鹿茸多肽对兔骨性关节炎软骨细胞增殖及凋亡调节作用的实验研究

目的观察鹿茸多肽对骨性关节炎细胞增殖和凋亡的保护、调节作用。方法建立兔骨性关节炎模型,体外分离培养软骨细胞,以假手术组细胞为正常对照组细胞,造模组细胞为骨关节炎软骨,分别加入6．25μg／mL鹿茸多肽为低剂量组,加入12．5μg／mL鹿茸多肽为中剂量组,加入25μg／mL鹿茸多肽为高剂量组,通过流式细胞仪检测骨性关节炎细胞增殖及凋亡。结果与正常对照组比较,模型组G0／G1期细胞比例显著降低（P〈0．01）,G2／M和S期细胞比例明显升高（P〈0．05）。鹿茸多肽对骨关节炎软骨细胞周期各时相并无明显的调控作用,可明显降低早期凋亡细胞比例,且有一定的量效关系。结论鹿茸多肽对骨性关节炎软骨细胞的早期凋亡有明显抑制作用。     

黄芪多糖通过JAK2/STAT3通路调控人膝骨关节炎软骨细胞增殖与凋亡

目的 研究黄芪多糖(APS)对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3通路的影响。方法 无菌分离人膝骨关节炎软骨细胞,设空白对照组,APS低、中、高剂量(25、50、100mg/L)组和塞来昔布(20mg/L)组。药物干预48h后,MTT法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,PI染色法检测细胞周期分布,Western blot法检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、cyclin D1、p21、cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 与空白对照组比较,APS中、高剂量组和塞来昔布组细胞增殖活力升高、凋亡率降低(P<0.01),处于G₀/G₁期细胞比例降低、S期细胞比例升高(P<0.05);p-JAK2、p-STAT3、cyclin D1、Bcl-2表达上调而p21、cleaved caspase-3、Bax表达下调(P<0.01),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Bcl-2/Bax比值升高(P<0.01)。与塞来昔布组比较,APS高剂量组细胞增殖活力升高、凋亡率降低(P<0.01);G₀/G₁期细胞比例降低、S期细胞比例升高(P<0.01);p-JAK2、p-STAT3、cyclin D1表达上调且p21、cleaved caspase-3、Bax表达下调(P<0.01),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Bcl-2/Bax比值升高(P<0.01)。结论 APS具有促进人膝骨关节炎软骨细胞增殖并抑制其凋亡的作用,其机制可能与激活JAK2/STAT3通路有关。     

塞来昔布对离体人膝骨关节炎细胞凋亡及EGFR/MAPK信号通路的影响

目的 探究塞来昔布对离体人膝骨关节炎细胞凋亡及表皮生长因子受体/丝裂原激活蛋白激酶（EGFR/MAPK）通路的影响。方法 体外分离及培养膝关节软骨细胞,并以甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞。将细胞分为空白对照组（人正常膝骨关节软骨细胞不做特殊处理）、模型组（人膝骨关节炎软骨细胞不做特殊处理）及塞来昔布低、高剂量组（人膝骨关节炎软骨细胞中分别加入含终浓度为50 μmol/L和200 μmol/L塞来昔布溶液的培养液）。采用CCK-8法、AnnexinV/PITC双染法分别检测各组细胞增殖、凋亡能力,Western blotting检测细胞增殖、凋亡及EGFR/MAPK通路蛋白的表达。结果 甲苯胺蓝染色结果显示,人正常膝骨关节软骨细胞、人膝骨关节炎软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒,细胞核呈深蓝色,细胞质呈浅蓝色;与人膝骨关节炎软骨细胞形态比较,人正常膝骨关节软骨细胞体积较大,形态较规则,蓝紫色异染颗粒较多。与空白对照组比较,模型组,塞来昔布低、高剂量组细胞存活率降低（P <0.05）,凋亡率升高（P <0.05）;与模型组比较,塞来昔布低、高剂量组细胞存活率升高（P <0.05）,凋亡率降低（P <0.05）;与塞来昔布低剂量组比较,塞来昔布高剂量组细胞存活率升高（P <0.05）,凋亡率降低（P <0.05）。与空白对照组比较,模型组,塞来昔布低、高剂量组EGFR、MMP-9、Caspase-3蛋白相对表达量升高（P <0.05）,p-P38 MAPK/P38 MAPK蛋白相对表达量降低（P <0.05）;与模型组相比,塞来昔布低、高剂量组EGFR、MMP-9、Caspase-3蛋白相对表达量降低（P <0.05）,p-P38 MAPK/P38 MAPK蛋白相对表达量升高（P <0.05）;与塞来昔布低剂量组比较,塞来昔布高剂量组EGFR、MMP-9、Caspase-3蛋白相对表达量降低（P <0.05）,p-P38 MAPK/P38 MAPK蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 塞来昔布能促进离体人膝骨关节炎细胞增殖,抑制细胞凋亡。其作用可能是通过抑制EGFR表达,促进P38 MAPK通路活化实现的。     

三七总皂苷经miR-24靶向C-myc对骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡与增殖的影响

目的 探讨三七总皂苷经微小RNA-24(miR-24)靶向原癌基因(C-myc)对骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡与增殖的影响。方法 木瓜蛋白酶水溶液注射至大鼠膝关节腔内诱导骨关节炎,分离两侧膝关节骨关节炎软骨;设立骨关节炎软骨细胞组、三七总皂苷低、中、高剂量组(三七总皂苷终浓度分别为：100、200、400μg/ml),于37℃、5%CO2、20% O2培养72h,培养结束后,CCK-8试剂盒测定细胞活力、吉姆萨染色测定菌落水平、流式细胞仪测定细胞凋亡水平、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法与蛋白免疫印迹(WB)法测定miR-24、C-myc mRNA及C-myc蛋白水平。结果 与骨关节炎软骨细胞组比较,三七总皂苷低、中、高剂量组OD值、存活率、细胞菌落数、细胞miR-24 mRNA水平升高(P<0.05),凋亡率、C-myc mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);且随着三七总皂苷剂量的增加,三七总皂苷各剂量组OD值、存活率、细胞菌落数、细胞miR-24 mRNA水平逐渐升高(P<0.05),凋亡率、C-myc mRNA和蛋白水平逐渐降低(P<0.05),呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 三七总皂苷能抑制骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡,促进骨关节炎大鼠软骨细胞增殖;其机制可能与三七总皂苷能靶向上调miR-24 mRNA进而抑制C-myc mRNA和蛋白的表达有关。     

人骨关节炎软骨细胞的体外培养

目的:对人骨关节炎软骨细胞的分离、消化和培养进行初步研究,并就其生物学活性同人正常软骨细胞进行比较和评价。方法:以含血清培养液配制的0.05%和0.2%Ⅱ型胶原酶顺序消化关节软骨分离细胞,检测细胞存活率;体外传代培养观察细胞形态、生长、增殖和Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚集体等的变化,以及用流式细胞仪检测有或无IL-1β诱导的细胞凋亡和周期变化。结果:①消化后骨关节炎组原代细胞活力平均为82%,少于正常组的95%(P<0.01)。②MTT检测骨关节炎组细胞增殖低于正常组(P<0.01),Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝O异染反应均较弱,传至第4代软骨细胞生物学特性基本消失。③骨关节炎组细胞凋亡率为6.9%,而正常组为0.5%,IL-1β诱导后凋亡率增加了27.4%,正常组只有12.7%。结论:酶二步消化法具有较高细胞存活率、低污染率和操作简便等特点,分离培养的骨关节炎软骨细胞符合人患骨关节炎时软骨细胞退变的表现,能很好的为骨关节炎细胞水平的研究提供最佳实验对象。     

丹紫康膝冲剂对大鼠膝骨陛关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的探讨丹紫康膝冲剂对大鼠膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法将健康Wistar大鼠80只随机分为4组,分别为丹紫康膝组,西药组,模型组,正常组。除正常组外,其他组予以改良Hultll造模法造成大鼠膝骨性关节炎模型,于造模6周后对各组进行干预,干预4周后肉眼观察大鼠膝关节大体形态,抽取关节液检测一氧化氮（NO）含量,TUNEL法检测关节软骨细胞凋亡率。结果肉眼观察下见模型组造模膝关节软骨明显退变,局部溃疡,关节边缘增生,正常组膝关节软骨光滑润泽,丹紫康膝组和西药组可见造模膝关节有新生软骨生成;膝关节滑膜液NO含量正常组较其余3组低（P〈0．05）,丹紫康膝组和西药组NO含量较模型组低（火0．05）;丹紫康膝组和西药组细胞凋亡率明显低于模型组（P〈0．05）,丹紫康膝组、西药组、模型组细胞凋亡率均较正常组高（P〈0．05）。结论丹紫康膝冲剂能降低大鼠膝关节关节液NO含量．从而抑制由N0介导的关节软骨细胞凋亡。     

消肿方对骨关节炎家兔软骨细胞凋亡及同源细胞群数量的影响

目的观察消肿方对兔骨关节炎软骨细胞凋亡及同源细胞群数量和BCL-2阳性细胞百分比的影响。方法取新西兰大耳白兔复制膝关节骨关节炎模型,连续灌胃给药治疗28d后处死动物,取膝关节软骨镜下观察软骨细胞形态、计数同源细胞群数量,原位缺口末端标记法检测骨关节炎动物模型软骨细胞凋亡,免疫组化检测BCL-2阳性细胞并计算其百分比。结果骨关节炎动物模型软骨细胞发生过度凋亡、同源细胞群下降及BCL-2阳性细胞百分比下降,消肿方能抑制软骨细胞凋亡,升高同源细胞群数量及BCL-2阳性细胞百分比。1. 在软骨同源细胞群数量方面：模型组降低,在治疗早期（4周）,消肿方由低剂量组到中剂量组增加时,其升高幅度加大,除高剂量治疗组由4周延长至8周时,其增加不明显外,其余各组随时间延长,出现同源细胞群数量明显增加。2. 在软骨细胞凋亡指数（AI）方面：治疗后,AI下降,而且随中药剂量增大,其下降幅度加大,空白组AI在12周时明显升高,模型组和阳性对照组AI在8周时明显升高,超过8周后,升高不明显,治疗后,AI下降,在各剂量治疗组,随治疗时间延长时,其下降幅度加大。3. 在软骨细胞BCL-2阳性细胞百分比方面：模型组百分比最低,经治疗后,百分比逐渐升高,随中药剂量增大,其升高幅度加大,随时间延长,各组百分比均明显升高。结论消肿方可抑制骨关节炎动物模型软骨细胞凋亡,升高同源细胞群数量及BCL-2阳性细胞百分比。     

大蒜素对人膝骨关节炎软骨细胞增殖与凋亡的影响及机制研究

目的研究大蒜素(Allicin)对人膝关节炎软骨细胞增殖与凋亡的影响并探索其机制。方法取严重创伤需截肢患者和膝骨关节炎行膝关节置换患者的膝关节软骨,无菌分离并体外培养软骨细胞。设正常对照组、模型组和大蒜素低(5 mg/L)、中(10 mg/L)、高(20 mg/L)剂量组。药物干预48 h后,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡水平和周期分布,ELISA法检测培养液一氧化氮(NO)、前列腺素E_2(PGE_2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6),Western blot电泳法检测p65、IκBα、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P27、激活型半胱氨酸蛋白酶-3 (Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶1 (MMP-1)、基质金属蛋白酶13 (MMP-13)表达。结果与模型组比较,大蒜素中、高剂量组细胞增殖率显著升高且凋亡率降低(P0.01),G0/G1期细胞比例降低(P 0.01),培养液中NO、PGE_2、TNF-α、IL-6水平降低(P0.05,P 0.01),IκBα、cyclin D1表达上调且p65、P27、Cleaved Caspase-3、MMP-1、MMP-13表达下调(P 0.01)。结论大蒜素具有促进人膝关节炎软骨细胞增殖并抑制其凋亡的作用,可能与抑制NF-κB炎症通路、调控细胞周期和凋亡相关蛋白表达有关。     

骨关节炎患者软骨细胞的体外培养技术

目的 探索骨关节炎患者软骨细胞的分离和培养技术.方法 用关节镜采集10位骨关节炎患者膝关节非负重部位退变部分软骨组织.以0.2%Ⅱ型胶原酶及0.25%胰蛋白酶联合消化分离关节软骨细胞,体外培养观察骨关节炎患者软骨细胞形态、生长以及增值情况.结果 Ⅱ型胶原酶胰蛋白酶联合消化软骨可成功分离软骨细胞,骨关节炎患者软骨细胞增殖缓慢,Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝异染反应均较弱.结论 Ⅱ型胶原酶胰蛋白酶联合消化分离骨关节炎患者软骨细胞的技术简单且易操作,分离培养的软骨细胞符合骨关节炎患者软骨退变的表现,可为骨关节炎的体外诊疗研究提供实验基础.     

环巴胺对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察Hedgehog(Hh)信号通路抑制剂环巴胺对体外培养的佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞增殖和凋亡的影响.方法 SD大鼠足趾皮内注射弗氏完全佐剂制备AA模型(模型组),对照组足趾皮内注射等量生理盐水;观察继发侧足肿胀,28 d后,HE染色评价踝关节形态学变化;胰酶-胶原酶消化培养AA大鼠软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,CCK-8法检测环巴胺处理对AA大鼠软骨细胞增殖的影响,Hoechst 33258检测环巴胺对AA大鼠软骨细胞凋亡影响,Western blot法检测AA大鼠软骨细胞中Hh信号通路相关蛋白(Shh、Ptch1、Gli1)的表达情况.结果 第12天,AA大鼠继发侧关节肿胀明显,HE染色表明AA大鼠踝关节破坏明显;Ⅱ型胶原和甲苯胺蓝染色证实成功培养AA大鼠软骨细胞;不同剂量的环巴胺可促进AA大鼠软骨细胞增殖,抑制其凋亡,降低Shh、Ptch1、Gli1 蛋白表达.结论 环巴胺可促进AA大鼠软骨细胞的增殖,抑制其凋亡,其机制与抑制AA大鼠软骨细胞Hh信号通路有关.     

兔关节软骨细胞的体外培养及凋亡相关基因在传代细胞中的表达

目的验证体外Ⅱ型胶原酶消化法培养兔软骨细胞的可行性,探讨凋亡及抗凋亡基因在软骨细胞传代中的变化,寻找关节软骨退变老化研究的最适宜靶细胞。方法在无菌条件下取6周龄新西兰大白兔双侧膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法分离关节软骨细胞并进行原代、传代培养;形态学观察时采用甲苯胺蓝染色法对关节软骨细胞进行鉴定;RT-PCR法检测P0~P4代软骨细胞烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）、信息沉默因子1（Sirt1）、p53、Bax基因的mRNA相对表达量,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各代关节软骨细胞增殖情况。结果显微镜下观察兔原代软骨细胞大多呈透亮椭圆形、短梭形、多角形特征,72h全部贴壁生长。甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞细胞质染成浅蓝色,细胞核染成深蓝色;前3代软骨细胞表型稳定,增殖力良好;连续培养至P4代后,绝大部分细胞变为长梭形和不规则形状。随着软骨细胞的传代,NAMPT的表达量逐渐下调。与P0代软骨细胞相比,Sirt1的表达量在P1代细胞中明显上调,在P2代细胞急剧下降至P0代以下,在P3~P4代细胞中Sirt1的表达量逐渐下调。凋亡基因p53和Bax的表达量随着软骨细胞的传代而上调。前3代软骨细胞增殖差异无统计学意义（均P＞0.05）;在培养到第4~7天时,P1~P3代与P4代软骨细胞增殖差异有统计学意义（P＜0.05）。结论采用体外Ⅱ型胶原酶消化法培养兔关节软骨细胞是切实可行的。随着软骨细胞的传代,抗凋亡基因NAMPT、Sirt1的表达逐渐下调,凋亡基因p53、Bax的表达逐渐上调。P1~P3代关节软骨细胞作为研究关节软骨凋亡的细胞体系是合适的。     

周期蛋白D1基因沉默对骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡与增殖的影响

目的 研究周期蛋白D1(Cyclin D1)表达沉默对骨关节炎(OA)软骨细胞的增殖和凋亡的影响。方法 从健康的成年大白鼠分离软骨细胞,并进行人工培养。采用甲苯胺蓝染和Ⅱ型胶原免疫组化筛选软骨细胞。构建表达Cyclin D1-siRNA的质粒。在软骨细胞中通过IL-1 β诱导产生OA模型。软骨细胞被分为:空白控制组,IL-1 β诱导组(OA模型组),IL-1 β诱导实验组(OA实验组,Cyclin D1-siRNA转染),IL-1 β诱导的阴性控制组(OA阴性控制组,阴性转染)。每组细胞培养了24 h、48 h、72 h、96 h,且用细胞计数试剂盒量化细胞增殖。用流式细胞术检测细胞周期与凋亡。用qRT-PCR和Western blotting检测细胞中Cyclin D1、mRNA和蛋白质的表达。结果 细胞增殖测定结果表明,相较于培养了24 h的软骨细胞,72 h和96 h的软骨细胞增殖速度更加显著。和空白控制组相比,培养72 h和96 h的OA模型组、OA实验组和OA阴性控制组的细胞增殖速度显著下降。OA模型组细胞增殖在48 h、72 h和96 h显著低于OA实验组、OA阴性控制组。流式细胞术表明,相比较于空白控制组,OA模型组、OA实验组、OA阴性控制组中细胞凋亡率更高。相比较于OA模型组和OA阴性控制组,OA实验组细胞凋亡率增加。相关Cyclin D1 mRNA和蛋白质表达,在OA实验组中,显著低于空白控制组、OA阴性控制组和OA模型组。结论 Cyclin D1基因表达沉默能够抑制OA软骨细胞的增殖和增强OA软骨细胞的凋亡。      

三七总皂苷经miR-24靶向C-myc对骨关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡与增殖的影响

目的探讨三七总皂苷经微小核糖核酸-24(miR-24)靶向原癌基因(C-myc)对骨关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡与增殖的影响。方法木瓜蛋白酶水溶液注射至SD大鼠膝关节腔内诱导大鼠骨关节炎,分离模型大鼠两侧膝关节骨关节炎软骨;实验设骨关节炎软骨细胞组、三七总皂苷低、中、高剂量组(三七总皂苷终浓度分别为:100、200、400μg/mL)四组,于37℃、5%CO_2、20%O_2培养72h,培养结束后,采用CCK-8测定软骨细胞活力,吉姆萨染色测定软骨细胞菌落数,流式细胞仪测定软骨细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(Western bolt)法测定软骨细胞miR-24、C-myc mRNA及C-myc蛋白表达水平。结果与骨关节炎软骨细胞组比较,三七总皂苷低、中、高剂量组OD值增加[(0.73±0.04)、(0.84±0.01)、(0.92±0.04)比(0.66±0.06),P均0.05],存活率升高[(69.65±6.41)%、(82.54±5.35)%、(94.21±2.41)%比(54.56±7.53)%,P均0.05],细胞菌落数升高[(71.65±6.54)个、(83.41±8.14)个、(95.56±7.43)个比(58.23±6.54)个,P均0.05],细胞miR-24 mRNA表达上调[(2.15±0.35)、(3.54±0.31)、(4.76±0.37)比(1.14±0.20),P均0.05],凋亡率降低[(6.71±0.26)%、(4.65±0.25)%、(3.10±0.38)%比(8.22±0.34)%,P均0.05],C-myc mRNA表达下调[(4.53±0.37)、(2.59±0.45)、(0.89±0.38)比(5.24±0.45),P均0.05],蛋白表达量降低[(3.47±0.41)、(2.49±0.50)、(1.21±0.82)比(5.54±0.63),P均0.05];随着三七总皂苷剂量的增加,三七总皂苷各剂量组OD值增加,存活率、细胞菌落数增加,细胞miR-24 mRNA表达上调,凋亡率降低,Cmyc mRNA表达下调,蛋白表达量降低(P均0.05),呈剂量依赖性(P0.05)。结论三七总皂苷能抑制骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡,促进骨关节炎大鼠软骨细胞增殖;其机制可能与靶向上调miR-24 mRNA进而抑制C-myc mRNA和蛋白表达有关。     

分析马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响

目的分析马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响情况。方法通过使用硝普钠(SNP)方式制作出兔膝骨关节炎模型,数量为80例。将其分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组不做任何处理,低、中、高剂量组分别使用不同剂量的马钱子处理,观察对软骨细胞凋亡和增殖的相关影响。结果对照组凋亡率最高,随着马钱子剂量的提升,凋亡率显著降低。同时细胞增殖OD值也随着马钱子剂量提升而提升,差异均显著(P0.05)。结论马钱子能够明显降低关节炎软骨细胞的凋亡并提升细胞增殖效率,有较高应用价值。     

中药调节兔膝骨关节软骨代谢作用的研究

目的研究中药对软骨细胞活性及代谢反应的调节规律,探讨中药治疗骨关节炎的作用机理。方法从细胞增殖(MTT法)、细胞DNA合成(3H-TdR掺入率)、蛋白多糖的形成(甲苯胺蓝染色)和Ⅱ型胶原的合成(3H-脯氨酸掺入)观察兔膝骨关节软骨细胞代谢变化。结果鹿茸多肽及维骨力对细胞增殖及蛋白多糖合成有促进作用,益气通络方对细胞增殖及蛋白多糖合成起抑制作用。益气通络组、鹿茸多肽组及维骨力组对软骨细胞的增殖有促进作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);鹿茸多肽组及维骨力组对软骨细胞DNA及Ⅱ型胶原的合成有促进作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);益气通络组对软骨细胞代谢起抑制作用(P<0.05)。结论益气通络方阻断分解代谢细胞因子,防止胶原纤维转型而促进细胞增殖;鹿茸多肽促进软骨细胞合成代谢而促进软骨细胞增殖,维骨力保护软骨细胞而促进软骨细胞增殖。     

健骨伸筋汤对大鼠膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨健骨伸筋汤对大鼠膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响.方法 采用改良的Hulth法造模,造模2周后,开始对空白对照组、模型组生理盐水灌胃;对照组壮骨关节丸灌胃;治疗组分低、高浓度进行中药灌胃,第13周处死,通过免疫组化、TUNEL法检测软骨细胞的增殖与凋亡.说明健骨伸筋汤可以通过调节软骨细胞的增殖与凋亡防治骨关节炎.结果 健骨伸筋汤方含药血清各浓度组的软骨细胞增殖指数值明显高于对照组及模型组(P＜0.05),软骨细胞凋亡率明显低于对照组及模型组(P＜0.05).结论 健骨伸筋汤可以促进软骨细胞的增殖,还可以抑制软骨细胞异常凋亡,从而起到防治骨关节炎的作用.     

兔膝骨关节炎关节软骨细胞凋亡的实验研究——超微结构观察

目的 为探讨骨关节炎关节软骨退变的发生机理。方法 按照Hulth法建立兔膝关节炎模型实验组，12只实验兔随机分为2组，每组6只，自身健侧做实验对照组，分别为建模后2周组和4周组后取材，分别制作光镜电镜标本进行系统观察研究。结果 不同时期的骨关节炎关节软骨有程度不一的软骨细胞凋亡，以4周组最为显著，特别是在电镜下软骨细胞凋亡的形态学改变更具特征、更为典型。结论 (1)膝骨关节炎的关节软骨细胞退变时，软骨细胞数目的减少有软骨细胞凋亡的参与。(2)关节软骨退变的程度与软骨细胞数目的减少即与软骨细胞凋亡的程度有关。(3)形态学的特征性表现可作为判断软骨细胞是否发生凋亡的“金指标”。     

Toll样受体4表达与膝骨关节炎软骨细胞凋亡的关系

目的:探讨Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)表达与人膝骨关节炎软骨细胞凋亡的关系,明确TLR4介导的信号通路在骨关节炎发病机制中的作用。方法:取骨关节炎晚期行膝关节置换的关节软骨,剪碎后,采用酶消化法消化细胞,将处于对数生长期第3代细胞随机分为ZVF组、喜树碱对照组和阴性对照组,培养4周后,TUNEL法测定各组细胞凋亡情况,然后采用免疫组化染色和蛋白质印迹测定软骨细胞的TLR4蛋白表达。将软骨细胞随机分为对照组和TLR4抑制剂组,采用流式细胞仪和Caspase-3试剂盒测定两组细胞的凋亡情况。结果:用凋亡抑制剂ZVF和凋亡诱导剂喜树碱刺激体外培养的膝骨关节炎软骨细胞,培养4周后,蛋白质印迹结果显示喜树碱组TLR4蛋白表达最多,阴性对照组其次,ZVF组较阴性对照组的TLR4蛋白表达明显降低。免疫组化染色可见喜树碱组TLR4染色阳性细胞基本充满视野,荧光强度强;而阴性对照组可见一定数量染色阳性细胞,荧光强度一般;ZVF组只可见少量染色阳性细胞,荧光强度弱。流式细胞术结果显示TLR4抑制剂组软骨细胞凋亡率明显低于正常对照组;Caspase-3活化度检测结果同流式细胞术结果一致。结论:凋亡软骨细胞较正常软骨细胞的TLR4表达增加,而阻滞TLR4信号传导通路能有效抑制软骨细胞的凋亡。TLR4信号通路参与了软骨细胞的凋亡,在骨性关节炎的发病及进展中起着重要作用。     

益气养血方抗兔膝骨关节炎模型软骨退变的作用及机制研究

目的探讨益气养血方对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞凋亡及血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅱ型胶原蛋白(COL-Ⅱ)、人基质金属蛋白酶-13(MMP13)表达的影响,揭示其抗骨关节炎软骨退变的作用及机制。方法 40只日本大耳白兔随机分为4组,即假手术组、KOA模型组、阳性药(双醋瑞因)组、益气养血方组各10只。石蜡切片HE染色观察软骨退变情况,TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化检测COL-Ⅱ、MMP13的表达。结果益气养血方对KOA模型兔膝关节软骨退变具有一定抑制作用,能下调血清促炎细胞因子TNF-α产生水平(P0.05),抑制软骨细胞凋亡;能下调软骨组织MMP-13蛋白的表达(P0.01),上调软骨组织COL-Ⅱ胶原的表达(P0.05),抑制软骨基质降解。结论益气养血方通过下调TNF-α、MMP-13蛋白表达,同时上调COL-Ⅱ胶原表达,抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,可能是益气养血方治疗骨关节炎的作用机制之一。     

关节软骨细胞线粒体功能障碍与软骨退变的关系

目的:探求骨关节炎患者软骨细胞中线粒体功能状况及线粒体功能与软骨退变的关系.方法:收集2012年4月至10月在北京大学第一医院因骨关节炎(osteoarthritis,OA)行膝关节置换术患者的关节软骨10例.根据Outerbridge分级对所取软骨组织进行透射电子显微镜观察.获取正常及OA软骨细胞,用透射电子显微镜观察2组软骨细胞线粒体形态.定量检测正常及OA软骨细胞线粒体呼吸链复合体酶1,2,2+3,4及ATP合酶活力,用JC-1法检测2组软骨细胞线粒体膜电位.获取10例正常软骨细胞并将其分为正常对照组和鱼藤酮处理组,比较2组细胞线粒体超微结构、线粒体膜电位、细胞凋亡及Ⅱ型胶原含量.结果:软骨组织块及软骨细胞电子显微镜均发现病变的软骨细胞线粒体发生肿胀,外膜破裂,嵴破坏、消失.OA软骨细胞线粒体膜电位下降,红绿荧光比为1.50,较正常细胞(2.58)低.OA软骨细胞呼吸链复合酶1,2,2+3,4及ATPase活力都较正常组低,但差异无统计学意义(P =0.109,0.197,0.098,0.169,0.145).鱼藤酮处理的细胞线粒体出现类似于OA软骨细胞的形态变化.JC-1法示正常软骨细胞红绿荧光比为2.58;鱼藤酮组细胞为1.78.细胞凋亡检测示正常软骨细胞凋亡率为4.38％,鱼藤酮组细胞为7.53％.正常软骨细胞Ⅱ型胶原含量为(72.9±24.3) μg/L,鱼藤酮组为(44.63±7.11)μg/L,较正常组低(P =0.044).结论:OA软骨细胞中存在线粒体功能障碍,破坏软骨细胞线粒体功能会导致软骨细胞凋亡率增加,分泌Ⅱ型胶原的能力下降,从而促进软骨退变.