电针联合腹腔注射氯胺酮对神经源性痛大鼠脊髓神经元凋亡的影响

目的观察电针联合腹腔注射氯胺酮对神经源性痛大鼠的脊髓神经元凋亡的影响，探讨其镇痛机制。方法成年雄性Wistar大鼠30只，体重230—250g，随机分为5组：A组（n=6，正常组）；B组（n=6，对照组）：结扎左侧坐骨神经中段后腹腔注入等量生理盐水；C组（n=6，电针组）：结扎左侧坐骨神经中段后1、3、5、7d电针阳陵泉和足三里，频率2Hz／100Hz，强度≤2mA，30min／次；D组（n=6，氯胺酮组）：结扎坐骨神经后1、3、5、7d向腹腔注入氯胺酮10mg／kg（1mg／ml）；E组（n=6，针药合用组）：针药使用方法同C、D组。并于术后1、3、5、7d分别进行行为学测定，记录缩爪时间。于结扎后7d取L4-6脊髓，采用TUNEL法观察脊髓神经元凋亡。结果与A组相比，B组脊髓神经细胞凋亡指数升高（P＜0．05）；与B组相比，C、D、E组机械性触诱发痛减轻（P＜0．05）；与C组相比，E组机械性触诱发痛显著减轻（P＜0．05），脊髓神经细胞凋亡指数也显著降低（P＜0．05）。结论结扎坐骨神经可引起脊髓神经元的凋亡，并与神经源性痛的发展相一致。针药合用的镇痛效果强于单独使用电针。其对大鼠脊髓的保护作用可能与抑制脊髓神经元凋亡有关。     

微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对大鼠损伤脊髓后IκBα表达的影响及意义

目的探讨微囊化兔坐骨神经组织细胞移植于大鼠损伤脊髓后对其IκBα的表达及活性的影响。方法家兔10只用于制备兔坐骨神经组织的胞悬液。成年SD大鼠120只随机分为4组：微囊组（微囊化兔坐骨神经组织细胞移植组，n=36）、细胞组（坐骨神经组织细胞移植组，71—36）、单损组（单纯损伤组，n=36）、假手术组（n=12）。微囊组、细胞组和单损组大鼠在脊髓半横断伤后，立即于损伤处分别植入明胶海绵吸附的10uL微囊化坐骨神经组织细胞、明胶海绵吸附的10uL坐骨神经组织细胞以及明胶海绵吸附的10uL生理盐水。分别于术后6h、12h、24h、3d、7d、14d（每个时相取6只大鼠）取出损伤部位脊髓标本，假手术组（每个时相取2只大鼠）则取相应节段脊髓。石蜡包埋后切片，行免疫组织化学染色观IκBα的表达变化。结果IκBα阳性细胞主要见于神经元细胞及胶质细胞的胞浆内。大鼠脊髓损伤后上述细胞IκBα表达降低，24h降到最低点．3d后表达开始回升，7d逐步恢复正常水平。微囊组与单损组、细胞组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论微囊化兔坐骨神经组织细胞移植于大鼠损伤脊髓后，可以通过抑制IκBα磷酸化降解环节，从而抑制炎症反应。     

丙戊酸钠对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的保护作用

目的:观察丙戊酸钠对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元凋亡及Bcl-2基因表达的影响。方法:采用清洁级SD大鼠30只,行右坐骨神经横形切断后即刻原位吻合术,制成周围神经损伤模型后,随机分为丙戊酸钠口服组(A组)、生理盐水对照组(B组)。分别于术后1,4,7,14,28 d取材,应用TUNEL法检测细胞凋亡数,用免疫组化技术检测脊髓运动神经元Bcl-2的表达,并对脊髓凋亡细胞以及阳性运动神经元进行计数。结果:坐骨神经切断后4,7,14 d,实验组脊髓运动神经元Bcl-2吸光度明显高于对照组(P<0.05);坐骨神经切断后7,14 d,实验组脊髓神经元凋亡率明显低于对照组(P<0.05)。结论:丙戊酸钠对鼠坐骨神经损伤后脊髓神经元具有保护作用。     

环孢素对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的保护作用

目的:通过观察应用环孢素对大鼠坐骨神经切断后脊髓前角运动神经元GAP-43mRNA的表达,研究环孢素对脊髓前角运动神经元的影响。方法:60只大鼠随机分为实验组和对照组,实验组进行环孢素干预,在3、7、14、21、28天,5个不同的时相点各从实验组和对照组中随机抽取6只大鼠,取下脊髓T12-L1节段,脊髓前角GAP-43mRNA的表达用荧光定量RT-PCR检测。结果:对照组GAP-43mRNA第3日呈低表达,第7天表达量增加,第14天表达量达到高峰,第21天表达量下降,第28天表达量接近第3天水平。实验组第3、7和14天表达量与对照组相似,第21和28天表达量较对照组有所提高,经统计学处理,第3、7和14天实验组与对照组比较,差异无显著性(P>0.05),第21天和28天实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:应用环孢素对坐骨神经损伤后脊髓运动神经元有一定的保护作用,可延缓神经元的退变。     

周围神经损伤后脊髓神经元退变与组织型纤溶酶原激活物及其抑制物表达的关系研究

目的：探讨周围神经损伤后脊髓神经元退变与组织型纤溶酶原激活物（tPA）及其抑制物1（PAI-1）、神经丝氨酸蛋白酶抑制剂（NSP）表达的关系。方法：雄性SD大鼠（56只）随机分为实验组（50只）和对照组（6只。无手术）。实验组行坐骨神经离断术（SCNT）,于术后1、4、7、14和21 d取伤侧脊髓L4~6节段,观察前角神经元形态学改变及tPA、PAI-1和NSP表达。结果：与对照组比,实验组L4~6tPA、NSP表达增加,NSP在1 d内达峰值后逐渐下调,tPA水平则在7 d升达最高峰,此时前角外侧核神经元存活率开始减少（P〈0.01）。术后21 d,tPA仍未恢复正常水平（P〈0.05）,脊髓前角运动神经元存活率61.6%。两组脊髓均未测到PAI-1表达。结论：SCNT后L4~6前角神经元退变,可能与损伤刺激脊髓灰质内神经元和小胶质细胞合成、释放tPA增加有关,同时,损伤也促使tPA抑制物NSP表达上调,后者可能发挥神经保护作用。     

大鼠坐骨神经切断模型脊髓背角内PKCγ的变化

目的探讨大鼠坐骨神经切断模型脊髓背角内PKCγ的变化及意义。方法建立大鼠坐骨神经切断模型，在坐骨神经切断后2、5、10、15、20、30、40、60d，取脊髓背角，应用免疫组织化学方法进行染色，图像分析软件测量并比较脊髓背角手术侧和对照侧的免疫强度。结果从第2天开始，手术侧脊髓背角L4～L5节段PKCγ免疫阳性反应较对照侧明显增强，差异有显著性（t=3．12，P＜0．05）；在第15天时免疫阳性反应最强，是对照组的1．89倍（t=4．85，P＜0．01），然后逐渐减弱，2个月后恢复到正常水平（t=0．91，P＞0．05）。结论PKCγ在由神经损伤引起的脊髓背角神经元兴奋性改变中发挥重要作用。     

成年大鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元死亡方式的研究

目的探索成年大鼠坐骨神经切断损伤后脊髓前角运动神经元的死亡方式.方法选择大鼠坐骨神经切断损伤模型,术后48 h、7 d、15 d、30 d动物经4%多聚甲醛常规灌注固定,取L4～L6脊髓节段,TUNEL染色和电镜观察.结果坐骨神经切断后TUNEL染色和电镜观察均检测到脊髓前角运动神经元典型的凋亡形态学改变.结论周围神经切断后脊髓前角运动神经元出现凋亡,表明神经元的凋亡可能为成年大鼠周围神经损伤引发神经元死亡的重要病理过程.     

缝线粘附重组pcDNA3-GDNF-GFP质粒对周围神经损伤后神经元保护的实验

目的 研究周围神经损伤后新的修复方法和胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用.方法 50只雌性Wistar大鼠制成右侧坐骨神经缺损动物模型,随机分为实验组和对照组.实验组使用粘附pcDNA3-GDNF-GFP的缝线,对照组使用粘附pcDNA3的缝线进行坐骨神经的缝合修复.术后1周、8周使用激光共聚焦显微镜检测GDNF在脊髓神经元的表达;术后12周行脊髓神经元尼氏染色和右侧坐骨神经电生理检查.结果 实验组神经元有绿色荧光表达,证明转染成功;尼氏染色发现神经元数目多于对照组,实验组神经的传导速度、动作电位的峰值及潜伏期分别是19.82±1.90 m/s、3.47±0.32 mV、0.36±0.03 ms,明显高于对照组.结论 使用携pcDNA3-GDNF-GFP重组质粒的缝线修复损伤的周围神经,可以对脊髓神经元产生营养保护作用并促进周围神经的再生.     

银杏酮酯对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子蛋白表达的影响

目的研究银杏酮酯对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子（nerve growth factor，NGF）蛋白表达的影响。方法SD大鼠78只，随机分成正常组、损伤对照组与实验组，后两组切断右侧坐骨神经并缝合。实验组给予银杏酮酯每日200mg／kg溶于1mL生理盐水中灌胃，损伤对照组给予生理盐水1mL灌胃，正常组不做处理。分别于术后1、3、7、14、21及28d取吻合口远段的神经、相应节段的脊神经节及脊髓，应用免疫组织化学和图像分析的方法研究所取组织中NGF的表达并进行定量分析。结果实验组坐骨神经、脊神经节及脊髓中NGF蛋白免疫阳性区域面积和平均灰度值在术后7、14、21和28d明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。结论大鼠坐骨神经损伤后用银杏酮酯治疗，在早期可促使坐骨神经及相应节段脊神经节和脊髓组织中的NGF蛋白表达增加。     

大鼠坐骨神经切断后相应脊髓节段中GAP-43表达的变化

目的 探讨成年Wister大鼠在坐骨神经切断后GAP-43于相应脊髓节段前角运动神经元内的表达变化.方法 选取健康成年雄性Wister大鼠60只,随机分为坐骨神经切断组和对照组,分别于术后1、2、4、8、12、16周处死后取其L4～L6脊髓,利用免疫组织化学技术检测GAP-43在相应脊髓节段中的表达变化,并利用影像分析系统进行统计学分析.结果 在对照组中GAP-43表达呈阴性,随着时间的变化无明显改变.坐骨神经切断组与对照组在不同时相中的变化:1周时对照组中胞体内GAP-43有明显表达,2周达到高峰,4～8周时呈下调趋势,9～16周时GAP-43在神经元中仍有表达.结论 坐骨神经切断可导致成年大鼠相应脊髓阶段中前角运动神经元GAP-43表达明显增加,表明周围神经损伤后,神经元的再生能力增强,但并不能长时间持续.     

鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠的影响及可能机制

目的评价鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对神经病理性疼痛大鼠行为学的影响,以及脊髓背角C—Jun氨基末端蛋白激酶（JNK）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）蛋白表达的影响。方法取鞘内置管成功的健康雄性sD大鼠120只,随机分为对照组（C组）、假手术组（S组）、神经病理性疼痛组（P组）和GDNF治疗组（G组）,每组30只。P组和G组采用结扎大鼠右侧坐骨神经建立坐骨神经慢性压迫损伤（chronicconstric—tioninjury,CCI）模型。C组不给予任何处理;S组只暴露坐骨神经,但不结扎;P组鞘内注射生理盐水10叫,隔日1次,连续14天;G组鞘内注射GDNF2I,zg,用生理盐水稀释至10μl,隔日1次,连续14天。各组大鼠分别于处理前及处理后3、7、14天测定热刺激缩足反射潜伏期（pawwithdrawthermallatency,PWTL）和机械刺激缩足反射阂值（pawwithdrawalmechanicalthreshold,PWMT）,然后每组取10只大鼠处死,取L4-6脊髓背角,采用Westernblot法测定磷酸化JNK（P—JNK）蛋白和磷酸化ERK（P—ERK）蛋白的表达水平。结果与C组比较,P组和G组PWTL和PWMT均缩短,脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达上调（P〈0．05）;与P组比较,G组PWTL和PWTL均延长,脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达下调（P〈0．05）。结论鞘内注射GDNF可以通过抑制脊髓背角P—JNK蛋白及P—ERK蛋白的表达减轻大鼠神经病理性疼痛。     

He-Ne激光照射对大鼠神经损伤后脊髓CGRP表达的影响

目的 研究１０mW氦氖（Ｈe-Ne)激光照射对大鼠坐骨损伤神经后脊髓ＣＧＲＰ表达的影响。方法 ９６只ＳＤ大鼠制成坐骨神经损伤模型。Ｈe-Ne激光照射损伤的坐骨神龙,免疫组化方法观察脊髓内ＣＧＲＰ的变化。结果 神经损伤后１d脊髓内ＣＧＲＰ表达即增加;载wk及４wk时激光照射组ＣＧＲＰ的表达高于对照组,阳性表达主要存在于脊髓灰质内前角运动神经元和脊根感觉纤维;８wk时ＣＧＲＰ仍保持较高水平的表达,二组无明显差异。结论 １０mW-He-Ne激光照射大鼠损伤的坐骨神经可引起脊髓内神经元ＣＧＲＰ表达的变化,有促进完成神经再生的作用。     

大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤后脊髓背角感觉神经元超微形态学变化

目的观察大鼠坐骨神经慢性压迫损伤后脊髓背角浅层神经元超微形态变化。方法成年雄性SD大鼠20只,随机分为jE常组和手术组。手术组结扎大鼠左侧坐骨神经建立坐骨神经慢性压迫性损伤fCCI）模型,存术后3、7、14d取与坐骨神经相应的腰4—6节段脊髓,透射电镜观察左侧脊髓背角浅层神经元超微结构并摄片,光镜下苏术素伊红染色对大鼠腰4—6脊髓背角两侧感觉神经元计数。结果坐骨神经损伤后,光镜下损伤侧脊髓背角感觉神经元数量较健侧昆著减少（P〈O．05）,两周时细胞死亡率为23％;电镜下CCI7d和14d绀腰4～6节段脊髓左侧背角浅层神经元出现多种形态变化,以细胞凋亡为主？结论坐骨神经损伤后腰4—6节段脊髓背角神经元tP,现丢失,超微形态上呈现多样性,以细胞凋亡为主。     

大鼠坐骨神经损伤后脑源性神经营养因子对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43表达的影响

目的探讨大鼠坐骨神经损伤后内源性脑源性神经营养因子(BDNF)对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43表达的调节。方法大鼠坐骨神经压榨损伤后,腹腔注射BDNF抗体中和内源性BDNF,对照组注射生理盐水,动物存活7d或14d,用Western blot与RT-PCR观察GAP-43在脊髓腰骶膨大部前角的表达。结果与对照组相比,注射BDNF抗体后坐骨神经损伤侧脊髓前角内GAP-43蛋白与其mRNA的表达明显下降,上述改变在统计学上均有显著意义(P<0.01)。结论大鼠坐骨神经损伤后内源性BDNF可能参与脊髓前角内GAP-43表达的调节。     

大鼠坐骨神经损伤后早期脊髓背角小胶质细胞活化状态和活化类型的变化规律

目的 研究坐骨神经损伤后脊髓背角小胶质细胞活化状态和活化类型的变化规律。方法 大鼠随机分为对照组(n=24)、实验组(n=24)。实验组采用结扎坐骨神经主干的方法构建大鼠坐骨神经损伤模型。测量大鼠疼痛行为学数据,于术后第1,7,14天取材,采用免疫荧光染色技术检测大鼠腰段脊髓背角不同激活状态的小胶质细胞变化;通过qRT-PCR验证不同类型小胶质细胞相关标记物的变化趋势。结果 假手术组大鼠在术后14 d内脊髓背角小胶质细胞形态和数量无明显改变,小胶质细胞标记物也无明显变化。术后1 d,CCI大鼠小胶质细胞形态和数量无明显变化,但促炎型(M1型)标记物增加,提示M1型小胶质细胞活化。术后7 d和14 d,CCI大鼠小胶质细胞数量显著增加,标记物检测显示以M1型活化为主,抑炎型(M2型)小胶质细胞活化不明显。结论 大鼠脊髓背角小胶质细胞在坐骨神经损伤后早期即开始活化,活化持续到至少术后两周,在此期间均以M1型小胶质细胞活化为主。     

5-HT3受体在慢性神经病理性疼痛模型脊髓组织中的表达

目的观察慢性神经病理性疼痛大鼠脊髓组织中5-HT,受体的表达变化。方法采用大鼠坐骨神经结扎（慢性压迫性损伤）制备慢性神经病理性疼痛模型。坐骨神经结扎造模后7天,采用测定热缩足反射潜伏期（TWL）和机械缩足反射阀值（MWT）2种行为学方法检测大鼠痛觉闽值变化,免疫组织化学染色法检测大鼠脊髓背角5-HT,受体表达,Westernblot方法检测大鼠脊髓背角中5-HT,受体蛋白水平。结果造模7天后：模型组大鼠的TWL和MWT均低于正常组和假手术组（P〈0．05）,模型组大鼠脊髓背角组织中5-HT,受体表达明显高于正常组和假手术组（P〈0．05）、5-HT,受体蛋白水平高于正常组和假手术组（P〈0．05）。结论在慢性神经病理性疼痛中,脊髓背角组织中5-HT,受体表达增加;脊髓背角组织中5-HT,受体可能参与了慢性神经病理性疼痛的痛觉信息传导过程。     

大鼠坐骨神经PDLLA／NGF套管模型脊髓背角c-fos表达的研究

目的建立大鼠外消旋聚乳酸／神经生长因子（PDLLA／NGF）复合套管模型,观察大鼠神经恢复过程中行为学改变和机械痛觉过敏的变化以及脊髓背角c-fos表达的改变,探讨外周神经损伤再生与痛觉过敏的关系。方法雄性Wistar大鼠40只,体重180～200g,随机分成2组,每组20只,A组为坐骨神经损伤PDLLA／NGF套管修复组;B组为假手术组。术后24日起检测行为学、机械刺激阈值、热缩足反射时间及c—fos表达计数。结果A组术后27天后机械痛阈和热缩足反射潜伏期与B组相差明显,有统计学意义。A组术侧L4～5脊髓背角与B组相比较,背角浅层c-fos计数增多,有统计学差异。A组c-fos、机械痛阈和热缩足反射潜伏期45日与27日均有统计学差异。结论大鼠PDLLA／NGF复合套管模型再生神经生长进入去神经支配区域后,触觉诱发疼痛和脊髓背角浅层c-fos表达,同时出现再生神经支配区域的痛觉过敏和疼痛相关行为。     

枸杞多糖对大鼠坐骨神经离断后神经生长因子表达的影响

目的研究枸杞多糖对大鼠坐骨神经离断后神经生长因子（NGF）表达的影响。方法雌性SD大鼠72只,随机分成空白对照组、模型组与枸杞多糖（LBP）组,每组24只,后两组切除右侧坐骨神经2cm,LBP组腹腔注射枸杞多糖10mg/（kg.d）,模型组给予相同剂量生理盐水,分别于给药后第7、14、21和28d取坐骨神经离断的近端神经及相连背根神经节和相对应的脊髓（每组6只）,应用免疫组织化学方法分析神经生长因子表达的变化。利用Image-proplus6.0图像分析系统进行半定量分析。结果模型组和LBP组的坐骨神经及相连背根神经节和相应的脊髓NGF免疫组化平均光密度高于空白对照组,LBP组坐骨神经、脊神经节及脊髓中的NGF免疫组化平均光密度在术后第7、14、21、28d均低于模型组组（P〈0.05）。结论枸杞多糖可抑制大鼠坐骨神经离断后近端及相应的节段神经节和脊髓组织中的神经生长因子量的表达。