Wistar雄性大鼠DNA基因组的多态性分析

使用一种随机引物“Ｐ２（ＣＧＧＣＣＧＧＴＡ）对正常Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠ＤＮＡ基因组进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ分析，扩增产物呈现出多态性ＤＮＡ图谱，其中ＤＮＡ片段分子大小依次为：１４３９、１３３４、１１２２、７０８、５７５、５３７、４７９、３１６ｂｐ。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术简便、快速。     

随机扩增多态性DNA技术对淋球菌耐药相关性分析

目的：用随机扩增多态性ＤＮＡ技术分析淋球菌ＤＮＡ，评价不同菌株间的克隆相关性及耐药性传播。方法：对３０株临床分离淋球菌进行了β－内酰胺酶检测，用Ｋ－Ｂ法进行了１２种抗纱药敏以随机引物ＯＰＡ－０３对３０株菌ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析。结果：经ＯＰＡ－０３扩增淋球菌ＤＮＡ，琼脂糖凝胶电泳ＥＢ染色，最多可获得８个不同大小的ＤＮＡ片段（２００－２０００ｂｐ）不同菌株扩增出１￣８个月片段，３０株淋球菌可获得５种     

非小细胞肺癌的随机扩增多态DNA分析

目的：用ＲＡＰＤ技术检测非小细胞肺癌组织的遗传改变。方法：选用４０条含１０个碱基的随机引物对１６例非小细胞肺癌进行ＲＡＰＤ扩增,扩增产物在含溴化乙锭的１．５％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透视仪上观察照相。结果：４０条引物都能扩增出清晰的条带,其中２２条引物产生的条带在肿瘤与其相应正常组织间无差异,表现为单态性;１８条引物扩增出的ＤＮＡ序列在肿瘤与其相应正常组间存在差异,表现为带的缺失、增加、移动和带强弱     

斯氏肺吸虫和华支睾吸虫基因组态DNA的初步分析

目的 比较分析斯氏肺吸虫和华支睾吸虫基因组多态ＤＮＡ的多态性和探讨两吸虫间的相似基因。方法 应用随机扩增多态性（Ｒａｎｄｏｍ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ，ＲＡＰＤ）技术对斯氏肺吸虫和华支睾吸虫的基因组多态ＤＮＡ进行扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后分析结果。结果 引物Ｐ１和Ｐ２扩增产生斯氏肺吸虫和华支睾吸虫的成虫ＤＮＡ图谱，而Ｐ３引物未扩增出产物。斯氏肺吸虫和华支睾吸虫的Ｐ１     

应用40条引物进行不同品系小鼠RAPD遗传检测的初步研究

目的：探讨运用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ对小鼠进行遗传检测的可能性,筛选在各品系小鼠间具有多态性的引物。方法：运用４０条引物对ＴＡ１、ＢＡＬＢ／ｃ、ＮＩＨ、ＳＣＩＤ、Ｔ７３９、ＤＢＡ／２、６１５、ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ等９个品系小鼠的ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,以琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果：４０条引物中只筛选出２条多态性引物,其它３８条引物扩增结果无品系间多态性。结论：ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法可以区分９     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＥＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射生标记制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶ ＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｍｇ ＨＣＭＶ ＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射性标记系统制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｎｇＨＣＭＶＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。表明ＲＡＰＤ－ΡＣＲ技术可用于少量ＤＮＡ模板制备大量ＤＮＡ探针，适用于原位杂交等需高浓度探针的核酸杂交及临床大量标本的测试，是一种经济方便的探针制备技术     

小鼠RAPD—PCR反应体系及扩增程序的筛选

筛选优化小鼠ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应体系及扩增程序。;方法以４０条引物对９个品系的小鼠基因组ＤＮＡ在各种不同条件下进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ,分析比较扩增结果。结论以上述反应体系及扩增程序进行小鼠ＲＡＰＤ－ＰＣＲ,扩增结果稳定。     

中华按蚊不同地理株基因组DNA的多态性

目的：研究中华按蚊不同地理株基因组ＤＮＡ的多态性。方法：应用ＲＡＰＤ技术，用２０个随机引物（ＯＰＥ０１￣ＯＰＥ２０）对江苏，福建，海南，贵州，陕西５个省区中华按蚊的基因组ＤＮＡ进行了ＰＣＲ扩增。     

用RAPD-PCR鉴定抗溴氰菊酯淡色库蚊

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ法对淡色库蚊抗溴氰菊酯品系和敏感品系的基因组ＤＮＡ进行了分析鉴别。结果表明：不同引物扩增出的产物数量不等,明显可分辨的带一般在４～１３条之间,带的大小在０．５～５．１ｋｂ之间;２２个引物在两品系中各扩增出１７０条可分辨带,绝大部分条...     

粘质沙雷氏菌和红曲霉跨界原生质体融合子的分子鉴定

目的 应用分子生物学方法鉴定粘质沙雷氏菌和红曲霉原生质体跨界融合子.方法 采用随机扩增多态性分析和功能基因PCR扩增的方法对9个融合子进行分子鉴定.结果 筛选出的6条随机引物对2个亲本和9个融合子的DNA均能扩增出清晰的条带,除第5号融合子和粘质沙雷氏菌的相似指数略低,其余8个融合子和2个亲本的相似指数均大于2个亲本之...     

红曲菌株的RAPD多态性分析

[目的]研究红曲分离株的遗传多样性和亲缘关系,为种质鉴定、保护和利用提供参考。[方法]用随机引物对10个红曲菌株进行RAPD分析,从中筛选出63特征性好,多态性高的RAPD图谱,用NTSYS-PC-2.1软件进行同一性和差异性分析并根据遗传距离构建系统进化树。[结果]红曲分离株间的同一性平均73.32%,表明它们的遗传背景具有很大的相似性;RAPD聚类结果与菌株的形态差异相关,表明RAPD分子标记进行菌株鉴别与传统形态分类鉴别结果基本一致,鉴别能力较强。[结论]基于RAPD多态性的遗传分析能从分子水平上揭示红曲菌的遗传背景差异,为分类鉴定、种质起源和系统进化提供辅助手段和技术依据。     

云南铁线莲属12种药用植物的RAPD分析

目的:通过对12种铁线莲属药用植物进行遗传多样性和亲缘关系分析,为生药鉴定提供依据.方法:随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析遗传多样性,UPGMA类平均法进行聚类分析.结果:利用筛选出的10个随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到89条带,其中多态性带有89条,多态性百分率为100%.采用UPGM聚类法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,得出反映各种间亲缘关系的树状图.对多数种而言,种间差异明显,同种不同分布点也存在差异,但同一分布点的不同个体差异较小.结论:该标记技术对铁线莲属植物的生药鉴定是可行的,在系统学方面的应用有待进一步研究.     

BALB/c突变无毛小鼠特异性免疫功能的研究

选用9条随机引物，对Wistar,WKY,F344三个品系的近交系大鼠进行了随机扩增多态性DNA（RAPD）分析。结果显示同一品系大鼠不同个体之间的RAPD图谱都相同，表明所测的三个品系大鼠内部遗传背景均一，在不同品系大鼠之间的RAPD结果有差异。Wistar与WKY之间，Wistar与F344之间，WKY与F344之间的共享度分别为87.9%,98.5%和89.2%。RAPD方法可以作为一种检测近交系大鼠种群内的遗传变异及区分不同品系近交系鼠的遗传检测方法。     

疏肝、健脾、补肾复方对慢性束缚应激大鼠行为学和免疫功能的影响

目的　研究慢性束缚应激时大鼠行为学和免疫功能的变化以及疏肝、健脾、补肾三种中药复方对其影响。方法　用特制束缚架连续束缚 2 1d(或 7d) ,每天 3h的方法制作大鼠束缚应激模型 ,观察大鼠行为学和免疫功能的变化。结果　慢性束缚应激后 ,大鼠的行为学发生了明显的变化 ,血清IL - 1β 上升 ,IL - 2和IL - 6下降 ,并且随着束缚时间的延长变化越明显。结论　逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸能改善大鼠行为学的变化 ,明显增强慢性束缚应激大鼠的免疫功能。     

红鲫C1HD近交系RAPD标记的建立

目的建立红鲫C1HD近交系的RAPD标记。方法从80条随机引物中筛选出20条扩增效果和多态性较好的引物,对8尾红鲫C1HD近交系和8尾普通红鲫基因组DNA进行RAPD扩增。结果S333引物扩增出一条特异性条带,大小约为2.1 kb。结论S333引物扩增出的特异性条带可以作为区分普通红鲫与红鲫C1HD近交系的分子遗传标记。     

慢性胃炎、消化性溃疡患者携带株幽门螺杆菌基因分型

目的:探讨慢性胃炎、消化性溃疡患者携带株幽门螺杆菌(Hp)的基因分型方法.方法:对Hp标准株和慢性胃炎、消化性溃疡、非胃炎非溃疡患者携带株基因组DNA进行随机扩增多态性分析(RAPD),PCR扩增空泡毒素基因(vacA)和致病岛基因(cag-PAI)的cagA、cagE、cagT片段,并测定全部菌株的VacA活性.采用聚类分析进行基因分型.结果:单纯RAPD分型结果显示不同基因型别Hp与不同疾病结局无关(P=0.068 5).依据vacA cag-PAI分型结果显示不同基因型别Hp与不同疾病结局无关(P=0.268 5).将RAPD分析结果与vacA cagPAI检测结果进行综合聚类,全部菌株可分为3个型别,慢性胃炎、消化性溃疡和非胃炎非溃疡分别有自己的优势基因型,且各型间的总体分布差异有统计学意义(P=0.006 7).VacA的活性表达情况在各基因型之间的分布差异无统计学意义(P=0.265 5).结论:Hp基因型与疾病类型有关,空泡毒素基因和致病岛基因可作为Hp基因分型的靶基因,RAPD是有效的基因分型手段.     

红景天属4种植物RAPD分析与分类鉴定

目的 用RAPD技术对红景天属(Rhodiola L．)的大花红景天R．crenulata、长鞭红景天R．fastigiata、狭叶红景天R．kirilowii和高山红景天R．sachalinensis 4种药用植物进行分子水平鉴定。方法 CATB法提取红景天属原植物总DNA，以200条随机引物进行随机扩增。结果 用OPA4(AATCGGGCTG)、OPB7(GGTGACGCAG)、OPB18(CCACAGCAGT)、OPX14(ACAGGTGCTG)和OPZ13(GACTAAGCCC)作随机扩增引物进行随机扩增时，可得到识别这些物种基因组DNA的多态片段。结论 RAPD法能有效地鉴别红景天类药材，把大花红景天、长鞭红景天、狭叶红景天和高山红景天区分开。     

应用RAPD标记技术对树鼩遗传多样性的分析

目的建立树鼩RAPD(random amplified polymorphic DNA)遗传标记分析方法,了解中缅树鼩种群的遗传多样性。方法采用PCR技术对40条随机引物进行优化,筛选出能有效用于树鼩群体遗传分析的RAPD位点,对48只树鼩个体的基因组DNA进行PCR扩增,并应用Popgene 1.32与RAPDistance Package Version 1.04等软件进行数据处理,分析树鼩的群体遗传特性。结果20个RAPD引物共检测到113个位点,平均每个引物可扩增出5.65个位点,其中多态位点数为69个(占61.1%)。个体间的遗传相似系数平均为0.8307,个体间遗传距离在0.09~0.27之间,平均遗传距离为0.1693。雄性群体的遗传多态度(H0)(0.1864)略高于雌性群体(0.1470),平均遗传多态度(Hpop)为0.1667;树鼩遗传多态度所占的比例在群体内为48.29%,而雌、雄群体间为51.71%。NJ法进行聚类分析得出T15、T33和T47号树鼩个体聚类成一大类,其余45只树鼩个体聚成另一大类,雌、雄个体呈相互交叉现象。结论实验所筛选的随机引物可有效用于中缅树鼩种群的遗传结构分析。本树鼩群体具有较好的遗传多样性。     

三个鼠源性肿瘤细胞系的RAPD分析

目的：探讨鼠源性肿瘤细胞系基因组不稳定程度或基因组损伤与肿瘤发生的关系。方法：用145条RAPD引物对鼠源性Lewis肺癌、SCC891乳腺癌及B16黑色素瘤及其相应正常组织基因组DNA进行RAPD扩增，扩增产物在含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶中电泳，紫外透射仪上观察照相。结果：145条引物绝大多数能扩增出清晰、明显的条带。多数引物扩增出的条带呈单态性，在肿瘤及其相应正常组织之间无差异。部分引物扩增出的DNA序列在肿瘤组织与其相应正常组织间存在差异，表现为多态性，即肿瘤组织与其相应正常组织的DNA片段相比，出现带的缺失、增加、移动和强度变化。扩增Lewis肺癌的105条引物中有25条表现多态性；扩增B16黑色素瘤的105条引物中有24条表现出多态性；扩增SCC891乳腺癌的120条引物中有18条表现出多态性。结论：RAPD扩增结果表明三个恶性度较高的瘤株，其基因组损伤程度亦较高，表现为基因拷贝数的增加或等位基因的丢失，进步证实了细胞的癌变与基因组某些改变密切相关。