Bioactivity identification of anti-hMIF monoclonal antibody and its protective effec on sepsis mice

目的 对制备的人巨噬细胞移动抑制因子(anti-human macrophage migration inhibitory factor,hMIF)单克隆抗体进行生物学活性鉴定,并研究其对脓毒症小鼠的保护作用.方法 通过ELISA、Western blot、免疫组织化学等方法鉴定抗MIF单克隆抗体F11的亚类、抗体亲和力及特异性;通过一氧化氮(nitric oxide,NO)释放抑制试验和异构酶活性抑制试验,鉴定F11抗体的生物学活性;选用C57 BL/6J小鼠构建CLP、LPS诱导脓毒症模型,研究F11抗体对脓毒症小鼠生存率的保护作用及对血清细胞因子TNF-α、IL-6的影响.结果 F11抗体亚类为IgG1型,亲和力为2.5×1010,Western blot 及免疫组织化学显示强阳性;F11抗体显著抑制MIF刺激RAW264.7细胞释放NO(P ＜0.01)及MIF异构酶活性(P＜ 0.01);明显提高脓毒症小鼠生存率(CLP模型:P＜0.01,LPS模型:P ＜0.05)且具有剂量依赖关系,并对CLP术后血清TNF-α和IL-6的升高具有明显抑制作用(P＜0.05).结论 成功制备了高特异性、高亲和力、具有异构酶活性抑制作用的抗MIF单克隆抗体,显著提高致脓毒症模型小鼠生存率并降低小鼠血清TNF-α、IL-6水平.     

血清巨噬细胞迁移抑制因子与创伤性脑损伤患者损伤程度及预后的相关性分析

目的 探讨血清巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)与创伤性脑损伤(trau-matic brain injury,TBI)患者损伤程度及预后的相关性.方法 根据格拉斯哥昏迷评分(Glasgow coma scale,GCS)将2019-01/2019-12月作者医院收治的108例TBI患者分为轻度组(n=39、中度组(n=32)和重度组(n=37),选取同期35例在作者医院健康体检者作为对照组.检测入选对象的血清MIF、白细胞计数(white blood cell count,WBC)、白细胞介素6(interleu kin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor a,TNF-α)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平,并对TBI患者进行6个月随访.结果 轻度组、中度组和重度组TBI患者受伤后各时点血清MIF和第二天WBC、IL-6、TNF-α、CRP均高于对照组(P＜0.05);中度组和重度组TBI患者受伤后各时点血清MIF和第二天WBC、IL-6、TNF-α、CRP均高于轻度组(P＜0.05),格拉斯哥预后评分(Glasgow outcome scale,GOS)低于轻度组(P＜0.05);重度组TBI患者受伤后各时点血清MIF和第二天WBC、IL-6、TNFα、CRP均高于中度组(P＜0.05),GOS低于中度组(P＜0.05).预后不良组TBI患者受伤后第二天血清MIF水平高于预后良好组(P＜0.05);MIF与WBC、IL-6、TNF-α、CRP和GOS呈正相关(P＜0.05).预后影响因素logisitic回归分析显示:MIF是TBI患者不良预后的独立危险因素(OR=1.366,P＜0.05);血清MIF水平预测TBI患者不良预后的截止值为28.61 ng/ml,曲线下面积(area under curve,AUC)为0.849 (95％CI:0.766～0.904;P＜0.05),敏感度为77.48％,特异度为65.12％.结论 TBI患者血清MIF水平增高,并与患者炎症、病情严重程度密切相关,血清MIF水平增高是TBI患者预后的独立危险因素,有望作为TBI的临床生物标志物.     

抗巨噬细胞移动抑制因子单抗对结肠炎小鼠结肠NF-κB、IκB表达的影响

目的探讨抗巨噬细胞移动抑制因子单抗对结肠炎小鼠结肠NF-κB p65、IκBα表达的影响。方法采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导制备小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的模型,应用抗MIF单抗干预,观察抗MIF单抗对小鼠UC发病的干预作用。该实验分为正常对照组、UC模型组、抗MIF单抗干预组和生理盐水组。造模及药物干预期间观察小鼠一般情况并行疾病活动指数(DAI)评分,第8天断颈处死全部小鼠,行结肠大体损伤评分,HE染色光镜下观察结肠病理改变,免疫组化染色观察NF-κB p65、IκBα在结肠组织炎症细胞的表达情况。结果与正常组相比,UC模型组中NF-κB p65的表达显著增加,而IκBα的表达稍增加,在抗MIF单抗治疗后,NF-κB p65的水平明显低于UC模型组,并且IκBα含量增高。结论抗MIF单抗对DSS诱导的急性UC的小鼠具有保护作用,减低了小鼠结肠组织NF-κB p65的表达水平,提高IκBα的表达水平,从而达到抑制UC小鼠结肠组织NF-κB通路的过度激活的作用。     

巨噬细胞移动抑制因子在伴高脂血症性急性坏死性胰腺炎大鼠发病中的变化

目的 复制伴高脂血症性急性坏死性胰腺炎(HAP)大鼠模型,观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在HAP发病中的变化.方法 50只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组(C组,n=5)、胰腺炎组(ANP组,n=15)、高脂组(HL组,n=15)、伴高脂血症性胰腺炎组(HAP组,n=15),采用高脂饲料喂养4周复制大鼠高脂血症模型,采用逆行胰胆管注射3.5％牛磺胆酸钠复制胰腺炎模型,于术后4、9和24h各处死5只大鼠,观察胰腺组织病理改变并评分,检测血清淀粉酶(Amyl)及三酰甘油(TG)水平,ELISA法测定血清MIF及TNF-α水平.结果 高脂饲料组大鼠的血清TG水平明显高于基础饲料组(P＜0.01) ;与C组相比,ANP组和HAP组各时点的血清Amyl、MIF、TNF-α水平及胰腺组织病理学评分均明显升高(P＜0.01或P＜0.05) ;与ANP组相比,HAP组TNF-α水平只在24 h明显升高(P＜0.01) ;HAP组各时点MIF水平与ANP组相比无明显升高(P＞0.05) ;ANP组和HAP组胰腺组织病理学评分与血清MIF、TNF-α水平均呈正相关(P＜0.05).结论 HAP发病早期血清MIF表达增加,提示MIF参与了HAP的发生发展过程.     

姜黄素对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的保护作用

目的观察姜黄素对葡聚糖硫酸钠(DSS)所致小鼠溃疡性结肠炎(UC)的保护作用。方法采用DSS制备UC小鼠模型,将BALB/c小鼠50只,随机分为5组:正常组A、模型组B、地塞米松组C(1.5mg/kg·d)、姜黄素低剂量组D(15mg/kg·d)、姜黄素高剂量组E(60mg/kg·d),每组10只。7d后,进行组织学损伤评分,并检测结肠组织中IL-1、TNF-α含量及TNF-αmRNA表达。结果 D组的组织学损伤评分、结肠组织中IL-1、TNF-α含量及TNF-αmRNA的表达均高于C组及E组,差异有统计学意义(P<0.05);C组与E组差异无统计学意义(P>0.05)。结论高剂量姜黄素能降低小鼠组织学评分,降低结肠组织IL-1、TNF-α的含量,降低结肠黏膜TNF-αmRNA的表达,对溃疡性结肠炎具有保护作用。     

抗hMIF单克隆抗体的活性鉴定及其对脓毒症小鼠的保护作用

目的对制备的人巨噬细胞移动抑制因子(anti-human macrophage migration inhibitory factor,hMIF)单克隆抗体进行生物学活性鉴定,并研究其对脓毒症小鼠的保护作用。方法通过ELISA、Western blot、免疫组织化学等方法鉴定抗MIF单克隆抗体F11的亚类、抗体亲和力及特异性;通过一氧化氮(nitric oxide,NO)释放抑制试验和异构酶活性抑制试验,鉴定F11抗体的生物学活性;选用C57BL/6J小鼠构建CLP、LPS诱导脓毒症模型,研究F11抗体对脓毒症小鼠生存率的保护作用及对血清细胞因子TNF-α、IL-6的影响。结果 F11抗体亚类为IgG1型,亲和力为2.5×1010,Western blot及免疫组织化学显示强阳性;F11抗体显著抑制MIF刺激RAW264.7细胞释放NO(P<0.01)及MIF异构酶活性(P<0.01);明显提高脓毒症小鼠生存率(CLP模型:P<0.01,LPS模型:P<0.05)且具有剂量依赖关系,并对CLP术后血清TNF-α和IL-6的升高具有明显抑制作用(P<0.05)。结论成功制备了高特异性、高亲和力、具有异构酶活性抑制作用的抗MIF单克隆抗体,显著提高致脓毒症模型小鼠生存率并降低小鼠血清TNF-α、IL-6水平。     

巨噬细胞移动抑制因子、肿瘤坏死因子α在强直性脊柱炎中的表达及临床意义

目的探讨血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、肿瘤坏死因子α(TNF-ɑ)在强直性脊柱炎(AS)中的表达及临床意义。方法选择2009年1月至2012年12月在深圳市罗湖区人民医院风湿科门诊及住院治疗的AS患者40例,依据Bath AS活动指数分为活动期组30例,静止期组10例,另外选取体检中心健康自愿者30例作为正常对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述受试者血清MIF及TNF-ɑ水平,并进行比较。结果活动期组患者血清MIF及TNF-α水平显著高于正常对照组及静止期组(P<0.05);按骶髂关节CT结果Ⅰ、Ⅱ级AS患者血清MIF及TNF-α水平显著高于正常对照组(P<0.05),AS患者血清MIF和TNF-α水平与红细胞沉降率、C反应蛋白呈正相关(P<0.05)。结论 MIF和TNF-α在AS患者活动期高表达,提示其可能参与AS慢性进展性炎症的过程。     

血清巨噬细胞移动抑制因子、肿瘤坏死因子-α与糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨血清巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor alpha,TNF-α)浓度在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)正常尿蛋白组及糖尿病合并肾病(diabetic nephropathy,DN)患者中的变化及其临床意义。方法将97例T2DM患者根据尿蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAER)分为正常尿蛋白组(A组,31例)、微量尿蛋白组(B组,35例)、大量尿蛋白组(C组,31例),取30例健康体检者作为对照组(D组),ELLSA方法检测各组血清MIF、TNF-α浓度,同时检测患者空腹血糖(fasting plasma glucose,FBG)、糖化血红蛋白(glycosylatedhemoglobin,HbA1c)、三酰甘油(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL-C)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL-C)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)肌酐(serum creatinine,Cr)。结果正常尿蛋白组(A组,31例)及糖尿病肾病(B、C)组血清MIF浓度高于正常对照组(P<0.05);糖尿病正常尿蛋白组(A组)与微量尿蛋白组(B组)、大量尿蛋白组(C组)血清MIF浓度差异无统计学意义。糖尿病肾病(B、C)组血清TNF-α高于正常对照组(P<0.05);糖尿病肾病(B、C)组血清TNF-α高于糖尿病正常尿蛋白组(A组)。采用Spearman相关分析,血清MIF与DM病程(r=0.435,P<0.01)、HbA1c(r=0.459,P<0.01)、FBG(r=0.520,P<0.01)、TG(r=0.256,P<0.05)呈正相关,与HDL-C(r=-0.244,P<0.05)浓度呈负相关;血清TNF-α与尿A/C(r=0.254,P<0.01)、DM病程(r=0.182,P<0.05)呈正相关。Logistic回归分析结果表明,在校正年龄、糖尿病病程、BMI、HbA1c、HDL、Cr等因素后,血清TNF-α与蛋白尿的OR=1.069(95%CI:1.005～1.137,P=0.035),血清MIF浓度与蛋白尿无相关关系。结论 2型糖尿病患者血清TNF-α浓度的变化在糖尿病肾病病程中更敏感,临床上可参考血清TNF-α浓度或同时检测血清MIF与TNF-α浓度,来判断糖尿病肾脏的损伤程度。     

冬凌草甲素对小鼠溃疡性结肠炎内质网应激的作用研究

目的 探讨冬凌草甲素对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的结肠上皮组织内质网应激(ERS)的影响.方法 利用葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠UC模型组,设置冬凌草甲素及柳氮磺胺吡啶干预组;测定疾病活动指数(DAI),对结肠组织速行病理形态学评分(HPS),RT-qPCR检测结肠上皮组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子EBP同源蛋白(CHOP)、激活性转录因子6(ATF6)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及肌醇酶1α (IRE1α)mRNA表达变化.结果 与健康小鼠相比,模型组结肠上皮组织中TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、ATF6、CHOP、PERK及IRE1α mRNA表达均明显上调(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,冬凌草甲素干预组DAI与HPS均明显下降(P＜0.05,P＜0.01),疗效与柳氮磺胺吡啶干预组相当(P＞0.05,P＜0.01),除IER1α mRNA外,TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、CHOP、ATF6及PERK mRNA表达水平均明显下调(P＜0.05,P＜0.01).结论 冬凌草甲素能减轻DSS诱导小鼠结肠炎症,其机制可能与其调节结肠上皮组织ERS有关.     

巨噬细胞移动抑制因子在溃疡性结肠炎发病中的作用

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在溃疡性结肠炎发病中的意义.方法 检测38例活动期溃疡性结肠炎(UC,其中轻度10例,中度20例,重度8例) 、 23例其他结肠炎患者和20例健康体检者血清中MIF及超敏C反应蛋白(hs-CRP)含量及肠黏膜组织中MIF的表达情况.结果 UC患者的血清MIF水平高于其他结肠炎及正常对照者的血清MIF水平(P＜0.05);溃疡性结肠炎重度组的MIF水平高于轻度组[(12.204±2.340)μg/L vs (9.060±1.444)μg/L,P<0.05].溃疡性结肠炎重度组的hs-CRP水平高于轻度组[(9.002±1.538)μg/L vs (3.556±1.283)μg/L,P＜0.05].UC患者肠黏膜的MIF表达率为100% 、染色明显增强,与其他结肠炎患者及正常对照者比较均具有显著性差异(P＜0.01).结论 MIF参与溃疡性结肠炎的发病过程,可能是溃疡性结肠炎活动的指标,控制MIF的产生可能有治疗作用.     

巨噬细胞移动抑制因子在肿瘤发生中的作用

巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是一种炎性因子,参与了肿瘤发生发展的多个方面,包括肿瘤的增殖、扩散和肿瘤血管的生成。文中对MIF与肿瘤关系的最新研究进展进行综述。     

孕酮对离体在位及异位子宫内膜细胞巨噬细胞移动抑制因子分泌的影响

目的:探讨孕酮对离体在位及异位子宫内膜细胞巨噬细胞移动抑制因子(MIF)分泌的影响。方法:采用 ELISA方法,检测10μmol/L、0.1μmol/L孕酮作用24h后,体外培养的在位及异位子宫内膜细胞上清液中MIF水 平。结果:与空白组比较,高、低浓度孕酮作用24h后的在位及异位子宫内膜细胞MIF分泌量减少;异位内膜组的 下降程度大于在位内膜组(P<0.01);高浓度孕酮作用强于低浓度孕酮组(P<0.05)。结论:孕酮对子宫内膜细胞 分泌MIF具有明显抑制作用,对异位内膜分泌能力的抑制作用更为显著。     

巨噬细胞移动抑制因子真核表达载体的构建

目的构建巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)基因真核表达载体。方法通过PCR方法从pAdTrack-CMV质粒中扩增出348 bp的靶片段,将其粘端克隆至pcDNA3.1-(+)真核表达质粒,然后应用限制性酶切、PCR扩增及序列测定等技术进行鉴定。结果成功构建了MIF真核表达载体,酶切及测序证实读码框正确。结论成功克隆MIF真核表达载体,为体内基因治疗勃起功能障碍奠定基础。     

巨噬细胞移动抑制因子在儿童肾小球肾炎中的临床意义

目的：探讨血、尿巨噬细胞移动抑制因子（MIF）水平检测在儿童肾小球肾炎中的临床意义。方法：采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测28例增殖性肾炎（系膜毛细血管性肾炎2例、IgA肾病9例、紫癜性肾炎12例、毛细血管内增生性肾小球肾炎5例）、24例非增殖性肾炎（微小病变18例、膜性肾病1例、局灶节段性肾小球硬化5例）、15例健康对照组儿童血清和尿液MIF水平,进行比较并分析其与24h尿蛋白的关系。结果：增殖性肾炎组尿液MIF水平显著高于非增殖性肾炎组及对照组（均P〈0.01）,非增殖性肾炎组尿MIF水平与对照组差异无显著性（P〉0.05）;三组血MIF水平比较差异无显著性（P〉0.05）。增殖性肾炎组患儿中,肾病蛋白尿组尿MIF高于蛋白尿组（P〈0.05）,两组血MIF水平差异无显著性。24h尿蛋白与尿MIF水平呈显著正相关（P〈0.01）,与血MIF无相关性（P〉0.05）。结论：MIF表达上调可能是儿童增殖性肾炎肾损害的重要机制之一,尿液MIF水平检测在监测肾脏损害方面具有较好的临床实用价值。     

病毒性心肌炎患儿血清MIF IL-6水平的变化

目的探讨VM患儿血清MIF、IL-6水平的变化及临床意义。方法采用ELISA法测定32例急性期和20例恢复期VM患儿血清MIF、IL-6水平,同时检测CK-MB,并与35例健康儿童作对照。结果VM急性期血清MIF、IL-6水平明显高于恢复期及对照组(P<0.01),并与CK-MB呈正相关(P<0.05);VM恢复期MIF、IL-6水平与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论MIF、IL-6可能参与VM的发生、发展,并可作为病情判断及预后的观察指标。     

巨噬细胞游走抑制因子在糖尿病大鼠心肌中的表达及意义

目的检测巨噬细胞游走抑制因子（MIF）在糖尿病大鼠心肌中的表达,探讨其在糖尿病心肌病变中的作用。方法将30只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组（CON组）、糖尿病1个月组（DMI组）和糖尿病2个月组（DM2组）,行腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,免疫组化染色法检测三组心肌中MIF的表达。结果与正常对照组对比,糖尿病模型组大鼠心肌中MIF含量显著增多,且DM2组显著高于DMI组（P〈0．01）。结论随病程进展,糖尿病大鼠心肌中MIF表达逐步增强,MIF参与糖尿病心肌病变的发生发展。     

巨噬细胞移动抑制因子在肾癌中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响.方法 以内蒙古自治区人民医院和包头市肿瘤医院2013年3月至2015年3月病理室确诊的49例肾癌患者为研究对象,采用蛋白质印迹法(West-ern blot)及反转录(RT)-PCR法检测肾癌组织及癌旁正常组织、肾癌细胞株及正常肾小管上皮细胞HK 2中MIF蛋白及mRNA表达;利用脂质体将siRNA MIF及siRNA NC转染到肾癌细胞中,Western blot及RT-PCR检测转染效果,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达.结果 肾癌组织中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(0.89±0.09 vs.0.18±0.02,1.19±0.04 vs.0.19±0.01,P＜0.05),肾癌细胞株ACHN、769-p、786-O、Caki-1中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于肾小管上皮细胞HK-2(P＜0.05).与siRNA NC组比较,siRNA MIF组中MIF蛋白及mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),细胞活力及侵袭能力降低(P＜0.05),HIF-1α及MMP9表达水平下调(P＜0.05).结论 MIF在肾癌中高表达,下调MIF表达能明显抑制肾癌细胞的侵袭能力,可能与抑制HIF-1α/MMP9信号通路有关.     

巨噬细胞移动抑制因子ELISA方法的建立和应用研究

目的建立检测巨噬细胞移动抑制因子含量的ELISA检测法。方法采用方阵滴定法,比较4种封闭液、不同稀释度的捕获抗体、检测抗体和辣根过氧化酶标记链菌素对检测结果的影响,确定ELISA法的最佳实验条件。结果包被用捕获抗体的最适浓度为4mg/L,检测抗体的最适浓度为200mg/L,Streptavidin-HRP的最适稀释度为1∶5000。该方法的检测灵敏度为0.156μg/L,变异系数为7.3%～9.6%,回收率为91.2%～113.6%,与VEGF、TNF-α、IL-6、ICAM-1、胆红素、血红蛋白及甘油三酯均无交叉反应。结论建立的ELISA检测法简便、特异且灵敏,适用于检测血清中的MIF水平。     

巨噬细胞移动抑制因子蛋白在胰腺癌组织表达的临床意义

目的观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在胰腺癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学技术对36例胰腺癌组织中的MIF蛋白表达进行研究。结果胰腺癌组织中的MIF表达率为69.4%(25/36),高于正常胰腺组织表达率0(0/10)。统计学分析显示,MIF蛋白表达与胰腺癌病理分级呈显著相关(P<0.01),与胰腺癌临床分期及有无局部淋巴结转移间无显著相关(P>0.05)。结论MIF蛋白表达有可能与胰腺癌的发生有关。     

巨噬细胞移动抑制因子在大鼠坐骨神经损伤后表达的变化

目的：研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）在大鼠周围神经损伤后的表达变化，探讨MIF在周围神经损伤后再生中的作用。方法：通过核酸印迹杂交的方法了解MIF在神经后表达的变化，并对损伤后4d的神经进行免疫组化分析，观察其表达部位的改变。结果：①MIF在神经损伤后出现空间和时间上的动脉变化。在神经损伤后4d，其MIF表达的部位与正常坐骨神经表达的部位不同。在神经损伤的远端，MIF存在于吞饮髓鞘碎片的雪旺细胞中。而在损伤神经的近端，MIF不仅存在于雪旺细胞中，同时在轴突内也有较高水平。②对神经损伤后AIFmRNA的杂交定量分析显示，在损伤后的12h内，MIF的mRNA水平维持在较低水平，24h的骤然上升至高水平并在1周内维持较高水平，之后回落至正常水平。结论：MIF在周围神经损伤-再生过程中可能起着相当重要的作用。