肝素寡糖对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞炎症的影响及分子机制研究

以脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞HUVECs炎症损伤,探讨肝素寡糖对炎症的影响及其分子机制。实验分为空白组(0.5%血清培养基)、模型组(LPS+0.5%血清培养基)及给药组(LPS+0.5%血清培养基+0.01、0.1、1 μmol/L HDO),采用活性氧实验检测细胞内活性氧簇水平,Western blot检测VCAM-1、p38、p-p38及核转录因子NF-κB等关键蛋白的表达水平。结果显示0.01、0.1和1 μmol/L的HDO可抑制100 μg/mL LPS诱导的HUVECs炎症因子VCAM-1表达水平,较弱的影响细胞中NF-κB分布,并下调信号通路中关键蛋白p38和p-p38表达。结果表明,HDO可能通过抑制炎症信号通路中关键蛋白的表达水平来抑制炎症因子的表达,从而起到抗炎作用。     

辛伐他汀对脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞Tribbles表达的影响

目的 研究脂多糖(LPS)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)肿瘤坏死因子(TNF-α)和Tribbles mRNA表达变化及辛伐他汀对其表达的影响.方法 实验分为12h组和24h组,各组又分为空白对照组、脂多糖(100ng/ml)组、辛伐他汀(5 μg/ml)组、辛伐他汀(5 μg/ml)和脂多糖(100ng/ml)共...     

番茄红素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应的作用及其分子机制

 【目的】 探讨番茄红素对脂多糖(LPS)所诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子生成的影响及其作用的分子机制。【方法】 分别用1、5、10 μmol/L 的番茄红素孵育细胞1 h,再用1 μg/mL LPS 处理细胞不同时间,分别用Griess法和ELISA法检测RAW264.7巨噬细胞培养基中NO及IL-6的含量,用Western-blot检测核因子-κB(NF-κB) p65、磷酸化和非磷酸化I-κBα、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的蛋白表达量。【结果】 番茄红素能有效地降低炎性因子NO和IL-6分泌,进一步研究显示番茄红素能够抑制LPS诱导I-κBα磷酸化和降解、NF-κB核转移,阻断ERK1/2和p38 MAPK激活,而对JNK活化没有影响。【结论】 番茄红素能够通过抑制ERK1/2 和p38 MAPK信号通路的激活而抑制巨噬细胞NF-κB依赖的炎症因子NO和IL-6生成,这可能是番茄红素防治一些炎症相关性疾病的作用机制之一。     

联胺对人脐静脉内皮细胞中IL-8表达及NF-κB蛋白活化的影响

目的探讨联胺对培养的人脐静脉内皮细胞表达IL-8及核因子-κB活化的影响。方法酶联免疫吸附法检测IL-8蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应法检测IL-8mRNA的表达,细胞免疫化学法观察NF-κB的活化。结果联胺（1、5和10μmol/L）可诱导IL-8在蛋白及mRNA水平表达,与对照组差异有显著性意义（P〈0.05）,且与联胺呈浓度依赖性。联胺（5μmol／L）作用人脐静脉内皮细胞30min后发现NF-κB从胞质向胞核转移,60min达高峰,持续到120min。结论联胺能诱导IL-8在蛋白及mRNA水平表达,其机制可能是通过NF-κB活化实现的。     

盐酸苄丝肼对脂多糖所致人脐静脉内皮细胞炎症的影响及其机制研究

通过脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立体外炎症模型,进一步验证盐酸苄丝肼的抗炎作用,并探究盐酸苄丝肼抗炎抗动脉粥样硬化的相关分子机制。实验分为空白组(PBS+0.5% FBS DMEM培养基)、模型组［LPS(500 μg/mL)+0.5% FBS DMEM培养基］及给药组［LPS(500 μg/mL)+盐酸苄丝肼+0.5% FBS DMEM培养基］,采用Western blot、ELISA和qPCR检测HUVECs细胞中炎症因子血清淀粉样蛋白P(SAP)、TNF-α、MCP-1蛋白和mRNA的表达水平。采用Western blot检测p65/p-p65、p38/p-p38、IκBα/p-IκBα和AKT/p-AKT的表达水平及p65、p38、IκBα的入核情况。结果显示,盐酸苄丝肼(1×10^-9、1×10^-10、1×10^-11 mol/L)能显著抑制促炎细胞因子SAP、TNF-α和MCP-1的蛋白及其mRNA的表达,在下调p65/p-p65、p38/p-p38、IκBα/p-IκBα和AKT/p-AKT的蛋白表达的同时抑制p65、p38、IκBα的核转位,从而抑制相关基因的转录活性。     

姜黄素减弱TNF-α刺激的人脐静脉内皮细胞的炎症反应

炎症和内皮细胞机能障碍是动脉粥样硬化的关键早期事件。研究了姜黄素对肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,以了解姜黄素对内皮细胞的抗炎作用的途径,为防治细胞因子诱导的内皮细胞机能障碍提供新方法。以 MTT 法检测了姜黄素对 HUVEC 的细胞毒     

绿原酸对脂多糖诱导的巨噬细胞的影响

目的 研究绿原酸(CHA)对小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB表达的影响。方法 巨噬细胞分别用脂多糖(LPS)作用和LPS加CHA共同作用。以流式细胞术检测细胞NF-κBp65表达率，并分别测定培养上清中NO含量和GSH-Px活陛。结果 LPS作用2h后．NF-κBp65表达率升高，并持续至4h，LPS与CHA共同作用后，其表达率明显下降。NO含量在用LPS作用6h后仍持续上升．加CHA作用后明显下降。GSH-Px活性在LPS作用6h后仍持续降低．加CHA作用后明显升高。结论 绿原酸的抗炎机理之一可能是通过降低NF-κBp65的水平来抑制NO的表达，另外也可能与抗氧化酶的活性增加有关。     

二苯乙烯苷对氧化损伤人脐静脉内皮细胞NF-κB表达的影响

目的 研究二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 以不同浓度(0.1、1.0和10.0 μmol/L)的二苯乙烯苷孵育体外培养人脐静脉内皮细胞4 h后,用200 μmol/L过氧化氢作用内皮细胞24 h,采用电镜观察、MTT等方法 测定各组细胞活力;RT-PCR、Western-blot检测基因NF-κB、IκB表达.结果 与对照组比较,不同剂量组TSG均可以提高过氧化氢诱导损伤的人脐静脉内皮细胞活性,降低NF-κB mRNA及蛋白水平的表达,其中以1 μmol/L TSG组的作用最明显(P<0.01),但对IκB基因表达的影响差异均无显著性(P>0.05).结论 二苯乙烯苷对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞具有抗氧化保护作用,其作用机制可能与下调NF-κB的表达、阻断细胞NF-κB/IκB信号通路有关.     

人脐静脉内皮细胞传代培养方法

内皮细胞在一些生理、病理过程中起重要作用。内皮细胞培养方法广泛用于其形态、功能、代谢的研究。我们采用改良Jaffe法成功传代培养人脐静脉内皮细胞。材料与方法: 内皮细胞分离与培养:用酶消化法分离内皮细胞。取正常娩出胎盘之脐带(20～25cm),置4℃cord缓冲液中保存(一般不超过6h)。操作在超净台     

威麦宁对PG细胞与HUVEC黏附作用的影响

目的研究威麦宁体外对人高转移肺癌细胞(PG)与血管内皮细胞(HUVEC)黏附作用的影响,探讨其抗肿瘤转移作用机制。方法MTT法检测威麦宁对PG、HUVEC活力的影响;虎红染色法检测威麦宁对PG细胞与HUVEC黏附作用的影响,检测对肿瘤坏死因子(TNF-α)活化的HU-VEC与PG细胞黏附作用的影响。结果威麦宁(31.25、62.5 mg/L)作用PG、HUVEC 24 h后,对两种细胞的存活率即活力皆没有影响(P>0.05)。威麦宁(31.25、62.5mg/L)作用PG细胞24 h后,对HUVEC的黏附有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01);作用HUVEC 6、12 h后,能明显降低TNF-α诱导的HUVEC对PG细胞的黏附作用(P<0.01)。结论威麦宁可能通过对PG细胞和HUVEC双重作用,抑制PG-HUVEC间的黏附,从而抑制肿瘤细胞的血道转移。     

罗格列酮对C反应蛋白作用下人脐静脉内皮细胞生长?凋亡及核因子κB表达的影响

目的:研究C反应蛋白(CRP)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生长、凋亡及核因子κB(NF-κB)表达情况以及罗格列酮(RSG)干预对其的影响,以探讨CRP在抗动脉粥样硬化(AS)中的作用。方法:体外培养HUVECs,细胞传至第5代,随机分为8组:正常对照组(NG)、CRP5μg/L组、CRP20μg/L组、CRP100μg/L组、罗格列酮对照组(RSG组)、RSG CRP5组、RSG CRP20组、RSG CRP100组,分别检测CRP作用下和RSG干预后12、24、48h HUVECs的生长、凋亡及NF-κB表达情况。结果:CRP各质量浓度组HUVECs的凋亡及NF-κB的表达明显高于NG(P<0.05),生长低于NG,尤以100μg/L浓度时更明显(P<0.05)。RSG干预后HUVECs的凋亡及NF-κB的表达明显低于其相应对照组(P<0.05),生长高于其相应对照组,并随时间的延长而更加明显。结论:CRP可促进HUVECs凋亡,抑制其生长,诱导NF-κB表达增加,提示CRP能激活炎症反应,在AS的病理机制中发挥重要作用。RSG能有效降低CRP的致炎症效应有助于延缓糖尿病AS的进程。     

尼古丁对人脐静脉内皮细胞凋亡及坏死的影响

目的不同浓度尼古丁对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡及坏死的影响。方法用CD34以免疫组织化学法鉴定HUVECs。通过3种不同浓度的尼古丁(3、30、300 ng/ml)刺激HUVECs 24 h后,用流式细胞仪检测其凋亡及坏死率。结果低浓度尼古丁促进细胞凋亡最强,而随着尼古丁浓度的增加,细胞凋亡率反而逐渐降低,各组差异具有统计学意义(P<0.05);此外,随着尼古丁浓度增加,细胞坏死率也日益增多,各组差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关(r=0.675)。结论尼古丁对HUVECs凋亡的影响具有浓度依赖性,细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关。     

法舒地尔对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:观察法舒地尔对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响,探讨其作用机制.方法:用0.1%的Ⅰ型胶原酶消化分离HUVECs,加入内皮细胞完全培养基中培养,采用胰蛋白酶进行消化传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态并进行免疫组织化学鉴定.将HUVECs随机分为对照组(内皮细胞培养基培养)、LPS组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS)和法舒地尔组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS+3.275 μg/mL法舒地尔),Western blot法检测RhoA、ROCK2、p-ERM蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测RhoA、ROCK2和p-ERM mRNA表达量.结果:原代培养的内皮细胞在接种后24 h后完全贴壁生长,第3天融合呈铺路石样镶嵌排列,免疫组织化学检测可见第Ⅷ因子相关抗原阳性反应,证实为内皮细胞.LPS组RhoA、ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达水平均显著高于对照组(P<0.01);而法舒地尔组ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达均低于LPS组(P<0.05~P<0.01),但2组RhoA蛋白和基因表达水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论:Rho/ROCK/ERM通路在LPS诱导的HUVECs细胞骨架改变中起重要作用,法舒地尔可拮抗LPS诱导的骨架蛋白重排等HUVECs损伤,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路活化有关.     

巨细胞病毒感染致人脐静脉内皮细胞E选择素时序性的表达

目的：观察人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）作用于血管内皮细胞（vein endothelial cells,ECV）对E选择素时序性的表达,探讨HCMV感染致动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）发生和发展的可能机制。方法:用HCMV感染ECV,采用RT-PCR方法检测不同感染时段细胞E选择素mRNA及蛋白的表达。结果:HCMV感染ECV后,感染0h时E选择素mRNA有基础水平的表达,4h升高并达高峰,8h时开始回落,12h回落显著,24h回落更明显,与0h比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,48h接近0h表达水平（P＞0.05）。结论:HCMV感染ECV后能够促进E选择素表达,并且呈时间依赖性。HCMV有可能通过上调E选择素的表达,介导ECV的炎症反应,促进AS的发生、发展。     

米非司酮对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用

目的 :研究米非司酮 (MIF)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖与凋亡的作用。方法 :应用MTT比色法观察MIF对HUVEC细胞生长的影响 ;采用形态学观察、流式细胞术、免疫组织化学、DNA缺口原位末端标记法 (TUNEL)观察MIF作用前后HUVEC细胞增殖与凋亡变化。结果 :不同浓度MIF均能抑制HUVEC细胞生长。MIF≤ 2 0 μmol L对细胞生长的抑制作用在第 2 4h达高峰 ,此后呈下降趋势。MIF >2 0 μmol L对细胞生长产生剂量依赖性抑制作用。用 4 0 μmol L的MIF处理 72h后 ,HUVEC细胞的增殖降低、凋亡率增加 ,P<0 .0 0 0 1;且伴随ER PR、VEGF表达的下降。结论 :MIF具有抑制HUVEC细胞增殖、诱导HUVEC细胞凋亡的作用。     

金黄色葡萄球菌诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的观察

目的观察人脐静脉内皮细胞株ECV．304对金黄色葡萄球菌（S．aureus）感染的反应。方法常规方法制备金黄色葡萄球菌悬液,以1：1、1：10和1：100的感染复数感染ECV．304细胞1、3、6、12h和24h后,估算细胞吞噬细菌数,采用Hoechst33258染色,DNAladder及细胞凋亡相关因子RT．PCR检测细菌感染后细胞凋亡情况。结果金黄色葡萄球菌感染复数越高,细胞内吞噬的活细菌数越多。金黄色葡萄球菌感染导致ECV-304细胞发生凋亡,凋亡具有时间依赖性,随着感染时间的延长,凋亡小体增多,DNA片段也随之增多。抗凋亡细胞因子Bcl2mRNA表达量随着感染时间的延长下降,而促凋亡细胞因子Bax和Caspase．3表达量增多。结论金黄色葡萄球菌感染ECV-304细胞后,通过下调抗凋亡细胞因子Bcl2、上调促凋亡细胞因子Bax和Caspase-3诱导细胞凋亡。金黄色葡萄球菌感染内皮细胞的可能致病机制为临床治疗提供了实验依据。     

解脲脲原体诱导脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的：研究解脲脲原体（Ureaplasmaurealyticum,uu）能否诱导脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC）凋亡,并探讨其凋亡机制。方法：UU感染HUVEC2、4、8、12h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率。并检测uu感染HUVEC8h后TNF—d、caspase-3及caspase-8产生量,同时检测加入TNF—d抗体、caspase-3和caspase-8抑制剂后的细胞凋亡率。结果：UU可以诱导HUVEC发生凋亡,与对照组差异有统计学意义（P〈0．01）;感染8h后TNF—α、caspase-3、caspase-8的产生量均高于对照组（P〈0．01）;加入TNF-α抗体、caspase-3和caspase-8抑制剂后凋亡率均明显低于对照组（P〈0．01）。结论：uu可以诱导HUVEC凋亡,并存在明显的时间效应关系,其凋亡机制可能是通过TNF-α介导的caspase-8及caspase-3激活的外源性死亡因子受体途径。     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞中NO和eNOS的影响

目的 讨论肿瘤坏死因子-α（TNF—α）对内皮细胞一氧化氮（NO）产生及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性的影响。方法 以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为实验材料，检测与不同浓度TNF—α作用不同时间后．细胞培养上清液和细胞中NO水平的变化，以及细胞eNOS活性的改变。结果 （1）随着TNF—α浓度的升高，eNOS的活性减弱，而细胞和上清液中NO的含量增加；（2）随着干预时间的延长，eNOS的活性减弱；而细胞和上清液中NO的含量在作用24h后升高，且明显高于对照组；（3）L一单甲基精氨酸（L—NMMA）和地塞米松（DXM）均能阻断TNF-α引起的细胞和细胞上清中NO的表达增加。结论 TNF-α降低eNOS活性，却在高浓度和长时间作用后增加NO的合成，可能与激活诱导型一氧化氮合酶有关，因为NO的变化可以被L—NMMA和DXM阻断。     

齐墩果酸对损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨齐墩果酸(oleanic acid,OA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制?方法:培养HUVECs,分为正常组?H2O2模型组?H2O2+OA (0.25 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (0.50 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (1.00 ?滋mol/L)组?H2O2+维生素C(1.50 mmol/L)组?各组培养24 h后,通过MTT法检测细胞增殖能力,酶生化法测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,酶生化法测定细胞裂解液中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,流式细胞仪测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡率?结果:OA能够恢复H2O2损伤的细胞活力,减轻H2O2诱导的LDH释放,减少H2O2诱导的MDA生成,恢复H2O2损伤的GSH-Px和SOD活力,清除H2O2诱导的ROS,减轻H2O2诱导的细胞凋亡,提高HUVECs细胞NO的生成?结论:OA对损伤血管内皮细胞有保护作用,这与OA能够启动HUVECs细胞内抗氧化防御机制,清除细胞内的ROS,提高HUVECs细胞NO的生成,抑制H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡有关?