FGF对关节软骨细胞基质及其TGFβ1表达的作用

目的:观察成纤维细胞生长因子(FGF)对培养兔关节软骨细胞基质及转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响.方法:培养1月龄新西兰兔关节软骨细胞,在每次换液时加入FGF 100 ng/ml,铺满后收集细胞,作关节软骨细胞TGFβ1检测及电镜免疫组织化学观察.采用氯胺T法和Antonopoulos法,作细胞基质的胶原和蛋白多糖含量测定.结果:FGF能明显促进胶原和蛋白多糖的合成,并且与剂量、时间呈正相关(P＜0.01).光镜下实验组细胞明显呈棕色,电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒粘附.结论:FGF能促进关节软骨细胞TGFβ1的表达及基质合成,推迟了关节软骨细胞的成熟,维持细胞的软骨表现型,这些作用有利于关节软骨损伤后的修复,可能具有一定的临床意义.     

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞iNOS表达和NO合成的影响

目的观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对IL-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔原代软骨细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响。方法体外培养兔软骨细胞,用甲苯胺蓝染色检测蛋白多糖,免疫荧光检测兔原代软骨细胞Ⅱ型胶原;用IL-1β10 ng/ml和(或)不同浓度(5、10、15、20μg/ml)川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48 h后,RT-PCR和免疫组化检测iNOS基因及蛋白表达;用硝酸还原法检测细胞培养上清液NO的表达。结果软骨细胞呈三角形或多角形,蛋白多糖表达于细胞质中,Ⅱ型胶原主要表达于细胞质,少见于细胞核。与对照组比较,IL-1β单独作用软骨细胞iNOS和NO的表达显著增加(P<0.01);IL-1β和川芎嗪联合作用后,软骨细胞iNOS和NO的表达较IL-1β单独作用显著降低(P<0.05,P<0.01),但仍显著高于对照组(P<0.01)。结论川芎嗪能有效抑制IL-1β诱导兔软骨细胞iNOS的表达和NO的合成。     

FGF对关节软骨细胞基质及其TGFβ1表达的作用

目的：观察成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）对培养兔关节软骨细胞基质及转化生长因子β１（ＴＧＦβ１ ）表达的影响。方法：培养１月龄新西兰兔关节软骨细胞,在每次换液时加入ＦＧＦ１００ ｎｇ／ｍ ｌ,铺满后收集细胞,作关节软骨细胞ＴＧＦβ１检测及电镜免疫组织化学观察。采用氯胺Ｔ法和Ａｎｔｏｎｏｐｏｕｌｏｓ法,作细胞基质的胶原和蛋白多糖含量测定。结果：ＦＧＦ能明显促进胶原和蛋白多糖的合成,并且与剂量、时间呈正相关（Ｐ＜ ０．０１）。光镜下实验组细胞明显呈棕色,电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒粘附。结论：ＦＧＦ能促进关节软骨细胞ＴＧＦβ１ 的表达及基质合成,推迟了关节软骨细胞的成熟,维持细胞的软骨表现型,这些作用有利于关节软骨损伤后的修复,可能具有一定的临床意义。     

兔实验性骨关节病髁突软骨细胞表达软骨基质分子的变化及白细胞介素1β的影响

目的 :研究外源性炎症因子白细胞介素 1β(interleukin 1β,IL 1β)对颞下颌关节骨关节病与正常髁突软骨细胞代谢活动的影响 ,探讨其在颞下颌关节骨关节病进展过程中所发挥的作用。方法 :采用 2 0 μg·L-1重组白介素1β(recombinedhumaninterleukin 1β ,rhIL 1β)刺激体外贴壁培养条件下的成兔正常成熟髁突软骨细胞与兔实验性颞下颌关节骨关节病模型髁突软骨细胞 ,RT PCR方法检测、比较细胞对软骨基质成分Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚糖体、胶原酶以及内源性生长因子胰岛素样生长因子 1(insulin likegrowthfactor 1,IGF 1)和转移生长因子 β1(trans forminggrowthfactor β1,TGF β1)的mRNA表达变化。结果 :在 2 0 μg·L-1rhIL 1β的刺激下 ,(1)正常成熟髁突软骨细胞Ⅱ型胶原和软骨蛋白多糖聚糖体的表达均明显降低 ,胶原酶表达水平变化不明显 ;(2 )在IL 1β的作用下 ,骨关节病软骨细胞对Ⅱ型胶原和胶原酶的表达水平降低 ,对软骨蛋白多糖聚糖体的表达水平无明显影响 ;(3)IL 1β对正常和骨关节病髁突软骨细胞内源性生长因子IGF 1和TGF β1的表达均无明显影响。 结论 :蛋白多糖聚糖体的合成 ,导致髁突软骨病变发生 ,而且能不断干扰骨关节病髁突软骨细胞代谢 ,导致关节软骨基质环境进一步恶化。     

重组人转化生长因子-β1荧光质粒的构建及转染软骨细胞的基因表达

目的：探讨重组人转化生长因子（TGF）-β1荧光质粒的构建及经脂质体转染软骨细胞的表达情况.方法：体外酶消化分离法培养兔关节软骨细胞并采用特异性细胞外基质Ⅱ型胶原免疫细胞染色进行鉴定.双酶切法切取TGF-β1的cDNA片段,通过T4 DNA连接酶连接到pEGFP-C1载体上构建pEGFP-C1-TGF-β1表达质粒.用构建的pEGFP-C1-TGF-β1表达质粒经脂质体转染软骨细胞,在12、24 h、2、4、6 d通过荧光显微镜观察细胞内TGF-β1基因的表达,应用荧光定量PCR检测表达水平.结果：成功分离培养软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞染色显示细胞胞质染成棕黄色,胞核基本不着色.pEGFP-C1-TGF-β1真核表达载体质粒成功构建,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确.荧光显微镜观察转染后的软骨细胞有绿色荧光蛋白表达,软骨细胞的转染率分别为12 h：（8.22±2.02）%,24 h：（16.54 4±2.91）%,2 d：（14.06±3.67）%,4 d：（14.24±2.62）%,6 d：（12.36±2.28）%.荧光定量PCR检测转染软骨细胞TGF-β1基因拷贝数为16 277±1779,高于未转染软骨细胞的3095±205（P〈0.05）.结论：构建的TGF-β1荧光质粒可以转染软骨细胞并获得表达,为基因治疗骨性关节炎的研究提供基础.     

CTGF和TIMP1双基因体外联合转染恒河猴腰椎间盘细胞对II型胶原和蛋白多糖的影响

目的 建立恒河猴腰椎间盘细胞体外培养模型,研究腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）介导的结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP1) 双基因体外联合转染恒河猴椎间盘细胞较单基因对II型胶原和蛋白多糖合成的影响的变化,以探讨体外延缓椎间盘细胞退变的方法。方法 应用酶消化法培养恒河猴腰椎间盘髓核细胞,以感染复数（MOI） 为106的rAAV2-CTGF-IRES-TIMP1及rAAV2-CTGF、rAAV2-TIMP1分别感染髓核细胞,应用Western blot鉴定和RT-PCR检测II型胶原及蛋白多糖mRNA的表达,35S整合法性行蛋白多糖合成率的测定,SP-ABC免疫组化法检测Ⅱ型胶原含量。结果 rAAV2-CTGF-IRES-TIMP1双基因及rAAV-CTGF、rAAV-TIMP1单基因能够转染恒河猴椎间盘髓核细胞并在其内表达细胞因子。与对照组相比,CTGF可以促进II型胶原及蛋白多糖的合成,TIMP1可以促进蛋白多糖的合成,对II型胶原的合成未见到明显作用;双基因联合感染可以显著促进髓核细胞蛋白多糖和II型胶原的合成。结论 CTGF和TIMP1 单基因转染均可以促进蛋白多糖的合成,CTGF 对 II型胶原的合成亦有促进作用;双基因联合感染可以明显促进蛋白多糖和II型胶原的合成,其效果优于单基因,为多基因治疗椎间盘退变奠定了良好的基础。     

中药调节兔膝骨关节软骨代谢作用的研究

目的研究中药对软骨细胞活性及代谢反应的调节规律,探讨中药治疗骨关节炎的作用机理。方法从细胞增殖(MTT法)、细胞DNA合成(3H-TdR掺入率)、蛋白多糖的形成(甲苯胺蓝染色)和Ⅱ型胶原的合成(3H-脯氨酸掺入)观察兔膝骨关节软骨细胞代谢变化。结果鹿茸多肽及维骨力对细胞增殖及蛋白多糖合成有促进作用,益气通络方对细胞增殖及蛋白多糖合成起抑制作用。益气通络组、鹿茸多肽组及维骨力组对软骨细胞的增殖有促进作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);鹿茸多肽组及维骨力组对软骨细胞DNA及Ⅱ型胶原的合成有促进作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);益气通络组对软骨细胞代谢起抑制作用(P<0.05)。结论益气通络方阻断分解代谢细胞因子,防止胶原纤维转型而促进细胞增殖;鹿茸多肽促进软骨细胞合成代谢而促进软骨细胞增殖,维骨力保护软骨细胞而促进软骨细胞增殖。     

含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测

目的：构建含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法：使用HindⅢ将HIV-1 Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出，插入到表达质粒LZRSpBMN—Z中，构建成重组反转录病毒表达质粒IZRS-Tratl01。采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS-Tat101转染进含反转录病毒erw、gal和pol编码基因的包装细胞phoenix(φNX)中，嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。免疫组化(IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染删x细胞中的表达水平。收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清，并分别感染293细胞，Western blot检测Tat在293中表达。与此同时，收集感染293细胞培养上清，加入到HL3T1细胞(HELa—HIV-1-LTR／CAT报告基因)中，共培养72h后收集细胞，提取蛋白作CAT活性检测。结果：①含Tat101基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后，Tat在临时转染φNX中表达水平显高于在稳定转染中的水平；②临时转染病感染293细胞，Tat在感染细胞中得到了表达，且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV-1的LTR启动子，使得其下游的CAT基因得到表达。结论：重组IZRS-Tat101反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白，且表达蛋白具有转录激活功能。     

羧甲基壳聚糖抑制白细胞介素-1β诱导软骨细胞基质金属蛋白酶-1,3的表达

目的:探讨羧甲基壳聚糖抑制重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)刺激下的兔软骨细胞合成基质金属蛋白酶-1,3(MMP-1,3)的作用机制。方法:分离、培养兔软骨细胞,用rhIL-1β刺激,同时加入不同浓度的羧甲基壳聚糖(CM-chitosan)或L-精氨酸甲酯(L-NAME),培养24h后,检测上清液中的一氧化氮含量和软骨细胞内的诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活力。提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链方法(RT-PCR)检测iNOS,MMP-1,MMP-3的mRNA表达。通过ELISA方法检测上清液中MMP-1,MMP-3的含量。结果:IL-1β能够增加软骨细胞一氧化氮的释放及iNOS的酶活性,诱导细胞iNOS,MMP-1,3的mRNA表达,增加MMP-1,3的分泌。羧甲基壳聚糖对软骨细胞一氧化氮的释放,iNOS酶活力及iNOSmRNA表达均有抑制作用,不同浓度的抑制效果相近;它对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及MMP-1,3的分泌也有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。L-NAME对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及分泌也有抑制作用,但L-NAME与羧甲基壳聚糖对一氧化氮的影响相似时,羧甲基壳聚糖对MMP-1,3mRNA表达和分泌的抑制作用强于L-NAME。结论:羧甲基壳聚糖抑制软骨细胞合成MMP-1,MMP-3是部分通过降低iNOS表达,减少一氧化氮合成来实现的。     

白藜芦醇对白细胞介素-1β诱导软骨细胞iNOs表达的影响

目的:探讨白藜芦醇对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导下大鼠软骨细胞细胞一氧化氮合酶(i NOs)表达的影响。方法:体外培养大鼠膝关节软骨细胞,用IL-1β(10μg/L)刺激,并不加或加入不同浓度的白藜芦醇处理,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测i NOs基因及相关蛋白表达。结果:IL-1β诱导下软骨细胞i NOs的表达显著增加(和对照组比较,P<0.05),而加入不同浓度白藜芦醇能明显抑制IL-1β诱导软骨细胞i NOs的表达。结论:白藜芦醇抑制IL-1β诱导软骨细胞i NOs的表达是其保护骨关节炎软骨细胞的机制之一。     

抗人趋化素样因子1羧基端多肽抗体的制备、鉴定及组织芯片分析

目的制备及鉴定抗人趋化素样因子1(CKLF1)多克隆抗体,为CKLF1表达和功能研究提供基础.方法利用生物信息学方法分析CKLF1蛋白序列,设计、合成CKLF1羧基端多肽,与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,免疫新西兰白兔获得多克隆抗体.经ELISA法测定抗体效价,Western-blot鉴定抗体与原核细胞体外翻译和果蝇S2细胞稳定转染表达的CKLF1反应,组织芯片检测该抗体与内源性表达的CKLFs结合.结果抗CKLF1 C端多肽抗体的效价为10-4,能识别在原核细胞体外翻译系统和真核细胞中表达的CKLF1蛋白,也可与多种组织中天然表达的CKLFs发生特异性反应,在正常支气管软骨、胃粘膜和平滑肌中呈阳性表达,在正常直肠和高分化直肠癌的腺上皮中呈强阳性表达,而在低分化的直肠癌中为阴性.结论抗CKLF1多克隆抗体效价高,亲和力强,可用于CKLF1的检测和研究.     

脱氢表雄酮对白细胞介素-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响

目的:研究脱氢表雄酮(DHEA)对白细胞介素(IL-1β)诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响。方法:分离人骨关节炎软骨细胞传代培养并加入IL-1β,分别将50,25和12.5μmol/L的DHEA作用于该软骨细胞。其后检测细胞增殖、上清液糖胺聚糖(GAG)和NO含量、细胞凋亡以及质金属蛋白酶-1及其组织抑制剂-1(MMP-1和TIMP-1)含量。结果:50,25和12.5μmol/L的DHEA均能促进软骨细胞增殖和GAG合成(均P<0.01),抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡(均P<0.01)以及MMP-1合成(均P<0.01);50和25μmol/L的DHEA可抑制IL-1β诱导的软骨细胞NO形成(均P<0.01),还可抑制软骨细胞自身的凋亡(均P<0.01)和MMP-1合成(均P<0.05),其效应呈浓度依赖性;50μmol/L的DHEA还可改善IL-1β对骨关节炎软骨细胞TIMP-1合成的抑制作用(P<0.05)。结论:脱氢表雄酮能在一定程度上对抗IL-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变。     

趋化素样因子研究进展

最近,我国学者应用抑制性减数杂交技术(SSH,Suppressive subtraction hybrization)首次成功的克隆到一个新的细胞因子,因其含有趋化因子的基本结构特征和趋化功能,同时又具有趋化因子没有的功能,被命名为趋化素样因子1(CKLFl),并发现其至少存在3种异构体。分别命名为CKLF2、3、4。CKLF基因为于16号染色体q22上,有4个外显子和3个内含子组成。CKLF1、3为分泌性蛋白,而CKLF2、4主要以膜结合形式存在。研究表明,CKLFl具有广谱的趋化活性、骨髓细胞增殖刺激活性和抑制软骨细胞增殖作用。CKLF2能促进细胞增殖和分化,并有抑制细胞凋亡作用。提示CKLF在机体的生理和病理作用中有重要意义,CKLFs的成功克隆表明CKLFs可能代表一个新的基因超家族,对这个超家族的深入研究将具有重要的理论意义和潜在的应用价值。     

Biodegradable chitosan scaffolds containing microspheres as carriers for controlled transforming growth factor-β1 delivery for cartilage tissue engineering

Background Natural articular cartilage has a limited capacity for spontaneous regeneration. Controlled release of transforming growth factor-β(1) (TGF-β(1)) to cartilage defects can enhance chondrogenesis. In this study, we assessed the feasibility of using biodegradable chitosan microspheres as carriers for controlled TGF-β(1) delivery and the effect of released TGF-β(1) on the chondrogenic potential of chondrocytes.Methods Chitosan scaffolds and chitosan microspheres loaded with TGF-β(1) were prepared by the freeze-drying and the emulsion-crosslinking method respectively. In vitro drug release kinetics, as measured by enzyme-linked immunosorbent assay, was monitored for 7 days. Lysozyme degradation was performed for 4 weeks to detect in vitro degradability of the scaffolds and the microspheres. Rabbit chondrocytes were seeded on the scaffolds containing TGF-β(1) microspheres and incubated in vitro for 3 weeks. Histological examination and type II collagen immunohistochemical staining was performed to evaluate the effects of released TGF-β(1) on cell adhesivity, proliferation and synthesis of the extracellular matrix.Results TGF-β(1) was encapsulated into chitosan microspheres and the encapsulation efficiency of TGF-β(1) was high (90.1%). During 4 weeks of incubation in lysozyme solution for in vitro degradation, the mass of both the scaffolds and the microspheres decreased continuously and significant morphological changes was noticed. From the release experiments, it was found that TGF-β(1) could be released from the microspheres in a multiphasic fashion including an initial burst phase, a slow linear release phase and a plateau phase. The release amount of TGF-β(1) was 37.4%, 50.7%, 61.3%, and 63.5% for 1, 3, 5, and 7 days respectively. At 21 days after cultivation, type II collagen immunohistochemical staining was performed. The mean percentage of positive cells for collagen type II in control group (32.7%±10.4%) was significantly lower than that in the controlled TGF-β(1) release group (92.4%±4.8%, P&lt;0.05). Both the proliferation rate and production of collagen type II in the transforming growth factor-β(1) microsphere incorporated scaffolds were significantly higher than those in the scaffolds without microspheres, indicating that the activity of TGF-β(1) was retained during microsphere fabrication and after growth factor release.Conclusion Chitosan microspheres can serve as delivery vehicles for controlled release of TGF-β(1), and the released growth factor can augment chondrocytes proliferation and synthesis of extracellular matrix. Chitosan scaffolds incorporated with chitosan microspheres loaded with TGF-β(1) possess a promising potential to be applied for controlled cytokine delivery and cartilage tissue engineering.     

Effects of estradiol on proliferation and metabolism of rabbit mandibular condylar cartilage cells in vitro

Objective To investigate the effects in vitro of 17β-estradiol ( E2 ) on the proliferation and metabolism of rabbit mandibular condylar cartilage cells.Methods Chondrocytes were derived from neonatal rabbit mandibular condylar cartilage using a modified enzyme method. 17β-estradiol was added to the culture medium in a variety of concentrations. Cell growth and DNA, collagen, and proteoglycan synthesis were used as indicators of proliferation and differentiation of condylar chondrocytes. These were measured by cell number, ^3 H-proline and ^35S-incorporation, respectively.Results E2 increased cell number and ^3H-thymidine incorporation at 10^-8 to 10^-10mol/L, and 10^-8 to 10^-11 mol/L in a dose-dependent manner, peaking at 10^-8 mol/L and 10^-9mol/L, respectively.However, further increase in the concentration of estradiol caused inhibition of both cell number and ^3H-thymidine incorporation, and this was significant at 10^-6mol/L. The effect of E2 on proteglycan synthesis was similar; the maximum stimulating effect was at 10^-8mol/L, and inhibition was significant at 10^-6mol/L. There was no obvious stimulatory effect of E2 on ^3H-thymidine incorporation observed.Conclusions Estradiol affects condylar chondrocyte cell growth, DNA, and proteoglycan synthesis in a biphasic manner depending on its concentration. This indicates that estrogen may be important in the proliferation and differentiation of mandibular condylar chondrocytes, and could be relevant to some aspects of certain tempormandibular joint diseases by modulating the function of the chondrocytes.     

趋化素样因子（CKLF1）对骨髓细胞增殖活性的研究

目的 研究趋化素样因子1（CKLF1）对造血功能的调节作用。方法 利用MTT法,检测CKLF1真核细胞表达载体转染上清在液体培养基中,对人低密度骨髓细胞和小鼠骨髓细胞的增殖调控作用;并在兰固体培养基中,观察其对人低密度骨髓细胞集落形成的刺激作用。结果 COS－7细胞表达的CKLF1能明显促进人和小鼠骨髓细胞的增殖,并能促进人骨髓细胞的集落形成,与GM－CSF有协同刺激作用。结论 CKLF1能促进人和小鼠骨髓造血干／祖细胞的增殖和分化。     

血管内皮生长因子在新生鼠胫骨生长板软骨细胞中的表达

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在鼠生长板软骨细胞增殖、分化和矿化过程中的自分泌作用。方法：新生鼠（1～2d）10只．切取干骺部软骨组织，采用免疫组织化学方法（5只）和RT—PCR方法（5只），检测VEGF及其受体Flt-1和KDR/Flk-1在胫骨生长板中的表达。结果：免疫组织化学染色VEGF、Fit-1和KDR／Flk-1在生长板的上肥大区、下肥大区和矿化区中的软骨细胞表达强阳性，在增殖区少数软骨细胞中呈阳性表达，在静止区软骨细胞中表达阴性。RT—PCR检测的5只鼠中除1只不表达Flt-1外，VEGF（251bp）、Flt-1（272bp）和KDR/Flk-1（252bp）在软骨组织中均清晰表达。结论：VEGF及受体Flt-1和KDR／Flk-1在生长板软骨中的表达具有高度一致性，并且随着软骨细胞的分化成熟表达逐渐增强。提示VEGF在生长板软骨细胞的增殖、分化和矿化过程中，可以自分泌作用方式起重要调节作用。     

骨关节病与大骨节病关节软骨细胞凋亡的比较

目的比较成年人大骨节病与骨关节病关节软骨细胞凋亡及凋亡相关调控因子Fas和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达分布特点,探讨两种疾病发病机制的异同。方法收集15例大骨节病、15例正常对照以及15例骨关节病的关节软骨,分别采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和免疫组化法,观察大骨节病、骨关节病和正常对照关节软骨的细胞凋亡率、Fas及iNOS蛋白表达及其分布特点。结果大骨节病及骨关节病关节软骨细胞凋亡率较正常对照高(P<0·01),且关节软骨剥蚀区的细胞凋亡率较未剥蚀区高(P<0·05),但大骨节病与骨关节病之间软骨细胞凋亡率差异无显著性。大骨节病与骨关节病关节软骨Fas及iNOS表达阳性细胞数较正常关节软骨增多(P<0·01),且关节软骨剥蚀区Fas及iNOS表达阳性细胞数较未剥蚀区增多(P<0·05),但大骨节病与骨关节病之间Fas及iNOS表达阳性细胞数差异无显著性。结论骨关节病和大骨节病均存在软骨细胞异常凋亡,Fas和iNOS可能参与了细胞凋亡过程。