人卵巢癌3AO细胞不同转移潜能克隆株的建立

目的:建立不同转移潜能的卵巢癌克隆细胞株。方法:通过克隆技术和细胞电泳,从卵巢癌细胞系3AO中筛选出3个电泳率差异较大的克隆亚系(A1、A5和A11)。并通过生长曲线、软琼脂集落形成实验、移动实验、体外侵袭实验,比较它们的生物学特性及其侵袭转移能力。结果:A1的电泳速度最快, 为(15.30±0.67)μm/s,细胞群体倍增时间为20.55 h,软琼脂集落形成数及侵袭人工基底膜的细胞数多于其他两者,为高转移潜能克隆株。A11的电泳速度为(6.20±0.72)μm/s,群体倍增时间为38.48 h,软琼脂集落形成数及侵袭人工基底膜的细胞数少于其他两者,为低转移潜能克隆株。结论:此异质性克隆系统来自同一肿瘤母系,遗传背景相似,却具有不同的转移潜能,为研究肿瘤转移机制和克隆肿瘤转移相关基因提供了良好模型。     

手术切除的结直肠癌组织中的肿瘤干细胞的培养及鉴定

目的获得结直肠癌患者手术切除癌组织的肿瘤干细胞（CSC）,培养并鉴定其干细胞特性。方法通过原代培养手术切除 结直肠癌组织获得结直肠癌细胞,再通过有限稀释法和无血清培养法筛选结直肠癌CSC,软琼脂集落实验检测CSC和对照组人 结直肠癌细胞株SW480 的增殖能力;用低数量级细胞裸鼠皮下成瘤实验,检测结直肠癌CSC和SW480 的成瘤能力;并运用 Western blot及免疫荧光方法,检测CSC和SW480的免疫表型。结果临床结直肠癌标本原代培养的CSC,加入血清培养可使 CSC分化。软琼脂集落形成实验结果显示,原代培养的CSC克隆形成率为56.64%和54.45%,对照组人结直肠癌细胞株SW480 的克隆形成率为4.41%,CSC与SW480集落形成率的差异具有统计学意义（P<0.01）。裸鼠皮下成瘤实验中,原代培养的CSC 皮下注射500 个细胞可形成皮下瘤,而SW480 皮下注射500 个细胞不形成皮下瘤。CSC 表达CD133、CD44,不表达CK7; SW480细胞不表达CD133、CD44,表达CK7。结论原代培养的手术切除结直肠癌组织标本获得的肿瘤细胞,再行无血清培养 可形成CSC,鉴定具有CSC的自我更新及分化能力。     

外源性mIκBα基因抑制肝癌细胞HepG2的生长

目的观察核转录因子的抑制基因mIκBα在肝癌细胞株HepG2的表达及对该细胞株生长的影响。方法将由293包装细胞产生的含mIκBα的Ad腺病毒上清(Ad-mIκBα)和含包装载体的腺病毒上清(Adv)感染HepG2细胞,观察感染后HepG2细胞的绿色荧光蛋白(GFP)表达和mIκBα蛋白表达,并观察细胞的平板集落形成数、软琼脂集落形成能力、细胞生长曲线、裸鼠成瘤实验。结果肝癌细胞感染腺病毒后GFP表达阳性,感染含mIκBαAd腺病毒的肝癌细胞有mIκBα蛋白表达;HepG2/Ad-mIκBα细胞形成的集落数明显比HepG2/Adv和HepG2细胞形成的集落数少(P<0.05);HepG2细胞、HepG2/Adv细胞在软琼脂内存活,并形成桑椹样细胞集落,而HepG2/Ad-mIκBα细胞在软琼脂上无生长;细胞生长曲线显示HepG2/Ad-mIκBα细胞生长速度较HepG2/Adv、HepG2亲本细胞有所减慢,但饱和密度无显著性差异。裸鼠接种4周后HepG2/Ad-mIκBα细胞成瘤率为80%,HepG2/Adv细胞成瘤率为100%,肿瘤形成率无显著性差异,HepG2/Ad-mIκBα细胞形成的肿瘤的体积比HepG2/Adv细胞形成的肿瘤的体积明显减小(P<0.05)。结论mIκBα基因可以抑制HepG2肝癌细胞的生长。     

亚砷酸钠诱导 HaCaT细胞恶性转化实验

目的探讨低浓度亚砷酸钠（NaAsO2）对人永生化但无致癌性的皮肤角质细胞株（HaCaT）的影响。方法（1）细胞培养：HaCaT细胞株常规培养,隔日换液,4 d传代;（2）细胞毒性实验：MTT法检测细胞毒性,确定最佳染毒剂量;（3）细胞转化实验：HaCaT细胞在含0．05 ppm NaAsO2培养液中连续传代培养40代（约160 d）,细胞培养期间,倒置显微镜下观察每代细胞形态的变化并采集图片,MTT法检测细胞增殖能力,半固体琼脂实验检测细胞克隆形成率。结果NaAsO2处理细胞形态学、增殖能力及非停泊依赖性能力均发生变化,主要表现为多核巨细胞,倍增时间缩短,在半固体琼脂培养基上形成集落及克隆形成率明显增加。结论NaAsO2处理的细胞发生恶性转化,砷诱导体外细胞恶性转化模型建立成功。     

野生型p53基因对白血病K562细胞的增殖抑制作用

目的:建立携野生型p53基因的K562细胞株,研究该细胞内野生型p53基因的表达并观察其生物学特性。方法:构建重组人p53逆转录病毒载体,导入PA317细胞中进行包装,经过病毒滴度测定,筛选高滴度的产病毒细胞克隆。收集培养上清液中的重组人p53逆转录病毒颗粒,感染K562靶细胞,建立携野生型p53基因的K562细胞株。观察该细胞株的生长方式、形态学和生长速度。SP免疫组化染色法检测p53蛋白表达。进一步用流式细胞仪检测p53蛋白表达率和细胞周期变化;双层软琼脂培养实验检测细胞的增殖潜能改变。以pBabe空载体同时实验,作为各阶段的对照。结果:成功地构建了重组逆转录病毒载体pBabe/p53;获得逆转录病毒生产PA317/p53细胞系,最高病毒滴度为4.64×105CFU/m l;获稳定表达p53基因的K562/p53靶细胞,免疫组化结果证实该细胞内有野生型P53蛋白表达,流式细胞仪检测到野生型P53蛋白表达率为1.32%;与对照K562/pBabe细胞比较,K562/p53靶细胞的生长速度下降;软琼脂集落生成的下降率为27.14±4.49%(P<0.05);增殖指数下降,S期比例下降(P均<0.01)。结论:制备了携p53基因的高滴度逆转录病毒,建立携野生型p53基因的K562/p53细胞株,证实表达的野生型p53蛋白对该细胞有抑制作用。     

受康宁胶囊体外抗癌作用及毒性实验

目的观察爱康宁胶囊体外抗肿瘤活性及毒副作用.方法采用双层琼脂集落形成实验观察爱康宁胶囊的体外抗癌作用,并作急性毒性限量实验观察爱康宁胶囊的毒性作用.结果爱康宁胶囊对人癌细胞(肝癌BEL-7402、胃腺癌MGC-80-3和食管癌Eca109)有明显的细胞毒作用.小鼠腹腔注射LD50为39.8±4.5g/kg,急性毒性限量试验小鼠口服600g/kg·     

新药金龙蛇颗粒体外抗肿瘤作用研究

目的观察新药金龙蛇颗粒的体外抗肿瘤作用。方法采用MTT比色法和软琼脂克隆形成实验,观察金龙蛇颗粒体外对人胃癌细胞MKN-45、人肺癌细胞SPCA-1的作用。结果 MTT法结果表明,对MKN-45细胞金龙蛇低、中、高剂量组24h抑制率为30.69%、32.67%、43.56%,48h为36.99%、39.04%、43.84%,对SPCA-1细胞24h抑制率则为23.33%、24.44%、37.78%,48h为28.46%、33.33%、46.34%,皆与空白组存在统计学差异,并且体现了剂量依赖效应,抑制率随剂量增加而增高。软琼脂克隆形成实验结果显示,对MKN-45细胞金龙蛇低、中、高剂量组100个细胞克隆形成率为25.67%、22.17%、19.83%,200个细胞为22.09%、19.75%、17.67%,对SP-CA-1细胞100个细胞克隆形成率为33.50%、28.17%、24.17%,200个细胞为24.59%、20.25%、18.25%,同样与空白组存在差异,并体现出了剂量效应。结论体外实验观察新药金龙蛇颗粒具有一定的抗肿瘤作用。     

核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western blot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力;FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变,并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测,初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。结果建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高(P<0.05);甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落;与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例(42.27±0.86)%显著减低(P<0.01),S期细胞比例(43.08±0.74)%显著增加(P<0.01),同时伴有p21 mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率(1.00±0.13)%明显降低(P<0.01),C...     

干扰素α对人肺腺癌细胞系A549增殖抑制和诱导分化作用

目的探讨干扰素α(IFN-α)对人肺腺癌细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法用不同质量浓度IFN-α(25μg／L,75μg／L,100μg／L)处理人肺腺癌A549细胞,记录细胞数目,进行甲基绿-派洛宁染色,测定软琼脂集落形成率。结果IFN-α能明显抑制A549细胞的增殖,药物组与对照组之间差异有显著性(P＜0.05),药物组与对照组比较增殖型细胞减少,分化型细胞数增加,双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制,对照组集落普遍比药物组集落大,且单个集落中细胞数目多(P＜0.05)。结论IFN-αt对A549细胞具有增殖抑制和诱导分化作用。     

贫铀对人肾小管上皮细胞的恶性转化及苯乙酸、亚硒酸钠的抑制作用

目的:探讨贫铀(DU)是否会引起人肾小管上皮细胞(HKC)向恶性表型转化,以及抑制物是否可有效地抑制这种恶性转化. 方法: 将HKC用可溶性DU溶液(0.063～0.500 g/L)作用24 h后,再与1.0～2.5 μmol/L的苯乙酸(PA)或亚硒酸钠(SS)孵育1 d～3 mo,观察不同代龄细胞的集落形成率、生长曲线、刀豆蛋白(ConA)凝集实验、半固体琼脂集落形成率及裸小鼠成瘤性;检测脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白在转化细胞中的表达. 结果: 传约20～30代后,HKC在半固体琼脂中形成集落,注入裸小鼠后成瘤. 部分转化细胞的FHIT蛋白表达也较正常HKC减弱. PA, SS可明显减少HKC在半固体琼脂集落形成率至(0.6±0.1)‰,裸小鼠也无皮下肿瘤形成(0/3)(P<0.05). 结论: DU可诱发HKC向恶性表型转化;用PA,SS抑制这种恶性转化的效果相似.     

羟基磷灰石纳米粒子抑制结肠癌SW-480细胞生长的体外实验

目的:本研究旨在明确羟基磷灰石纳米粒子(HAP)在体外能否诱导人结肠癌SW-480细胞凋亡并从凋亡角度探讨其抑癌机制。方法:用HAP以不同浓度作用于人结肠癌SW-480细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:HAP以剂量和时间依赖的方式抑制人结肠癌SW-480细胞的生长。25 mg/L,50mg/L HAP作用72 h细胞的生长抑制率分别是49.71%和61.03%。12.5-100 mg/L的HAP处理48 h后,结肠癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。流式细胞仪均能检测到凋亡峰,12.5,25,50,100 mg/L HAP作用48 h,凋亡率分别是3.57%,21.45%,37.10%和49.45%。结论:HAP在体外能抑制人结肠癌SW-480细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

白杨素敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡

目的:研究白杨素(ChR)是否具有增敏重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhsTRAIL)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。方法:体外培养人肝癌Bel-7402细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率。DNA琼脂糖凝胶电泳确证诱导细胞凋亡作用。Western Bloting检测细胞DR5蛋白的表达。结果:ChR40μmol/L、rhsTRAIL 100ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.91%±0.38%、5.89%±0.39%和28.7%±2.50%。ChR(40μmol/L)联合rhsTRAIL(100ng/mL)处理48小时,人肝癌Bel-7402细胞展示出典型DNA梯形条带图谱。Western Blot分析结果发现:白杨素以浓度和时间依赖的方式上调Bel-7402细胞DR5表达。结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。     

MDM2癌基因对野生型p53基因诱发凋亡的抑制作用

目的 　研究 MDM2癌基因与野生型 p5 3基因在细胞凋亡发生中的相互关系。方法　 构建了一个表达人野生型 ( wt) p5 3逆转录病毒载体 ,经 PA31 7细胞包装后转染人胰腺癌细胞 ( PC- 2 ) ,建成 PC- 2 /swtp5 3转化细胞系。再用含 MDM2基因的p CMV- MDM2载体转染 PC- 2 /swtp5 3细胞 ,获得双重转染细胞系 PC- 2 /swtp5 3/p CMV- MDM2。用流式细胞技术 ,原位检测分析和 DNA凝胶电泳分析细胞凋亡。结果　 恢复 wtp5 3表达的胰腺癌细胞系 ( PC- 2 /swtp5 3)细胞凋亡明显增多 ( >1 2 % ) ,而双重转染的细胞系 ( PC- 2 /swtp5 3/p CMV- MDM2 )则凋亡细胞数明显下降 ( 3.2 % )。结论　 MDM2癌基因可抑制由野生型 p5 3基因诱发的细胞凋亡。     

SEMA3B基因在不同病理类型肺癌细胞株中的表达及意义

目的:探讨SEMA3B基因在不同病理类型来源肺癌细胞株中的表达及意义.方法:采用实时定量逆转录聚合酶链反应(Real Time RT- PCR)和琼脂糖凝胶电泳方法,检测来源于不同病理类型肺癌细胞株中SEMA3B基因的表达水平.结果:在不同病理类型的细胞株中SEMA3B - mRNA均较正常肺癌组织显著低表达；在大细胞肺癌细胞株H 1 299、腺癌细胞株PC7、鳞癌细胞株LK2或LC/Sq1细胞中SEMA3B均表达缺失.结论:SEMA3B低表达或表达缺失可能是肺癌发生的机制之一,深入分析SEMA3B在肺癌细胞中与其它信号通路间的相互作用,将有利于我们阐明肺癌的发生.     

白花蛇舌草体外诱导人肝癌HEPG2细胞凋亡的初步研究

目的：初步探讨白花蛇舌草对人肝癌HEPG2细胞的增殖抑制作用。方法：制备白花蛇舌草水提取液，体外培养人肝癌HEPG2细胞，MTT法体外细胞毒实验，琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡。结果：白花蛇舌草浓度在10-80mg／mL时，抑制人肝癌HEPG2细胞生长，且随着剂量的增加抑制作用增强，电泳图片显示DNA梯形降解带纹。结论：白花蛇舌草通过诱导细胞凋亡对人肝癌HEPG2细胞具有增殖抑制作用。     

多西他赛对结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用

目的探讨多烯他赛治疗结肠癌的作用机制。方法采用不同浓度的多烯他赛处理结肠癌LoVo细胞后,应用四唑蓝比色试验检测细胞增殖,采用端粒重复扩增一微孔板杂交法检测端粒酶活性,分别用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL方法检测细胞凋亡,采用流式细胞仪测细胞周期。结果多烯他赛对结肠癌LoVo细胞增殖具有较强的抑制作用。多烯他赛能够抑制端粒酶活性,可诱导结肠癌细胞凋亡,均呈浓度和时间依赖性。结论多烯他赛抑制结肠癌细胞恶性增殖与抑制端粒酶活性、诱导凋亡及细胞周期阻滞有关。     

人参皂甙Rh2诱导人喉癌细胞株Hep-2凋亡的研究

目的:研究人参皂甙Rh-2(G-Rh2)诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的作用。方法:应用流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳检测G-Rh2处理前后Hep-2细胞的凋亡情况,并应用SP免疫组化法检测药物处理前后相关基因产物Bax、Bcl-2蛋白的表达,观察G-Rh2对喉癌Hep-2细胞的诱导凋亡作用及其对细胞周期的影响。结果:(1)G-Rh2具有诱导凋亡作用,且呈量效、时效关系,细胞凋亡率随G-RH2浓度及作用时间的增加而升高,并可将细胞周期阻滞于G0/G1期。(2)G-Rh2处理Hep-2后,Bax表达上调,Bcl-2在G-Rh2处理前后无明显变化。结论:G-Rh2对体外培养的Hep-2细胞具有诱导凋亡的作用,其机制可能与上调Bax的表达及细胞周期阻滞有关。     

5-氟脲嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的研究

探讨５－氟脲嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌化疗中的意义。方法：应用细胞形态观察,琼脂糖凝胶电脉,流式细胞仪检测和观察５－ＦＵ对胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１增殖周期的影响以及杀伤细胞的方式,并检测了ＳＧＣ－７９０１细胞表面ｂｃｌ－２、ｂａｘ蛋白的表达情况。     

Effects of apigenin on cell proliferation of human pancreatic carcinoma cell line BxPC-3 in vitro

Objective： To observe the effects of apigenin on cell proliferation of human pancreatic carcinoma cell line BxPC-3 in vitro. Methods：The inhibitive effects of apigenin at different concentrations （0 μmol/L, 100 μmol/L, 200 μmoL/L, and 400 μmol/L） on human pancreatic carcinoma cell line BxPC-3 were detected by MTT assays, transmission electron microscope, agarose gel electrophoresis and flow cytometry. The immunohistochemistry was used to detect the expression of Bcl-2 and Bax gene. Results： Apigenin at different concentrations could inhibit the proliferation of human pancreatic carcinoma cell lines BxPC-3, and the inhibitive effect was dose-dependent. The cell cycle of pancreatic carcinoma cells was arrested at G2/M phase. The results of immunohistochemistry showed that the density of apigenin increased, and the expression of Bcl-2 gene was reduced gradually, At the same time the expression of Bax gene was enhanced. Conclusion ：Apigenin could inhibit the proliferation of human pancreatic carcinoma cell lines BxPC-3 in vitro. The effect of apoptosis was accompanied with the expression of Bcl-2 decrease and Bax increase.     

消炎痛抗肿瘤作用及体外增敏作用的研究

采用ＭＴＴ法,ＤＮＡ凝胶电泳,流式细胞仪分析技术,原位ＤＮＡ末端脱氧核苷酸转移酶法（ＴｄＴ）观察消炎痛对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响,结果：消炎痛可显著抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,呈剂量一时间依赖性效应,并可协同５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）的抗肿瘤细胞增殖作用,提示消炎痛通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用。