内皮型一氧化氮合酶基因转染犬骨髓源内皮祖细胞的实验研究

目的:探讨人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)基因转染犬内皮祖细胞(EPCs)的有效方法?方法:分别用5型腺病毒和pEGFP-N1质粒作为载体携带heNOS,对体外定向培养扩增的骨髓来源的犬EPCs进行体外转染,然后对转染heNOS基因后的EPCs进行鉴定及功能检测,观察heNOS基因的功能表达情况?结果:heNOS转染犬EPCs 48 h后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测到5型腺病毒转染组EPCs的eNOS表达量(2 091.67 ± 172.49 pg/ml)较pEGFP-N1质粒转染组(173.67 ± 36.76 pg/ml)和未转染组(158.00 ± 30.91 pg/ml)均显著增多(P < 0.01);硝酸还原酶法测定5型腺病毒转染组细胞培养上清中的NO含量(49.5 ± 5.2 μmol/L)较质粒转染组(38.5 ± 7.1 μmol/L)和未转染组(39.7 ± 7.2 μmol/L)均显著增多(P < 0.01)?结论:5型腺病毒载体介导的heNOS基因能够成功地转染犬EPCs,并能在EPCs中有效表达?     

急性心肌梗死后大鼠炎症细胞因子表达和心室重塑的关系

目的:探讨急性心肌梗死(AMI)后大鼠心脏炎症细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-10基因表达和心室重塑的关系。方法:大鼠分2组,①假手术组(Sham),不结扎左冠状动脉前降支(LAD);②心肌梗死组(MI):结扎LAD。动物笼养4周,作超声心动图检查心脏结构和功能;然后处死大鼠,取出心脏,沿乳头肌等分为二,一半用RT-PCR法测定心脏细胞因子mRNA表达,另一半用Westernblot测定细胞因子蛋白生成量。结果:超声心动图显示,同Sham组相比,MI组LVEDd显著增加、FS和EF明显降低(P均<0.01)。Sham组上述细胞因子均无明显表达,MI组TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-10mRNA表达和蛋白产生均显著高于Sham组(P<0.01)。直线相关分析显示,致炎症细胞因子蛋白表达同LVEDd呈正相关,而抗炎症细胞因子蛋白表达同LVEDd呈负相关。结论:AMI后大鼠心脏内致炎症细胞因子和炎症保护因子IL10都升高,炎症细胞因子参与了AMI后的心室重塑。     

JNK抑制剂对缺血/再灌注大鼠心肌梗死面积及心功能的影响

[摘要] 目的 观察JNK 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）特异性阻断剂SP600125对大鼠心脏缺血/再灌注（I/R）损伤后心肌梗死面积和收缩功能的影响,探讨阻断该信号转导通路减轻梗死面积及心功能I/R损伤的作用及机制。方法 30只健康成年SD大鼠被随机分成5组,每组6只。用穿线结扎冠状动脉前降支（LAD）30 min、复灌180 min造成心肌I/R损伤动物模型。SP600125 3个剂量组在松开结扎前5 min和再灌注过程中分次静脉给予SP600125总剂量分别为4.7、14.4、47.9 mg/kg;假手术组、模型组相同时间给予等量生理盐水。观察左心室收缩压（LVSP）、左心室等容期压力最大变化速率（±dp/dt max）和左心室发展压（LVDP′）等血流动力学指标,并计算心肌梗死及缺血危险区面积。结果 SP600125使I/ R心肌损伤减轻,缩小梗死面积,在整个I/R期, SP600125组LVSP、±dp/dt max和LVDP′的变化值均明显小于模型组（P < 0. 05或P <0.01）。结论 SP600125 3个剂量组均能改善大鼠心肌梗死面积及心脏I/R引起的心脏收缩功能。 [关键词]JNK抑制剂;缺血/再灌注心肌;梗死面积;心功能     

辛伐他汀抑制大鼠急性心肌梗死后炎症因子的实验研究

目的:在大鼠结扎前降支致心肌梗死的模型上观察辛伐他汀抑制心肌梗死后炎症因子的作用,探讨辛伐他汀改善心室重塑和心功能的机制。方法:结扎大鼠冠状动脉前降支造成心肌梗死模型,给予辛伐他汀干预;8周后,测定心脏重量指数、心肌梗死区与非梗死区心肌羟脯氨酸含量和胶原含量、检测不同分组大鼠心肌组织中TNF-α、IL-6和IL-10水平差异,并与假手术组比较。结果:心肌梗死组(M组)大鼠右室重量指数[RVWI右室心脏重量指数=右室心脏重量(mg)/体重(g)]为0.803±0.010、左室重量指数[LVWI左室心脏重量指数=左室心脏重(mg)量/体重(g)]为3.26±0.05,较假手术组(S组)升高(p<0.01)。心肌梗死组(M组)心肌组织中羟脯氨酸、胶原含量(mg/g)、TNF-α和IL-6(pg/ml)表达升高(分别为5.528±0.59、40.58±4.31、20.83±5.79、109.88±22.68)(p<0.01),IL-10(pg/ml)表达降低(25.17±5.52)(p<0.05)。辛伐他汀干预组较M组RVWI、LVWI(mg/g)下降(0.690±0.011、2.42±0.04)(p<0.01),心肌中羟脯氨酸、胶原含量(mg/g)及TNF-α、IL-6(pg/ml)表达下降(分别为3.40±0.78、24.95±5.74、21.15±6.01、156.48±32.82)(p<0.01),IL-10(pg/ml)表达升高(24.88±5.44)(p<0.01)。结论:辛伐他汀可减少急性心肌梗死后有害炎症因子表达,并抑制胶原形成及心肌纤维化,可能与其改善心室重塑和心功能有明显关系。     

内皮型一氧化氮合酶基因在犬内皮细胞的转染和表达

目的探讨转染内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因后内皮细胞(EC)的功能变化。方法采用脂质体法转染eNOS基因于实验犬EC;RT-PCR和免疫组化法检测转染效果;分别采用比色法和酶联免疫法检测细胞培养液一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)和vWF的浓度;并观察转染细胞生长增殖情况。结果RT-PCR产物电泳和测序及免疫组化法检测证实转染效果满意;转染后EC培养液NOS和NO浓度在不同时间明显升高(120h分别为33.53和32.99),与正常组对比差异显著(P<0.05)。转染后细胞生长增殖和vWF含量无显著差异。结论通过脂质体法成功地将eNOS基因转染于实验犬EC;转染后eNOS基因在mRNA和蛋白质水平均高效表达;内皮细胞eNOS活性显著增强;转染后细胞生物学功能稳定。     

内皮型一氧化氮合酶基因在犬内皮细胞的转染和表达

目的探讨转染内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因后内皮细胞(EC)的功能变化.方法采用脂质体法转染eNOS基因于实验犬EC;RT-PCR和免疫组化法检测转染效果;分别采用比色法和酶联免疫法检测细胞培养液一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)和vWF的浓度;并观察转染细胞生长增殖情况.结果 RT-PCR产物电泳和测序及免疫组化法检测证实转染效果满意;转染后EC培养液NOS和NO浓度在不同时间明显升高(120 h分别为33.53和32.99),与正常组对比差异显著(P<0.05).转染后细胞生长增殖和vWF含量无显著差异.结论通过脂质体法成功地将eNOS基因转染于实验犬EC;转染后eNOS基因在mRNA和蛋白质水平均高效表达;内皮细胞eNOS活性显著增强;转染后细胞生物学功能稳定.     

eNOS基因重组腺病毒载体在大鼠骨髓来源内皮祖细胞中的表达分析

目的探讨eNOS基因重组腺病毒载体在大鼠骨髓来源内皮祖细胞（EPCs）中的表达与作用。方法将eNOS基因插入载体PSUCMV中构建重组质粒PSUCMVeNOS,经酶切、插入、转染后包装扩增成腺病毒颗粒;大鼠胫骨获取骨髓,制备EPCs,鉴定正确后传代纯化,将三代细胞随机分为PBS对照组（C组）、Lac基因转染组（L组）和eNOS基因转染组（N组）。分别于干预后第1天、第3天、第7天观察各组细胞形态的变化,检测培养液中NO含量和各组细胞eNOS表达的变化。结果AdCMVeNOS病毒DNA成功包装成完整的病毒颗粒,测其滴度为1．58×10^10 PFU／mL;将其转染鉴定正确的EPCs,结果于体外转染后1d内,即可检测到eNOS转基因产物的表达增加;N组同一时点eNOS含量明显高于L组、C组,组间比较差异显著;组内比较,N7、N3与N1组比较差异显著。随时间延长NO生成量递增,第3天与第7天结果差异有显著性。结论eNOS基因可在大鼠EPCs中高效表达,并可促使培养液中NO含量明显增高。     

心包腔内注入腺病毒-血管内皮生长因子165基因治疗心肌缺血的实验研究

目的:探讨经心包腔途径转染血管新生基因对缺血心肌的血管生成及舒缩功能的影响。方法:第一部分:随机将12头中国小型猪分为实验组和对照组,每组6头。两组猪均采用球囊堵塞前降支第一对角支远端以建立心肌梗死模型,心肌梗死模型建立后即刻,采用经皮剑突下穿刺方法,将中心静脉导管插入心包腔内转染Ad-LacZ。以胶原酶1200 u及透明质酸酶3000u预处理心包后,在心包腔内注射含Ad-LacZ基因2.0×109pfu。对照组心包腔内注射生理盐水。分别于注射后3天、7天及28天处死动物,对缺血心肌进行染色及病理观察。第二部分:随机将20头中国小型猪分为实验组和对照组,每组10头,每组又分3天(n=2)、7天(n=6)及28天(n=6)三个亚组。注射后3天、7天及28天分别用免疫组化、超声心动图对缺血心肌血管新生情况进行检测,并以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆、心包及心肌组织中Ad-VEGF165的表达。第三部分:20头小型猪随机分为心包转染组(心包组)和冠脉转染组(冠脉组)。心包组和冠脉组均注射Ad-VEGF1651.0 ml(2×109pfu),于注射前及其后3、7、28天分别测定组织内VEGF水平、微血管密度(MVD)、心功能。结果:①实验组注射Ad-LacZ基因后第3天、第7天及28天后X-gal染色有阳性细胞,以第7天最明显,对照组无阳性细胞。②Ad-VEGF165基因经心包腔转染缺血心肌组织后,在心包及组织中成高表达,于7天达到高峰,28天降至基线水平,血浆中无目的基因的表达;28天时,实验组缺血心肌微血管密度(MVD)、心功能均明显高于对照组[MVD,517.0±75.7/mm2vs 226.5±54.1/mm2,P=0.009;LVEF72.11±5.2%vs 55.14±4.37%,P=0.005]。③心包组和冠脉组的心脏均表达有VEGF165基因,组织内VEGF水平在7天时达高峰,28天时降至基线水平,前组高于后组(702±85pg/ml vs 592±59 pg/ml,P=0.026)。而两组的MVD、心功能随转染时间延长均明显增加,但心包组优于冠脉组(28d,MVD,517.0±75.7/mm2vs 326.4±24.1/mm2,P=0.001;FS,32.9±2.2%vs 30.6±2.1%,P=0.049;LVEF,72.11±5.2%vs 65.87±2.16%,P=0.034)。结论:①应用球囊堵塞法可成功建立猪急性心肌梗死模型,胶原酶及透明质酸酶预处理心包后,腺病毒载体可转染缺血心肌,并持续表达4周。②用胶原酶及透明质酸酶预处理心包腔后,经其转染Ad-VEGF165可以诱导急性心肌梗死模型局部VEGF蛋白表达,促进缺血心肌组织血管新生并能改善心功能。③导管介导的心包腔与冠脉转染Ad-VEGF165基因治疗心肌缺血是有效的、切实可行的,而前者可能是更有前途的新方法。     

腺病毒介导的P16基因转染对膀胱癌细胞AgNORs表达影响的研究

目的 :探讨复制缺陷型腺病毒介导的p16基因转染对人膀胱癌细胞中核仁形成区嗜银蛋白 (AgNORs)表达的影响。　方法 :将 p16重组腺病毒 (Ad p16 )感染p16蛋白表达丧失的人膀胱癌T2 4细胞株 ,银染后 ,用光镜观察肿瘤细胞中AgNORs的数目和大小 ,用图像分析仪定量分析AgNORs表达变化。　 结果 :转染Ad p16 48h后T2 4细胞AgNORs的大小、数目比对照组小且少 ;Ad p16转染的T2 4细胞的银染颗粒面积和胞核面积的比值 (I.S % )为4.42± 1.78,Ad LacZ和未转染组的I .S %值分别为 7.5 2± 1.92和 7.95± 1.5 8,实验组和对照组比较有非常显著的差异 (P <0 .0 1) ,对照组间差异不显著 (P >0 .0 5 )。　结论 :AgNORs在Ad p16转染后其含量减少 ,AgNORs的表达与细胞的增生能力密切相关 ,故AgNORs可作为评估肿瘤细胞恶性增殖能力的指标     

串珠素参与碱性成纤维细胞生长因子对于缺血心肌的保护

目的观察串珠素参与碱性成纤维细胞生长因子对于缺血心肌的保护。方法大鼠心肌梗死模型建立后,随机分为碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）＋心肌缺血（MI）组（bFGF＋MI组,缺血边缘区注射bFGF）、MI组（缺血边缘区注射等体积生理盐水）和假手术组（sham组）。分别于梗后24h、14d、28d结束实验。检测血流动力学参数,红四氮唑法测定心肌梗死面积,免疫组化法计数微血管数目,实时定量PCR检测串珠素mRNA表达,Western印迹检测FAK、P—p38MAPK变化。结果缺血区边缘注射hFGF后,心肌功能改善,心梗面积较MI组减小,微血管数目增加,多于MI组,串珠素mRNA在缺血边缘区、梗区表达增加,FAK、P—p38表达上调。结论bFGF明显改善大鼠急性心肌梗死后心肌功能,缩小梗死面积,促进缺血心肌血管新生,串珠素参与bFGF对于缺血心肌的保护,其细胞信号转导机制涉及FAK的激活和p38MAPK信号转导途径。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

浅谈影响放疗摆位精度的相关因素

本文旨以经验交流的方式,阐述影响放疗摆位精度的各种相关因素,以最大努力去消除或减少放疗摆位误差,提高放疗摆位的精度,同时达到与放疗界其他同行的共勉的愿望。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

十二指肠损伤的治疗体会

目的：提高十二指肠损伤的诊治水平，方法：回顾总结该院1999年－2001年间收治的十二指肠损伤7例临床经验。结果：合并其他腹部脏器损伤86％（6／7），单纯十二指肠损伤14％（1／7）。损伤部位以十二指肠降部为多占71％（5／7），水平部和球部各占14％（1／7），术后并发症发生率28％（2／7）、病死率14％（1／7）。结论：掌握十二指肠损伤的特点，早诊断、早手术、术中认真探查，掌握好检查指征，选择合理恰当术式，加强术后管理，可提高治愈率。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

儿童龋病易患因素调查分析

目的调查儿童龋病的易患因素,为防治儿童龋病齿提供参考依据。方法调查1880例儿童吃零食和平时刷牙的习惯,并分析其与龋齿发生的关系。结果不爱吃零食和爱吃零食儿童的患龋有显著差异（P〈0.005）,刷牙和不爱刷牙的儿童患龋二者有极显著的差异（P〈0.005）。结论儿童不良饮食习惯及不爱保持口腔清洁的习惯是儿童患龋的重要因素之一,医务人员及家长和幼儿园老师都有责任对儿童进行口腔健康教育和宣传指导,及早预防儿童龋病的发生,以有效降低儿童龋病发生率。     

中药枳壳提取物对大鼠不同肠段平滑肌运动功能的影响

【目的】观察枳壳提取物对大鼠十二指肠、空肠、回肠及结肠不同肠段平滑肌收缩功能的影响。【方法】采用离体肠平滑肌实验方法,利用BL-410生物机能分析仪记录给药前后大鼠各肠段平滑肌的收缩幅度和频率,探讨不同浓度枳壳提取物对各肠段收缩的影响。【结果】随着枳壳提取物浓度的不断增加,对正常大鼠十二指肠、空肠、回肠及结肠平滑肌的自发性收缩表现出显著的抑制作用,并能够拮抗乙酰胆碱所致的平滑肌收缩功能的亢进,使阿托品所致平滑肌的舒张作用进一步增强。而枳壳提取物对十二指肠、空肠、回肠及结肠4个肠段平滑肌的舒张作用的强度不同,其中对回肠的作用最强。【结论】枳壳提取物对大鼠离体肠平滑肌的舒张作用强弱表现为回肠>空肠>结肠>十二指肠。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

医学检验本科毕业生调查分析

通过对医学检验专业本科毕业生调查结果进行统计、分析,了解学生对毕业实习、毕业论文等工作的满意程度及意见、建议。结果显示,学生对毕业实习、毕业论文等工作都比较满意,一些调查结果和建议对修订医学检验专业人才培养方案具有指导意义。