RAIL泰素帝协同诱导人肺腺癌细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL）和化疗药物泰素帝（TXT）联合应用对体外培养人肺腺癌A549细胞的凋亡诱导作用,并初步探讨其作用机制。方法：通过形态学观察和MTT比色法检测TRAIL、TXT及二者联合应用对A549细胞的形态学影响和细胞增殖的抑制作用； Annexin Ⅴ FITC/PI染色，流式细胞术检测A549细胞的凋亡率；半定量RT PCR检测TXT对A549细胞死亡受体DR4、DR5基因表达的影响。结果：①TXT对A549细胞的生长有明显的抑制作用，且呈显著的剂量依赖性，IC50为62.1?ng/ml；而A549对TRAIL不敏感，100?ng/ml的抑制率仅为（6.84±1.14）%，1600?ng/ml的抑制率为（26.10±4.02）%。4?ng/ml TXT与100?ng/ml TRAIL联合应用有显著的协同抑制作用（P＜0.05），抑制率为（19.98±4.15）%；②100?ng/ml TRAIL、4?ng/ml TXT单独作用A549细胞24?h的凋亡率为4.44%和12.26%。100?ng/ml TRAIL与4?ng/ml TXT联合作用A549细胞24?h的凋亡率为16.84%；③4?ng/ml TXT作用前后，死亡受体DR4、DR5mRNA表达水平无明显改变。结论：人肺腺癌细胞A549对TRAIL不敏感，但TRAIL与TXT联合有显著的协同诱导细胞凋亡作用，这种协同作用机制与DR4、DR5的表达无关。     

白藜芦醇对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 研究白藜芦醇对TRAIL诱导乳腺癌,MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测细胞增殖;AnnexinV染色并流式细胞术检测细胞凋亡;分光光度法检测Caspse-8、Caspase-3相对活性;DAPI细胞核染色法观察细胞凋亡.结果 50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇分别与50 ng/mL TRAIL联合作用后,对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率为(62.43±2.07)%和(87.32±1.44)%;而细胞凋亡率分别为(53.59±1.44)%和(73.72±1.96)%,与单独应用相应浓度的白藜芦醇和TRAIL比较,差异均存在显著性(P＜0.01).50ng/mL TRAIL分别与50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇联合作用后,Caspase-8、Caspase-3的相对活性为(0.282±0.008)、(0.386±0.013)及(0.437±0.05)、(0.521±0.03),与对照组及单用TRAIL、白藜芦醇比较均明显增强,差异显著(P＜0.01).结论 TRAIL与白藜芦醇联合可协同抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡,白藜芦醇增强TRAIL诱导细胞凋亡的作用可能是通过促进Caspase-8和Caspase-3的表达来实现.     

PDTC增强TRAIL对人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对EBV阳性的人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测TRAIL（1、10、100ng／mL）及TRAIL（1、10、100ng／mL）＋100μmol／mLPDTC时Raji细胞的生长抑制率;原位末端酶标记技术（TUNEL）检测Raji凋亡细胞。结果①TRAIL 1、10ng／mL组12hRaji细胞生长抑制率分别为-35．52％及-15．07％;TRAIL 100ng／mL组12hRaji细胞生长抑制率为6．68％,并且呈时间依赖性（P〈0．05）。②TRAIL（1、10、100ng／mL）加入PDTC后,12hRaji细胞生长抑制率分别为1．18％、4．96％、14．63％,均显著高于TRAIL单用组（均P〈0．01）。③TRAIL（100ng／mL）联合PDTC时Raji细胞凋亡指数最高为79．49％,较TRAIL 100ng／mL（28．84％）有显著性升高,1、10ng／mL TRAIL联合PDTC后Rail凋亡细胞也均显著高于TRAIL单用组（均P〈0．01）。与MTT法检测结果具有一致性。结论TRAIL能诱导Raji细胞凋亡但作用不敏感。PDTC能显著增强TRAIL对Raji细胞的诱凋亡作用。     

自噬与脂联素诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的关系

目的 研究全长脂联素( Acrp30 )在人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、自噬、凋亡中的作用,并探讨自噬与凋亡的关系. 方法 体外培养 MCF-7 细胞,分为对照组(未加入Acrp30)、加药组(25、50、100、200 ng/ml Acrp30),四亚基偶氮唑盐( MTT)比色法检测各组细胞增殖情况. 选取100 ng/ml Acrp30浓度组( Acrp组)作用MCF-7 细胞,进行培养,倒置显微镜观察细胞形态、贴壁情况;划痕抑制试验了解细胞迁移能力;Western blot法评价细胞自噬水平;流式细胞仪检测Acrp组及3-甲基腺嘌呤(3-MA) 预处理组不同时间细胞的总凋亡率. 结果 ① MTT结果显示:与对照组相比,50、100 ng/ml组72 h,200 ng/ml 组48、72 h可显著抑制MCF-7细胞增殖( P<0. 05 );② 划痕抑制实验结果显示:与对照组相比, Acrp30 组作用 48、72 h,迁移距离显著减小( P <0. 01);③ Western blot结果显示:与对照组相比,Acrp30 组自噬水平( LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值) 24、48 h显著提高( P<0. 05,P<0. 01),但随时间延长,比值逐渐下降,作用72 h后LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值有所升高但差异无统计学意义;④ 流式细胞仪检测凋亡率结果显示:与对照组相比,Acrp30组和干预组48、72 h总凋亡率明显增加(P<0. 05,P<0. 01),与Acrp30组相比干预组72 h凋亡率显著升高( P<0. 05 ). 结论 Acrp30可抑制MCF-7细胞的增殖和迁移,诱导细胞的自噬和凋亡;抑制细胞自噬可促进Acrp30对MCF-7细胞凋亡的诱导.     

紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

目的 探讨紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对前列腺癌细胞的抑制作用。方法 MTT法测定紫杉醇、TRAIL及紫杉醇联合TRAIL作用于LNCAP、Du145、PC3细胞后的细胞生存率，同时，用流式细胞技术测定3种细胞的凋亡率。结果 2ng／ml TRAIL对LNCAP、PC3细胞有明显的抑制作用，但对Du145细胞抑制作用不明显；当TRAIL与紫杉醇联用则对3种癌细胞均显示出明显的抑制作用，且发生在给药24h后，72h时抑制作用最强。TRAIL对3种癌细胞有诱导凋亡作用，5ng／ml较2ng／ml作用强；紫杉醇与TRAIL联用明显增强诱导凋亡作用。结论 紫杉醇与TRAIL联合应用能明显增强对LNCAP、Du145、PC3细胞的抑瘤效果和诱导凋亡作用。     

TRAIL重组蛋白诱导肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的研究重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白诱导肝癌细胞HepG2的凋亡作用和意义。方法HepG2细胞经重组人可溶性TRAIL蛋白处理后,以MTT法测定细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡指数。结果TRAIL蛋白对HepG2的作用存在较好的量效和时效关系,其最佳作用剂量和最佳作用时间分别为1 000 ng/ml和24h;1 000 ng/ml的TRAIL蛋白作用24 h后,HepG2肝癌细胞的存活率降至45%,凋亡指数达51%。结论TRAIL重组蛋白能通过诱导细胞凋亡的方式杀伤一定量的HepG2肝癌细胞,有可能成为潜在的抗肝癌新药。     

3-甲基腺嘌呤对人耐药大肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响

目的：研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对耐5-氟尿嘧啶（5-Fu）结肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响,探讨自噬抑制剂在逆转结直肠癌耐药中的作用。方法：浓度递增筛选法诱导耐5-Fu（100kig／L）的SW480细胞株,用10umol／L浓度的3一MA处理后,再用5-Fu（浓度200μg／L）作用24h。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,丹酰戊二胺（MDC）染色和电镜检测细胞自噬活性变化。结果：3-MA对耐药细胞自噬活性的抑制率达89．7％,增殖抑制率为9．6％,凋亡率为5．7％,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。经3-MA处理后,5-Fu对耐药SW480细胞增殖抑制率达71．6％±2．9％,凋亡率达36．6％土2．9％,而单用5-Fu细胞增殖抑制率仅为23．6％±2．9％,凋亡率仅为10．3％±2．5％,3-MA预处理后5-Fu对耐药细胞的增殖抑制率及凋亡率均明显增强（P〈0．05）,自噬泡数量显著减少,自噬活性明显降低（P〈0．05）。结论：3-MA单用时仅有较弱的抗肿瘤作用,与5-Fu联用时耐药细胞的增殖及自噬活性被显著抑制,增强了SW480耐药细胞对5-Fu的敏感性,提高了化疗效果。     

5-Aza-2'-dC通过上调DR4与DR5表达增加TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡的敏感性

目的 探讨5-Aza-2'-dC增加肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性的作用及其可能机制.方法 5 μmol/L 5-Aza-2'-dC顸处理细胞96 h,TRAIL(0,50,100,200 ng/mL)处理细胞12h,MTT检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,流式细胞技术检测TRAIL受体DR4及DR5的表达,Western blot检测caspase-8蛋白表达水平,Real-time PCR检测细胞DR4、DR5和caspase-8 mRNA表达.结果 5-Aza-2'-dC预处理组与对照组相比,TRAIL对细胞增殖抑制率和诱导凋亡率明显高于对照组(P＜0.05).5-Aza-2'-dC能增加细胞表面DR4和DR5表达,促进凋亡通路关键蛋白caspase-8活化.5-Aza-2'-dC在mRNA水平增加了DR4、DR5和caspase-8的表达.结论 5-Aza-2'-dC增加了TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡的敏感性,其可能机制是通过上调DR4、DR5和caspase-8表达实现.     

奥美拉唑诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制研究

【目的】探讨质子泵抑制剂奥美拉唑体外对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。【方法】0、100、200、300μmol／L奥美拉唑分别作用于体外培养的HeLa细胞,荧光显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测凋亡基因caspase-3和bcl-2的mRNA表达。【结果】HeLa细胞经奥美拉唑作用24h后,均可见染色质凝集;MTT法检测示各组24h增殖抑制率为（2．19±0．24）％、（16．70±1．61）％、（27．50±1．37）％和（31．20±2．04）％,48h增殖抑制率为（2．38±0．76）％、（16．80±3．00）％、（40．50±2．64）％和（45．80±2．18）％。增殖抑制率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;各组流式细胞仪检测24h凋亡率为（3．99±0．75）％、（11．50±2．61）％、（25．70±3．1）％和（37．3±2．67）％;200μmol／L组48h凋亡率为（45±2．15）％,72h为（62．4±2．89）％。细胞凋亡率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;RT-PCR结果示casepase-3基因表达随奥美拉唑浓度增加而增加,bcl-2基因表达随奥美拉唑浓度增加而降低。【结论】奥美拉唑通过上调casepase-3和下调bcl-2基因的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡。     

自噬在脂多糖诱导成牙本质细胞凋亡中的作用

目的 探讨自噬在脂多糖（LPS）诱导成牙本质细胞（mDPC-23）凋亡中的作用。方法 将5 μg/mL脂多糖作用于成牙本质细胞0、6、12、24 h后,CCK8检测细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡。5 μg/mL脂多糖作用细胞24 h后,用Western blot检测自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5以及自噬相关通路AKT、p-AKT、mTOR和p-mTOR的表达水平。以脂多糖（5 μg/mL）和脂多糖（5 μg/mL）+3-甲基腺嘌呤（3-MA,5 mmol/L）为实验组,不加脂多糖或3-MA为空白对照组,作用细胞24 h后,Western blot检测凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达水平。结果 脂多糖作用mDPC-23细胞6、12 h,细胞增殖能力和凋亡无明显变化;作用24 h后,其增殖能力较对照组显著降低（P<0.05）,凋亡水平较作用0 h明显增加（P<0.05）。且脂多糖作用mDPC-23细胞24 h后,自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5表达较对照组均明显增加（P<0.05）,通路相关蛋白p-AKT和p-mTOR较对照组表达下降（P<0.05）。脂多糖组凋亡蛋白Caspase 3和Bax显著高于对照组（P<0.05）;脂多糖+3-MA组中凋亡蛋白明显低于脂多糖组（P<0.05）。结论 脂多糖可通过诱导mDPC-23自噬发生以促进细胞凋亡;而抑制自噬,可减弱脂多糖的促凋亡作用,提示在炎性牙髓组织损伤中,自噬发挥重要作用。     

心肌细胞肥大中番茄红素对自噬的作用

目的 探讨在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大中,番茄红素对自噬的影响.方法 原代培养的乳鼠心肌细胞,采用AngⅡ干预建立心肌肥大的模型;用番茄红素和自噬的阻断剂3-甲基腺嘌呤（3MA）干预.在光学显微镜下观察心肌细胞的形态;采用Western blot法检测自噬相关基因6（Atg6）Beclin1及自噬相关基因8（Atg8）LC3蛋白的表达;Real time PCR技术检测心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽（ANP）的mRNA表达.结果 在AngⅡ诱导的心肌肥大中[细胞面积（517.19±52.31）;ANP相对含量（17.83±2.07）],番茄红素[细胞面积（355.82±40.45）;ANP相对含量（12.16±1.41）]缓解了心肌细胞面积的增加（F=56.518,P＜0.05）,下调了ANP的mRNA表达水平（F=157.048,P＜ 0.05）.番茄红素增加了心肌肥大时自噬相关基因Beclin1[蛋白相对含量（0.685±0.058）,F=202.873,P＜0.05]和LC3蛋白相对含量[（0.608±0.045）,F=177.114,P＜0.05]蛋白的表达.自噬阻断剂3MA降低了番茄红素对心肌细胞肥大的抑制作用（P＜0.01）.结论 番茄红素可能通过激活自噬来抑制心肌细胞肥大.     

三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226自噬及凋亡关系的研究

目的通过引入自噬及凋亡抑制剂观察三氧化二砷（As2O3）作用于骨髓瘤细胞RPMI 8226引起自噬和凋亡之间的关系。方法①MTT法计算细胞生长抑制率。②流式细胞仪检测RPMI 8226细胞的自噬率及凋亡率的变化。③通过Western Blot方法检测不同实验组Beclin-1及Caspase-3表达的变化。结果①各浓度As2O3对人骨髓瘤细胞RPMI 8226都显示出明显的生长抑制作用（P〈0.05）,且呈时间-剂量依赖性。②与As2O3单独处理组相比,3-MA预处理组,As2O3诱导RPMI 8226细胞凋亡率呈下降趋势,有统计学意义（P〈0.05）;zVAD-fmk与As2O3联合处理组,凋亡率未见明显变化（P〉0.05）。与As2O3单独处理组相比,3-MA预处理组,As2O3诱导RPMI 8226细胞自噬率下降,有统计学意义（P〈0.05）;zVAD-fmk与As2O3联合处理组As2O3诱导RP-MI8226细胞自噬率亦下降,有统计学意义（P〈0.05）。③与As2O3单独加药组比较,3-MA预处理组As2O3诱导RPMI 8226细胞Procaspase-3蛋白表达明显升高,Beclin-1表达下降;zVAD-fmk预处理组亦表现为Procaspase-3蛋白表达明显升高,Beclin-1下降。结论①不同浓度组As2O3作用24、48、72h对RPMI8226细胞的增殖均有明显的抑制作用（P〈0.05）,且该作用成时间-剂量依赖关系。②As2O3可诱导RPMI 8226细胞发生凋亡及自噬,两者的关系表现为互为前提。抑制任何一方都会导致另一方过程受抑。③As2O3诱导RPMI 8226细胞凋亡过程中可能存在Caspase非依赖型细胞凋亡程序。     

自噬在电离辐射诱导的小鼠精母细胞GC-2凋亡过程中的作用

目的 探讨自噬在电离辐射诱导小鼠精母细胞GC-2凋亡过程中的作用.方法 将小鼠精母细胞GC-2分为空白对照组和不同剂量(2、4和8 Gy)60Co辐射处理组.采用原位末端转移酶标记法(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过蛋白质印迹实验观察自噬相关蛋白LC3(LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)和Beclin1表达水平的改变,使用荧光显微镜观察C,C-2细胞内自噬小体的变化.用5mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理GC-2细胞2h再给予60Co辐射处理,观察自噬抑制剂联合电离辐射对细胞凋亡率的影响以及自噬相关蛋白表达水平的改变.结果 与空白对照组相比,GC-2细胞经60Co辐射处理后细胞凋亡率升高(P＜0.05),荧光显微镜下可见细胞自噬体明显增多,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin1蛋白表达水平增加(P＜0.05).预先用5mmol/L 3-MA处理GC-2细胞2h再给予60Co辐射处理,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin1蛋白表达水平与未经3-MA处理组相比降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05).结论 电离辐射可以诱导精母细胞发生自噬,抑制细胞自噬后可增强电离辐射对精母细胞的杀伤作用.     

闽南地区抑郁症患者CYP2D6基因多态性与文拉法辛疗效的关联研究

目的 探讨CYP2D6基因多态性对抗抑郁药物文拉法辛血药浓度及其治疗效果、不良反应的影响.方法 随机选择闽南地区69例抑郁症患者作为研究对象,高效液相色谱法测定文拉法辛的血药浓度,提取外周血DNA并利用特异性引物对其进行扩增,测序,基因分型.通过汉密尔顿抑郁量表（HAMD）和副反应量表（TESS）来评估文拉法辛对抑郁症患者的治疗效果和不良反应.结果 rs16947位点经过基因分型可以分为CC、CT、TT三组,血药浓度分别为（157.35± 15.63） ng/ml、（70.17±5.11） ng/ml、（115.72± 10.2） ng/ml,差异无统计学意义（F=1.257,P=0.301）,剂量校正浓度、标准化浓度均差异无统计学意义（F=1.683,1.547,P＞0.05）.HAMD减分率[CC：（40.6±7.23）％,CT：（51.7±7.09）％,TT：（42.8±14.1）％]以及TESS评分[CC：（1.3±0.21）分,CT：（1.3±0.36）分,TT：（1.2±0.28）分]均差异无统计学意义（P＞0.05）;rs3892097位点经基因分型发现只存在GG一种基因型;rs 1065852位点经过基因分型可以分为CC、CT、TT三组,三个基因型组间血药浓度分别为（42.87±9.9） ng/ml、（64.25±13.59） ng/ml、（181.56± 14.15）ng/ml,差异有统计学意义（F=4.893,P=0.016）,剂量校正浓度、标准化浓度差异均有统计学意义（F=3.985,3.648,P＜0.05）.HAMD减分率[CC：（42.6±8.23）％,CT：（48.8±10.8）％,TT：（63.4±9.15）％]差异无统计学意义（F=2.961,P=0.07）,TESS评分差异与HAMD减分率差异相类似.结论 rs1065852位点影响CYP2D6酶的活性,进而对文拉法辛治疗抑郁症患者的治疗效果以及不良反应产生影响.     

百里醌联合吉西他滨对胰腺癌BxPC-3细胞体外生长的影响

目的 探讨百里醌联合吉西他滨对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用CCK-8法检测细胞相对活性,Hoechst染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、XI-AP）、半胱天冬酶（cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9）、PTEN、Akt及phospho-Akt蛋白的表达.结果 百里醌呈浓度依赖性地抑制胰腺癌BxPC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡.吉西他滨组（GEM）、百里醌组（TQ）、百里醌联合吉西他滨组（TQ＋GEM）、百里醌与吉西他滨序贯给药组（TQ-GEM）相对细胞活性分别为83.7％±4.1％、51.8％±6.0％、48.25％±6.50％、33.3％±3.9％;早期凋亡率分别为12.2％±3.8％、30.4％±4.3％、43.5％±5.7％、58.3％±6.1％;各组相对细胞活性均明显低于对照组（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著增高（P＜0.05）;与GEM组比较,TQ-GEM组与TQ＋ GEM组相对细胞活性明显下调（P ＜0.001）,凋亡率明显上调（P ＜0.001）;TQ-GEM组较TQ＋ GEM组出现更明显的增殖受抑（P ＜0.001）,更高的细胞凋亡率（P＜0.001）.百里醌-吉西他滨序贯给药作用于胰腺癌BxPC-3细胞后,BxPC-3细胞中Bax蛋白表达明显下调,而Bcl-2、XIAP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达明显上调.百里醌可显著上调BxPC-3细胞PTEN的表达,明显抑制Akt磷酸化.结论 百里醌可明显增强吉西他滨对体外胰腺癌细胞生长抑制作用,可能是通过上调PTEN,Akt去磷酸化,促使Bcl-2、XIAP表达上调及Bax表达下调,活化caspase-3、caspase-9诱导细胞凋亡而实现。     

细胞自噬在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究

【摘要】 目的 研究细胞自噬在三氧化二砷（ATO）诱导的肝癌细胞死亡中的作用,观察调控细胞自噬对ATO诱导的细胞凋亡有何影响。方法 以人肝癌HepG2细胞为研究对象,在ATO作用于HepG2细胞的基础上,加入自噬激动剂〔雷帕霉素（Rap）〕和自噬抑制剂〔三甲基腺嘌呤（3-MA）〕进行调控。以MTT法检测细胞生存率,透射电镜观察自噬体结构,免疫印迹法分析自噬相关蛋白LC-3和Beclin1的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 5~20 μmol/L ATO与10 mmol/L 3-MA联用时HepG2细胞存活率比同剂量ATO单独作用时降低（P <0.05）,凋亡率增加（P <0.05）,细胞内呈现典型凋亡反应特征,自噬蛋白LC3和Beclin1表达低于ATO单独作用组（P <0.05）。相反,5~20 μmol/L ATO与0.25 μmol/L Rap联用时,HepG2细胞的存活率比ATO单独作用时显著增加（P <0.05）,凋亡率降低（P <0.05）,细胞内出现大量自噬体结构,自噬蛋白LC3和Beclin1的表达较ATO单独作用组有增加趋势,但差异无统计学意义（P >0.05）。结论 特异性自噬抑制剂能显著增强ATO杀伤肝癌细胞的敏感性,其机制与增强肝癌细胞凋亡有关。     

复方苦参注射液对人食管鳞癌EC9706细胞凋亡及生长抑制的影响

目的 探讨复方苦参对人食管癌细胞株EC9706的生长抑制和诱导凋亡作用.方法 体外实验分为复方苦参25.00 μl/ml组、6.25 μl/ml组及对照组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,SP法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达.流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡,Western印迹检测细胞半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、Bc1-2及Fas蛋白的表达.平板克隆形成实验测定细胞克隆形成率.裸鼠移植瘤实验检测复方苦参的体内抑瘤作用,分为200μl／d治疗组、25μl／d治疗组及生理盐水对照组.SP法检测移植瘤PCNA及Bc1-2的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡.结果 体外实验中25.00 μl/ml组细胞48、72、96h增殖活性均低于对照组(均P＜0.01);PCNA表达水平及体外克隆形成率均低于对照组(均P＜0.05);细胞凋亡率、激活型caspase—3表达及Fas表达均高于对照组[(25.2±7.3)％比(3.4±1.5)％、(21.3±4.4)％比(1.8±0.6)％、(30.2±8.3)％比(5.4±1.6)％,均P＜0.01],Bc1-2表达低于对照组(P＜0.01).动物实验200μL／d治疗组瘤体质量低于生理盐水对照组[ (987±386) nmg比(1935±838) mg,P＜0.01],凋亡指数高于生理盐水对照组[(33.8±8.7)％比(5.3±1.4)％,P＜0.01].结论 复方苦参能够抑制EC9706细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻止移植瘤生长.诱导凋亡机制可能与EC9706细胞周期阻滞、Bc1-2表达下调、Fas表达上调及caspase-3激活有关.     

高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响

目的：观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法：体外培养人腹膜间皮细胞株第5～10代［HMrSV5,DMEM/F12培养基含10%（体积分数）胎牛血清］,观察1.5%、2.5%、4.25%（质量分数）葡萄糖腹膜透析液（dextrose）及线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂鱼藤酮（rotenone）,线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂噻吩甲酰三氟丙酮（thenoyltrifluoroacetone,TTFA）,线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂抗霉素A（antimycin A）对细胞IL-1β表达的影响（免疫印迹）;通过小RNA干扰技术下调NLRP3的表达,免疫印迹分析4.25%高糖腹膜透析液作用下细胞IL-1β的表达;通过白藜芦醇（resveratrol,RSV）诱导自噬,3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）、自噬相关蛋白5（autophagy related gene 5,ATG5）siRNA、自噬相关蛋白（Beclin1）siRNA抑制自噬,流式细胞仪分析细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）,免疫印迹分析IL 1β的表达。结果：对照组、1.5%高糖腹膜透析液、2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮（10 μmol/L）、抗霉素A（50 mg/L）、噻吩甲酰三氟丙酮（10 μmol/L）各组细胞上清IL-1β的相对表达依次为0、0.175±0.082、0.418±0.163、2.357±0.288、2.642±0.358、3.271±0.462、0.123±0.091,提示 2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮、抗霉素A作用细胞IL-1β表达明显升高,应用NLRP3 siRNA可阻断上述效应;此外,对照组、阴性对照siRNA（negative control,NC siRNA）、RSV（50 μmol/L,诱导自噬）、3 MA（10 mmol/L,抑制自噬）、ATG5 siRNA（抑制自噬）、Beclin1 siRNA（抑制自噬）各组总线粒体荧光强度分别为1.76±0.42、1.83±0.55、1.85±0.62、7.36±0.92、5.35±0.77、5.06±0.62,超氧化线粒体荧光强度分别为821.68±95.12、868.15±102.82、723.39±92.56、1 660.08±113.65、1 433.01±107.24、1 562.36±112.88,结合免疫印迹结果,提示抑制自噬可增强线粒体ROS产生和提高IL-1β表达,诱导自噬对ROS、IL-1β无明显影响。结论：长期应用高糖腹膜透析液,腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β持续激活,实时启动自噬可能成为干预NLRP3-IL-1β持续激活、延缓腹膜透析腹腔慢性炎症及腹膜纤维化的治疗靶点。     

黄芪甲苷通过激活自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡

目的研究黄芪甲苷通过激活细胞自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导PC12细胞凋亡的作用。方法取对数生长期的PC12细胞,随机分为7组:正常对照组、模型组、溶媒组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组、自噬激活剂组。除正常对照组外,其余各组剥夺氧、糖3h后再复氧、复糖12 h,并于复氧、复糖的同时给予相应药物处理。用透射电镜观察自噬小体的变化,Western blot检测LC3-II、Beclin1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达,流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡。结果与正常对照组相比,模型组出现典型的自噬小体,LC3-II、Beclin1表达均增多(P0.05),同时Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数也升高(P0.05)。与模型组相比,黄芪甲苷组、自噬激活剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达均增多(P0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均下降(P0.05);而自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达减少(P0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数升高(P0.05);溶媒组与模型组之间无显著差异(P0.05)。与黄芪甲苷组相比,黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达均减少(P0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均升高(P0.05)。结论黄芪甲苷可通过激活细胞自噬而抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。     

Expression of Beclinl in Osteosarcoma and the Effects of Down-regulation of Autophagy on the Chemotherapeutic Sensitivity

To explore the expression of Beclin1 in osteosarcoma and investigate the effects of down-regulation of autophagy on the chemotherapeutic sensitivity to cisplatin (DDP),the expression of Beclin1 in 28 specimens of osteosarcoma (group A) and 19 specimens of normal bone tissues (group B) were immunohistochemically detected. The expression of Beclin1 mRNA in MG63 cells treated with different concentrations of DDP was examined with RT-PCR. After down-regulation of autophagy in MG63 cells by an autophagy inhibitor,3-methyladenine (3-MA),the cell proliferation inhibition rate of MG63 cells treated with DDP was evaluated by using the MTT assay. The positive rates of Beclinl were 67.85% in group A and 94.73% in group B. Its expression was lower in osteosarcoma than in normal bone tissues,with a significant difference found between them (P＜0.05).RT-PCR showed that the expression of Bcclin1 mRNA in the cells treated with high-dose DDP were higher than that in the non-treated cells,and no significant difference in the expression of Beclin1 mRNA was found between the cells treated with low-dose DDP and the non-treated cells. There was a positive correlation between the level of Beclin1 mRNA expression and the concentration of DDP.MTT assay showed that the proliferation inhibition rates of the cell treated with 3-MA and DDP combined were substantially increased when compared with those treated with DDP alone (P＜0.01).This study demonstrated that autophagy may be implicated in the carcinogenesis of osteosarcoma,and DDP may induce autophagy in the MG63 cells. It also suggests that the down-regulated autophagy could increase chemotherapeutic sensitivity of DDP to osteosarcoma.