证实转入外源基因表达产物可行使正常功能。结论:逆转录病毒上清法可有效转染外源MDR1基因入骨髓造血细胞中;表达产物可行使正常生理功能;在转染4天时间内,转染率随转染时间延长而增高。  相似文献   

11.
转人组织蛋白酶K基因小鼠的Southern杂交鉴定   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的用地高辛标记探针的方法进行Southern杂交,以检测转人组织蛋白酶K基因小鼠外源DNA的整合情况,筛选携带目的基因的阳性小鼠。方法用地高辛标记探针的方法,对转人组织蛋白酶K基因小鼠(FD代)及首建阳性鼠与野生型ICR小鼠交配产生的F1代进行Southern杂交,对F0代和F1代进行筛选。结果经显微注射法,共获得25只转基因小鼠,通过Southern杂交鉴定,1只为阳性,阳性率为4%;对PCR阳性的F1代小鼠35只进行Southern杂交,结果全部为阳性。结论外源基因(人Cathepsin K基因)已整合到小鼠的染色体上,并且能够遗传。  相似文献   

12.
人bcl-xl转基因小鼠外源基因的复制及传代的稳定性观察   总被引:7,自引:0,他引:7  
显微注射法建立转bcl-xl基因小鼠,将PCR及Southern-blot检测阳性的小鼠与正常鼠酱并传代,然后检测子代中外源基因的遗传 情况。结果发现:10号小鼠传代过程中PCR阳性率保持稳定,符合孟德尔遗传规律,外源基因能够稳定遗传 。6号小鼠PCR阳性率呈轻微下降趋势,但能够保持相对稳定遗传 。13号和5号小鼠PCR阳性率均呈现明显的下降趋势。该二小鼠存在外源基因遗传丢失现象。结果提示:获得了能够稳定遗传 的转基因鼠系。  相似文献   

13.
海口和三亚地区商品猪中戊型肝炎病毒感染情况调查   总被引:3,自引:1,他引:3  
目的调查海口和三亚地区商品猪中戊型肝炎病毒感染情况,为制定相应的戊肝防制策略提供资料。方法应用ELISA方法,对海口和三亚的18个养猪场的190只成年猪进行了HEV血清学调查。结果在海口和三亚地区18个猪场的190只猪中,抗-HEV抗体阳性猪176只,总阳性率92.6%。在18个猪场中,有13个猪场的HEV阳性率在90%以上,其中,11个猪场的阳性率为100%。最低的阳性率为60%。结论在海口和三亚两地区商品猪中,HEV的感染是非常普遍的,且感染率较高,应予关注。  相似文献   

14.
CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植的体外实验研究   总被引:3,自引:2,他引:1  
目的 探索重组腺病毒载体(Recombinant adenovirus,rAdv)介导CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植免疫耐受的分子机制。方法 构建CTLA4Ig重组腺病毒载体,转染猪树突状细胞(Dendritic Cell,DC),以猪表皮细胞匀浆液为刺激原,观察DC递呈猪表皮抗原刺激人T细胞增殖、活化及信号转导的影响;同时,以CTLA4Ig转染小鼠DC细胞,观察该DC膜表面分子CD40、CD80表达。结果 CTLA4Ig转染DC能显著抑制人外周血T淋巴细胞增殖能力(P<0.01)和T细胞肌醇磷脂信号系统转导活性,IL-2分泌亦受到明显抑制(P<0.05);转染CTLA4Ig的小鼠DC膜表面分子CD80表达降低(P<0.05)。结论 腺病毒介导CTLA4Ig基因转染转皮能诱导人外周血T淋巴细胞免疫耐受。  相似文献   

15.
目的 建立甘丙肽(galanin,GAL)过表达转基因小鼠,为后续研究甘丙肽基因功能提供动物模型. 方法 重组质粒PDGFβ-GAL经XbaⅠ、HindⅢ双酶切后,将连接有启动子的甘丙肽基因片段回收纯化,用显微注射法将甘丙肽基因注入400枚受精卵的雄原核中,选取发育正常的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管壶腹部,待其产仔.用PCR方法鉴定子代小鼠基因型,蛋白印迹分析(Western blot)鉴定子代小鼠体内GAL蛋白表达情况. 结果 获得子代小鼠50只,有8只小鼠在基因组上整合有GAL基因,整合率为16%:Western blot显示转入的基因片段PDGF β-GAL在脑组织中的表达水平比肝组织高.结论 通过显微注射法成功建立了GAL过表达转基因小鼠模型.  相似文献   

16.
目的:在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位,并对其诊断敏感性进行评价。方法:人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I3位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和West-ernblot检测表达产物的抗原性,并以表达产物为包被抗原,通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗-HBs。结果:嵌和蛋白可与抗-HBs特异性结合,其ELISA检测抗-HBs阳性率为77.5%,Westernblot的为68%,而对照试剂盒的为62%。结论:在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性,有诊断应用价值。  相似文献   

17.
Li H  Gu S  She M 《中华医学杂志》1998,78(7):531-533
目的研究载脂蛋白AI(apoAI)基因表达调控对血浆高密度脂蛋白(HDL)代谢的影响。方法采用已建立的含小鼠金属硫蛋白I(MT-I)启动子的人apoAI转基因C57BL/6小鼠系,通过Southern及Northern杂交技术检测锌诱导前后人apoAI基因整合和表达的情况。结果转基因小鼠整合4~15拷贝的人apoAI基因。人apoAI基因主要在肝和肾中表达,经重金属锌诱导后,人apoAI基因可在肝、小肠及肾中高效表达。转基因鼠血浆总apoAI水平比对照组明显增高,其中人apoAI水平经锌诱导后增高约46%。与对照组相比,血浆HDL水平在锌诱导前后分别增高约47%和103%。转基因鼠HDL和人apoAI水平间呈显著正相关(r=0.85,P<0.01)。结论ApoAI对血浆HDL水平升高有重要的调节作用,该转基因鼠是进一步研究apoAI在高脂血症时对脂质代谢的影响和抗动脉粥样硬化(AS)作用机制的理想动物模型  相似文献   

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