三氧化二砷和顺铂对人卵巢癌细胞株3AO体外杀伤效应的对比研究

目的 :比较As2 O3 和顺铂 (cDDP)对卵巢癌细胞株的生长抑制作用和凋亡诱导作用。方法 :采用MTT测定法和流式细胞分析法 (FCM) ,检测As2 O3 对体外培养的人卵巢癌细胞株 3AO细胞的生长抑制率和诱导凋亡率及对细胞周期的影响 ,并与cDDP进行比较。采用吖啶橙染色 ,观察As2 O3 作用后 ,凋亡细胞的形态学变化。结果 :As2 O3 可以有效地抑制 3AO细胞生长并诱导其凋亡 ,具有量 效性及时 效性 ,与cDDP相比 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。As2 O3 作用后 ,S期细胞通过受阻 ,形态学观察发现细胞呈典型的凋亡细胞特征。结论 :与cDDP相比 ,As2 O3 对卵巢癌细胞株 3AO细胞具有更有效的生长抑制作用及诱导凋亡作用 ,并使S期细胞阻滞。     

三氧化二砷抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长及机制的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人卵巢癌细胞株 3AO细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及作用机制。方法 :4× 10 6个 3AO细胞接种于裸鼠皮下 ,采用不同浓度As2 O3 腹腔注射治疗 ,与顺铂 (cDDP)进行对比 ,计算移植瘤的体积、瘤重、抑瘤率及Fas、FasL基因表达水平的变化。结果 :As2 O3 对移植瘤生长的抑制作用明显优于cDDP ,且具有剂量低赖性 ;As2 O3 作用后Fas基因的表达呈升调节 ,而FasL基因的表达无明显变化。结论 :As2 O3 对人卵巢癌移植瘤的生长具有明显的抑制作用 ,其机制与Fas基因的过度表达有关。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1凋亡

目的：对比研究三氧化二砷(As2O3)诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1凋亡的作用．方法：用不同浓度的As2O3溶液作用人卵巢癌细胞株SKOV3及COC1,于不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期的变化,原位末端标记法观察细胞凋亡形态学特征．结果：不同浓度的As2O3溶液对卵巢癌细胞株SKOV3及COC1均有不同程度的生长抑制作用．随着药物浓度的升高、作用时间的延长,As2O3对COC1细胞的生长抑制率升高．15．0μmol/L(10ppc)浓度组的As203对SKOV3的生长抑制效应最显．低于15．0μmol/L的浓度组对SKOV3细胞株的抑制率之间没有显性差异．As2O3对COC1细胞的生长抑制作用比SKOV3强．6．0μmol/L As2O3作用48 h SKOV3细胞出现凋亡形态学改变,COC1细胞在1．5μmol/L As2O3作用48h就出现了凋亡形态学改变,且随着作用时间的延长凋亡细胞增多．15．0和6．0μmol/L As2O3作用下SKOV3细胞周期的变化出现了随着药物作用时间的延长G1期细胞比例逐渐上升,S期、G2／M期细胞的比例同时降低的现象．在3．0和1．5μmoL／L As2O3作用下COC1细胞周期也出现了相同的改变．结论：As2O3可以诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1发生凋亡,COC1比SKOV3对砷剂更敏感．诱导细胞发生G1期阻滞是As2O3抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

细胞内Ca2+变化在砷剂诱导胰腺癌细胞株凋亡中的作用

目的：探讨细胞内游离Ca^2 在As2O3诱导的胰腺癌细胞株凋亡过程中的作用及Fas,Fas配体（FasL)的变化和意义。方法：2μmol/L的As2O3与胰腺癌细胞株SW－1990共同孵育后,H－E染色、光镜观察,抽提细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳,上流式细胞仪检测细胞凋亡特征; 用Fura-2荧光负荷技术测细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i),流式细胞仪检测Fas,FasL的表达情况。结果：2μmol/LAsO3作用于胰腺癌细胞48h后,胰腺癌细胞出现典型的凋亡特性改变,且凋亡过程中[Ca^2 ]i明显升高,Fas,FasL表达呈先升后降,结论：As2O3在诱导胰腺细胞凋亡过程中,肿瘤细胞凋亡与[Ca^2 ]i升高和Fas、FasL表达有关。     

三氧化二砷诱导喉癌Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的 观察三氧化二砷（AS2O3）对喉癌Hep-2细胞株诱导细胞凋亡的作用和对细胞周期的影响。方法 体外培养的Hep-2细胞与不同浓度的AS2O3作用24、48、72h，通过MTT还原法检测细胞的生长抑制率，用倒置相差显微镜、流式细胞仪、荧光显微镜研究细胞凋亡的形态学改变，检测细胞凋亡率并进行细胞周期分析。结果 As2O3可有效抑制Hep-2细胞的生长，呈时间和浓度依赖性特点。形态学观察发现，As2O3诱导Hep-2细胞凋亡。2μmol/L As2O3作用24h，S期细胞比例增高，72h后，S期细胞明显下降，细胞大量凋亡。AS2O3在低浓度时，阻滞细胞通过S期，高浓度时诱导S期细胞凋亡。结论 AS2O3可诱导Hep-2细胞的凋亡，与细胞周期阻滞有关。     

三氧化二砷诱导喉癌Hep—2耐药细胞凋亡的研究

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对喉癌Hep -2细胞株和长春新碱诱导的多药耐药Hep -2r细胞的作用和对细胞周期的影响。方法 :用长春新碱(VCR)递增药物浓度法筛选耐药细胞Hep -2r,体外培养的细胞与不同浓度的As2 O3 作用 2 4、48、72h,通过MTT还原法检测细胞的生长抑制率 ,用光学显微镜、流式细胞仪、荧光显微镜研究细胞凋亡的形态学改变 ,检测细胞凋亡率并进行细胞周期分析。结果 :As2 O3 可有效抑制Hep -2细胞和Hep-2r细胞的生长 ,呈时间和浓度依赖性特点。形态学观察发现 ,As2 O3 诱导Hep-2和Hep-2r细胞凋亡 ,Hep -2和Hep -2r细胞对As2 O3 的敏感性无显著差异。2 μmol/LAs2 O3 作用 2 4h时 ,S期细胞比例增高 ,72h后 ,S期细胞明显下降 ,细胞大量凋亡。As2 O3 在作用早期 ,阻滞细胞通过S期 ,随着时间的延长 ,诱导S期细胞凋亡。结论 :As2 O3 可诱导Hep -2细胞和Hep-2r细胞凋亡 ,与细胞周期阻滞有关     

三氧化二砷诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用

目的 探讨三氧化二胂（As2O3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用。方法 应用普通光学显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪观察As2O3对HepG2细胞株的形态学改变和诱导凋亡率。结果 As2O3作用于细胞后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变,细胞体积缩小、染色质固缩成斑块状、呈半月型紧贴于核膜周边、核碎裂、凋亡小体形成等。AO／EB荧光染色法显示,细胞凋亡率为3．1％－9．1％。As2O3诱导HepG2细胞凋亡作用呈时间依赖性,最佳浓度为2μmol／L。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2／M期。结论 As2O3具有诱导HepG2细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值。     

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株体外作用的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)对卵巢癌细胞株体外生长的影响。方法：以As2O3处理卵巢癌细胞株SKOV3，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法，测定As2O3对SKOV3生长的抑制作用，并绘制剂量－效应曲线；通过透射电镜观察细胞超微结构的变化；应用流式细胞仪分析DNA含量和细胞周期并测定凋亡特征酶caspase-3的活性变化。结果：0．5－4．0μmol/L三氧化二砷明显抑制SKOV3细胞的增殖，并呈剂量和时间依赖性；透射电镜观察可看到较为典型的细胞凋亡的形态学改变；细胞核固缩，染色质凝集，呈新月状紧贴于核膜周边，凋亡小体形成等；流式细胞仪检测出现DNA含量小于G1峰的亚二倍体凋亡峰，同时出现G2／M期阻滞；SKOV3在As2O3作用下，caspase-3是实现凋亡的效应因子，它的激活必然导致凋亡细胞最终的各种表型变化。结论：As2O3对卵巢癌细胞株SKOV3的生长有明显的抑制作用，诱导凋亡是其主要作用机制之一。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡对端粒酶活性的影响

目的探讨三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡时对端粒酶活性的影响。方法不同浓度的As2O3溶液作用卵巢癌细胞SKOV3,在不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;FCM检测细胞凋亡率;TRAP-银染法观察端粒酶活性的变化。结果 As2O3溶液对SKOV3细胞有生长抑制和诱导凋亡的作用。As2O3作用SKOV3细胞24 h,端粒酶活性无明显下降,但有凋亡现象,凋亡率为6.15%。随着作用时间的延长,凋亡率逐渐上升,端粒酶活性逐渐下降。随着药物浓度的升高端粒酶活性也呈不断下降趋势,以至消失。结论 As2O3诱导SKOV3凋亡与端粒酶活性有一定相关性,但端粒酶活性的下降可能不是As2O3诱导细胞凋亡的早期事件。     

三氧化二砷体外诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人胃癌SGC 790 1细胞抑制生长、诱导凋亡的生物学效应。方法 :光学显微镜观察细胞形态 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)还原法检测As2 O3 对该细胞株生长的影响 ,流式细胞仪 (FCM )及 3′ OH末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果 :SGC 790 1细胞经As2 O3 作用后 ,细胞增殖受到明显抑制 ,且呈剂量和作用时间依赖关系 ,细胞周期分析显示G2 M期阻滞 ;FCM检测在细胞周期G1期前出现低于 2倍体的凋亡峰 ;TUNEL标记发现DNA链的断裂。结论 :As2 O3 能抑制人胃癌SGC 790 1细胞增殖 ,并诱导该细胞系凋亡 ,其发生机制可能与细胞周期阻滞有关。     

三氧化二砷启动人食管癌细胞凋亡机制研究

目的探讨三氧化二砷诱导白血病及实体瘤细胞凋亡的机制。方法以三氧化二砷敏感和不敏感人食管癌细胞株为模型,运用RT-PCR和流式细胞术检测三氧化二砷处理的这两类细胞Fas／FasL表达的改变;同时利用荧光探针检测线粒体功能变化。结果两类细胞有同等水平Fas表达,但均未检测出FasL;三氧化二砷既不能上调Fas也不能诱导FasL表达,但破坏线粒体跨膜电势和氧化-还原系统。结论三氧化二砷诱导人食管癌细胞凋亡不依赖Fas／FasL的启动,而直接作用于线粒体,活化Caspase-3导致凋亡。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的建立

目的　探讨建立人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的方法。方法　人卵巢癌细胞株 3AO和顺铂耐药细胞株 3AO/cDDP细胞体外培养。 4× 10 6个 3AO、3AO/cDDP分别接种于裸鼠腹腔 96h后 ,各随机分为 2组 ,分别腹腔内注射生理盐水和顺铂 (cDDP) ,观察各组裸鼠的致瘤率、生存期和生存延长率。采用流式细胞技术观察转移瘤LRP、MRP基因的表达情况。转移瘤瘤体行病理学检查。结果　 3AO、3AO/cDDP细胞的裸鼠致瘤率差异无显著性 ,P >0 .0 5 ;cDDP能提高 3AO荷瘤鼠的生存期及生存延长率 ,与 3AO/cDDP荷鼠相比 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ;3AO/cDDP转移瘤的LRP、MRP基因的表达水平显著高于 3AO转移瘤 ,P <0 .0 5 ;病理学检查提示裸鼠腹腔转移瘤细胞具人恶性特征。结论　该方法建立裸鼠卵巢癌腹腔转移模型具有成瘤率高的特点 ,并能保持顺铂耐药特征。     

Fas基因在卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的 :检测Fas基因表达并观察转染Fas基因对卵巢癌细胞凋亡的影响 ,探讨其在卵巢癌发生、发展中的作用。方法 :经流式细胞术、RT PCR方法检测 6种卵巢癌细胞Fas的表达水平。构建pcDNA3 Fas真核表达载体 ,经脂质体转染细胞 ,通过流式细胞仪检测Fas基因表达变化。应用PI染色经流式细胞术检测观察转染Fas基因对3AO细胞凋亡的影响。结果 :6种卵巢癌细胞均表达Fas,均属中低表达。经 pcDNA3 Fas真核表达载体转染的卵巢癌细胞Fas基因表达及对Fas单抗诱导凋亡的敏感性均有不同程度提高。结论 :Fas基因低表达及对Fas介导凋亡的抵抗可能与卵巢癌发生、发展有关 ;转染Fas基因可提高Fas基因表达 ,可促进卵巢癌细胞凋亡     

FasL基因转染Hela细胞体外诱导淋巴细胞凋亡的作用

目的 应用FasL基因转染具有上皮细胞特性的Hela细胞，探讨FasL基因的表达对诱导同种异体淋巴细胞凋亡的作用，为解决同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥问题提供一条研究途径。方法 PLNCX2-FasL质粒转化大肠杆菌，抽提纯化的PLNCX2-FasL质粒用限制性内切酶xho Ⅰ，Not Ⅰ酶切，琼脂糖凝胶电泳得到755bp大小的目的条带。紫外灯下切割回收目的条带并抽提纯化得到FasL基因，用xhoⅠ，Not Ⅰ酶切PCDNA3．1质粒载体并在相同位点插入FasL基因，T4酶连接，构建PCDNA3．1-FasL重组质粒。脂质体转染法将PCDNA3．1-FasL基因转染Hela细胞，G418筛选；经过免疫细胞化学法，RT-PCR鉴定后，进行单项淋巴细胞混合试验，检测FasL基因对诱导淋巴细胞凋亡的作用。结果 表达FasL基因的Hela细胞的淋巴细胞刺激指数较对照组转染空白质粒的Hela细胞下调，仅达到对照组刺激指数的17．0l％。结论 FasL基因转染上皮细胞可诱导淋巴细胞凋亡，为研究避免同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥提供了一种可行的方法和设想。     

黄芪皂苷对过氧化氢诱导的肺泡上皮细胞凋亡的作用

目的探讨黄芪皂苷对过氧化氢(H2O2)引起的肺泡上皮细胞凋亡的拮抗作用。方法采用Annexin V评价细胞凋亡,Westernblot检测细胞内Fas和FasL,分别对过氧化氢单纯刺激组,黄芪100 uM和200 uM孵育后过氧化氢刺激组进行检测。结果黄芪皂苷孵育组凋亡数明显少于单纯H2O2刺激组(P<0.01)。黄芪皂苷孵育组中Fas和FasL的表达较单纯H2O2刺激组减弱(P<0.01)。结论黄芪皂苷可有效减少由H2O2引起的肺泡上皮细胞的凋亡,减少Fas和FasL的表达。     

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoC1／cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoC1/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析。结果:MPA明显抑制CoC1/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P<0.01);MPA与DDP合用对CoC1/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P<0.01)。结论:MPA能明显抑制CoC1/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性。     

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoCl/cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoCl/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理.方法采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoCl/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析.结果MPA明显抑制CoCl/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P＜0.01);MPA与DDP合用对CoCl/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P＜0.01).结论MPA能明显抑制CoCl/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性.     

卵巢上皮性癌OPCML基因的表达缺失和启动子甲基化

目的探讨OPCML基因在卵巢上皮性癌中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系。方法用逆转录—聚合酶链反应、限制性内切酶-聚合酶链反应检测卵巢正常组织、良性上皮性肿瘤、上皮性癌组织和SKOV-3、3AO、CAOV3卵巢癌细胞株OPCML基因的失表达及CpG岛甲基化。结果在卵巢癌中OPCMLmRNA的表达率显著低于正常卵巢组织(χ2=30·108,P=0·0000)和卵巢良性肿瘤组织(χ2=21·162,P=0·000)。SKOV-3和CAOV3细胞未见OPCMLmRNA表达,而3AO细胞可见OPCMLmRNA表达。在卵巢癌中,启动子CpG岛尤其是HapⅡ酶切位点甲基化率显著高于正常卵巢组织(χ2=13·630,P=0·0000)和良性肿瘤组织(χ2=11·797,P=0·000)。卵巢癌OPCML启动子CpG岛甲基化和mRNA失表达呈显著相关(r=11·589,P=0·002)。SKOV-3和CAOV3细胞有内切酶位点甲基化,而3AO细胞无酶切位点甲基化。结论卵巢上皮性癌细胞存在OPCML基因失表达;基因启动子CpG岛,尤其是HapⅡ酶切位点的甲基化是导致OPCML基因失表达的途径,但不是唯一途径。     

药物诱导与耐药基因转染两种方法建立的人食管癌顺铂耐药细胞系的比较

目的比较药物诱导和耐药基因转染两种方法所建立的人食管癌顺铂耐药细胞系的不同特点。方法顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用法历时9个月建立食管癌耐药细胞系Ec9706/cDDP;同时采用脂质体转染法将人野生型DNA聚合酶β(polβ)的重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入食管癌细胞Ec9706,经G418筛选得到稳定转染细胞系Ec9706-AC3。荧光显微镜观察转染效果,普通倒置显微镜观察细胞形态变化。绘制生长曲线,计算群体倍增时间。RT-PCR方法检测细胞中polβmRNA的表达水平,MTT法测细胞对顺铂的敏感性,并观察冻存复苏、撤药培养对耐药性的影响。结果两种方法所获耐药细胞与亲本细胞相比形态无明显变化,polβmRNA表达均增加。Ec9706/cDDP耐药指数为15.70±1.16,冻存复苏对耐药指数影响不大,而撤药培养可使耐药性降低,细胞群体倍增时间延长;Ec9706-AC3细胞耐药指数为1.78±0.67,不受冻存复苏、撤药培养的影响,细胞群体倍增时间不变。结论用不同方法成功建立两种人食管癌顺铂耐药细胞,不同方法获得的耐药细胞生物学特性有所不同。     

奥曲肽诱导肝癌细胞凋亡和Fas/FasL的表达

目的 探讨奥曲肽对人肝癌细胞抑制作用的机制,为奥曲肽临床应用提供实验依据.方法 用奥曲肽4、7、10 μ g/ml作用人肝癌细胞株(SMMC-7721)24、48、72 h,以空白作为对照组;采用原位末端标记(TUNEL)法流式细胞仪检测SMMC-7721凋亡;直接标记单克隆(CD95/CDl78)抗体法流式细胞仪检测SMMC-7721 Fas/FasL表达的变化.结果 奥曲肽在4、7、10 μg/ml d作用 SMMC-7721 24 h后,SMMC-7721凋亡率从8%升高为40%(P＜0.05),Fas表达率从57%升高为76%(P＜0.05),FasL表达率从54%升高为63%(P＜0.05).结论 奥曲肽能诱导肝癌细胞(Hep SMMC-7721)凋亡的发生,而且能促进肝癌细胞Fas/Fasl基因的表达.