组织培养下胎儿卵巢卵泡的发育

目的 :观察组织培养条件下胎儿卵巢能否发育以及胎儿胰腺条件培养液对其发育的影响。方法 :取 16例 2 0～ 2 8周和 11例 >2 8周中期妊娠水囊引产的胎儿卵巢 ,经直接培养及加胎儿胰腺条件培养液组织培养后 ,观察培养前后的组织学变化。结果 :胎儿卵巢经组织培养后 ,较成熟卵泡比例增加 ,P <0 .0 0 5 ;加胎儿胰腺条件培养液组与未加胎儿胰腺条件培养液组相比 ,较成熟卵泡比例增加更为明显 (P <0 .0 0 5 )。结论 :胎儿卵巢在组织培养条件下能继续发育 ,胎儿胰腺条件培养液有促进卵泡发育的作用。     

胎儿卵巢冷冻保存及复苏

目的：探讨胎儿卵巢的体外保存方法。方法：１６例２０－１８周的胎儿卵巢置于含１．４１ｍｏｌ／Ｌ的二甲基亚砚（ＤＭＳＯ）培养液中，采用胡步降温法投入液氮保存，复苏时采用４０℃水浴快速复温和室温下慢复温，然后进行组织培养并观察卵泡和雌二醇（Ｅ２）分泌情况。结果：胎儿卵巢冻存后复苏培养，其卵铴仍能继续发育并产生Ｅ２；快速复温组卵泡组织形态良好，并能维持良好的内分泌功能；慢复温组卵巢上皮破裂，Ｅ２分泌量明显     

组织培养下胎儿卵巢雌二醇的分泌

目的 :观察组织培养条件下胎儿卵巢能否分泌雌二醇 (E2 )及胎儿胰腺条件培养液对E2 分泌的影响。方法 :取 16例中晚期妊娠水囊引产的胎儿卵巢 ,将其切成 1 2mm× 1 2mm× 1 2mm的碎块进行直接培养及加胎儿胰腺条件培养液组织培养。培养后测定培养液中E2 含量。结果 :胎儿卵巢在组织培养条件下能产生E2 ,随培养时间延长 ,E2 分泌量增加。加胎儿胰腺条件培养液组 ,E2 分泌量高于对照组 ,P <0 .0 5。结论 :胎儿卵巢在组织培养条件下能分泌E2 ,可作为卵巢移植的供体。     

人胎儿卵巢组织异种移植后卵母细胞的发育及成熟能力

目的探讨人胎儿卵巢组织冷冻复苏、体外培养和异种移植后卵母细胞的发育和成熟情况。方法取5例胎龄20周引产的胎儿卵巢,采用丙二醇慢速冷冻保存,复苏后在组织培养条件下进行体外培养,6d后移植到免疫缺陷小鼠的肾被膜下,应用卵泡刺激激素作用23周后取出卵巢组织,机械法取出窦卵泡内的卵母细胞,结合体外成熟培养,观察卵子成熟情况,并通过移植前后组织学和增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化观察卵泡发育情况。结果冷冻复苏组织和新鲜卵巢组织中各期卵泡的构成比之间差异无显著性(P>0.05);培养组织与新鲜组织和冻融组织相比,增殖期卵泡的比例显著增加(P<0.05);移植组织与新鲜组织、冻融组织和培养组织相比,增殖期卵泡比例亦显著增加(P<0.05)。各组织中原始卵泡均未见PCNA阳性表达,其表达最早出现于初级卵泡,新鲜组织和冻融组织中偶可见PCNA阳性表达,而培养组织和移植组织中可见明显的PCNA阳性表达。从移植卵巢的窦卵泡中获得未成熟卵子42个,经体外成熟培养有21.43%的卵子可发育到MII期。结论人胎儿卵巢组织能耐受冻融、组织培养和移植过程,其卵泡能够重新生长发育,恢复内分泌功能,且不影响卵母细胞的发育及成熟能力。     

胎儿卵巢冷冻保存及复苏

目的 :探讨胎儿卵巢的体外保存方法。方法 :将 16例 2 0～ 2 8周的胎儿卵巢置于含 1.41mol/L的二甲基亚砜 (DMSO)培养液中 ,采用三步降温法投入液氮保存 ,复苏时采用 40℃水浴快速复温和室温下慢复温 ,然后进行组织培养并观察卵泡发育和雌二醇 (E2 )分泌情况。结果 :胎儿卵巢冻存后复苏培养 ,其卵泡仍能继续发育并产生E2 ;快速复温组卵泡组织形态良好 ,并能维持良好的内分泌功能 ;慢复温组卵巢上皮破裂 ,E2 分泌量明显减少。结论 :“三步降温法”冻存胎儿卵巢效果好 ,快速复温能更好地维持卵泡形态发育和内分泌功能     

胎儿卵巢组织培养与冷冻保存

对人胎儿卵巢的组织培养、冷冻保存后再复苏培养,以观察胎儿卵巢培养前后的形态学变化、培养时雌激素产生的能力以及冷冻保存对胎儿卵巢形态发育及内分泌功能的影响。结果表明:在体外培养条件下,胎儿卵巢的卵泡不仅可以维持培养前的良好形态,而且能够进一步发育成熟;培养时具有雌二醇分泌能力。冷冻保存对胎儿卵巢的卵泡发育和雌二醇分泌功能没有明显影响。提示:将中期引产胎儿卵巢冻存起来,建立“胎儿卵巢库”,可解决临床卵巢移植的供需矛盾。     

人胎儿卵泡发育及培养时对促性腺激素反应的形态学研究

取人胎儿卵巢19例作体外培养,观察培养前后与加不同比例促性腺激素后的卵巢形态学变化。培养维持最长达6d。随妊娠进展,胎儿卵泡逐渐生长,自16周起胎儿卵巢在体外就有对促性腺激素起反应的潜力。24周以上的胎儿卵巢可见窦前期和窦期卵泡,伴有透明带基膜和泡膜细胞形成。给予适当剂量的促性腺激素(FSH、LH或hMG)体外培养,可维持培养前的良好状态,不加激素组则易见卵泡闭锁。本文19例胎儿卵巢加激素培养未见发育到较大的窦状卵泡。     

羊膜细胞培养液对胎儿卵巢组织雌二醇分泌的实验研究

目的观察胎儿卵巢在体外培养条件下及羊膜细胞培养液条件培养液对分泌雌二醇(E2)的影响,旨在为卵巢移植提供较好的供体培养方法。方法取20～28周妊娠水囊引产的胎儿卵巢,将其切成碎块进行一般培养液直接培养(A组)及加羊膜细胞培养液培养(B组)。培养后测定两种不同培养液中E2含量并进行比较。结果胎儿卵巢在一般培养液和加羊膜细胞培养液培养条件下能产生E2,随培养时间延长,E2分泌量增加。而加羊膜细胞培养液组E2分泌量高于一般培养液直接培养(P<0.05)。结论胎儿卵巢在一般培养液培养条件下能分泌E2,而加羊膜细胞培养液能促进培养的卵巢组织的E2分泌,可作为卵巢移植的供体培养的较好培养液。     

胎儿卵巢组织玻璃化冻存效果的研究

目的探讨玻璃化冻存法对胎儿卵巢组织形态和功能的保存效果。方法采用改良EG5.5/30玻璃化液冻存胎儿卵巢皮质片,解冻后观察卵巢组织学变化,卵巢皮质片异种异位移植后,观察受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况。结果实验组与新鲜培养后移植组、添加抗氧化剂培养后移植组相比动情周期恢复率差异无统计学意义(P>0.05),但高于新鲜移植组(P<0.005);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于两种培养组(P<0.05);在卵泡计数上,实验组每高倍视野的卵泡计数明显高于新鲜移植组(P<0.005),与培养后移植组间的差异无统计学意义(P>0.05)。移植后18周,组织学观察见大量窦卵泡,而培养组仅偶见窦卵泡。结论玻璃化冻存法可有效冻存胎儿卵巢组织,且不影响卵泡继续发育的潜能。     

激活素A和卵泡抑素对冻融人胎儿卵巢雌二醇分泌的影响

目的：研究组织培养条件下冻融人胎儿卵巢雌二醇（E2）的分泌及激活素A（Act A）和卵泡抑素（FS）对E2分泌的影响。方法：冻融人胎儿卵巢组织体外培养，分别加入基础培养液（对照组，即MEM组）、基础培养液＋100ng／ml Act A（Act A组）、基础培养液＋100ng／ml FS（FS组）和基础培养液＋100ng／ml Act A＋100ng／ml FS（A＋F组），每组4块组织，培养8d。收集培养2d、4d、6d、8d各组培养液，测定比较其E2值。结果：培养4d、6d、8d卵巢组织分泌的E2值均高于2d的E2值（均P〈0．05），随培养时间延长，E2分泌量先增加后减少，在培养后6d可达较高分泌水平；Act A组E2分泌量明显高于对照组、FS组和A＋F组（均P〈0．01）。结论：冻融人胎儿卵巢在组织培养条件下能分泌E2，Act A能促进体外培养胎儿卵巢E2的分泌，其作用可能受到FS的调节。