人牙周膜细胞在弹性牵张力作用下核心结合因子的表达

目的：探讨人牙周膜细胞在张应力作用下的成骨特性和核心结合因子(coxe—bindingfactoral，cbfal)在正畸成骨中的作用机制．方法：人牙周膜细胞体外原代培养，弹性膜及体外培养细胞加载系统加载弹性牵张力，免疫组化方法检测cbfal多克隆抗体在人牙周膜细胞的表达．结果：未加力的正常人牙周膜细胞cbfal抗体检测为阴性，弹性牵张力作用下人牙周膜细胞有cbfal阳性表达．结论：弹性牵张力可以诱导人牙周膜细胞向成骨样细胞分化；cbfal可能是正畸成骨的调控途径之一。     

骨巨细胞瘤中成纤维样基质细胞体外钙化能力的研究

目的：探讨骨巨细胞瘤的组织来源。方法：体外培养。Ｇｏｍｏｒｉ法碱性磷酸酶染色,生化检测细胞培养上清液中的碱性磷酸酶含量。免疫组织化学染色检测骨钙素在成纤维样基质细胞中的表达。使用含Ｂ甘油磷酸钠和ＣａＣｌ２的培养液,观察成纤维样基质细胞体外钙化能力。结果：成纤维样基质细胞中碱性磷酸酶和骨钙素呈阳性表达,在体外具有钙化能力。在细胞培养上清液中有碱性磷酸酶。结论：骨巨细胞瘤中的成纤维样基质细胞具有某些成骨细胞的特点,为进一步探讨其组织来源提供了实验依据。     

实时定量反转录-聚合酶链反应检测机械力对人牙周膜细胞骨钙素表达的影响

目的观察周期性牵张力作用下人牙周膜细胞(HPDLCs)成骨分化关键基因骨钙素的表达变化,以明确周期性牵张力对HPDLCs成骨分化的诱导作用。方法利用自行研制的多通道细胞牵张应力加载系统对体外培养的HPDLCs施加12%形变率、0.1Hz周期性牵张力1,2,3,5d,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其成骨分化基因骨钙素(BGLAP)表达的时序性变化。结果体外培养HPDLCs骨钙素基因表达量极低,加力1、2、3、5d后骨钙素基因表达依次升高,并且在加力5d时表达量明显增高为对照组的71.6倍。结论周期性牵张力可以诱导HPDLCs向成骨方向分化,骨钙素在机械力诱导成骨分化的后期发挥作用。     

骨巨细胞瘤中成纤维样基质细胞体外钙化能力的研究

目的：探讨骨巨细胞瘤的组织来源。方法：在体外培养。Ｇｏｍｏｒｉ法碱性磷酸酶染色,生化检测细胞培养上清液中的碱酸酶含量,免疫组织化学染色检测骨钙素在成纤维样基质细胞中的表达。使用含Ｂ－甘油磷酸钠和ＣａＣｌ２的培养液,观察成纤维样基质细胞体外钙化能力。结果：成纤维样基质细胞中碱性磷酸酶和骨钙素呈阳性表达,在体外具有钙化能力,在细胞培养上清液中有碱性磷酸酶。结论：骨巨细胞瘤中的成纤维样基质细胞具有某些成     

胰岛素样生长因子Ⅰ对体外培养人牙周膜细胞骨钙素分泌的影响

目的：观察胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ）对体外培养的人牙周膜细胞骨钙素分泌的影响,以探讨IGF－Ⅰ在人牙周膜细胞向成骨样细胞分化中的作用。方法：体外培养牙周膜细胞,放免法测定人牙周膜细胞骨钙素分泌量。实验分为空白对照组、IGF－Ⅰ3．125ng/ml组、IGF－Ⅰ6．250ng/ml组,IGF－Ⅰ2．500ng/ml组、IGF－Ⅰ25．000ng/ml组。结果：在含β－甘油磷酸钠和L－抗坏血酸的的下,人牙周膜细胞体外培养可产生并分泌骨钙素;随着培养时间的延长,骨钙素分泌增加,在第3周时分泌量达最大。加入生长因子IGF－Ⅰ,骨钙素分泌量呈剂量依赖性增加,结论：IGF－Ⅰ可增加人牙周膜细胞骨钙素的分泌。     

福莫特罗和ICI118551对大鼠骨髓间充质干细胞来源的成骨样细胞功能的影响

目的:研究选择性β2肾上腺素能激动剂福莫特罗(Formoterol)和阻滞剂ICI118551对体外由大鼠骨髓间充质干细胞(MMSC)成骨分化的影响,探讨β2肾上腺素能受体信号对骨代谢的影响.方法:取3周龄雌性SD大鼠,全贴肇筛选法培养MMSC.用条件培养液诱导向成骨细胞分化后分别加入不同浓度Formoterol和ICI118551,检测细胞碱性磷酸酶,骨钙素的分泌水平和细胞增殖率.结果:MMSC成功诱导分化为成骨样细胞,不同浓度(10-5～10-9mmol/L)的Formoterol均可抑制成骨样细胞分泌碱性磷酸酶,骨钙素和细胞增殖.高浓度ICI118551(10-5和10-6mmol/L)抑制成骨样细胞分泌碱性磷酸酶,骨钙素和细胞增殖,低浓度ICI118551(10-8和10-9mmol/L)则可促进成骨样细胞分泌碱性磷酸酶,骨钙素和细胞增殖.结论:β2肾上腺素能受体激动剂可抑制体外成骨样细胞的功能和细胞增殖,而阻滞剂对成骨样细胞功能和增殖的影响与其浓度有关.     

机械牵张力对小鼠成骨细胞形态及BMP-2、碱性磷酸酶和胶原表达的影响

目的: 在正畸治疗过程中,牙齿在正畸力和机械牵引力下的移动必然伴随着积极的牙槽骨改建。骨形成蛋白-2（BMP-2）,ALP（碱性磷酸酶）和COL-I（I型胶原蛋白）是骨改建过程中非常重要的细胞因子,但目前对机械牵张力与BMP-2 ,ALP和COL-I之间的关系仍不甚了解。本实验的目的是研究不同大小机械牵张力对成骨细胞形态及其BMP-2,ALP和COL-I表达的影响。 方法: 对小鼠成骨样细胞分别施加0％、6％、12％和18％形变率的机械牵张力后,用RT-PCR方法检测BMP-2,ALP和COL-I的mRNA表达。其结果经SPSS13.0统计软件进行方差分析。 结果: 加力后细胞基本呈长梭形,排列更加有序,与加载牵张力的方向相一致;各实验组比对照组的BMP-2,ALP和COL-I mRNA表达量有明显增加,差别有统计学意义（p<0.05）,其中 12％拉伸形变组的增加量最大。 结论: 一定大小的机械牵张力可以促进成骨细胞BMP-2,ALP和COL-I的表达,并引起细胞的形态和排列方式发生改变,调控骨的形成,从而影响正畸治疗中的骨改建。     

骨形态发生蛋白对人骨髓基质细胞的体外成骨分化影响

目的 提取牛骨形态发生蛋白，并观察其对人骨髓基质细胞的体外成骨分化作用，为将骨形态发生蛋白与骨髓基质细胞用于进一步的缺损修复研究提供实验依据。方法 从小牛骨中的提取骨形态发生蛋白，配制条件培养液，并作用于培养状态的人骨髓基质细胞，染色检测细胞碱性磷酸酶，I型胶原表达情况，放免法测定培养液中骨钙素含量。结果 人骨髓基质细胞经衣导培养后，碱性磷酸酶，I型胶原，骨钙素表达明显增加。结论 体外培养时，天然骨形态发生蛋白可促进人骨髓基质细胞的成骨分化。     

体外培养的人牙囊细胞矿化相关标志物的表达

目的体外培养人牙囊细胞，探讨牙囊细胞是否具成骨、成牙骨质细胞表型特征，是否呵作为牙骨质再生的种子细胞。方法酶消化联合组织块法获得人牙囊细胞，免疫酶细胞化学染色技术检测其Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的表达．RT-PCR技术检测细胞的骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶的表达。矿化诱导并连续培养牙囊细胞，行Von kossa染色检测体外矿化形成情况。结果免疫组化结果：牙囊细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白呈不同程度的阳性表达：RT-PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达。经矿化诱导后的牙囊细胞在20d时可形成矿化结节，von Kossa染色阳性。结论牙囊细胞具有成骨细胞、成牙骨质细胞的部分特性，体外培养的人牙囊细胞具有分泌合成矿化组织的能力，可试将其作为牙周组织再生的种子细胞。     

成骨生长肽调节大鼠成骨细胞样细胞3种mRNA表达和电镜观察

研究了成骨生长肽(简称OGP)调节大鼠成骨细胞样细胞多种mRNAs表达和超微结构。将细胞分为OGP实验组和对照组，用RT—PCR方法检测细胞的I型胶原mRNA、骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA，并以GAPDH(磷酸甘油醛脱氢酶)作为内标，可求出各种mRNAs的相对含量。透射电镜观察二组细胞的超微结构。电镜观察到OGP组培养细胞的粗面内质网比对照组丰富，OGP组管状粗面内质网末端膨大成池，核糖体附在粗面内质网的表面上，细胞分化较完善。与对照组比较，OGP组分别上调细胞I型胶原mRNA、骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA表达。在10^-12～10^-8mol／L OGP范围内，其浓度较高，细胞I型胶原mRNA和骨钙素mRNA表达也较高。结果表明OGP能促进细胞分化；上调细胞I型胶原mRNA、骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA表达。因此，OGP有促进骨形成功能。     

骨碎补柚皮苷对人牙周韧带细胞增殖和成骨分化潜能的影响

目的:探讨骨碎补柚皮苷对人牙周韧带细胞的增殖能力以及成骨分化潜能的影响.方法:MTT法检测在含有不同浓度骨碎补柚皮苷的细胞培养液中人牙周韧带细胞的增殖特性;检测不同浓度骨碎补柚皮苷作用后人牙周韧带细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性的改变.结果:骨碎补柚皮苷≥0.01 μmol/L时能增进人牙周韧带细胞增殖(P<0.05),并能增加其ALP活性(P<0.05).结论:骨碎补柚皮苷可提高人牙周韧带细胞的增殖能力及成骨分化的潜能.     

牵张应力刺激下Erk1/2在人牙周膜细胞成骨化的作用分析

研究牵张应力刺激下细胞外调节蛋白激酶(Erk)1/2在人牙周膜细胞成骨化的作用,本实验收集行口腔正畸治疗拔除的健康前磨牙,组织块法和消化法原代培养人牙周膜细胞。振幅10%、频率0.5Hz的周期性牵张应力刺激细胞,以不加牵张应力的细胞为对照组;并于牵张应力刺激前分别使用ERK1/2通路抑制剂PD98059处理细胞,ERK1/2显性负性突变体转染细胞。实验结果显示,牵张应力刺激不同时间p-ERK1/2蛋白表达水平均明显提升(P<0.05),其中以刺激1 h、3 h时p-ERK1/2蛋白表达水平最高;ERK1/2蛋白表达水平在牵张应力刺激不同时间差异无统计学意义(P>0.05);牵张应力刺激3、6 h时Runt相关基因2蛋白表达水平明显提升(P<0.05)。加入抑制剂PD98059或ERK1/2显性负性突变体转染后,Runt相关基因2、碱性磷酸酶(ALP)、成骨相关基因骨钙素(OCN mRNA)表达水平明显下调;p-ERK1/2、Runt相关基因2蛋白表达水平明显下调。实验证明,Erk1/2信号通路在牵张应力刺激下牙周膜细胞成功分化中发挥重要作用,Erk1/2被力学刺激激活后可通过上调Runt相关基因2蛋白表达介导成骨相关基因ALP、OCN的表达。     

不同浓度雌激素对人源性牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的：对比研究不同浓度的雌激素对人源性牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法：采用DMEM完全培养基将人牙周膜干细胞制成单细胞悬液,分别加入浓度为0、10×10^-10、10×10^-9、10×10^-8、10×10^-7、10×10^-6、10×10^-5mol/L的雌激素,以未加入雌激素的成骨诱导液组（普通DMEM培养基中加入10mMβ-甘油磷酸钠、50μM维生素C及10nM地塞米松）作为阴性对照。培养后实时定量PCR方法分别检测成骨早中晚期关键指标Runx2、ALP和OCN mRNA表达。结果：浓度为10×10^-10、10×10^-9、10×10^-8、10×10^-7、10×10^-6、10×10^-5mol/L的雌激素对人源性的牙周膜干细胞培养均无毒性;不同浓度组间差异无统计学意义（P＞0.05）;在成骨诱导7、14、21天时,Runx2、ALP及OCN mRNA表达在10×10^-7组最高（P＜0.05~0.01）。在不同浓度雌激素组中成骨相关基因的表达均高于阴性对照组（P＜0.05）。结论：当雌激素浓度＜10×10^-7mol/L时,雌激素能够以剂量依赖的方式促进人牙周膜干细胞成骨分化过程中成骨相关基因的表达。当雌激素浓度＞10×10^-7mol/L时,雌激素浓度的增加并未促进成骨相关基因的表达。     

年龄因素对牙周膜干细胞增殖和分化能力的影响

目的 评估年龄因素对牙周膜干细胞(PDLSC)增殖、分化能力的影响.方法 选取来源于12位不同的患者因阻生需要拔除的第三磨牙12颗,根据患者年龄分为A组(年龄18～20岁)、B组(年龄45～50岁).分离培养获得PDLSC.MTT检测A、B组PDLSC增殖能力;进行成骨、成脂诱导,并用茜素红染色及油红O染色评价其分化能力;SA-βG染色分析A、B组细胞衰老情况;将A、B组PDLSC成骨诱导7d后进行ALP染色并同时采用Western blotting检测OCN、ALP的表达.结果 不同年龄阶段的供体中都能分离出PDLSC,然而其增殖和成骨分化能力随年龄增加而降低,成脂分化能力和SA-βG表达随年龄增加而增加.ALP和OCN成骨诱导7d后表达水平均升高,且A组高于B组.结论 随年龄增长能在牙周膜中获取PDLSC,随年龄增加其增殖与成骨分化能力下降,但成脂分化能力和SA-β表达则增加.     

双层胶原支架与人牙周膜细胞的体外生物相容性

【目的】 研究双层胶原支架与人牙周膜细胞的体外生物相容性?【方法】 组织块培养法培养原代人牙周膜细胞?MTT法测胶原支架不同浓度浸提液的细胞毒性?将人牙周膜细胞与支架材料三维培养,通过扫描电镜?组织切片观察其复合情况,并检测三维培养后细胞碱性磷酸酶(ALP)?羟脯氨酸(HYP)的分泌情况? 【结果】 不同浓度材料浸提液毒性评级为0 ~ 1级?细胞与支架复合培养后,细胞在支架上黏附?增殖良好,支架材料内部细胞分布均匀,且致密层可起屏障膜作用,阻挡细胞进入支架内部?细胞与胶原支架复合培养24 h后,细胞的ALP活性与对照组无明显差异(P > 0.05),复合培养48?72 h后,细胞的ALP活性高于对照组(P < 0.05)?复合培养24?48?72 h后,细胞的HYP活性均高于对照组(P < 0.05)?【结论】 双层胶原支架具有良好的生物相容性,可进一步应用于牙周组织工程的研究?     

颌骨骨髓基质细胞对牙周膜细胞生物学特性的影响

目的观察间接共培养犬颌骨骨髓基质细胞(canine maxillary bone marrow stromal cells, cM-BMSCs)对犬牙周膜细胞(canine periodontal ligament cells, cPDLCs)生物学特性的影响。方法 原代培养犬颌骨骨髓基质细胞和犬牙周膜细胞。MTT法检测犬牙周膜细胞增殖速率;利用Transwell结构建立犬颌骨骨髓基质细胞与犬牙周膜细胞共培养体系;qPCR法检测犬牙周膜细胞矿化相关基因核心结合因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)的变化;Western印迹法检测Runx2和OCN蛋白的表达变化。构建牙片/细胞膜片复合体植入裸鼠皮下。结果 两种细胞体外均贴壁生长,呈纺锤状外形;颌骨骨髓基质细胞间接共培养下对牙周膜细胞增殖有抑制作用;共培养组牙周膜细胞ALP活性高于对照组;qPCR和Western印迹法均能检测到牙周膜细胞Runx2、OCN的表达,共培养组牙周膜细胞的Runx2和OCN的表达均高于对照组。经过颌骨骨髓基质细胞条件培养液诱导后的牙周膜细胞与牙本质片复合形成了排列更加有序的牙周膜/牙骨质样结构,单纯的牙周膜细胞膜片不能新生类似的牙周组织复合结构。结论犬颌骨骨髓基质细胞间接共培养情况下可能会限制牙周膜细胞的增殖,促进牙周膜细胞向成骨样细胞分化。     

TAZ在张应力促进人牙周膜细胞骨向分化中的作用

目的：探索PDZ结合基序转录共激活因子（TAZ）参与张应力促进间充质干细胞（MSCs）骨向分化的调控作用及分子机制。方法：原代培养人牙周膜细胞（hPDLCs）。利用Flexcell系统对hPDLCs体外加载12%,0.5 Hz张应力,实时荧光定量PCR及Western blot检测hPDLCs中TAZ及成骨标志物核心结合因子α1（Cbfα1）、I型胶原（COL I）、骨钙素（OCN）、锌指结构转录因子（OSX）的表达变化;蛋白质免疫共沉淀检测TAZ与Cbfα1的结合情况。结果：加载12%,0.5 Hz张应力24 h及48 h时显著促进hPDLCs的TAZ、Cbfα1、COL I、OSX、OCN mRNA及蛋白表达水平（P＜0.05）。蛋白质免疫共沉淀证实TAZ与Cbfα1的结合量显著增加。hPDLCs转染TAZ siRNA 72 h,加载12%,0.5 Hz张应力24 h,TAZ蛋白水平及张应力所促进的细胞成骨蛋白表达下降。结论：张应力作用下TAZ通过上调Cbfα1的表达与转录活性诱导hPDLCs骨向分化。     

抑制自噬对根尖乳头干细胞成骨分化水平的影响

目的探讨抑制自噬对根尖乳头干细胞成骨分化水平的影响。方法5、10 ng/mL 肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分别处理根尖 乳头干细胞（SCAPs）,对照组不做处理,检测自噬相关蛋白LC3-II表达水平,GFP-LC3质粒转染并检测细胞内GFP-LC3数目, 吖啶橙染色检测酸性囊泡情况。TNF-α,TNF-α+3-MA分别处理SCAPs,检测LC3-II 的表达水平,GFP-LC3 质粒转染并检测 GFP-LC3数目,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡。TNF-α、TNF-α+3-MA分别处理SCAPs,对照组不做处理, 诱导成骨向分化,qRT-PCR检测分化第3、7、14天时成骨相关基因碱性磷酸酶（ALP）、骨涎蛋白（BSP）、骨钙素（OCN）的表达。 结果TNF-α可诱导SCAPs自噬活化：TNF-α组LC3-II/β-actin水平较对照组升高且具有浓度依赖性（P<0.05）,TNF-α组GFP-LC3 数目较对照组升高且具有浓度依赖性（P<0.05）,TNF-α组酸性囊泡较对照组增多。3-MA可抑制TNF-α诱导的SCAPs自噬活 化：TNF-α+3-MA组LC3-II/β-actin水平及细胞内GFP-LC3数目较TNF-α组显著降低（P<0.05）,并下调细胞活力（P<0.05）,上调 细胞凋亡水平（P<0.05）。抑制自噬导致SCAPs成骨分化的抑制：TNF-α+3-MA组ALP、BSP表达量在分化第3、7、14 天均较 TNF-α组降低（P<0.05）,OCN的表达量在第3、7天较TNF-α组降低（P<0.05）。结论TNF-α可诱导SCAPs自噬水平的活化;自噬 可能对TNF-α作用下的SCAPs起细胞保护作用,对抗细胞凋亡;自噬的抑制将下调TNF-α作用下SCAPs的成骨向分化水平,提 示自噬在TNF-α作用下SCAPs的成骨分化过程中具有重要作用。     

补肾中药醇提活性成分对人牙周膜细胞生物学性状的影响

目的:观察补肾中药醇提活性成分对体外培养人牙周膜细胞增殖和功能的影响.方法:应用组织块法和酶消化法体外培养人牙周膜细胞,以MTT法检测补肾中药活性成分对人牙周膜细胞的增殖率和中药活性成分对ALP活性的影响.结果:补肾中药醇提活性成分对人牙周膜细胞增殖能力和ALP活性有增强作用.结论:补肾中药醇提活性成分对体外培养人牙周膜细胞的增殖和功能有促进作用.